本發(fā)明涉及醫(yī)藥保健品和食品領(lǐng)域，具體涉及一種規(guī)模化養(yǎng)殖微擬球藻的方法。

背景技術(shù)：

能源與環(huán)境是人類社會(huì)可持續(xù)發(fā)展所面臨的重要問(wèn)題。一方面，支撐人類現(xiàn)代文明的化石能源不可再生，開(kāi)發(fā)替代能源迫在眉睫；另一方面，在加工和使用化石能源時(shí)不可避免地會(huì)產(chǎn)生廢氣與污水的排放問(wèn)題，已經(jīng)對(duì)環(huán)境造成了嚴(yán)重的影響，這些問(wèn)題需要有統(tǒng)籌協(xié)調(diào)的解決方案。

微藻是一類在水中生長(zhǎng)的種類繁多且分布極其廣泛的低等植物，它是由陽(yáng)光驅(qū)動(dòng)的細(xì)胞工廠，通過(guò)微藻細(xì)胞高效的光合作用，吸收CO₂，將光能轉(zhuǎn)化為脂肪或淀粉等碳水化合物的化學(xué)能，并放出O₂。利用微藻生產(chǎn)生物能源與化學(xué)品可以同時(shí)達(dá)到“替代化石能源、減少CO₂排放、凈化廢氣與污水”三個(gè)目的。“微藻生物技術(shù)”的優(yōu)勢(shì)在于以下幾個(gè)方面：①微藻是光合效率最高的原始植物，與農(nóng)作物相比，單位面積的產(chǎn)率高出數(shù)十倍。微藻也是自然界中生長(zhǎng)最為迅速的一種植物，通常在24h內(nèi)，微藻所含生物質(zhì)可以翻倍，在其“指數(shù)生長(zhǎng)期”內(nèi)其生物量翻倍時(shí)間可以縮短到3.5h。②微藻可以生長(zhǎng)在高鹽、高堿環(huán)境的水體中，可充分利用灘涂、鹽堿地、沙漠進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，也可利用海水、鹽堿水、工業(yè)廢水等非農(nóng)用水進(jìn)行培養(yǎng)，因此微藻可以不同農(nóng)作物爭(zhēng)地、爭(zhēng)水。③產(chǎn)油率高，微藻干細(xì)胞的含油量可高達(dá)70％，微藻沒(méi)有高等植物的根莖葉等細(xì)胞分化，在缺氮等條件下，某些單細(xì)胞微藻可大量積累油脂，是最有前景的產(chǎn)油生物。④微藻的培養(yǎng)需要利用工業(yè)廢氣中的CO₂，緩解溫室氣體的排放，也可以吸收工業(yè)廢氣中的NOx，減少環(huán)境的污染。⑤生產(chǎn)微藻生物柴油的同時(shí)，還可以生產(chǎn)相當(dāng)數(shù)量的微藻生物質(zhì)，還可進(jìn)一步獲得蛋白質(zhì)、多糖、脂肪酸等高價(jià)值產(chǎn)品。

目前，缺乏一種細(xì)菌含量少的規(guī)?；B(yǎng)殖微擬球藻的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對(duì)上述問(wèn)題，提供一種細(xì)菌含量少的規(guī)?；B(yǎng)殖微擬球藻的方法。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了下列技術(shù)方案：本發(fā)明的一種規(guī)模化養(yǎng)殖微擬球藻的方法，包括如下步驟：

(1)配置好固體培養(yǎng)基：麩皮66-85wt％、豆粕10-30wt％、石灰1-2wt％、KH₂PO₄ 1-2wt％、加入EM菌0.02-0.1wt％，按照上述比例的配方加入鹽度為30-35wt‰的地下海水?dāng)嚢杈鶆颍糜跍缇亙?nèi)蒸煮，維持溫度120-124℃，氣壓0.01-0.03MPa，將蒸煮好的上述培養(yǎng)基冷卻到20℃待用；

