本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，更具體而言，涉及一類新的具有降血脂活性的竹柏內(nèi)酯類化合物，其制備方法及用于降血脂\動(dòng)脈粥樣硬化的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：動(dòng)脈粥樣硬化是因?yàn)檠装Y細(xì)胞與動(dòng)脈壁之間的炎癥反應(yīng)不斷惡化而形成的慢性炎癥性的疾病，是當(dāng)今西方社會(huì)上致死量最高的因素之一。降血脂療法是針對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化最有效的治療手段，其中他汀類作為降脂藥中的明星藥物在降脂市場(chǎng)中占據(jù)了很大的份額，非常有效的降低了高血脂病人心血管疾病的發(fā)生和致死率。然而，他汀類并非對(duì)所有的高血脂，和高動(dòng)脈粥樣硬化硬化風(fēng)險(xiǎn)的病人有效果，很大一部分患者對(duì)他汀類反應(yīng)不敏感，不能靠他汀類阻止其動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展進(jìn)程，發(fā)展新型的降血脂藥物的任務(wù)迫在眉睫。綜上所述，本領(lǐng)域迫切需要提供新的具有降血脂活性的化合物。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一類具有降血脂活性的化合物。本發(fā)明的第一方面，提供了一種如下式i所示的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽：其中，式i為選自式i-1，i-2或i-3之一：a選自下組：n-r、o；其中，r選自下組：h、c1-c4的酰基、c1-c4的烷基、c1-c4的鹵代烷基、取代或未取代的c6-c10芳基、取代或未取代的c1-c10雜芳基；r1選自下組：h、取代或未取代的c1-c4的烷基、c1-c4的鹵代烷基、取代或未取代的c1-c4烷基(如2-羥基乙基，2-羥甲基乙基)、取代或未取代的乙烯基；r2選自下組：無、h、氧原子、取代或未取代的c2-c10的酯基、-or，其中，所述的r選自下組：h、取代或未取代的c2-c10的酰基、芴甲氧羰?；?fmoc)、或取代或未取代的c1-c10烷基；較佳地，r’為h；r3選自下組：h、鹵素、c1-c4的烷基、c1-c4的鹵代烷基、-oh、取代或未取代的c2-c10的酯基、-nh-r；其中，r選自下組：h、c1-c4的酰基、取代或未取代的c1-c4的烷基；r4選自下組：h、鹵素、氧原子、氰基、羥基、羧基、c1-c4的烷氧基、c1-c4的烷基、c1-c4的鹵代烷基、取代或未取代的c2-c10的酯基、-oc(o)-r、-nh-r；其中，r選自下組：h、c1-c4的酰基、取代或未取代的c1-c4的烷基；r5選自下組：h、鹵素、氰基、羥基、-or、-coor、取代或未取代c1-c10烷基、取代或未取代的c1-c10鹵代烷基、取代或未取代的c2-c30的酯基、取代或未取代(優(yōu)選為取代)的c7-c11芳基-酰基、-nh-r；其中，r選自下組：h、c1-c4的?；⑷〈蛭慈〈腸1-c4的烷基；或r4和r5共同構(gòu)成-r”-o-r”-，其中，所述的r”為無，或取代或未取代的c1-c4的亞烷基；r6選自下組：h、鹵素、氧原子、氰基、羧基、羥基、-or、-coor、取代或未取代c1-c10烷基、取代或未取代的c1-c10鹵代烷基、取代或未取代的c2-c10的酯基、取代或未取代(優(yōu)選為取代)的c7-c11芳基?；?、-nh-r；其中，r選自下組：h、c1-c4的?；?、取代或未取代的c1-c4的烷基；或r5和r6共同構(gòu)成-r”-o-r”-，其中，所述的r”為無，或取代或未取代的c1-c4的亞烷基；r7選自下組：h、c1-c4的烷基、c1-c4的鹵代烷基；r8為無，h、或r8與r2共同構(gòu)成-r”-o-r”-，其中，所述的r”為無或c1-c4的亞烷基：r9為無，h、或r9為-oh；所述的“”為雙鍵或單鍵；所述的“取代”指基團(tuán)上的一個(gè)或多個(gè)氫原子被選自下組的取代基取代：羧基、未取代或鹵代的c1-c6烷基、未取代或鹵代的c3-c6的環(huán)烷基、未取代或鹵代的c2-c10的酯基、鹵素、c1-c10烷基-氧基、未取代或鹵代的c2-c10?；⒘u基、羥基-c1-c10的亞烷基、未取代或鹵代的苯基；且當(dāng)母核為i-1結(jié)構(gòu)時(shí)，r2、r5和r6中至少有一個(gè)為選自下組的基團(tuán)：-or或取代或未取代的c2-c10的酯基；或r5和r6共同形成-oc(ch)2-o-結(jié)構(gòu)；當(dāng)母核為i-3結(jié)構(gòu)時(shí)，r2、r4和r6中至少有一個(gè)為氧原子；或所述的式i化合物具有以下結(jié)構(gòu)：在另一優(yōu)選例中，在所述化合物中，各手性碳原子可以任選地為r構(gòu)型或s構(gòu)型。在另一優(yōu)選例中，所述的c2-c10的?；竎2-c10的酸失去一個(gè)羥基形成的基團(tuán)，且所述的酸選自下組：羧酸、碳酸。在另一優(yōu)選例中，所述的羧酸包括飽和羧酸、不飽和羧酸、或芳香族羧酸。在另一優(yōu)選例中，所述的r2為c2-c10的芳香酯基，優(yōu)選地選自下組：苯甲?；⒒蛉〈谋郊柞；黄渲?，所述的取代是指苯甲酰基上的一個(gè)或多個(gè)氫原子被選自下組的取代基取代：鹵素、硝基、氨基、甲基、甲氧基。在另一優(yōu)選例中，所述的r2為碳酸酯基。在另一優(yōu)選例中，當(dāng)所述的r2為羥基時(shí)，還任選地帶有羥基保護(hù)基；較佳地，所述的羥基保護(hù)基為帶酰氯或者游離酸的保護(hù)基。在另一優(yōu)選例中，所述的r1、r3和r7各自獨(dú)立地為c1-c4的烷基。在另一優(yōu)選例中，所述的r4為h或羥基。在另一優(yōu)選例中，所述的r5為h或羥基。在另一優(yōu)選例中，所述的r1為異丙基。在另一優(yōu)選例中，所述的r3和r7各自獨(dú)立地為甲基。在另一優(yōu)選例中，所述的式i化合物具有以下式ia所示的結(jié)構(gòu)：式中，r1選自下組：取代或未取代的c1-c4的烷基、c1-c4的鹵代烷基；其中，所述的取代指基團(tuán)上的一個(gè)或多個(gè)氫原子被c1-c4的酯基取代；r2為-oh、-or或取代或未取代的c2-c10的酯基；r7選自下組：c1-c4的烷基、c1-c4的鹵代烷基；其余各基團(tuán)的定義如本發(fā)明第一方面中所述。在另一優(yōu)選例中，所述的式i化合物具有以下式ib所示的結(jié)構(gòu)：式中，r1選自下組：取代或未取代的c1-c4的烷基、c1-c4的鹵代烷基；r2與r8共同構(gòu)成-o-；r7選自下組：c1-c4的烷基、c1-c4的鹵代烷基；其余各基團(tuán)的定義如本發(fā)明第一方面中所述。在另一優(yōu)選例中，r5選自下組：鹵素、氰基、羥基、c1-c4的烷氧基、-coor、取代或未取代的c2-c10的酯基、取代或未取代c1-c10烷基、取代或未取代的c1-c10鹵代烷基、-nh-r；其中，r選自下組：h、c1-c4的酰基、c1-c4的烷基、c1-c4的鹵代烷基、取代或未取代(優(yōu)選為取代)的c7-c11芳基-?；Ｔ诹硪粌?yōu)選例中，r6選自下組：鹵素、氰基、羧基、羥基、c1-c4的烷氧基、取代或未取代的c2-c10的酯基、取代或未取代c1-c10烷基、取代或未取代的c1-c10鹵代烷基、取代或未取代(優(yōu)選為取代)的c7-c11芳基-酰基、-nh-r；其中，r選自下組：h、c1-c4的?；?、c1-c4的烷基、c1-c4的鹵代烷基。在另一優(yōu)選例中，在另一優(yōu)選例中，r2選自下組：o-r’，其中，所述的r’選自下組：h、取代或未取代的c2-c10的?；?、或取代或未取代的c1-c10的烷基；r4選自下組：h、鹵素、氰基、羧基、羥基、c1-c4的烷氧基、取代或未取代的c2-c10的酯基；r5選自下組：h、鹵素、氰基、羥基、c1-c4的烷氧基、-coor、取代或未取代的c2-c10的酯基、取代或未取代c1-c10烷基、取代或未取代的c1-c10鹵代烷基、-nh-r；其中，r選自下組：h、c1-c4的?；?、c1-c4的烷基、c1-c4的鹵代烷基、取代或未取代(優(yōu)選為取代)的c7-c11芳基-?；?；r6選自下組：h、鹵素、氰基、羧基、羥基、c1-c4的烷氧基、取代或未取代的c2-c10的酯基、取代或未取代c1-c10烷基、取代或未取代的c1-c10鹵代烷基、取代或未取代(優(yōu)選為取代)的c7-c11芳基-酰基、-nh-r；其中，r選自下組：h、c1-c4的?；?、c1-c4的烷基、c1-c4的鹵代烷基；所述的“取代”指基團(tuán)上的一個(gè)或多個(gè)氫原子被選自下組的取代基取代：羧基、苯基、c3-c6的環(huán)烷基、c1-c10的酯基、鹵素、c1-c10烷基-氧基、c2-c10?；?、羥基、羥基-c1-c10的亞烷基。在另一優(yōu)選例中，所述的r2、r4、r5和r6各自獨(dú)立地為選自下組的基團(tuán)：-or’，且所述的r’選自下組：在另一優(yōu)選例中，所述的a、r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8和r9為如實(shí)施例中各具體化合物所對(duì)應(yīng)的基團(tuán)。在另一優(yōu)選例中，所述的化合物具有選自下組的結(jié)構(gòu)：或所述的化合物為如式3b、4a或4b所示，其中，ra、rb、rc和rd的定義如表1、表2和表3中所述：本發(fā)明的第二方面，提供了一種如本發(fā)明第一方面所述的化合物用于選自下組的一種或多種用途：a)制備用于降血脂的藥物組合物；b)制備用于降低低密度脂蛋白(ldl)含量的藥物組合物；c)制備用于穩(wěn)定ldlr基因穩(wěn)定性的藥物組合物；d)制備用于上調(diào)ldlr基因表達(dá)的藥物組合物；e)制備用于增加肝細(xì)胞表面ldlr受體數(shù)量的藥物組合物；f)制備用于減少ldlr受體降解的藥物組合物；g)制備用于降低血液中tc和/或tg濃度的藥物組合物；h)制備用于增加血液中高密度脂蛋白(hdl)濃度的藥物組合物；i)制備用于改善肝功能損傷的藥物組合物。在另一優(yōu)選例中，所述的肝功能損傷為高脂誘導(dǎo)的肝功能損傷。在另一優(yōu)選例中，所述的改善肝功能損傷為降低alt\ast指標(biāo)。在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物還用于選自下組的用途：j)(體外非治療性地)增加肝細(xì)胞對(duì)ldl的攝取率；k)(體外非治療性地)上調(diào)肝細(xì)胞ldlr基因表達(dá)水平。在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物中，所述式i化合物的有效劑量為0.1-50mg/kg體重，較佳地為1-20mg/kg體重。在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物為選自下組的劑型：口服劑型、注射劑型。在另一優(yōu)選例中，所述的劑型包括片劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑等。本發(fā)明的第三方面，提供了一種藥盒，所述藥盒含有：(i)第一容器，以及裝于該第一容器中的活性成分(a)式i化合物；或含有活性成分(a)的藥物；(ii)第二容器，以及裝于該第二容器中的活性成分(b)他汀類藥物，或其藥學(xué)上可接受的鹽；或含有活性成分(b)的藥物；以及(iii)說明書，所述說明書中記載了聯(lián)合給予活性成分(a)和活性成分(b)從而降低使用對(duì)象體內(nèi)低密度脂蛋白含量的說明。在另一優(yōu)選例中，所述的式i化合物如本發(fā)明第一方面中所述。在另一優(yōu)選例中，所述的使用對(duì)象為哺乳動(dòng)物，較佳地為人。在另一優(yōu)選例中，所述的他汀類藥物選自下組：普伐他汀、阿伐他汀，或其組合。本發(fā)明的第四方面，提供了一種如下式i所示的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途：其中，a、r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8和r9等定義如本發(fā)明第一方面中所述，并且所述的“”為雙鍵或單鍵；其中，所述的化合物被用于選自下組的用途：a)降低施用對(duì)象的血脂水平；b)降低施用對(duì)象低密度脂蛋白(ldl)含量；c)穩(wěn)定施用對(duì)象ldlr基因穩(wěn)定性；d)上調(diào)施用對(duì)象ldlr基因表達(dá)；e)增加施用對(duì)象肝細(xì)胞表面ldlr受體數(shù)量；f)減少施用對(duì)象ldlr受體降解；g)降低施用對(duì)象血液中tc和/或tg濃度；h)增加施用對(duì)象血液中高密度脂蛋白(hdl)濃度；i)改善施用對(duì)象肝功能損傷。在另一優(yōu)選例中，所述的施用對(duì)象為哺乳動(dòng)物，較佳地為人。