定向淋巴的前藥的制作方法
本發(fā)明涉及前藥形式的化合物，特別是促進藥物活性劑轉(zhuǎn)運至淋巴系統(tǒng)且隨后增強母體藥物釋放的化合物。
發(fā)明背景
淋巴系統(tǒng)由分布在全身的緊鄰血管系統(tǒng)的血管、結(jié)節(jié)和淋巴組織的特化網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成。淋巴系統(tǒng)在免疫應(yīng)答、體液平衡、營養(yǎng)物吸收、脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)和腫瘤轉(zhuǎn)移中起眾多的關(guān)鍵作用。由于淋巴系統(tǒng)的獨特解剖學(xué)和生理學(xué)特征，將靶向遞藥至淋巴系統(tǒng)和通過淋巴系統(tǒng)靶向遞藥建議為改善藥物動力學(xué)和藥效學(xué)特性的手段。淋巴藥物轉(zhuǎn)運具有通過避免首過代謝提高口服生物利用度、改變系統(tǒng)藥物處置和增強對淋巴或淋巴細胞介導(dǎo)的病理學(xué)情況(例如淋巴瘤、白血病、淋巴腫瘤轉(zhuǎn)移、自身免疫疾病、淋巴停留感染和移植體排斥)的效能的潛能。
為了藥物接近腸淋巴，它們必須首先結(jié)合腸淋巴脂蛋白，所述脂蛋白響應(yīng)脂質(zhì)吸收而在腸吸收細胞(腸囊腫)中組裝。與這些脂蛋白的結(jié)合隨后促進藥物轉(zhuǎn)運入淋巴，因為它們的尺寸阻礙跨過消耗小腸的內(nèi)襯毛細血管的血管內(nèi)皮的便利擴散。相反，這些大膠體結(jié)構(gòu)進入淋巴毛細管，因為淋巴內(nèi)皮明顯地比血管內(nèi)皮更具有滲透性。從歷史上看，具有高淋巴轉(zhuǎn)運的藥物具有高度親脂性，以促進與脂蛋白的物理結(jié)合(通常，但不排它地，log D>5，且在長鏈甘油三酯中的溶解度>50mg/g)。因此，藥物的高度親脂性類似物被設(shè)想為促進淋巴藥物轉(zhuǎn)運的一種方式。然而，母體藥物的化學(xué)修飾可能導(dǎo)致作用強度降低，并且在許多情況中，親脂性的顯著增加與毒性增加相關(guān)聯(lián)。
親脂性前藥形式的化合物提供了一種暫時增加藥物化合物的親脂性和的脂蛋白親和力(由此增加淋巴靶向)的方式。通過淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)運，前藥最終恢復(fù)成母體藥物，以便在其靶位點上具有活性。
存在幾種探查藥物的簡單脂族酯類用作定向淋巴的前藥的潛能的研究。十一酸睪酮提供了一個采用該方法的上市銷售的化合物的實例?？诜螅G酮在其首次通過肝時幾乎全部被完全代謝，最終結(jié)果是它具有最低的生物利用度。睪酮的十一酸酯使小比例的被吸收的劑量重新定向進入淋巴系統(tǒng)，由此避免肝臟首過代謝并且增加睪酮的口服生物利用度。然而，這種方法仍然是非常低效的，且認為口服所述十一酸酯后睪酮的生物利用度<5％。
促進淋巴藥物轉(zhuǎn)移的另一種機制是使用前藥，該前藥結(jié)合進入與膳食脂質(zhì)的吸收、轉(zhuǎn)運和處置相關(guān)的內(nèi)源性途徑。用作前藥的膳食脂質(zhì)的一個實例是甘油三酯。藥物-脂質(zhì)綴合物的實例已被記錄在大量在先的出版物中，其中母體藥物包含可利用的羧酸基團且直接與甘油酯骨架綴合(Paris，G.Y.等人，J.Med.Chem.1979，22，(6)，683-687；Garzon Aburbeh，A.等人，J.Med.Chem.1983，26，(8)，1200-1203；Deverre，J.R.；等人，J.Pharm.Pharmacol.1989，41，(3)，191-193；Mergen，F(xiàn).等人，J.Pharm.Pharmacol.1991，43，(11)，815-816；Garzon Aburbeh，A.等人，J.Med.Chem.1986，29，(5)，687-69；以及Han，S.等人J Control.Release 2014，177，1-10)。
