本發(fā)明涉及一種基于溶解度依賴pH性質(zhì)的鹽酸魯拉西酮納米晶體制備方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

鹽酸魯拉西酮于2010年10月被美國FDA批準(zhǔn)用于治療精神分裂癥。該藥屬于生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)BCS II類藥物，極低的溶解度和溶出速率是導(dǎo)致其口服生物利用度差的主要原因(單次口服后，在人體中的絕對生物利用度為9％～19％)。

國內(nèi)外已有將鹽酸魯拉西酮制成固體分散體、微乳、共無定型等不同劑型以改善其不良特性的相關(guān)研究報道。這些方法盡管可以提高鹽酸魯拉西酮的溶解度、溶出速率和口服生物利用度，但是存在穩(wěn)定性較差、載藥量低、制備過程復(fù)雜、制備成本較高等問題，均不利于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。目前，納米晶體被認(rèn)為是提高難溶性藥物溶出速率和生物利用度的最具有前景的策略之一。納米晶體系采用聚合物或/和表面活性劑穩(wěn)定純藥物顆粒所形成的一種亞微米膠體分散體系。通過將藥物顆粒納米化，可以提高藥物的飽和溶解度、溶出速率和生物利用度。另外，納米晶體還具有穩(wěn)定性好、無需載體、含藥量高、制備工藝較為簡單等優(yōu)點。制備納米晶體的方法主要包括高壓均質(zhì)法、介質(zhì)研磨法和反溶劑沉淀法。高壓均質(zhì)法和介質(zhì)研磨法是通過機(jī)械力將大顆粒藥物粉碎成亞微米顆粒的方法制備納米晶體。這兩種方法雖然可控因素少，常用于工業(yè)化生產(chǎn)，但是耗時長、耗能大、生產(chǎn)成本高、制備的納米晶體粒徑分布寬。反溶劑沉淀法通常是先將藥物溶解在有機(jī)溶劑(如甲醇、二甲基亞砜和丙酮)中，然后滴加到含穩(wěn)定劑的水溶液中產(chǎn)生納米晶體。該法耗時短、耗能低、生產(chǎn)成本低、制得的納米晶體粒徑分布窄，但是會引入有機(jī)溶劑于產(chǎn)品中，限制了其在工業(yè)中的應(yīng)用。中國專利CN104814926A公開了一種傳統(tǒng)反溶劑沉淀法聯(lián)合高壓均質(zhì)法制備鹽酸魯拉西酮納米晶體。該方法雖然制備的納米晶體粒徑小及穩(wěn)定性好，但是聯(lián)合兩種方法制備納米晶體操作繁瑣，可控因素多。另外，該制備過程中使用毒性較大的有機(jī)溶劑(即甲醇)溶解藥物，增加了對生產(chǎn)儀器與設(shè)備的要求。并且后期需要去除產(chǎn)品中殘存的該有機(jī)溶劑(即旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)和/真空干燥)，進(jìn)一步增加了工序、能耗、生產(chǎn)時間和成本，不利于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。為了避免使用有機(jī)溶劑，中國專利CN103006556A公開了一種利用酸堿中和法制備燈盞乙素納米晶體。然而，該酸堿中和產(chǎn)生的副產(chǎn)物(如氯化鈉)影響產(chǎn)品的純度，并且可能帶來穩(wěn)定性的問題。因此，亟待一種簡單價廉、不使用有毒有害有機(jī)溶劑且不會產(chǎn)生副產(chǎn)物的方法制備鹽酸魯拉西酮納米晶體。

本發(fā)明者利用鹽酸魯拉西酮在不同pH溶液中溶解度差異(pH4時溶解度最大)，通過用含穩(wěn)定劑的去離子水稀釋含鹽酸魯拉西酮的pH4鹽酸溶液的方法制備納米晶體。該方法不僅能夠避免有毒有害有機(jī)溶劑的使用和副產(chǎn)物的產(chǎn)生，并且制備工藝簡單、操作易行、生產(chǎn)成本低廉，因此特別適用于工業(yè)化大生產(chǎn)，具有廣闊的開發(fā)前景。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于解決鹽酸魯拉西酮溶解度低，溶出速率慢，口服生物利用度差，以及制備鹽酸魯拉西酮納米晶體的現(xiàn)有技術(shù)存在的工藝復(fù)雜、成本高以及使用有毒有害有機(jī)溶劑等缺點，提供一種基于鹽酸魯拉西酮溶解度具pH依賴性質(zhì)的納米晶體制備方法。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

一種基于溶解度依賴pH性質(zhì)的鹽酸魯拉西酮納米晶體制備方法，包括以下步驟：

(1)將鹽酸魯拉西酮溶解在pH4鹽酸溶液與潛溶劑的混合溶劑中，作為良溶劑；

(2)將穩(wěn)定劑溶解在去離子水中，作為不良溶劑；

(3)將溶有鹽酸魯拉西酮的良溶劑加到不良溶劑中，磁力攪拌分散，加入完畢后，繼續(xù)攪拌，制得鹽酸魯拉西酮納米晶體。

所述步驟(1)中，潛溶劑為丙二醇或乙醇。

所述步驟(1)中，pH4鹽酸溶液與潛溶劑的體積比為(3～5)∶1。

所述步驟(1)中，良溶劑中鹽酸魯拉西酮的濃度為0.1～0.4％(單位：g/100mL)。

所述步驟(2)中，穩(wěn)定劑為羥丙甲基纖維素、泊洛沙姆、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、吐溫80、聚乙二醇中的一種或一種以上的混合物。