在另一優(yōu)選例中，所述的肝功能損傷為高脂誘導(dǎo)的肝功能損傷。在另一優(yōu)選例中，所述的改善肝功能損傷為降低alt\ast指標(biāo)。應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。具體實(shí)施方式本發(fā)明人經(jīng)過長(zhǎng)期而深入的研究，意外地發(fā)現(xiàn)，竹柏內(nèi)酯類化合物具有良好的降血脂活性，且活性優(yōu)于現(xiàn)有通用的降血脂化合物他汀類藥物。所述的化合物可以時(shí)間依賴性及劑量依賴性地在體內(nèi)或體外降低總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白濃度，并增加高密度脂蛋白濃度?；谏鲜霭l(fā)現(xiàn)，發(fā)明人完成了本發(fā)明。術(shù)語如本文所用，術(shù)語“c1-c4烷基”或“c1-c10烷基”指具有1～4個(gè)或1-10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基，或類似基團(tuán)。術(shù)語“c3-c6環(huán)烷基”指具有3～6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、甲基環(huán)丁基、環(huán)戊基，或類似基團(tuán)。如本文所用，術(shù)語“c1-c10?；被颉癱1-c4?；敝感稳纭熬哂?～9個(gè)或0-3個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基/環(huán)烷基/芳基/雜芳基/烯基/炔基-羰基”結(jié)構(gòu)的取代基，如乙?；⒈；⒍□；蝾愃苹鶊F(tuán)。術(shù)語“c2-c30酯基”指形如-ooc-r'所示結(jié)構(gòu)的基團(tuán)，其中，所述的r'為具有1～9個(gè)碳原子的選自下組的基團(tuán)：直鏈或支鏈烷基、環(huán)烷基、烯基、炔基、芳基或雜芳基結(jié)構(gòu)的取代基，如乙酰基、丙?；?、丁?；?，或類似基團(tuán)。其中，所述的r'還可以進(jìn)一步被取代，例如被選自下組的一個(gè)或多個(gè)取代基所取代：鹵素、-oh、-cooh、-coo(c1-c6烷基)、未取代或鹵代的苯基、未取代或鹵代的c1-c6烷基、未取代或鹵代的c2-c6酰基、未取代或鹵代的c1-c6烷基-羥基。術(shù)語“c1-c4亞烷基”指如上文所述的c1～c4烷基失去一個(gè)氫原子之后形成的基團(tuán)，例如-ch2-、-ch2-ch2-，或類似基團(tuán)。術(shù)語“鹵素”指f、cl、br和i。術(shù)語“c6-c10芳基”指具有6-10個(gè)碳原子的芳基，例如苯基、萘基等，所述的芳基可以是取代或未取代的。術(shù)語“c1-c10雜芳基”指具有1-10個(gè)碳原子和一個(gè)或多個(gè)選自o、s和/或n的雜原子的雜芳基，優(yōu)選c2-c8雜芳基。所述的雜芳基可以是取代或未取代的。本發(fā)明中，術(shù)語“含有”、“包含”或“包括”表示各種成分可一起應(yīng)用于本發(fā)明的混合物或組合物中。因此，術(shù)語“主要由...組成”和“由...組成”包含在術(shù)語“含有”中。本發(fā)明中，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”成分是指適用于人和/或動(dòng)物而無過度不良副反應(yīng)(如毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng))，即有合理的效益/風(fēng)險(xiǎn)比的物質(zhì)。本發(fā)明中，術(shù)語“有效量”指治療劑治療、緩解或預(yù)防目標(biāo)疾病或狀況的量，或是表現(xiàn)出可檢測(cè)的治療或預(yù)防效果的量。對(duì)于某一對(duì)象的精確有效量取決于該對(duì)象的體型和健康狀況、病癥的性質(zhì)和程度、以及選擇給予的治療劑和/或治療劑的組合。因此，預(yù)先指定準(zhǔn)確的有效量是沒用的。然而，對(duì)于某給定的狀況而言，可以用常規(guī)實(shí)驗(yàn)來確定該有效量，臨床醫(yī)師是能夠判斷出來的。在本文中，除特別說明之處，術(shù)語“取代”指基團(tuán)上的一個(gè)或多個(gè)氫原子被選自下組的取代基取代：鹵素、-oh、-cooh、-coo(c1-c6烷基)、未取代或鹵代的苯基、未取代或鹵代的c1-c6烷基、未取代或鹵代的c2-c6酰基、未取代或鹵代的c1-c6烷基-羥基。除非特別說明，本發(fā)明中，所有出現(xiàn)的化合物均意在包括所有可能的光學(xué)異構(gòu)體，如單一手性的化合物，或各種不同手性化合物的混合物(即外消旋體)。本發(fā)明的所有化合物之中，各手性碳原子可以任選地為r構(gòu)型或s構(gòu)型，或r構(gòu)型和s構(gòu)型的混合物。如本文所用，術(shù)語“本發(fā)明化合物”指式i所示的化合物。該術(shù)語還包括及式i化合物的各種晶型形式、藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑合物。如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”指本發(fā)明化合物與酸或堿所形成的適合用作藥物的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽包括無機(jī)鹽和有機(jī)鹽。一類優(yōu)選的鹽是本發(fā)明化合物與酸形成的鹽。適合形成鹽的酸包括但并不限于：鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機(jī)酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有機(jī)酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸?；谥癜貎?nèi)酯母核的化合物竹柏(podocarpusnagi)為羅漢松科(podocarpaceae)羅漢松屬植物，主要化學(xué)成分為降二萜雙內(nèi)酯，具有抗腫瘤、抗菌、殺蟲、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)抑制等作用。本發(fā)明人首次發(fā)現(xiàn)，竹柏內(nèi)酯類化合物可以增強(qiáng)肝細(xì)胞攝取低密度脂蛋白的能力。體內(nèi)藥效學(xué)評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)所述的化合物可以非常顯著的降低高脂誘導(dǎo)脂質(zhì)代謝紊亂的金黃地鼠的總膽固醇，甘油三酯，低密度脂蛋白等血脂指標(biāo)，提高高密度脂蛋白在總膽固醇中的比例，改善其肝功能，同時(shí)可以緩解高脂飲食引起的脂肪肝形成，因此是一種潛在的降脂化合物。具體地，本發(fā)明人以從竹柏樹皮、樹枝、樹葉和果實(shí)中分離得到的降二萜內(nèi)酯類化合物2、3、4和12等為原料，進(jìn)行了一系列結(jié)構(gòu)改造，經(jīng)過如酯化，消除，氫化等步驟，得到式2-b1、3-1～3-4、3-b1～3-b10、7-a1、12-1和4-a以及4-b化合物：其中rc和rd如下表1中所示：表1其中ra和rb如下表2中所示：表2化合物編號(hào)ra取代基rb取代基esi-msm/z[m+h]+4-a1meh363.24-a2hme363.24-a3meme377.24-a4eth377.24-a5het377.24-a6etet405.34-a7h-ch2-ch＝ch2389.24-a8-ch2-ch＝ch2-ch2-ch＝ch2429.3其中rc和rd如下表3中所示：表3其中，上述的反應(yīng)可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員結(jié)合本領(lǐng)域的現(xiàn)有技術(shù)，根據(jù)實(shí)際反應(yīng)條件進(jìn)行設(shè)計(jì)，本發(fā)明實(shí)施例中提供了一些示例性的方法(見實(shí)施例2-8中詳述)。竹柏內(nèi)酯類化合物降低ldl濃度的用途低密度脂蛋白受體(ldlr)是肝臟回收攝取低密度脂蛋白ldl的主要受體，于1974年被發(fā)現(xiàn)，并開始廣泛開始其結(jié)構(gòu)和功能方面的相關(guān)研究。ldlr由839個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成，合成于粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，經(jīng)過剪接和糖基化修飾后轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞膜上的大小約160kd胞膜糖蛋白。ldlr基因突變是遺傳性高血脂癥的主要原因之一。ldlr基因的表達(dá)水平和血漿膽固醇水平密切相關(guān)，位于ldlr基因啟動(dòng)子部位的sre調(diào)節(jié)位點(diǎn)受細(xì)胞內(nèi)srebp1/2的調(diào)節(jié)，而后者是與胞內(nèi)膽固醇水平密切相關(guān)。但細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平高時(shí)，srebp被固定于er膜上，不能進(jìn)入高爾基體激活；當(dāng)細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平降低時(shí)，srebp在膽固醇的作用下被釋放，隨后轉(zhuǎn)移到高爾基體內(nèi)被剪接成活化蛋白，進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，作為轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)含有sre的基因轉(zhuǎn)錄，包括ldlr，hmg-coar等膽固醇和脂肪酸代謝相關(guān)的基因。除了膽固醇水平調(diào)節(jié)，ldlr基因還受許多細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子和激素的調(diào)節(jié)，如雌激素，腫瘤壞死因子，佛波酯，胰島素等。他汀類藥物是hmg-coar的抑制劑，本類藥物通過抑制膽固醇的合成，降低細(xì)胞內(nèi)膽固醇的含量，從而負(fù)反饋型上調(diào)ldlr的細(xì)胞內(nèi)水平，達(dá)到進(jìn)一步增強(qiáng)其降脂功能的作用。調(diào)節(jié)ldlr水平和功能是調(diào)節(jié)機(jī)體血脂水平的一個(gè)重要途徑。ldlr基因另外一個(gè)特點(diǎn)是其基因具有不穩(wěn)定的特性，基因合成后在很短的時(shí)間內(nèi)即降解。這個(gè)過程可能與ldlr基因本身的3′端序列有關(guān)。ldlr基因3′端含有au富集區(qū)，此區(qū)被看做是基因不穩(wěn)定的一個(gè)特征性序列，很多rna結(jié)合蛋白可以與此序列結(jié)合，從而引起mrna的迅速降解。小檗堿被報(bào)道可以增加ldlr基因的穩(wěn)定性，提高其基因和蛋白水平，從而增加ldlr的功能，降低血漿ldl水平，經(jīng)過臨床試驗(yàn)已證實(shí)小檗堿是一個(gè)有效的通過調(diào)節(jié)ldlr水平發(fā)揮降脂效果的化合物。本申請(qǐng)中，所述的竹柏內(nèi)酯類化合物可以在體內(nèi)或體外上調(diào)ldlr蛋白的基因表達(dá)水平，同時(shí)增加ldlr蛋白本身的穩(wěn)定性，從而使得ldlr蛋白水平上調(diào)，進(jìn)而促進(jìn)肝細(xì)胞對(duì)于低密度脂蛋白的攝取。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，所述的竹柏內(nèi)酯類化合物對(duì)ldlr蛋白水平有上調(diào)作用，進(jìn)而促進(jìn)肝細(xì)胞對(duì)于低密度脂蛋白的攝取，從而降低血液中l(wèi)dl濃度，達(dá)到清除ldl的目的。除此之外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，除了ldl水平得到下降之外，受試動(dòng)物的血清總膽固醇(tc)水平，甘油三酯(tg)水平也同樣得到下調(diào)。同時(shí)，高密度脂蛋白在總膽固醇中的比例顯著提高。這說明竹柏內(nèi)酯類化合物對(duì)于高脂誘導(dǎo)的脂肪肝形成具有減緩作用。另外，在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，給予竹柏內(nèi)酯類化合物對(duì)于高脂飲食導(dǎo)致的肝功能損傷也產(chǎn)生了一定的改善，具體表現(xiàn)為血液中天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶指標(biāo)水平的改善。