(2)接種：在無(wú)菌房間內(nèi)，將微擬球藻的藻種灑入上述培養(yǎng)基中，接種完成并自動(dòng)攪拌均勻；

(3)在跑道池立體培養(yǎng)；

(4)采收、洗滌、濃縮脫水；

(5)噴霧干燥培養(yǎng)完成；

(6)將培養(yǎng)好的料過(guò)篩，制得規(guī)模化養(yǎng)殖微擬球藻。

進(jìn)一步地，在步驟(1)中，所述的地下海水的質(zhì)量占配方總質(zhì)量的60-80％，所述的地下海水用雙層250目棉布過(guò)濾，攪拌速率為500-800r/min。

進(jìn)一步地，在步驟(1)中，置于滅菌鍋內(nèi)蒸煮100分鐘。

更進(jìn)一步地，在步驟(3)中，將培養(yǎng)基放入塑鋼透明淺盤(pán)中，淺盤(pán)底布滿直徑3mm的孔，置于無(wú)菌培養(yǎng)房中，通入潔凈空氣，通氣量為1m³/min，溫度22-25℃，光照度1000-3000lx，培養(yǎng)48-72小時(shí)。

進(jìn)一步地，在步驟(5)中，控制干燥溫度在51-64℃，干燥后保持物料的水分控制在10％以內(nèi)。

進(jìn)一步地，在步驟(6)中，所述制得的藻體濃度為10⁶-10⁸個(gè)/ml。

有益效果：本發(fā)明細(xì)菌含量少，養(yǎng)殖效率高，能量消耗低，減少微藻的沉淀和附壁，提高微藻的收集率，可以實(shí)現(xiàn)微藻規(guī)模培養(yǎng)。

(1)以麩皮和豆粕為主要原料來(lái)培養(yǎng)微擬球藻，成本大大降低，且原料來(lái)源容易；用立體方式、固體培養(yǎng)基來(lái)大規(guī)模的培養(yǎng)微藻，可以節(jié)省空間，提高微藻的收集率。

(2)EM菌具有兩種功能，一是能促進(jìn)微藻的生長(zhǎng)；二是能抑制對(duì)微藻有害的細(xì)菌繁殖。本發(fā)明的EM菌的用量應(yīng)滿足加速微藻生長(zhǎng)的需要，既不能因用量過(guò)少而不起作用，又不能因用量過(guò)大而與微藻競(jìng)爭(zhēng)消耗過(guò)多的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

具體實(shí)施方式

以下實(shí)施例僅處于說(shuō)明性目的，而不是想要限制本發(fā)明的范圍。

實(shí)施例1

本發(fā)明的一種規(guī)?；B(yǎng)殖微擬球藻的方法，包括如下步驟：

(1)配置好固體培養(yǎng)基；麩皮66wt％、豆粕20wt％、石灰1wt％、KH₂PO₄ 1wt％、加入EM菌0.02wt％，上述比例的配方加入鹽度為30wt‰的地下海水?dāng)嚢杈鶆?，置于滅菌鍋?nèi)蒸煮100分鐘，維持溫度120℃，氣壓0.01MPa，將蒸煮好的上述培養(yǎng)基冷卻到20℃待用。

所述的地下海水用雙層250目棉布過(guò)濾。所述的地下海水的質(zhì)量占配方總質(zhì)量的80％，所述的地下海水用雙層250目棉布過(guò)濾，攪拌速率為600r/min。

(2)接種：在無(wú)菌房間內(nèi)，將微擬球藻的藻種灑入上述培養(yǎng)基中，接種完成并自動(dòng)攪拌均勻；

(3)在跑道池立體培養(yǎng)；將培養(yǎng)基放入塑鋼透明淺盤(pán)中，淺盤(pán)底布滿直徑3mm的孔，置于無(wú)菌培養(yǎng)房中，通入潔凈空氣，通氣量為1m³/min，溫度24℃，光照度1000lx，培養(yǎng)48小時(shí)。