所述步驟(2)中，鹽酸魯拉西酮與穩(wěn)定劑的重量比為(1～4)∶1。

所述步驟(2)中，去離子水與pH4鹽酸溶液的體積比為(10～100)∶1。

所述步驟(3)中，在反應(yīng)溫度為3～25℃下，良溶劑以3～16mL/min的速度加入不良溶劑中，控制磁力攪拌速度在200～1200r/min，加入完畢后繼續(xù)攪拌1～3h。

本發(fā)明將鹽酸魯拉西酮制成納米晶體，經(jīng)檢測其質(zhì)量外觀均一，平均粒徑在200～600nm。

本發(fā)明的原理是：將鹽酸魯拉西酮溶解在pH4鹽酸溶液與潛溶劑的混合溶劑中作為良溶劑，含有穩(wěn)定劑的水溶液作為不良溶劑，然后將溶有鹽酸魯拉西酮的良溶劑加入到不良溶劑中，利用鹽酸魯拉西酮的溶解度具有pH依賴性，形成過飽和溶液，導(dǎo)致鹽酸魯拉西酮析出結(jié)晶，而在穩(wěn)定劑的作用下控制鹽酸魯拉西酮結(jié)晶的粒徑在納米尺寸。

本發(fā)明的優(yōu)點在于：

(1)本發(fā)明利用鹽酸魯拉西酮的溶解度具pH依賴性質(zhì)的原理制備納米晶體。

(2)本發(fā)明的鹽酸魯拉西酮納米晶體制備方法工藝簡單，操作易行，制備過程沒有使用有毒有害的有機(jī)溶劑，不會產(chǎn)生副產(chǎn)物，所得制劑安全有效、生產(chǎn)成本低、易于產(chǎn)業(yè)化。

(3)該納米晶體粒徑小，質(zhì)量外觀均一，能有效增加藥物的溶解度和溶出速率，從而明顯提高口服生物利用度。

附圖說明

圖1為實施例4制備的鹽酸魯拉西酮納米晶體與鹽酸魯拉西酮原料藥和物理混合物飽和溶解度對比圖(n＝6)。

圖2為實施例4制備的鹽酸魯拉西酮納米晶體與鹽酸魯拉西酮原料藥和物理混合物體外溶出對比曲線(n＝6)。其中，A代表溶出介質(zhì)為鹽酸-氯化鉀緩沖液(pH1.2)；B代表溶出介質(zhì)為醋酸-醋酸鈉(pH4.0)；C代表溶出介質(zhì)為磷酸緩沖液(pH6.8)；D代表溶出介質(zhì)為磷酸緩沖液(pH7.4)。

圖3為實施例4制備的鹽酸魯拉西酮納米晶體與等摩爾量的鹽酸魯拉西酮原料藥經(jīng)口服給藥后在大鼠體內(nèi)血藥濃度-時間曲線(n＝6)。

具體實施方式

以下通過實施例再對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)就此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。

實施例1：

稱取12mg鹽酸魯拉西酮溶解在3mL pH4鹽酸溶液與1mL乙醇的混合溶劑中作為良溶劑；稱取8mg泊洛沙姆和4mg吐溫80溶解在40mL去離子水中作為不良溶劑；在25℃下，將良溶劑以16mL/min的滴速滴入不良溶劑中，控制攪拌速度在200r/min，滴畢，繼續(xù)攪拌1.5h，制得鹽酸魯拉西酮納米晶體。用激光粒徑儀檢測，平均粒徑為579.8nm，多分散指數(shù)為0.34。

實施例2：

稱取20mg鹽酸魯拉西酮溶解在16mL pH4鹽酸溶液與4mL丙二醇的混合溶劑中作為良溶劑；稱取5mg甲基維素溶解在160mL去離子水中作為不良溶劑；在3℃下，將良溶劑以3mL/min的滴速滴入不良溶劑中，控制攪拌速度在400r/min，滴畢，繼續(xù)攪拌1h，制得鹽酸魯拉西酮納米晶體。用激光粒徑儀檢測，平均粒徑為238.3nm，多分散指數(shù)為0.22。

實施例3：

稱取10mg鹽酸魯拉西酮溶解在3mL pH4鹽酸溶液與1mL丙二醇的混合溶劑中作為良溶劑；稱取10mg聚乙二醇溶解在300mL去離子水中作為不良溶劑；在14℃下，將良溶劑以5mL/min的滴速滴入不良溶劑中，控制攪拌速度在1200r/min，滴畢，繼續(xù)攪拌3h，制得鹽酸魯拉西酮納米晶體。用激光粒徑儀檢測，平均粒徑為376.2nm，多分散指數(shù)為0.26。