藥物組合物和施用方法由于本發(fā)明化合物具有優(yōu)異的降低血液中l(wèi)dl含量的活性，因此本發(fā)明化合物及其各種晶型，藥學(xué)上可接受的無機(jī)或有機(jī)鹽，水合物或溶劑合物，以及含有本發(fā)明化合物為主要活性成分的藥物組合物可用于治療、預(yù)防以及緩解由于血液中l(wèi)dl含量過高導(dǎo)致的疾病，如脂肪肝等。本發(fā)明的藥物組合物包含安全有效量范圍內(nèi)的本發(fā)明化合物或其藥理上可接受的鹽及藥理上可以接受的賦形劑或載體。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明顯改善病情，而不至于產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用。通常，藥物組合物含有1-3000(活性劑量范圍3-30mg/kg)mg本發(fā)明化合物/劑，更佳地，含有10-2000mg本發(fā)明化合物/劑。較佳地，所述的“一劑”為一個(gè)膠囊或藥片?！八帉W(xué)上可以接受的載體”指的是：一種或多種相容性固體或液體填料或凝膠物質(zhì)，它們適合于人使用，而且必須有足夠的純度和足夠低的毒性?！跋嗳菪浴痹诖酥傅氖墙M合物中各組份能和本發(fā)明的化合物以及它們之間相互摻和，而不明顯降低化合物的藥效。藥學(xué)上可以接受的載體部分例子有纖維素及其衍生物(如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素鈉、纖維素乙酸酯等)、明膠、滑石、固體潤(rùn)滑劑(如硬脂酸、硬脂酸鎂)、硫酸鈣、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄欖油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化劑潤(rùn)濕劑(如十二烷基硫酸鈉)、著色劑、調(diào)味劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑、防腐劑、無熱原水等。本發(fā)明化合物或藥物組合物的施用方式?jīng)]有特別限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤內(nèi)、直腸、腸胃外(靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下)、和局部給藥。用于口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在這些固體劑型中，活性化合物與至少一種常規(guī)惰性賦形劑(或載體)混合，如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，或與下述成分混合：(a)填料或增容劑，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合劑，例如，羥甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；(c)保濕劑，例如，甘油；(d)崩解劑，例如，瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些復(fù)合硅酸鹽、和碳酸鈉；(e)緩溶劑，例如石蠟；(f)吸收加速劑，例如，季胺化合物；(g)潤(rùn)濕劑，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(h)吸附劑，例如，高嶺土；和(i)潤(rùn)滑劑，例如，滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉，或其混合物。膠囊劑、片劑和丸劑中，劑型也可包含緩沖劑。固體劑型如片劑、糖丸、膠囊劑、丸劑和顆粒劑可采用包衣和殼材制備，如腸衣和其它本領(lǐng)域公知的材料。它們可包含不透明劑，并且，這種組合物中活性化合物或化合物的釋放可以延遲的方式在消化道內(nèi)的某一部分中釋放?？刹捎玫陌窠M分的實(shí)例是聚合物質(zhì)和蠟類物質(zhì)。必要時(shí)，活性化合物也可與上述賦形劑中的一種或多種形成微膠囊形式。用于口服給藥的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳液、溶液、懸浮液、糖漿或酊劑。除了活性化合物外，液體劑型可包含本領(lǐng)域中常規(guī)采用的惰性稀釋劑，如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑，例知，乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特別是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油或這些物質(zhì)的混合物等。除了這些惰性稀釋劑外，組合物也可包含助劑，如潤(rùn)濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、矯味劑和香料。除了活性化合物外，懸浮液可包含懸浮劑，例如，乙氧基化異十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、甲醇鋁和瓊脂或這些物質(zhì)的混合物等。用于腸胃外注射的組合物可包含生理上可接受的無菌含水或無水溶液、分散液、懸浮液或乳液，和用于重新溶解成無菌的可注射溶液或分散液的無菌粉末。適宜的含水和非水載體、稀釋劑、溶劑或賦形劑包括水、乙醇、多元醇及其適宜的混合物。用于局部給藥的本發(fā)明化合物的劑型包括軟膏劑、散劑、貼劑、噴射劑和吸入劑。活性成分在無菌條件下與生理上可接受的載體及任何防腐劑、緩沖劑，或必要時(shí)可能需要的推進(jìn)劑一起混合。本發(fā)明化合物可以單獨(dú)給藥，或者與其他藥學(xué)上可接受的化合物聯(lián)合給藥。使用藥物組合物時(shí)，是將安全有效量的本發(fā)明化合物適用于需要治療的哺乳動(dòng)物(如人)，其中施用時(shí)劑量為藥學(xué)上認(rèn)為的有效給藥劑量，對(duì)于60kg體重的人而言，日給藥劑量通常為1～2000mg，優(yōu)選6～600mg。當(dāng)然，具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)包括：1.對(duì)竹柏內(nèi)酯類化合物進(jìn)行了改造，使其具有相較于天然竹柏內(nèi)酯類化合物而言更好的降血脂活性(體外活性與現(xiàn)有技術(shù)中已知的藥物普伐他汀和阿伐他汀相當(dāng)，或優(yōu)于上述化合物)；2.本發(fā)明的竹柏內(nèi)酯化合物的降血脂活性具有明顯的時(shí)間依賴性和劑量依賴性；3.本發(fā)明的竹柏內(nèi)酯化合物可以有效降低血液中l(wèi)dl濃度作用機(jī)制：通過穩(wěn)定ldlr基因的穩(wěn)定性上調(diào)ldlr基因的表達(dá)，從而增加肝細(xì)胞表面ldlr受體數(shù)量，達(dá)到清除ldl的目的；4.本發(fā)明化合物的體外、體內(nèi)活性均有效，活性劑量低，可以在低達(dá)3mg/kg的劑量下就表現(xiàn)出降血脂效果，遠(yuǎn)低于與已報(bào)道的普伐他汀和小檗堿類藥物起效劑量；5.除了降低ldl外，還能降低血液中tc、tg濃度，并增加hdl(高密度脂蛋白，對(duì)機(jī)體有利的一種蛋白)濃度；6.除了降低血脂指標(biāo)外，對(duì)高脂誘導(dǎo)的肝功能損傷有明顯的改善功能，能夠顯著降低alt\ast(衡量肝功能指標(biāo))。儀器和器材此外光譜uv：shimadiuuv-2550和beckmandu-7紫外可見光光譜儀；紅外光譜ir：perkin-elmer577型紅外分光光度儀；低分辨質(zhì)譜lr-eims：finniganmat-95；高分辨質(zhì)譜hr-eims：kratos1hspectrometer；核磁共振譜：varianinova600型核磁共振儀，brukeram-500，am-400，am-300型核磁共振儀，δ(ppm)，以tms為內(nèi)標(biāo)；lc-ms：agilent1100液相偶聯(lián)brukeresquire質(zhì)譜儀；分析型hplc：waters2690separatemodel,waterspda996檢測(cè)器偶聯(lián)alltchelsd2000檢測(cè)器，millennium2000操作系統(tǒng)，watersrp18column(5.0×125mm,5μm,waters)，流速1.0ml/min，ch3cn(merck,germany)，h2o(樂百氏)；jascohplc(chiralceliacolumn,5μm,150×4.6mm),流速0.6ml/min,hexane/ethanol(7:3).hplc-ms：waters2695separatemodel,waterspda2998檢測(cè)器偶聯(lián)alltchelsd2424檢測(cè)器，3100msdetector，sunfiretmc-18column(4.6×100mm,3.5μm,waters)，流速1.0ml/min，ch3cn(merck,germany)，h2o(樂百氏)；jascohplc(chiralceliacolumn,5μm,150×4.6mm),流速0.6ml/min,hexane/ethanol(7:3).制備型hplc：variansd1instrument,varians320單波長(zhǎng)檢測(cè)器，c18column(220×25nm,10μm,waters)，流速15ml/min,ch3cn(merck,germany)，h2o(樂百氏)；spectramaxm2e多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)分子儀器公司)；電泳儀和半干電轉(zhuǎn)印槽(bio-radlaboratories,hercules,ca)；pcr儀(bio-radlaboratories,hercules,ca)；臺(tái)式冷凍離心機(jī)(德國(guó)hettich公司)；752c紫外可見分光光度計(jì)(上海第三分析儀器)；dk-8b電熱恒溫水槽(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；revco二氧化碳培養(yǎng)箱(美國(guó)revco公司)；試劑與材料柱層析硅膠：100-200目，200-300目硅膠和硅膠h均為青島海洋化工廠生產(chǎn)；tlc薄層制備板：hsgf254為煙臺(tái)化工廠生產(chǎn)。mci樹脂：chp20p(75-150μm)為三菱公司生產(chǎn)；葡聚糖凝膠sephadexlh-20：pharmaciabiotechab，uppsala，sweden。顯色劑：10％硫酸-香蘭醛溶液，碘；植物材料：竹柏枝葉采于廣西田林，竹柏樹皮采于海南瓊中，由上海藥物研究所標(biāo)本室沈金貴副教授采集并鑒定，標(biāo)本保存于本所標(biāo)本室。dmem、胎牛血清(fetalbovineserum，fbs)購自gibco-brl(grandisland,ny)；dii購自biotuim(hayward,ca)；β-actin抗體購自cellsignalingtechnology(beverly,ma)；ldlr,pcsk9抗體購自abcam(cambridge,unitedkingdom)；pcr引物在上海生工合成。蛋白酶抑制劑cocktail購自calbiochem(sandiego,ca)；immobilon-ptransfer轉(zhuǎn)移膜(pvdf)購自milliporecorporation(bedford,ma)；增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光試劑(enhancedchemiluminescencereagents，ecl)購自pierce(rockford,il)；醫(yī)用x-光膠片購自中國(guó)碧云天公司；trizolreagent購自invitrogen(carlsbad,ca)；m-mlv反轉(zhuǎn)錄酶購自promega(madison,wi)；realtimepcr反應(yīng)試劑購自bio-radlaboratories；金黃地鼠高脂飼料(0.12％膽固醇，10％椰子油)購自上海斯萊克斯公司。蛋白測(cè)定試劑盒購自中國(guó)碧云天公司；肝臟組織甘油三酯tg，總膽固醇tc含量測(cè)定試劑盒購自上海榮盛生物科技公司。血液指標(biāo)(總膽固醇tc，甘油三酯tg，高密度脂蛋白hdl，低密度脂蛋白ldl，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶alt，天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ast)測(cè)定試劑盒購自四川邁克生物公司。