本發(fā)明屬于生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種泰樂菌素發(fā)酵新工藝。

背景技術(shù)：

目前泰樂菌素發(fā)酵生產(chǎn)中主要的氮源來源為棉籽餅粉、麩質(zhì)粉和魚粉等植物氮源或動物氮源，使用以上的動植物氮源主要有以下缺點(diǎn)：

1、棉籽餅粉和麩質(zhì)粉等植物氮源，受品種、產(chǎn)地、季節(jié)、儲存、加工和運(yùn)輸?shù)纫蛩氐挠绊?，產(chǎn)品質(zhì)量波動較大，影響生產(chǎn)的穩(wěn)定性。

2、魚粉等動物氮源受漁場、季節(jié)、魚種、加工等因素的影響，產(chǎn)品質(zhì)量也有波動，從而影響了生產(chǎn)。

3、棉籽餅粉、麩質(zhì)粉和魚粉都是遲效氮源，需要微生物自身的酶，來酶解成小分子的物質(zhì)才能被利用，所需發(fā)酵周期較長。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種泰樂菌素發(fā)酵新工藝，以解決上述問題。

本發(fā)明泰樂菌素發(fā)酵新工藝，包括以下步驟：

1)培養(yǎng)：泰樂菌素一級種子培養(yǎng)成熟后，通過分種的方式接入兩個二級種子罐進(jìn)行培養(yǎng)，得到種子液，兩個二級種子罐的接種量的比例為2:1；

2)利用：待二級種子罐的菌絲濃度到達(dá)18-22％時，發(fā)酵罐開始配料，在發(fā)酵罐滅菌前，將接種量大的二級種子罐內(nèi)的種子液壓入發(fā)酵罐內(nèi)做為微生物氮源，滅菌后待用；

3)發(fā)酵：發(fā)酵罐滅菌結(jié)束，溫度降至30℃，將接種量小的二級種子罐內(nèi)的種子液接入發(fā)酵罐做為二級種子使用，開始發(fā)酵培養(yǎng)，待發(fā)酵120h后，使用HPLC檢測發(fā)酵液組分情況，根據(jù)C組分的含量確定升溫至38℃的轉(zhuǎn)化時間，將C組分轉(zhuǎn)化為有效組分A，經(jīng)過10-30h的轉(zhuǎn)化，待A組分的含量在85％-95％，C組分的含量在5％以下時，發(fā)酵結(jié)束，發(fā)酵液可以放罐。

步驟1)所述二級種子罐中接種量大的二級種子罐，0-10h每升種子液每分鐘通入0.8L無菌空氣，10-45h每升種子液每分鐘通入1.2L無菌空氣；接種量小的的二級種子罐，0-10h每升種子液每分鐘通入0.6L無菌空氣，10-45h每升種子液每分鐘通入0.9L無菌空氣。

所述步驟3)的發(fā)酵溫度為28℃，0-30h空氣流量為每升發(fā)酵液每分鐘通氣量為0.5L，30h到發(fā)酵結(jié)束每升發(fā)酵液每分鐘通氣量為0.8L。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明泰樂菌素發(fā)酵新工藝，采用泰樂菌素自身菌體作為微生物氮源，不受加工、運(yùn)輸、產(chǎn)地、季節(jié)等因素的影響，氮源質(zhì)量穩(wěn)定；微生物氮源容易吸收利用，縮短了發(fā)酵周期，有效的解決了發(fā)酵周期長的問題。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

泰樂菌素發(fā)酵新工藝，包括以下步驟：

用有效容積10L的罐作為一級種子罐，培養(yǎng)種子液6L；培養(yǎng)52h后，菌絲濃度到達(dá)了12％，這時同時移入兩個二級種子罐，二級種子罐的有效容積為50L,每個二級種子罐均加入30L滅菌基礎(chǔ)料，一個接入種子液2L，為1#二級種子罐,另外一個接入種子液4L，為2#二級種子罐；1#二級種子罐0-10h空氣流量為19.2L/min，10h后為28.8L/min；2#二級種子罐0-10h空氣流量為27.2L/min，10h后為40.8L/min；培養(yǎng)溫度為29℃；1#二級種子罐培養(yǎng)到28h，菌絲濃度在18％，發(fā)酵罐開始配料，配料體積66L,將2#二級種子罐的種子液壓入發(fā)酵罐后體積為100L；開始滅菌，滅菌后培養(yǎng)基體積為110L，待發(fā)酵罐培養(yǎng)基溫度降至30℃，將1#二級種子罐內(nèi)的種子液接入發(fā)酵罐，開始發(fā)酵培養(yǎng)。