(4)采收、洗滌、濃縮脫水；

(5)噴霧干燥培養(yǎng)完成；控制干燥溫度在64℃，干燥后保持物料的水分控制在10％以內(nèi)。

(6)將培養(yǎng)好的料過(guò)篩，制得規(guī)模化養(yǎng)殖微擬球藻。所述制得的藻體濃度為10⁶個(gè)/ml。

實(shí)施例2

實(shí)施例2與實(shí)施例1的區(qū)別在于：本發(fā)明的一種規(guī)?；B(yǎng)殖微擬球藻的方法，包括如下步驟：

在步驟(1)中，配置好固體培養(yǎng)基；麩皮85wt％、豆粕10wt％、石灰2wt％、KH₂PO₄2wt％、加入EM菌0.1wt％，置于滅菌鍋內(nèi)蒸煮，維持溫度124℃，氣壓0.03MPa，將蒸煮好的上述培養(yǎng)基冷卻到20℃待用。所述的地下海水用雙層250目棉布過(guò)濾。所述的地下海水用雙層250目棉布過(guò)濾。所述的地下海水的質(zhì)量占配方總質(zhì)量的70％，攪拌速率為800r/min。

在步驟(2)中，接種：在無(wú)菌房間內(nèi)，將微擬球藻的藻種灑入上述培養(yǎng)基中，接種完成并自動(dòng)攪拌均勻；

在步驟(3)中，在跑道池立體培養(yǎng)；將培養(yǎng)基放入塑鋼透明淺盤(pán)中，淺盤(pán)底布滿直徑3mm的孔，置于無(wú)菌培養(yǎng)房中，通入潔凈空氣，通氣量為1m³/min，溫度22℃，光照度2000lx，培養(yǎng)60小時(shí)。

(4)采收、洗滌、濃縮脫水；

(5)噴霧干燥培養(yǎng)完成；控制干燥溫度在51℃。

(6)將培養(yǎng)好的料過(guò)篩，制得規(guī)?；B(yǎng)殖微擬球藻。所述制得的藻體濃度為10⁸個(gè)/ml。

實(shí)施例3

實(shí)施例3與實(shí)施例1的區(qū)別在于：

本發(fā)明的一種規(guī)?；B(yǎng)殖微擬球藻的方法，包括如下步驟：

在步驟(1)中，配置好固體培養(yǎng)基；麩皮75wt％、豆粕30wt％、石灰1.2wt％、KH₂PO₄1.5wt％、加入EM菌0.08wt％，置于滅菌鍋內(nèi)蒸煮，維持溫度123℃，氣壓0.02MPa，將蒸煮好的上述培養(yǎng)基冷卻到20℃待用。所述的地下海水的質(zhì)量占配方總質(zhì)量的60％，攪拌速率為500r/min。

在步驟(3)中，在跑道池立體培養(yǎng)；將培養(yǎng)基放入塑鋼透明淺盤(pán)中，淺盤(pán)底布滿直徑3mm的孔，置于無(wú)菌培養(yǎng)房中，通入潔凈空氣，通氣量為1m³/min，溫度25℃，光照度3000lx，培養(yǎng)72小時(shí)。

在步驟(5)中，噴霧干燥培養(yǎng)完成；控制干燥溫度在55℃。

在步驟(6)中，將培養(yǎng)好的料過(guò)篩，制得規(guī)?；B(yǎng)殖微擬球藻。所述制得的藻體濃度為10⁷個(gè)/ml。

對(duì)比例1

本對(duì)比例與實(shí)施例1至3的區(qū)別僅在于：不添加EM菌。養(yǎng)殖過(guò)程中監(jiān)測(cè)藻液的細(xì)菌計(jì)數(shù)最高達(dá)到了1.2×10⁸個(gè)/mL藻液，測(cè)得培養(yǎng)結(jié)束時(shí)藻液的pH自然升高到7.5。添加EM菌大大促進(jìn)了微藻的生長(zhǎng)并迅速消耗了無(wú)機(jī)氮源。

本文中所描述的具體實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明精神作舉例說(shuō)明。本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對(duì)所描述的具體實(shí)施例做各種各樣的修改或補(bǔ)充或采用類似的方式替代，但并不會(huì)偏離本發(fā)明的精神或者超越所附權(quán)利要求書(shū)所定義的范圍。