其他試劑除特殊說明外均購自上海國(guó)藥集團(tuán)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為雄性敘利亞金黃地鼠，體重100±10g，購自中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。動(dòng)物放置于中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所spf動(dòng)物房(溫度23±1℃；濕度60％)，自然晝/夜循環(huán)，用標(biāo)準(zhǔn)的食物和水飼養(yǎng)。(實(shí)驗(yàn)批準(zhǔn)號(hào)：simm-ae-2010-10-wyp-01)根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的方法從竹柏枝葉中得到化合物2(3-deoxynagilactone)、3(nagilactonea)、4(1-deoxy-2-hydroxy-nagilactonea)、7(nagilactoneb)、12(nagilactonee)并作為原料進(jìn)一步進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾。實(shí)施例1化合物2、3、4、7、12的提取分離方法竹柏樹皮(16.2kg)打粉后用95％乙醇浸泡，室溫提取三次，合并提取液并濃縮至無醇味，然后轉(zhuǎn)移至龍頭瓶中，分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇與水分配，得到石油醚部位(95g)、氯仿部位(15g)、乙酸乙酯部位(255g)，氯仿部位和乙酸乙酯部位合并，硅膠柱純化(200-300目，青島海洋化工生產(chǎn))，用氯仿：甲醇系統(tǒng)200：1，100：1，50：1，30：1，20：1，10：1，5：1，丙酮洗脫，tlc檢測(cè)后合并得到12個(gè)餾分，餾分2通過凝膠柱層析(氯仿/甲醇1：1)，再通過硅膠柱層析(氯仿/丙酮50：1-10：1)得到化合物2(188mg)，12(209mg)。餾分6經(jīng)過硅膠和凝膠柱層析以及pre-hplc制備分離分別得到化合物3(1.2g)和4(2.1g)，餾分7和8合并經(jīng)mci和硅膠柱層析得到化合物7(380mg)。竹柏枝葉(30kg)粉碎，用95％乙醇浸泡三次，濃縮提取液至無醇味，然后依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇分別與水分配，得到二氯甲烷部位(175g)和乙酸乙酯部位(105g)，氯仿和乙酸乙酯部位分別經(jīng)硅膠、凝膠、mci、pre-hplc等柱層析得到化合物2(800mg)，3(1.2g)，4(2.1g)，7(1.1g)?；衔锏奶匦匀缦拢?-deoxynagilactone(2)白色粉末，mf:c19h22o6,esimsm/z347.1[m+h]+,391.3[m+hcoo]-；1hnmr(300mhz,cdcl3):δ5.90(s,1h,h-11),5.29(d,j＝8.9hz,1h,h-7),4.98(dd,j＝8.7,6.0hz,1h,h-6),3.50(m,1h,h-2),3.25(d,j＝6.8hz,1h,h-15),3.23(d,j＝2.3hz,1h,h-1),2.44(d,j＝14.5,2.3hz,1h,h-3a),1.85(d,j＝14.4hz,1h,h-3b),1.71(d,j＝5.7hz,1h,h-5),1.55(s,3h,h-20),1.51(s,3h,h-18),1.32(d,j＝6.6hz,3h,h-16),1.25(d,j＝6.6hz,3h,h-17).nagilactonea(3)白色粉末，mf:c19h24o6.esimsm/z:349.2[m+h]+,719.3[2m+na]+.393.2[m+hcoo]-,1hnmr(300mhz,pyr):δ1.26(d,j＝6.6hz,3h),1.30(d,j＝6.6hz,3h),1.33(s,3h,h-18),1.55(m,1h),1.81(d,j＝5.9hz,1h,h-5),2.01(s,3h,h-17),2.55(m,1h),3.50(m,1h,h-15),4.18(m,1h,h-1),5.17(dd,j＝5.7,8.6hz,1h,h-6),5.67(d,j＝8.2hz,1h,h-7),7.38(s,1h,h-11).1-deoxy-2-hydroxy-nagilactonea(4)白色粉末，mf:c19h24o6.esimsm/z:349.2[m+h]+,719.3[2m+na]+,393.7[m+hcoo]-,1hnmr(300mhz,pyr):δ1.26(d,j＝6.7hz,3h,h-17),1.33(d,j＝6.7hz,3h,h-16),1.45(s,3h,h-18),1.84(s,3h,h-20),1.82(d,j＝5.3hz,h-5),2.05(dd,j＝13.3,6.5hz,1h),2.24(dd,j＝13.7,4.9hz,1h),2.53(m,1h),2.69(t,j＝13.1hz,1h),3.48(m,1h,h-15),4.35(brm,1h,h-2),5.11(dd,j＝6.5,8.5hz,1h,h-6),5.63(d,j＝8.4hz,1h,h-7),6.33(s,1h,h-11),7.80(brs,1h).nagilactoneb(7)白色粉末，mf:c19h24o7,esimsm/z:365.2[m+h]+,751.4[2m+na]+,363.3[m-h]-,727.5[2m-h]-,1hnmr(300mhz,pyr):δ7.04(s,1h,h-11),5.66(d,j＝8.7hz,1h,h-7),5.18(m,1h,h-6),4.33(m,2h),3.50(m,1h,h-15),2.76(t,j＝12.5hz,1h),2.13(d,j＝17.1hz,1h),2.03(s,3h,h-20),1.92(d,j＝6.8hz,1h,h-5),1.48(s,3h,h-18),1.33(d,j＝6.8hz,3h,h-16),1.27(d,j＝6.7hz,3h,h-17).nagilactonee(12)白色粉末，mf:c19h24o6,esimsm/z:349.1[m+h]+,719.3[2m+na]+,347.0[m-h]-.1hnmr(300mhz,cdcl3):δ5.97(s,1h,h-11),4.99(d,j＝3.7hz,1h,h-6),4.42(d,j＝3.8hz,1h,h-14),3.97(s,1h,h-7),3.67(m,1h,h-3),3.47(d,j＝10.0hz,1h),2.17(m,1h),1.93–1.72(m,3h),1.59(s,3h),1.52(s,3h),1.24(d,j＝8.1hz,3h),1.11(dd,j＝6.7,4.5hz,6h).實(shí)施例2化合物2-b1的合成取化合物2(30mg，0.08mmol)溶于無水吡啶(5ml)，加入過量的醋酸酐(0.02ml，2n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)反應(yīng)確認(rèn)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以p-tlc純化(氯仿/甲醇＝50/1(v/v))得到白色固體粉末2-b1(25mg，74％)。2-b1:mf:c21h24o7.mw:388.esimsm/z:389.2[m+h]+,447.2[m+ch3coo]+.1hnmr(300mhz,cdcl3):δ6.28(d,j＝9.6hz,1h,h-7),5.93(s,1h,h-11),5.06(m,1h),3.21(s,1h),2.93(m,1h),2.45(m,1h),2.15(s,3h,ac),1.87(m,1h),1.72(s,1h),1.52(s,3h),1.44(s,3h),1.29–1.18(m,6h,h-16,17).實(shí)施例3化合物3-1～3-4的合成實(shí)驗(yàn)1：化合物3-1和3-2的合成取化合物3(30mg，0.09mmol)，加入pd/c(10％)催化劑5mg，加入甲醇10ml，室溫?cái)嚢瑁ㄈ雋2，反應(yīng)過夜，tlc檢測(cè)反應(yīng)確認(rèn)結(jié)束，將反應(yīng)液中的不溶物過濾，濾液濃縮，lc/ms檢測(cè)有2個(gè)主要峰，用p-hplc制備，得白色固體3-1(14mg,46％)和3-2(8mg,28％)。3-1:c19h28o6.esimsm/z:353.1[m+h]+,375.1[m+na]+,705.4[2m+h]+,737.4[2m+na]+.411.1[m+ch3coo]-,hresimsm/z:375.1763[m+na]+(calcdforc19h28o6na,375.1784),1hnmr(300mhz,cdcl3):δ4.69(s,1h),3.89(1h),3.42(m,1h),3.09(1h),2.71–2.31(m,3h),2.25(s,1h),2.09(1h),1.78(m,1h),1.60(m,1h),1.30(s,3h),1.25(s,2h),1.16(m,3h),1.10(s,2h),0.94(d,j＝6.8hz,2h).3-2:c19h28o5.esimsm/z:337.1[m+h]+,335.1[m-h]-,335.1[m-h]-,hresimsm/z:359.1850[m+na]+(calcdforc19h28o5na,359.1834),1hnmr(300mhz,cdcl3):δ3.99–3.89(m,1h),3.07(m,1h),2.86(m,1h),2.70(m,1h),2.47–2.29(m,2h),2.29–2.15(m,1h),2.10(m,1h),1.92(s,1h),1.79–1.57(m,3h),1.52(d,j＝11.6hz,1h),1.26(s,3h),1.20(m,1h),1.07(s,3h),0.91(d,j＝6.4hz,3h),0.80(d,j＝6.4hz,3h).實(shí)驗(yàn)2：化合物3-3的和合成取化合物3(16mg，0.04mmol)，加入甲醇5ml(干燥)，加入過量的硼氫化鈉(30mg)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)反應(yīng)確認(rèn)結(jié)束，反應(yīng)液濃縮，氯仿萃取，萃取液用純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮后p-tlc純化得白色固體3-3(4mg,30％)。3-3:c19h24o5.mw:332.esimsm/z:333.3[m+h]+,687.4[2m+na]+,331.1[m-h]-,hresimsm/z:355.1529[m+na]+(calcdforc19h24o5na,359.1521),1hnmr(300mhz,cdcl3):δ7.53(s,1h,h-11),5.11(t,j＝5.4hz,2h),4.02(d,j＝5.3hz,1h),2.57(m,5h),2.28(d,j＝5.8hz,1h),2.17(s,1h),2.12(m,1h),1.93(d,j＝7.9hz,1h),1.60(s,3h),1.49(s,3h),1.25(s,3h),1.08(d,j＝6.7hz,3h),0.99(d,j＝6.7hz,3h).實(shí)驗(yàn)3：化合物3-4的合成取化合物3(20mg，0.06mmol)，加入干燥二氯甲烷5ml和3a分子篩，室溫?cái)嚢?，加入pcc(100mg，8n)，tlc監(jiān)測(cè)反應(yīng)，2h后將溶液中的不溶物過濾，濾液濃縮，經(jīng)硅膠柱層析純化后得白色固體3-4(10mg，48％)。3-4:c19h22o7.esimsm/z:385.2[m+na]+,747.3[2m+na]+,361.4[m-h]-,723.6[2m-h]-,hresimsm/z:385.1251[m+na]+(calcdforc19h22o7na,385.1263),1hnmr(300mhz,cdcl3):δ6.29(s,1h,h-11),6.09(d,j＝4.0hz,1h),5.04(t,j＝4.7hz,1h),4.52(d,j＝9.0hz,1h),4.02(dd,j＝14.7,8.4hz,1h),2.62(s,2h),2.47–2.30(m,2h),2.17(s,1h),2.07–1.96(m,3h),1.85(m,2h),1.80–1.68(m,2h),1.66–1.47(m,2h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.27(d,j＝6.2hz,3h),1.25(s,3h),1.21(s,3h),1.07(d,j＝6.6hz,3h),0.93(d,j＝6.7hz,3h).13cnmr(100mhz,meod):δ209.8s,209.6s,183.2s,166.0s,153.4s,125.6d,104.1s,74.2d,56.9d,50.7d,46.6s,44.2s,38.2d,37.3t,29.5t,26.3q,24.0q,18.5q,17.7q.