在其它實例中，短的連接基已用于促進藥物-甘油三酯綴合，其中藥物不含可利用的羧酸(Scriba，G.K.E.，Arch.Pharm.(Weinheim)。1995，328，(3)，271-276；以及Scriba，G.K.E.等人，J.Pharm.Pharmacol.1995，47，(11)，945-948)。這些藥物-脂質(zhì)綴合物使用琥珀酸促進與可利用的羥基官能團綴合。然而，文獻教導(dǎo)這種結(jié)構(gòu)根本無用，例如，Scriba檢查了睪酮-琥珀酸-甘油酯脂質(zhì)綴合物的體外水解，并且得出結(jié)論“本研究中通過化學(xué)水解、血漿酯酶催化的水解和脂肪酶介導(dǎo)的水解從前藥中僅極為緩慢地釋放睪酮…因此，睪酮綴合物看起來是遞送類固醇的差前藥。”
其它文獻使用了醚鍵與甘油酯連接以及酯鍵與藥物連接(Sugihara，J.等人，J.Pharmacobiodyn.1988，11，(5)，369-376；以及Sugihara，J.等人，J.Pharmacobiodyn.1988，11，(8)，555-562)。這些論文的作者清楚地描述，甘油與正烷基鏈之間的醚鍵和正烷基鏈與藥物之間的酯鍵對于藥物的化學(xué)修飾似乎是必需的。然而，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，醚鍵實際上是起反作用的，無法實現(xiàn)顯著的淋巴轉(zhuǎn)運。
因此，對于研發(fā)新的脂質(zhì)-藥物活性劑綴合物存在需求，所述綴合物有利于藥物活性劑穩(wěn)定地轉(zhuǎn)運至腸淋巴并且易于回復(fù)為母體活性劑以便有效。
發(fā)明概述
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，使用某些“連接基”使藥物活性劑連接至甘油三酯單元為所得到的脂質(zhì)-藥物活性劑綴合物提供了最佳的藥物動力學(xué)特性。
因此，一方面，本發(fā)明提供式(I)的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽：
其中
R1和R2獨立地表示H或C2-C28脂肪酸的殘基；
-X-選自-O-、-NH-和-S-；
-Y-表示任選被取代的-C3-C20烷基-、-C3-C20烯基-或-C3-C20炔基-，其中所述烷基、烯基或炔基中的一個或多個碳原子可以被NH、S、O、C5-C8芳族或脂族環(huán)狀基團或C5-C8芳族或脂族雜環(huán)基團替代，條件是所述烷基、烯基或炔基不超過相當于直鏈C20烷基的長度；
表示藥物活性劑的殘基；
-L-是-X’-或-X’C(O)-；
X’是O、S、N、N(R4)或S(O)2NH；
表示單鍵，此時X’是O、S、N(R4)或S(O)2NH；或
表示兩個單獨的鍵，此時X’是N；
-Z-是-C(O)-或-C(O)R3-，此時-L-是-X’-；或
-Z-不存在，此時-L-是-X’C(O)-；
R3是自我毀滅的基團；且
R4是H或C1-C4烷基。
另一方面，本發(fā)明提供式(I)的化合物，其表示為式(II)：
其中
R1和R2獨立地表示H或C2-C28脂肪酸的殘基；
-X-選自-O-、-NH-和-S-；