實施例4：

稱取30mg鹽酸魯拉西酮溶解在10mL pH4鹽酸溶液與2mL丙二醇的混合溶劑中作為良溶劑；稱取10mg羥丙甲基纖維素溶解在100mL去離子水中作為不良溶劑；在3℃下，將良溶劑以8mL/min的滴速滴入不良溶劑中，控制攪拌速度在600r/min，滴畢，繼續(xù)攪拌1h，制得鹽酸魯拉西酮納米晶體。用激光粒徑儀檢測，平均粒徑為231.5nm，多分散指數(shù)為0.17。

實施例5：

鹽酸魯拉西酮納米晶體飽和溶解度研究

取過量的鹽酸魯拉西酮原料藥、物理混合物與本發(fā)明實施例4的鹽酸魯拉西酮納米晶體各6份，分別置于5mL pH1.2鹽酸溶液、pH2.0鹽酸溶液、pH3醋酸緩沖液、pH4醋酸緩沖液、pH5.0磷酸緩沖液、pH6.0磷酸緩沖液、pH6.8磷酸緩沖液、pH7.0磷酸緩沖液、pH7.4磷酸緩沖液中，于37℃連續(xù)振蕩48h，用0.1μm濾膜過濾。采用HPLC(High Performance Liquid Chromatography)法對所得濾液中鹽酸魯拉西酮含量進(jìn)行定量測定，使用Inertsil ODS-SP柱(4.6×250mm，5μm)；流動相為乙腈-(0.05％冰醋酸+0.05％三乙胺)水(65∶35)；檢測波長為230nm；流速為1mL/min；柱溫為35℃；內(nèi)標(biāo)為瑞格列奈；進(jìn)樣體積為20μL。結(jié)果顯示，本發(fā)明制備的鹽酸魯拉西酮納米晶體飽和溶解度明顯高于鹽酸魯拉西酮原料藥及物理混合物，見圖1。

實施例6：

鹽酸魯拉西酮納米晶體體外溶出度研究

取鹽酸魯拉西酮原料藥、物理混合物與本發(fā)明實施例4的鹽酸魯拉西酮納米晶體各6份，每份相當(dāng)于鹽酸魯拉西酮2mg，按《中國藥典》2015年版第二法(槳法)，分別以鹽酸-氯化鉀緩沖液(pH1.2)、醋酸-醋酸鈉(pH4.0)和磷酸緩沖液(pH6.8和pH7.4)為溶出介質(zhì)，體積為500mL，溫度(37±0.5)℃，轉(zhuǎn)速為50rpm/min，于5、10、15、20、30、60和90min取樣5mL，過0.1μm濾膜，同時補充等量等溫溶出介質(zhì)。用HPLC法對所得濾液中鹽酸魯拉西酮含量進(jìn)行定量測定，使用Inertsil ODS-SP柱(4.6×250mm，5μm)；流動相為乙腈-(0.05％冰醋酸+0.05％三乙胺)水(65∶35)；檢測波長為230nm；流速為1mL/min；柱溫為35℃；內(nèi)標(biāo)為瑞格列奈；進(jìn)樣體積為20μL。結(jié)果顯示，本發(fā)明制備的鹽酸魯拉西酮納米晶體溶出速率明顯高于鹽酸魯拉西酮原料藥及物理混合物，見圖2。

實施例7：

鹽酸魯拉西酮納米晶體的口服生物利用度研究

采用雄性SD大鼠(220～240g)12只，隨機(jī)分為兩組，即A和B(n＝6)。給藥前禁食12h，自由飲水。A組灌胃給予實施例4制備所得鹽酸魯拉西酮納米晶體，B組灌胃給予鹽酸魯拉西酮原料藥混懸液，劑量5mg/kg。分別于給藥后0.08、0.17、0.33、0.5、1、1.5、2、3、4、6、10、24h于大鼠眼眶取血0.3mL，置于肝素化的離心管中，10000rpm離心5min，去上層血漿-20℃保持備用。用HPLC法測定血漿樣品中鹽酸魯拉西酮的含量，使用Inertsil ODS-SP色譜柱(4.6×250mm，5μm)；流動相為乙腈-(0.05％冰醋酸+0.05％三乙胺)水(65∶35)；檢測波長為230nm；流速為1mL/min；柱溫為35℃；內(nèi)標(biāo)為瑞格列奈；進(jìn)樣體積為20μL。采用藥動學(xué)軟件DAS2.1計算藥動學(xué)參數(shù)。結(jié)果表明，鹽酸魯拉西酮原料藥混懸液的AUC_0-24h為1977.22ng/mL·h，納米晶體的AUC_0-24h為4711.37ng/mL·h，鹽酸魯拉西酮在大鼠體內(nèi)的血藥濃度-時間曲線如圖3所示。以鹽酸魯拉西酮原料藥混懸液作為參比，鹽酸魯拉西酮納米晶體的相對生物利用度為238.28％，說明鹽酸魯拉西酮納米晶體能夠顯著提高鹽酸魯拉西酮的口服生物利用度。