實(shí)施例4：化合物3-b1～3-b10的合成實(shí)驗(yàn)1：化合物3-b1和3-b4的合成取化合物3(70mg，0.2mmol)溶于無水吡啶(5ml)，加入過量的醋酸酐(0.04ml，2n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)反應(yīng)確認(rèn)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以pre-tlc純化(氯仿/甲醇＝50/1(v/v))得到白色固體粉末3-b1(20mg，26％)和3-b4(41mg，47％)。3-b1：mf:c21h26o7.esimsm/z:391.2[m+h]+,389.1[m-h]-,449.2[m+ch3coo]-.1hnmr(300mhz,cdcl3):δ6.80(s,1h,h-11),6.30(d,j＝9.1hz,1h,h-7),5.08(dd,j＝9.1,5.5hz,1h,h-6),4.01(s,1h,h-1),2.96(dt,j＝13.2,6.8hz,1h,h-15),2.44–2.26(m,1h),2.16(d,j＝8.6hz,3h,ac),1.99–1.85(m,1h),1.82(d,j＝5.6hz,1h),1.74(dd,j＝14.9,7.0hz,1h),1.62–1.50(m,1h),1.35(s,3h,h-20),1.30(s,3h,h-19),1.24(t,j＝5.9hz,6h,h-16,17).3-b4:mf:c23h28o8.esimsm/z:433.2[m+h]+,455.2[m+na]+.1hnmr(300mhz,cdcl3):δ6.32(d,j＝9.2hz,1h,h-7),5.85(s,1h,h-11),5.13–4.99(m,2h,h-1,6),2.96(m,1h,h-15),2.30(dd,j＝14.3,4.9hz,1h),2.17(s,3h,ac),2.14(s,3h,ac),2.06(d,j＝7.0hz,1h),1.88(d,j＝5.9hz,1h),1.80–1.65(m,1h),1.45(s,3h,h-18),1.32(s,3h,h-19),1.23(t,j＝6.7hz,6h,h-16,17).實(shí)驗(yàn)2：化合物3-b2和3-b5的合成取化合物3(22mg，0.06mmol)溶于無水吡啶(5ml)，加入過量的丙酸酐(0.02ml，2n)，油浴加熱40℃，恒溫?cái)嚢?，tlc檢測(cè)反應(yīng)確認(rèn)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以p-tlc純化(氯仿/甲醇＝50/1(v/v))得到白色固體粉末3-b2(8mg，28％)和3-b5(16mg,63％)。3-b2:mf:c22h28o7.esimsm/z:405.1[m+h]+,427.1[m+na]+,831.3[2m+na]+,463.2[m+ch3coo]+,hresimsm/z:427.1707[m+na]+(calcdforc22h28o7na,427.1733),1hnmr(300mhz,cdcl3):δ6.80(s,1h,h-11),6.32(d,j＝9.1hz,1h,h-7),5.08(dd,j＝9.1,5.5hz,1h,h-6),3.99(m,1h,h-1),2.95(dt,j＝13.7,6.9hz,1h,h-15),2.55–2.28(m,3h),2.10(d,j＝4.3hz,1h),1.91(td,j＝12.7,6.3hz,1h),1.81(d,j＝5.5hz,1h),1.73(dd,j＝17.6,9.2hz,1h),1.66(s,1h),1.62–1.48(m,1h),1.34(s,3h),1.25(s,3h),1.22(s,3h),1.18(s,3h).3-b5:mf:c25h32o8.esimsm/z:461.2[m+h]+,943.4[2m+na]+,hresimsm/z:483.2004[m+na]+(calcdforc25h32o8na,483.1995),1hnmr(300mhz,cdcl3):δ6.35(d,j＝9.2hz,1h,h-7),5.84(s,1h,h-11),5.07(m,2h),2.96(m,1h,h-15),2.53–2.24(m,5h),2.06(m,1h),1.89(d,j＝5.9hz,1h),1.71(d,j＝15.5hz,2h),1.46(s,3h),1.32(s,3h),1.28–1.13(m,9h).實(shí)驗(yàn)3：化合物3-b3的合成取化合物3(17mg，0.05mmol)溶于無水吡啶(5ml)，加入過量的特戊酸酐(0.03ml，1.6n)，油浴加熱50℃，恒溫和攪拌，tlc檢測(cè)反應(yīng)確認(rèn)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以p-tlc純化(氯仿/甲醇＝50/1(v/v))得到白色固體粉末3-b3(13mg，62％)。3-b3:mf:c24h32o7.esimsm/z:433.2[m+h]+,455.2[m+na]+,887.4[2m+na]+,431.1[m-h]-,491.2[m+ch3coo]-,hresimsm/z:455.1930[m+na]+(calcdforc24h32o7na,455.2046),1hnmr(300mhz,cdcl3):δ6.79(s,1h,h-11),6.28(d,j＝9.2hz,1h,h-7),5.08(dd,j＝9.1,5.5hz,1h,h-6),4.00(t,j＝6.5hz,1h,h-1),2.92(dt,j＝13.6,7.0hz,1h,h-15),2.43–2.25(m,9h),1.90(m,1h),1.82(m,1h),1.75(d,j＝7.5hz,1h),1.52(m,2h),1.35(s,3h),1.28(s,3h),1.25(s,9h),1.23(m,9h).實(shí)驗(yàn)4：化合物3-b6的合成取化合物3(18mg，0.06mmol)溶于無水二氯甲烷(5ml)，加入dmap(10mg，1.6n)和環(huán)丙基甲酸(0.02ml，4n)，室溫?cái)嚢?，加入dcc(50mg，4.7n)，tlc檢測(cè)反應(yīng)確認(rèn)結(jié)束，先將反應(yīng)中生成的沉淀過濾，濾液濃縮后以硅膠純化(氯仿/甲醇＝50/1(v/v))得到白色固體粉末3-b6(12mg，48％)。3-b6:c27h32o8.esimsm/z:485.2[m+h]+,507.1[m+na]+,hresimsm/z:507.1996[m+na]+(calcdforc27h32o8na,359.1521),1hnmr(300mhz,cdcl3):δ6.37(d,j＝9.0hz,1h,h-7),5.87(s,1h,h-11),5.07(m,2h),4.09–3.96(m,1h),3.53–3.37(m,1h),2.97(m,1h,h-15),2.32(m,1h),2.13–1.95(m,1h),1.87(d,j＝5.8hz,1h),1.81–1.53(m,1h),1.48(s,2h),1.31(s,3h),1.22(t,j＝5.8hz,3h),1.07(d,j＝11.2hz,6h),0.97(d,j＝7.9hz,4h).實(shí)驗(yàn)5：化合物3-b7的合成取化合物3(32mg，0.09mmol)溶于無水吡啶(5ml)，加入環(huán)丁基甲酰氯(0.03ml，3n)，油浴加熱50℃，恒溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)反應(yīng)確認(rèn)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以p-tlc純化(氯仿/甲醇＝50/1(v/v))得到白色固體粉末3-b7(21mg，45％)。3-b7:c29h36o8.esimsm/z:513.4[m+h]+,1047.6[2m+na]+,557.8[m+hcoo]-,hresimsm/z:535.2296[m+na]+(calcdforc29h36o8na,535.2308),1hnmr(300mhz,cdcl3):δ6.32(d,j＝9.1hz,1h,h-7),5.83(s,1h,h-11),5.15–4.99(m,2h,h-6,h-1),3.20(dd,j＝16.9,8.3hz,2h),3.03–2.85(m,1h),2.32(dd,j＝24.1,15.2hz,9h),2.15–1.77(m,8h),1.76–1.51(m,3h),1.45(s,3h),1.32(s,3h),1.22(dd,j＝11.1,6.8hz,6h).實(shí)驗(yàn)6：化合物3-b8的合成取化合物3(25mg，0.07mmol)溶于無水吡啶(5ml)，加入過量的琥珀酸酐(25mg，3n)，油浴加熱70℃，恒溫?cái)嚢?，tlc檢測(cè)反應(yīng)確認(rèn)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以硅膠純化(氯仿/甲醇＝20/1(v/v))得到白色固體粉末3-b8(30mg，93％)。3-b8:c23h28o9.esimsm/z:449.2[m+h]+,471.2[m+na]+,919.5[2m+na]+,895.8[2m-h]-,hresimsm/z:471.1617[m+na]+(calcdforc23h28o9na,471.1631),1hnmr(300mhz,cdcl3):δ6.78(s,1h,h-11),6.31(d,j＝9.2hz,1h,h-7),5.08(dd,j＝8.9,5.5hz,1h,h-6),4.00(t,j＝6.4hz,1h,h-1),2.93(dd,j＝13.2,6.6hz,1h,h-15),2.81–2.61(m,4h),2.42–2.24(m,1h),1.91(dd,j＝14.2,6.7hz,1h),1.81(d,j＝5.4hz,1h),1.76(d,j＝6.8hz,1h),1.62–1.45(m,1h),1.47-1.34(m,1h),1.31(s,3h),1.28(s,3h),1.22(d,j＝2.8hz,3h),1.21(s,3h).實(shí)驗(yàn)7：化合物3-b9的合成取化合物3(21mg，0.06mmol)溶于無水吡啶(5ml)，加入過量的琥珀酸酐(25mg，3n)，油浴加熱70℃，恒溫?cái)嚢?，tlc檢測(cè)反應(yīng)確認(rèn)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以硅膠純化(氯仿/甲醇＝20/1(v/v))得到白色固體粉末3-b9(17mg，61％)。3-b9:c24h30o9.esimsm/z:485.3[m+na]+,947.5[2m+na]+.923.8[2m-h]-,hresimsm/z:485.1794[m+na]+(calcdforc24h30o9na,485.1788),1hnmr(300mhz,cdcl3):δ6.80(s,1h,h-11),6.31(d,j＝8.9hz,1h,h-7),5.08(m,1h,h-6),3.99(s,1h,h-1),2.94(m,1h),2.33(m,1h),2.17(s,1h),1.98(m,3h),1.81(d,j＝5.1hz,1h),1.55(d,j＝6.9hz,1h),1.33(s,3h),1.29(s,3h),1.22(t,j＝6.8hz,6h).實(shí)驗(yàn)8：化合物3-b10的合成取化合物3(20mg，0.06mmol)溶于無水吡啶(5ml)，加入苯甲酰氯(0.03ml，3n)，室溫?cái)嚢?，tlc檢測(cè)反應(yīng)確認(rèn)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以p-tlc純化(氯仿/甲醇＝50/1(v/v))得到白色固體粉末3-b10(28mg，88％)。3-b10:c33h32o8,esimsm/z:557.2[m+h]+,1135.6[2m+na]+,601.6[m+hcoo]-,hresimsm/z:579.1982[m+na]+(calcdforc33h32o8na,579.1995),1hnmr(300mhz,cdcl3):δ8.04(t,j＝7.4hz,4h),7.69–7.53(m,2h),7.47(t,j＝7.6hz,4h),6.63(d,j＝9.3hz,1h,h-7),5.99(s,1h,h-11),5.37(t,j＝5.8hz,1h,h-1),5.27(dd,j＝9.0,5.8hz,1h,h-6),3.05(dt,j＝13.5,6.7hz,1h,h-15),2.45–2.30(m,1h),2.29–2.13(m,1h),2.05(d,j＝5.7hz,1h),1.87(m,1h),1.77(s,3h),1.72–1.54(m,2h),1.38(s,3h),1.25(d,j＝6.6hz,3h),1.12(d,j＝6.7hz,3h).實(shí)施例5化合物4-a1～4-a8的合成實(shí)驗(yàn)1:4-a1和4-a2的合成化合物4(35mg,0.1mmol)和硫酸二甲酯(15mg,0.12mmol)溶解于2ml的無水dmf中，加入1.2當(dāng)量的nah(3mg,0.12mmol)，反應(yīng)液于室溫下攪拌過夜。tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入30ml飽和的nh4cl溶液，用20ml的乙酸乙酯萃取三次。有機(jī)相合并，無水硫酸鎂干燥、減壓蒸餾除去溶劑。