-Y-表示任選被取代的-C3-C20烷基-、-C3-C20烯基-或-C3-C20炔基-，其中所述烷基、烯基或炔基中的一個或多個碳原子可以被NH、S、O、C5-C8芳族或脂族環(huán)狀基團或C5-C8芳族或脂族雜環(huán)基團替代，條件是所述烷基、烯基或炔基不超過相當于直鏈C20烷基的長度；
表示藥物活性劑的殘基；
-L-是-X’-或-X’C(O)-；
X’是O、S或N(R4)；
R4是H或C1-C4烷基；且
-Z-是-C(O)-，此時-L-是-X’-；或
-Z-不存在，此時-L-是-X’C(O)-；或
其藥學(xué)上可接受的鹽。
另一方面，本發(fā)明提供式(I)的化合物，其表示為式(III)：
其中
R1、R2、-X-、和-Z-如對式(I)或式(II)所定義；
R5和R6各自選自氫和C1-C4烷基；且
n是1至18；或
其藥學(xué)上可接受的鹽。
另一方面，本發(fā)明提供式(I)的化合物，其表示為式(IV)：
其中R1、R2和X如對式(I)所定義；
R5和R6各自選自氫和C1-C4烷基；
-Z-是-C(O)-或-C(O)R3-；
R3是自我毀滅的基團；且
n是1至18；或
其藥學(xué)上可接受的鹽。
另一方面，本發(fā)明提供式(I)的化合物，其表示為式(V)：
其中R1、R2、X、R5、R6和n如對式(IV)所定義；且
-Z-是-C(O)-；或
其藥學(xué)上可接受的鹽。
另一方面，本發(fā)明提供治療或預(yù)防其中增加的睪酮水平是有益的疾病或障礙的方法，其包括對有此需要的受試者施用治療有效量的式(IV)的化合物。
另一方面，本發(fā)明提供式(IV)的化合物在制備用于治療或預(yù)防其中增加的睪酮水平是有益的疾病或障礙的藥劑中的用途。
另一方面，本發(fā)明提供式(IV)的化合物，其用于治療或預(yù)防其中增加的睪酮水平是有益的疾病或障礙。
另一方面，本發(fā)明提供一種促進藥物活性劑的淋巴轉(zhuǎn)運和系統(tǒng)性釋放的方法，其包括使該藥物活性劑與式(VI)的前藥殘基或其藥學(xué)上可接受的鹽綴合：
其中
R1和R2獨立地表示H或C2-C28脂肪酸的殘基；
-X-選自-O-、-NH-和-S-；
-Y-表示任選被取代的-C3-C20烷基-、-C3-C20烯基-或-C3-C20炔基-，其中所述烷基、烯基或炔基中的一個或多個碳原子可以被NH、S、O、C5-C8芳族或脂族環(huán)狀基團或C5-C8芳族或脂族雜環(huán)基團替代，條件是所述烷基、烯基或炔基不超過相當于直鏈C20烷基的長度；
-Z-是-C(O)-、-C(O)R3-或-CH2-；
R3是自我毀滅的基團；且
表示連接基與所述藥物活性劑綴合的點。
對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在結(jié)合所伴有的實施例和權(quán)利要求書閱讀如下詳細描述時，本發(fā)明的這些方面和其它方面將是更加顯見的。
附圖簡要說明
圖1：十二指腸內(nèi)輸注十一酸睪酮(TU)和化合物10、11、14和41后麻醉的腸系膜淋巴管插管的雌性SD大鼠中總的睪酮相關(guān)衍生物的累積淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)與時間關(guān)系的圖示。
圖2：十二指腸內(nèi)輸注MPA和化合物30至35后麻醉的腸系膜淋巴管插管的雄性SD大鼠中總的包含麥考酚酸(MPA)的化合物的累積淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)與時間關(guān)系的圖示。