發(fā)酵罐培養(yǎng)溫度為28℃，0-30h通氣量為71L/min，30h后為113.6L/min；培養(yǎng)到122h用HPLC法檢測發(fā)酵液組分，A組分含量為58.62％，C組分含量為33.71％，根據(jù)C組分的含量，在143h將發(fā)酵罐罐溫升至38℃進(jìn)行組分轉(zhuǎn)化，160hA組分含量到達(dá)了90.38％，C組分含量為0.86％，發(fā)酵結(jié)束放罐。

實(shí)施例2

泰樂菌素發(fā)酵新工藝，包括以下步驟：

用有效容積10L的罐作為一級種子罐，培養(yǎng)種子液8L；培養(yǎng)55h后，菌絲濃度到達(dá)了14％，這時同時移入兩個二級種子罐，二級種子罐的有效容積為50L,,每個二級種子罐均加入30L滅菌基礎(chǔ)料，一個接入種子液3L，為1#二級種子罐,另外一個接入種子液6L，為2#二級種子罐；1#二級種子罐0-10h空氣流量為19.8L/min，10h后為29.7L/min；2#二級種子罐0-10h空氣流量為28.8L/min，10h后為43.2L/min；培養(yǎng)溫度都為29℃；1#二級種子罐培養(yǎng)到30h，菌絲濃度在20％，發(fā)酵罐開始配料，配料體積60L,將2#二級種子罐的種子液壓入發(fā)酵罐后體積為96L；開始滅菌，滅菌后培養(yǎng)基體積為106L；待發(fā)酵罐培養(yǎng)基溫度降至30℃，將1#二級種子罐內(nèi)的種子液接入發(fā)酵罐，開始發(fā)酵培養(yǎng)。

發(fā)酵罐培養(yǎng)溫度為28℃，0-30h通氣量為68.5L/min，30h后為111.2L/min；培養(yǎng)到120h用HPLC法檢測發(fā)酵液組分，A組分含量為54.32％，C組分含量為29.78％，根據(jù)C組分的含量，在145h將發(fā)酵罐罐溫升至38℃進(jìn)行組分轉(zhuǎn)化，160hA組分含量到達(dá)了89.57％，C組分含量為0.31％，發(fā)酵結(jié)束放罐。

實(shí)施例3

泰樂菌素發(fā)酵新工藝，包括以下步驟：

用有效容積10L的罐作為一級種子罐，培養(yǎng)種子液5L；培養(yǎng)56h后，菌絲濃度到達(dá)了14％，這時同時移入兩個二級種子罐，二級種子罐的有效容積為50L,每個二級種子罐均加入30L滅菌基礎(chǔ)料，一個接入種子液1.5L，為1#二級種子罐,另外一個接入種子液3L，為2#二級種子罐；1#二級種子罐0-10h空氣流量為18.9L/min，10h后為28.35L/min；2#二級種子罐0-10h空氣流量為26.4L/min，10h后為39.6L/min；培養(yǎng)溫度都為29℃；1#二級種子罐培養(yǎng)到33h，菌絲濃度在22％，發(fā)酵罐開始配料，配料體積55L,將2#二級種子罐的種子液壓入發(fā)酵罐后體積為88L；開始滅菌，滅菌后培養(yǎng)基體積為97L；待發(fā)酵罐培養(yǎng)基溫度降至30℃，將1#二級種子罐內(nèi)的種子液接入發(fā)酵罐，開始發(fā)酵培養(yǎng)。

發(fā)酵罐培養(yǎng)溫度為28℃，0-30h通氣量為64.25L/min，30h后為102.8L/min；培養(yǎng)到123h用HPLC法檢測發(fā)酵液組分，A組分含量為52.13％，C組分含量為31.76％，根據(jù)C組分的含量，在144h將發(fā)酵罐罐溫升至38℃進(jìn)行組分轉(zhuǎn)化，160hA組分含量到達(dá)了91.54％，C組分含量為0.00％，發(fā)酵結(jié)束放罐。