殘余物經(jīng)過pre-tlc(二氯甲烷-丙酮20:1)純化，即得化合物4-a1(15mg,41％)和4-a2(13mg,36％)。4-a1:白色固體，mf:c20h26o6,esimsm/z:363.2[m+h]+,1hnmr(600mhz,pyr-d5):δ1.26(d,j＝6.8hz,3h,h-17),1.33(d,j＝6.8hz,3h,h-16),1.44(s,3h,h-18),1.76(s,3h,h-20),1.81(d,j＝6.5hz,1h,h-5),1.86(m,1h,h-1),2.17(m,1h,h-3),2.26(dd,j＝13.4,9.0hz,1h,h-1),2.42(dd,j＝13.7,12.2hz,1h,h-3),3.36(s,3h,h-21),3.48(m,1h,h-15),3.67(m,1h,h-2),5.12(dd,j＝8.3,6.6hz,1h,h-6),5.64(dd,j＝8.4,2.9hz,1h,h-7),6.29(s,1h,h-11),7.86(d,j＝2.8hz,1h).4-a2:白色固體，mf:c20h26o6,esimsm/z363.2[m+h]+,1hnmr(500mhz,pyr-d5):δ1.24(d,j＝7.0hz,3h,h-17),1.26(d,j＝7.0hz,3h,h-16),1.41(s,3h,h-18),1.62(s,3h,h-20),1.80(d,j＝6.3hz,1h,h-5),2.01(dd,j＝13.4,6.7hz,1h,h-1),2.22(dd,j＝13.6,5.0hz,1h,h-3),2.48(dd,j＝13.4,6.0hz,1h,h-1),2.63(t,j＝13.0hz,1h,h-3),3.22(m,1h,h-15),3.60(s,3h,h-21),4.33(m,1h,h-2),4.97(d,j＝8.5hz,1h,h-7),5.16(dd,j＝8.4,6.3hz,1h,h-6),6.29(s,1h,h-11),6.71(d,j＝5.0hz,1h).實(shí)驗(yàn)3:4-a3的合成化合物4(35mg,0.1mmol)和硫酸二甲酯(126mg,1.0mmol)溶解于2ml的無水dmf中，加入10當(dāng)量的nah(24mg,1.0mmol)，反應(yīng)液于室溫下攪拌過夜。tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入50ml飽和的nh4cl溶液，用20ml的乙酸乙酯萃取三次。有機(jī)相合并，無水硫酸鎂干燥、減壓蒸餾除去溶劑。殘余物經(jīng)過sephadexlh-20(氯仿-甲醇1:1)純化，即得化合物4-a3(17mg,77％)。4-a3:白色固體，mf:c21h28o6.esimsm/z:377.2[m+h]+,1hnmr(500mhz,pyr-d5):δ1.24(d,j＝3.5hz,3h,h-17),1.25(d,j＝3.4hz,3h,h-16),1.40(s,3h,h-18),1.54(s,3h,h-20),1.73(d,j＝6.3hz,1h,h-5),1.83(dd,j＝13.5,6.1hz,1h,h-1),2.12(dd,j＝13.9,5.5hz,1h,h-3),2.21(dd,j＝13.6,8.8hz,1h,h-1),2.35(dd,j＝13.8,9.2hz,1h,h-3),3.22(m,1h,h-15),3.34(s,3h,h-21),3.59(s,3h,h-22),3.63(m,1h,h-2),4.97(d,j＝8.5hz,1h,h-7),5.17(dd,j＝8.4,6.3hz,1h,h-6),6.25(brs,1h,h-11).實(shí)驗(yàn)4:4-a4和4-a5的合成化合物4(35mg,0.1mmol)和硫酸二乙酯(18.5mg,0.12mmol)溶解于2ml的無水dmf中，加入1.2當(dāng)量的nah(3mg,0.12mmol)，反應(yīng)液于室溫下攪拌過夜。tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入30ml飽和的nh4cl溶液，用20ml的乙酸乙酯萃取三次。有機(jī)相合并，無水硫酸鎂干燥、減壓蒸餾除去溶劑。殘余物經(jīng)過pre-tlc(二氯甲烷-丙酮25:1)純化，即得化合物4-a4(16mg,43％)和4-a5(17mg,45％)。4-a4:esimsm/z377.2[m+h]+；4-a5:esimsm/z377.2[m+h]+.實(shí)驗(yàn)5:4-a6的合成化合物4(35mg,0.1mmol)和硫酸二甲酯(154mg,1.0mmol)溶解于2ml的無水dmf中，加入10當(dāng)量的nah(24mg,1.0mmol)，反應(yīng)液于室溫下攪拌過夜。tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入50ml飽和的nh4cl溶液，用20ml的乙酸乙酯萃取三次。有機(jī)相合并，無水硫酸鎂干燥、減壓蒸餾除去溶劑。殘余物經(jīng)過sephadexlh-20(氯仿-甲醇1:1)純化，即得化合物4-a6(32mg,79％)。4-a6:esimsm/z405.3[m+h]+.實(shí)驗(yàn)6:4-a7和4-a8的合成化合物4(35mg,0.1mmol)和3-溴基-1-丙烯(18.2mg,0.15mmol)溶解于2ml的無水dmf中，加入1.5當(dāng)量的nah(4mg,0.15mmol)，反應(yīng)液于室溫下攪拌過夜。tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入30ml飽和的nh4cl溶液，用20ml的乙酸乙酯萃取三次。有機(jī)相合并，無水硫酸鎂干燥、減壓蒸餾除去溶劑。殘余物經(jīng)過制備型hplc純化，即得化合物4-a7(12mg,31％)和4-a8(20mg,47％)。4-a7:白色固體，wf：c22h28o6,esimsm/z389.2[m+h]+；1hnmr(600mhz,pyr-d5):δ1.25(d,j＝6.7hz,3h,h-17),1.28(d,j＝6.7hz,3h,h-16),1.41(s,3h,h-18),1.65(s,3h,h-20),1.81(t,j＝3.0hz,1h,h-5),2.02(dd,j＝13.4,6.8hz,1h,h-1),2.22(dd,j＝13.6,5.0hz,1h,h-3),2.49(dd,j＝13.5,9.0hz,1h,h-1),2.63(tj＝13.0hz,1h,h-3),3.25(m,1h,h-15),4.23(ddt,j＝12.5,6.2,1.4hz,1h,h-21),4.33(m,1h,h-2),4.61(ddt,j＝12.5,5.2,1.5hz,1h,h-21),5.15-5.18(3h,h-6,h-7,h-23),5.36(dq,j＝17.2,1.7hz,1h,h-23),6.04(m,1h,h-22),6.31(s,1h,h-11),6.72(brs,1h).4-a8:白色固體，mf:c25h32o6,esimsm/z429.9[m+h]+,1hnmr(600mhz,pyr-d5):δ1.24(d,j＝3.5hz,3h,h-17),1.26(d,j＝3.5hz,3h,h-16),1.41(s,3h,h-18),1.59(s,3h,h-20),1.78(d,j＝4.0hz,1h,h-5),1.87(dd,j＝13.5,6.2hz,1h,h-1),2.13(dd,j＝13.8,5.2hz,1h,h-3),2.26(dd,j＝13.6,8.9hz,1h,h-1),2.40(dd,j＝13.7,8.0hz,1h,h-3),3.25(m,1h,h-15),3.80(m,1h,h-2),4.10(m,2h,h-21),4.23(ddt,j＝12.5,6.0,1.4hz,1h,h-24),4.59(ddt,j＝12.5,6.0,1.5hz,1h,h-24),5.15-5.19(3h,h-6,h-7,h-26),5.22(dq,j＝10.6,1.4hz,1h,h-23),5.36(dq,j＝17.3,1.8hz,1h,h-26),5.44(dq,j＝17.2,1.8hz,1h,h-23),6.05(m,2h,h-22,h-25),6.28(s,1h,h-11).實(shí)施例6化合物4-b1～4-b44的合成實(shí)驗(yàn)1:化合物4-b1的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶(1ml)，加入乙酰氯(0.004ml,1.5eq.)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b1(6mg,27％)。4-b1:esimsm/z:391.2[m+h]+,435.2[m+hcoo]-.mf:c21h26o7.mw:390.esimsm/z:391.2[m+h]+,435.2[m+hcoo]-.1hnmr(500mhz,cdcl3):δ5.94(s,1h,h-11),5.31(d,j＝9.1hz,1h,h-7),5.08(m,1h,h-2),4.96(dd,j＝8.3,6.6hz,1h,h-6),3.25(m,1h,h-15),2.40(dd,j＝13.9,9.5hz,1h),2.32(t,j＝11.7hz,1h),2.09(s,3h),2.00(dd,j＝13.9,5.8hz,1h),1.89(d,j＝6.6hz,1h,h-5),1.77(dd,j＝13.9,6.0hz,1h),1.51(s,3h,h-20),1.45(s,3h,h-19),1.33(d,j＝6.8hz,3h,h-16),1.25(d,j＝6.8hz,3h,h-17).13cnmr(126mhz,cdcl3):δ180.1,171.6,170.6,164.5,162.1,109.0,106.5,73.8,66.6,60.3,48.6,42.4,40.1,36.8,32.6,29.6,26.8,24.3,21.3,20.9,20.4.實(shí)驗(yàn)2:化合物4-b2的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加丙酰氯(0.008ml,2.6eq.)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b2(5mg,22％)。4-b2:esimsm/z:405.3[m+h]+,449.1[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)3:化合物4-b3的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入異丁酰氯(0.008ml,2.2n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b3(12mg,50％)。4-b3:esimsm/z:419.3[m+h]+,463.3[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)4:化合物4-b4的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入正丁酰(0.008ml,2.2n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b4(8mg,34％)。4-b4:esimsm/z:419.3[m+h]+,463.3[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)5:化合物4-b5的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入正己酰氯(0.012ml,1.5n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b5(18mg,71％)。4-b5:esimsm/z:447.4[m+h]+,491.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)6:化合物4-b6的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入葵酰氯(0.012ml,1.1n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b6(8mg,28％)。4-b6:esimsm/z:503.4[m+h]+,547.3[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)7:化合物4-b7的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入乙酰氯(0.008ml,3n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b7(13mg,53％)。4-b7:esimsm/z:433.2[m+h]+,477.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)8:化合物4-b8的合成取化合物4(10mg,0.029mmol)溶于無水吡啶1ml，加入正己酰氯(0.06ml,1.5n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b8(8mg,51％)。