圖3：十二指腸內(nèi)輸注MPA和化合物31和40后麻醉的腸系膜淋巴管插管的雄性SD大鼠中總的包含麥考酚酸(MPA)的化合物的累積淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)與時間關(guān)系的圖示。
圖4：十二指腸內(nèi)輸注十一酸睪酮(TU)和化合物10、16和18后麻醉的腸系膜淋巴管插管的雌性SD大鼠中總的睪酮相關(guān)衍生物的累積淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)與時間關(guān)系的圖示。
圖5：十二指腸內(nèi)輸注MPA和化合物31、32、34、36、37、38和39后麻醉的腸系膜淋巴管插管的雄性SD大鼠中總的包含麥考酚酸(MPA)的化合物的累積淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)與時間關(guān)系的圖示。
圖6：十二指腸內(nèi)輸注MPA和化合物30、32、42、43、44和45后麻醉的腸系膜淋巴管插管的雄性SD大鼠中總的包含麥考酚酸(MPA)的化合物的累積淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)與時間關(guān)系的圖示。
圖7.十二指腸內(nèi)輸注MET和化合物3后麻醉的腸系膜淋巴管插管的雄性SD大鼠中總的美托洛爾(MET)相關(guān)衍生物的累積淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)與時間關(guān)系的圖示。
圖8.十二指腸內(nèi)輸注ATV和化合物9后麻醉的腸系膜淋巴管插管的雄性SD大鼠中總的阿托伐他汀(ATV)相關(guān)衍生物的累積淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)與時間關(guān)系的圖示。
圖9.十二指腸內(nèi)輸注ASP和化合物8后麻醉的腸系膜淋巴管插管的雄性SD大鼠中總的阿司匹林(ASP)相關(guān)衍生物的累積淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)與時間關(guān)系的圖示。
圖10.十二指腸內(nèi)輸注SER和化合物1、6和7后麻醉的腸系膜淋巴管插管的雄性SD大鼠中總的舍曲林(SER)相關(guān)衍生物的累積淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)與時間關(guān)系的圖示。
圖11.十二指腸內(nèi)輸注化合物5后麻醉的腸系膜淋巴管插管的雄性SD大鼠中總的塞來昔布相關(guān)衍生物的累積淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)與時間關(guān)系的圖示。
圖12：經(jīng)口管飼十一酸睪酮(TU)和化合物10、11、13、14和40至有意識的頸動脈插管的雌性SD大鼠后劑量歸一化睪酮血漿濃度的圖示。
圖13：經(jīng)口管飼十一酸睪酮(TU)(以商業(yè)產(chǎn)品Testocaps的形式)和化合物13至喂食狀態(tài)的雌性灰狗或經(jīng)口管飼化合物13至禁食狀態(tài)的灰狗后劑量歸一化睪酮血漿濃度的圖示。
圖14：經(jīng)口管飼十一酸睪酮(TU)和化合物10、13、16、18和19至有意識的頸動脈插管的雌性SD大鼠后劑量歸一化睪酮血漿濃度的圖示。
圖15：經(jīng)口管飼十一酸睪酮(TU)和化合物11、13、18、19、22、25、26和27至有意識的頸動脈插管的雌性SD大鼠后劑量歸一化睪酮血漿濃度的圖示。