4-b8:esimsm/z:545.4[m+h]+,590.1[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)9:化合物4-b9的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入環(huán)丙基甲酰氯(0.008ml,1.5n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b9(12mg,51％)。4-b9:esimsm/z:417.2[m+h]+,461.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)10:化合物4-b10的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入環(huán)戊甲酰氯(0.008ml,1.2n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b10(10mg,40％)。4-b10:esimsm/z:445.3[m+h]+,489.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)11:化合物4-b11的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入環(huán)己甲酰氯(0.008ml,1.2n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b11(10mg,40％)。4-b11:esimsm/z:459.3[m+h]+,503.3[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)12:化合物4-b12的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入3-環(huán)己基丙酰氯(0.008ml,1.2n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b12(8mg,29％)。4-b12:esimsm/z:487.4[m+h]+,531.3[m+ch3coo]-.實(shí)驗(yàn)13:化合物4-b13的合成取化合物4(10mg,0.029mmol)溶于無水吡啶1ml，加入環(huán)丙基甲酰氯(0.008ml,3n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b13(7mg,50％)。4-b13:esimsm/z:485.3[m+h]+,529.3[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)14:化合物4-b14的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入環(huán)丁基甲酸(0.008ml,1.5n)，室溫?cái)嚢瑁尤雂cc(50mg，4.6n)，反應(yīng)過夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b14(17mg,58％)。4-b14:esimsm/z:513.3[m+h]+,557.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)15:化合物4-b15的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入丁二酸酐(20mg,3.5n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b15(10mg,39％)。4-b15:esimsm/z:449.3[m+h]+,447.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)16:化合物4-b16的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入戊二酸酐(20mg,3.1n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b16(7mg,27％)。4-b16:esimsm/z:463.3[m+h]+,461.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)17:化合物4-b17的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入琥珀酸單乙酯酰氯(0.012ml,1.5n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b17(10mg,37％)。4-b17:mf:c25h32o9.mw:476.esimsm/z:477.4[m+h]+,521.3[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)18:化合物4-b18的合成取化合物4(10mg,0.029mmol)溶于無水吡啶1ml，加入琥珀酸單乙酯酰氯(0.012ml,3n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b18(17mg,97％)。4-b18:esimsm/z:605.5[m+h]+,649.4[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)19:化合物4-b19的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入2-呋喃甲酰氯(0.010ml,1.8n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b19(12mg,48％)。4-b19:esimsm/z:443.3[m+h]+,487.2[m+ch3coo]-.實(shí)驗(yàn)20:化合物4-b20的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入2-噻吩甲酰氯(0.010ml,1.6n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b20(10mg,38％)。4-b20:esimsm/z:459.3[m+h]+,503.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)21:化合物4-b21的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入2-氯煙酰氯(12mg,1.2n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b21(14mg,55％)。4-b21:esimsm/z:488.2[m+h]+,532.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)22:化合物4-b22的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入1-苯并噻吩-3-羰酰氯(12mg,1.1n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b22(13mg,45％)。4-b22:esimsm/z:509.3[m+h]+,553.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)23:化合物4-b23的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入1,5-二甲基-1h-吡唑-3-羰酰氯(10mg,1.1n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b23(9mg,34％)。4-b23:esimsm/z:471.3[m+h]+,515.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)24:化合物4-b24的合成取化合物b(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶(1ml)，加入4-甲基-2-苯基-1,3-噻唑-5-碳酰氯(15mg,1.2n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b24(10mg,35％)。4-b24:esimsm/z:550.3[m+h]+,594.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)25:化合物4-b25的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入苯甲酰氯(0.010ml,1.5n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b25(13mg,51％)。4-b25:esimsm/z:453.3[m+h]+,497.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)26:化合物4-b26的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入4-叔丁基苯甲酰氯(0.015ml,1.3n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b26(14mg,48％)。4-b26:esimsm/z:509.3[m+h]+,553.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)27:化合物4-b27的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入4-叔丁基苯甲酰氯(15mg,1.3n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b27(11mg,38％)。4-b27:esimsm/z:513.3[m+h]+,557.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)28:化合物4-b28的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入反式肉桂酰氯(10mg,1.1n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b28(10mg,37％)。4-b28:esimsm/z:479.3[m+h]+,523.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)29:化合物4-b29的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入3-苯基丙酰氯(0.015ml,1.3n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b29(12mg,44％)。4-b29:esimsm/z:481.3[m+h]+,525.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)30:化合物4-b30的合成取化合物4(10mg,0.029mmol)溶于無水吡啶1ml，加入苯甲酰氯(0.005ml,1.5n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b30(7mg,51％)。4-b30:esimsm/z:557.3[m+h]+,601.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)31:化合物4-b31的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入2-氯苯甲酰氯(0.010ml,1.4n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b31(11mg,40％)。4-b31:esimsm/z:488.3[m+h]+,532.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)32:化合物4-b32的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入2-氟苯甲酰氯(0.010ml,1.6n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b32(10mg,40％)。4-b32:esimsm/z:471.3[m+h]+,515.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)33:化合物4-b33的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入3-氯苯甲酰氯(0.010ml,1.4n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末b33(11mg,40％)。4-b33:esimsm/z:488.3[m+h]+,532.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)34:化合物4-b34的合成取化合物4(20mg,0.057mmo)溶于無水吡啶1ml，加入3-溴苯甲酰氯(0.010ml,1.3n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b34(11mg,36％)。4-b34:esimsm/z:532.3[m+h]+,576.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)35:化合物4-b35的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入4-溴苯甲酰氯(15mg,1.2n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b35(11mg,36％)。4-b35:esimsm/z:532.3[m+h]+,576.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)36:化合物4-b36的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入4-氯苯甲酰氯(0.010ml,1.4n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b36(11mg,40％)。4-b36:esimsm/z:488.3[m+h]+,532.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)37:化合物4-b37的合成取化合物4(10mg,0.029mmol)溶于無水吡啶1ml，加入2-氯苯甲酰氯(0.005ml,1.4n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b37(8mg,44％)。4-b37:esimsm/z:666.3[m+h]+,670.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)38:化合物4-b38的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入2-甲基丙烯酰氯(0.010ml,1.8n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b38(10mg,42％)。4-b38:esimsm/z:417.3[m+h]+,461.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)39:化合物4-b39的合成取化合物4(10mg,0.029mmol)溶于無水吡啶1ml，加入巴豆酰氯(10mg,3.3n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b39(12mg,86％)。4-b39:esimsm/z:485.3[m+h]+,529.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)40:化合物4-b40的合成取化合物4(20mg,0.057mmol)溶于無水吡啶1ml，加入巴豆酰氯(0.010ml,1.3n)，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以制備hplc純化，得到白色固體粉末4-b40(8mg,30％)。4-b40:esimsm/z:467.3[m+h]+,511.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)41:化合物4-b41的合成取化合物4(300mg,0.86mmol)溶于無水吡啶2ml，加入芴甲氧羰酰氯(300mg,1.4n)，室溫?cái)嚢柽^夜，反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液中加入2n稀鹽酸用于中和吡啶，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以飽和nacl、純水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘余物以sephadexlh-20純化(氯仿/甲醇＝1/1(v/v))，得到黃色固體粉末4-moc(205mg,42％)。取化合物4-moc(20mg,0.035mmol)溶于無水吡啶1ml，加入乙酰氯(0.008ml,3.0n)，室溫?cái)嚢柽^夜，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸餾去除大部分吡啶，得到的殘余物溶于二氯甲烷，加入二乙胺(0.1ml)，室溫反應(yīng)0.5h，減壓蒸餾去除溶劑，得到殘余物以sephadexlh-20純化(氯仿/甲醇＝1/1(v/v))，得到黃色固體粉末4-b41(10mg,73％)。4-b41:esimsm/z:391.2[m+h]+,435.2[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)42:化合物4-b42的合成取化合物4-moc(20mg,0.035mmol)溶于無水吡啶1ml，加入異丁酰氯(0.008ml,2.2n)，室溫?cái)嚢柽^夜，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸餾去除大部分吡啶，得到的殘余物溶于二氯甲烷，加入二乙胺(0.1ml)，室溫反應(yīng)0.5h，減壓蒸餾去除溶劑，得到殘余物以sephadexlh-20純化(氯仿/甲醇＝1/1(v/v))，得到黃色固體粉末4-b42(10mg,68％)。4-b42:esimsm/z:419.3[m+h]+,463.3[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)43:化合物4-b43的合成取化合物4-moc(20mg,0.035mmol)溶于無水吡啶1ml，加入正丁酰氯(0.008ml,2.2n)，室溫?cái)嚢柽^夜，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸餾去除大部分吡啶，得到的殘余物溶于二氯甲烷，加入二乙胺0.1ml，室溫反應(yīng)0.5h，減壓蒸餾去除溶劑，得到殘余物以sephadexlh-20純化(氯仿/甲醇1:1)，得到黃色固體粉末4-b43(6mg,41％)。4-b43:esimsm/z:419.3[m+h]+,463.3[m+hcoo]-.實(shí)驗(yàn)44:化合物4-b44的合成取化合物4-moc(20mg,0.035mmol)溶于無水吡啶1ml，加入對(duì)溴苯甲酰氯(12mg,1.5n)，室溫?cái)嚢柽^夜，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸餾去除大部分吡啶，得到的殘余物溶于二氯甲烷，加入二乙胺0.1ml，室溫反應(yīng)0.5h，減壓蒸餾去除溶劑，得到殘余物以sephadexlh-20純化(氯仿/甲醇1:1)，得到黃色固體粉末4-b44(18mg,97％)。4-b44:esimsm/z:531.3,533.2,[m+h]+,575.2,577.1[m+hcoo]-.實(shí)施例7化合物7-a1的合成化合物7(20mg,0.055mmol)溶解于20ml的丙酮中，加入對(duì)甲苯磺酸—水合物(10mg,0.052mmol)，反應(yīng)液于室溫下攪拌過夜。tlc檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液中加入30ml飽和的nahco3溶液，用20ml的乙酸乙酯萃取三次。有機(jī)相合并，無水硫酸鎂干燥、減壓蒸餾除去溶劑。殘余物經(jīng)過sephadexlh-20(氯仿-甲醇1:1)純化，即得化合物7-a1(17mg,77％)。7-a1:白色固體，mf:c22h28o7,esimsm/z405.2[m+h]+,13cnmr(125mhz,pyr-d5):δ182.0(c-19),170.4(c-9),165.6(c-14),162.9(c-12),111.9(c-20),109.8(c-8),108.6(c-11),79.7(c-6),75.4(c-1),73.1(c-2),60.6(c-7),48.9(c-5),42.4(c-4),41.7(c-10),34.8(c-3),30.1(c-15),26.8and25.3(c-21andc-22),24.4(c-18),21.2(c-17),10.7(c-16),18.8(c-20).實(shí)施例8化合物12-1的合成取化合物12(75mg，0.22mmol)，加入干燥二氯甲烷15ml和3a分子篩，室溫?cái)嚢?，加入pcc(150mg，3n)，tlc監(jiān)測(cè)反應(yīng)，7h后將溶液中的不溶物過濾，濾液濃縮，經(jīng)硅膠柱層析純化后得白色固體12-1(61mg，81％)。12-1:c19h22o6.esimsm/z:347.1[m+h]+,369.1[m+na]+345.1[m+h]+,hresimsm/z:369.1319[m+na]+(calcdforc19h22o6na,369.1314),1hnmr(300mhz,cdcl3):δ6.11(s,1h,h-11),4.89(d,j＝4.4hz,1h,h-7),4.48(d,j＝3.4hz,1h),4.03(s),2.70(m,2h),2.42(d,j＝4.5hz,1h),2.11(m,3h),2.12(m,1h),1.54(s,3h),1.14(m,9h),0.90(s,1h).實(shí)施例9化合物活性測(cè)試9.1竹柏內(nèi)酯類化合物活性測(cè)試前述分離以及化學(xué)合成的各化合物(終濃度為5μm)處理脫脂血清饑餓12小時(shí)的hepg2細(xì)胞24小時(shí)，加入熒光標(biāo)記的低密度脂蛋白(dii-ldl)20μg/ml，37℃孵育4小時(shí)，用磷酸鹽緩沖液(pbs)輕輕洗細(xì)胞5次后用異丙醇提取脂質(zhì)，于酶標(biāo)儀上測(cè)定熒光讀數(shù)(激發(fā)光：520nm；發(fā)射光570nm)。然后用0.2m氫氧化鈉裂解細(xì)胞，測(cè)定蛋白含量，計(jì)算出熒光/蛋白的數(shù)值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4，多個(gè)化合物中在5μm濃度下對(duì)低密度脂蛋白ldl攝取起到顯著增強(qiáng)作用。對(duì)結(jié)構(gòu)改造得的新化合物，也表現(xiàn)出hepg2肝細(xì)胞低密度脂蛋白攝取有增強(qiáng)作用(表4)。表4.部分化合物對(duì)肝細(xì)胞低密度脂蛋白攝取的增強(qiáng)作用作用強(qiáng)度+101％-120％；++121％-140％；+++141％-160％；++++161％-180％；+++++181％-200％；++++++>200％.9.2竹柏內(nèi)酯類化合物促進(jìn)肝細(xì)胞低密度脂蛋白(ldl)攝取活性機(jī)制研究化合物上調(diào)低密度脂蛋白受體(ldlr)基因表達(dá)水平ldlr蛋白水平上調(diào)可能是由兩方面原因引起的：ldlr基因水平上升或ldlr蛋白本身的穩(wěn)定性增加。基于以上的條件，檢測(cè)了ldlr基因的表達(dá)水平。用本發(fā)明化合物在5μm濃度下處理肝細(xì)胞24小時(shí)，trizol試劑提取細(xì)胞總rna，取3μgrna用m-mlv(逆轉(zhuǎn)錄酶)反轉(zhuǎn)錄成cdna,再用ldlr的特異性引物進(jìn)行real-timepcr(實(shí)時(shí)定量pcr)，以gapdh作為內(nèi)參照基因比對(duì)化合物對(duì)ldlr基因的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果顯示，本發(fā)明化合物顯著性提高了ldlr基因的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)中用到的基因引物序列及pcr條件見表5。表5.引物序列及pcr反應(yīng)條件綜上所述，竹柏內(nèi)酯類化合物在體外的ldl攝取實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮了出乎意料的增強(qiáng)ldl攝取的效果。其中部分化合物(如4-b19、4-b29、4-b31)效果非常顯著，甚至可以達(dá)到>200％的作用強(qiáng)度。因此，實(shí)驗(yàn)證實(shí)，基于新的降脂靶點(diǎn)的竹柏內(nèi)酯類化合物具有極高的臨床應(yīng)用價(jià)值和新藥開發(fā)潛力。在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。當(dāng)前第1頁12