圖16：經(jīng)口管飼十一酸睪酮(TU)和化合物11、18、21和23至有意識的頸動脈插管的雌性SD大鼠后劑量歸一化睪酮血漿濃度的圖示。
圖17：經(jīng)口管飼十一酸睪酮(TU)和化合物10、18、28和29至有意識的頸動脈插管的雌性SD大鼠后劑量歸一化睪酮血漿濃度的圖示。
圖18：經(jīng)口管飼阿法沙龍或化合物2至有意識的頸動脈插管的雄性SD大鼠后阿法沙龍(ALP)血漿濃度的圖示。
圖19：化合物10、13、16和化合物18的單酸甘油酯形式在體外與新鮮采集的大鼠膽汁和胰液(對于化合物10和18)或豬胰脂肪酶(對于化合物13和16)一起溫育過程中的穩(wěn)定性特性的圖示。
圖20：化合物11、13、22、25、26和27的單酸甘油酯形式在體外與豬胰脂肪酶一起溫育過程中的穩(wěn)定性特性的圖示。
圖21：化合物11、13、21、23和24的單酸甘油酯形式在體外與豬胰脂肪酶一起溫育過程中的穩(wěn)定性特性的圖示。
圖22：化合物10和29的單酸甘油酯形式在體外與豬胰脂肪酶一起溫育過程中的穩(wěn)定性特性的圖示。
圖23：化合物31、32、34、36、37、38和39的單酸甘油酯形式在體外與新鮮采集的大鼠膽汁和胰液一起溫育過程中的穩(wěn)定性特性的圖示。
圖24：在不存在或存在0.6mg JZL184和9μg奧利司他的情況下十二指腸內(nèi)輸注MPA和化合物32后麻醉的腸系膜淋巴管插管的雄性SD大鼠中總的包含麥考酚酸(MPA)的化合物的累積淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)與時間關(guān)系的圖示。
發(fā)明詳述
當前藥策略用于藥物開發(fā)領(lǐng)域以改善藥物動力學(xué)特性時，通常預(yù)期前藥可以通過非特異性降解或酶介導(dǎo)的生物轉(zhuǎn)化回復(fù)為母體化合物，然后展示出生物活性。本發(fā)明公開了基于修飾的甘油酯的化合物，它們能夠促進藥物活性劑的淋巴轉(zhuǎn)運并且改善所述化合物回復(fù)為活性藥用物質(zhì)。
膳食脂質(zhì)，例如甘油三酯類應(yīng)用獨特的代謝途經(jīng)以獲得進入淋巴(并且最終到達體循環(huán))，其完全不同于其它營養(yǎng)物(例如蛋白質(zhì)和碳水化合物)的代謝途經(jīng)。在攝入后，膳食甘油三酯類被體腔脂肪酶水解，每個甘油三酯分子釋放一個單酸甘油酯和兩個脂肪酸。該單酸甘油酯和兩個脂肪酸隨后被吸收入腸細胞，在那里它們被重新酯化成甘油三酯類。
再合成的甘油三酯類被組裝成腸脂蛋白(主要是乳糜微粒)且由此形成的乳糜微粒從腸細胞胞吐出來，且隨后獲得優(yōu)先進入腸淋巴管。在淋巴管內(nèi)，乳糜微粒形式的脂質(zhì)通過一系列毛細血管、結(jié)節(jié)和輸送管排出，最終在左鎖骨下靜脈和頸內(nèi)靜脈的連接處排空進入體循環(huán)。在進入血液循環(huán)后，乳糜微粒中的甘油三酯類優(yōu)先和有效地被具有高脂蛋白脂肪酶表達的組織(例如脂肪組織、肝和潛在的某些類型的腫瘤組織)吸收。
預(yù)期脂質(zhì)模擬性化合物與天然甘油三酯類行為類似，且在到達體循環(huán)之前被轉(zhuǎn)運至淋巴系統(tǒng)和通過淋巴系統(tǒng)。按照這種方式，母體藥物活性劑的藥物動力學(xué)和藥效學(xué)特性可以被操作以便增強進入淋巴和淋巴組織，由此通過避免首過代謝(和潛在的腸流出)提高口服生物利用度。脂質(zhì)模擬性化合物還可以促進藥物靶向至淋巴、淋巴結(jié)和淋巴組織內(nèi)的部位和高脂質(zhì)利用和脂蛋白脂肪酶表達的部位，例如脂肪組織和一些腫瘤。
易于轉(zhuǎn)化成母體藥物的脂質(zhì)化前藥在通過體循環(huán)轉(zhuǎn)運后降低了胃腸(GI)道中的游離藥物濃度，這可以在減少胃腸刺激、掩蔽味道、促進藥物在腸膽汁鹽微團中增溶方面(歸因于與內(nèi)源性單酸甘油酯類的類似性)和提高被動膜滲透性方面(通過增加親脂性)提供益處。脂質(zhì)化前藥還提高在包含單獨的脂質(zhì)或脂質(zhì)與表面活性劑和/或助溶劑的混合物的脂質(zhì)載體中的溶解度，并且這樣做使得能以大于對母體藥物可能是可行的劑量以藥物溶液施用。
本發(fā)明的發(fā)明人令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，將藥物活性劑連接至甘油酯單元的藥物-甘油酯綴合物的部分可以被修飾，以改善藥物-甘油酯綴合物在GI道中的穩(wěn)定性，促進轉(zhuǎn)運至腸淋巴，且最終促進藥物活性劑從藥物活性劑-甘油酯前藥中釋放。因此，通過改變將藥物活性劑連接至甘油酯單元的“連接基”，對于所得到的化合物可以實現(xiàn)最佳的藥物動力學(xué)特性。
在本說明書中，應(yīng)用了本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的大量術(shù)語。盡管如此，但是為了清楚目的，定義大量術(shù)語。
在本說明書中，除非另有定義，否則術(shù)語“任選被取代的”是指基團可以進一步被一個或多個基團取代，也可以不被這些基團取代，所述基團選自羥基、烷基、烷氧基、烷氧基羰基、烯基、烯氧基、炔基、炔氧基、氨基、氨基酰基、硫代、芳基烷基、芳基烷氧基、芳基、芳氧基、?；被?、羧基、氰基、鹵素、硝基、磺基、膦?；⒘柞；被㈧⒒?、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、三鹵代甲基、五氟乙基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲硫基、三氟乙烯基、一-和二-烷基氨基、一-和二-(取代的烷基)氨基、一-和二-芳基氨基、一-和二-雜芳基氨基、一-和二-雜環(huán)基、氨基和帶有不同取代基的不對稱二-取代的胺類，所述取代基選自烷基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基。
如本申請中所用的，單獨使用或在化合物措詞中使用的術(shù)語“烷基”表示直鏈或支鏈烷基。前綴例如“C2-C20”用于表示烷基內(nèi)的碳原子數(shù)(在這種情況中為2－20個)。直鏈和支鏈烷基的實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲-丁基、叔-丁基、正戊基、己基、庚基、5-甲基庚基、5-甲基己基、辛基、壬基、癸基、十一基、十二烷基和二十二烷基(C22)。
如本申請中所用的，單獨使用或在化合物措詞中使用的術(shù)語“烯基”表示包含至少一個碳-碳雙鍵的直鏈或支鏈烴殘基，包括如上述所定義的烯烴類單-、二-或多不飽和烷基。優(yōu)選地，烯基是直鏈烯基。前綴例如“C2-C20”用于表示烯基內(nèi)的碳原子數(shù)(在這種情況中為2－20個)。烯基的實例包括乙烯基、烯丙基、1-甲基乙烯基、丁烯基、異-丁烯基、3-甲基-2-丁烯基、1-戊烯基、1-己烯基、3-己烯基、1-庚烯基、3-庚烯基、1-辛烯基、1-壬烯基、2-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、3-癸烯基、1,3-丁二烯基、1,4-戊二烯基、1,3-己二烯基、1,4-己二烯基和5-二十二烯基(C22)。
如本申請中所用的，單獨使用或在化合物措詞中使用的術(shù)語“炔基”表示包含至少一個碳-碳三鍵的直鏈或支鏈烴殘基，包括如上述所定義的烯烴類單-、二-或多不飽和烷基。優(yōu)選地，炔基是直鏈炔基。前綴例如“C2-C20”用于表示炔基內(nèi)的碳原子數(shù)(在這種情況中為2－20個)。
如本申請中所用的，單獨使用或在化合物措詞中使用的術(shù)語例如“雜環(huán)”或“雜環(huán)基”表示飽和、部分不飽和或完全不飽和單環(huán)、雙環(huán)或稠合多環(huán)環(huán)系，其包含至少一個選自氮、硫和氧的雜原子。前綴例如“C5-C8”用于表示該基團環(huán)狀部分內(nèi)的碳原子數(shù)(在這種情況中為5－8個)。適合的雜環(huán)取代基的實例包括，但不限于吡咯、呋喃、苯并呋喃、苯并噻唑、咪唑、苯并咪唑、咪唑啉、吡唑、吡唑啉、三唑、唑、唑啉、異唑、異唑啉、呋咱、二唑、哌啶、吡啶、嘧啶、噠嗪和吡嗪，它們各自可以進一步被1-3個取代基取。
如本申請中所用的，術(shù)語例如“芳基”或“芳族環(huán)狀基團”表示任意單核或多核的綴合的或稠合的芳族烴基環(huán)系的殘基。前綴例如“C5-C8”用于表示芳基環(huán)狀部分內(nèi)的碳原子數(shù)(在這種情況中為5－8個)。芳基的實例包括苯基(單核)、萘基(稠合多核)、聯(lián)苯基(綴合的多核)和四氫萘基(稠合的多核)。
如本申請中所用的，術(shù)語“連接基”表示對于本申請中所述的式(I)的化合物而言從“X”到“L”的化合物部分，其使藥物活性劑連接至甘油酯單元。
如本申請中所用的，術(shù)語“自我毀滅的基團”定義一種化學(xué)部分，其與連接基形成易斷裂的鍵，與藥物活性劑形成穩(wěn)定的鍵，其中與藥物活性劑的鍵在連接基裂解時變得不穩(wěn)定。自我毀滅的基團的實例包括，但不限于乙縮醛自我毀滅的基團、對羥基芐基羰基自我毀滅的基團、翻轉(zhuǎn)酯的自我毀滅的基團和三甲基鎖自我毀滅的基團。許多其它適合的自我毀滅的基團在本領(lǐng)域中是已知的，例如Blencowe等人，Polym.Chem.2011，2，773-790和Kratz等人Chem Med Chem.2008，3，20-53中所描述的。
如本申請中所用的，術(shù)語“藥物活性劑”表示任意的藥物活性物質(zhì)或成像(造影)劑，其將得益于通過腸淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)運，例如以避免首過代謝或用于在淋巴系統(tǒng)內(nèi)靶向遞送。
適合的藥物活性劑的實例包括，但不限于睪酮、麥考酚酸、雌激素(雌激素)、嗎啡、美托洛爾、雷洛昔芬、阿法沙龍、他汀類藥物例如阿托伐他汀、噴他佐辛、普萘洛爾、L-DOPA、丁丙諾啡、咪達唑侖、利多卡因、氯丙嗪、阿米替林、去甲替林、噴他佐辛，硝酸異山梨酯、三硝酸甘油酯、氧烯洛爾、拉貝洛爾、維拉帕米、沙丁胺醇、環(huán)硫雄醇、美法侖、洛伐他汀、非甾類抗炎藥(NSAIDS，例如阿司匹林、布洛芬、萘普生)、COX-2抑制劑(例如塞來昔布、羅非昔布)、皮質(zhì)類固醇抗炎藥(例如潑尼松龍、潑尼松、地塞米松)、抗瘧藥(例如羥氯喹)、環(huán)磷酰胺、亞硝基脲類、鉑、甲氨蝶呤、硫唑嘌呤、巰嘌呤、氟尿嘧啶、放線菌素D、蒽環(huán)類(例如柔紅霉素)、絲裂霉素C、博來霉素、光輝霉素、作用于抑免蛋白的藥物(例如環(huán)孢素、他克莫司、西羅莫司)、柳氮磺吡啶、來氟米特、麥考酚酯、阿片樣物質(zhì)、芬戈莫德、多球殼菌素、苯丁酸氮芥、多柔比星、奈拉濱、可的松、地塞米松、潑尼松、普拉曲沙、長春堿、硼替佐米、噻替派、奈拉濱、鹽酸柔紅霉素、氯法拉濱、阿糖胞苷、達沙替尼、甲磺酸伊馬替尼、鹽酸普納替尼、硫酸長春新堿、鹽酸苯達莫司汀、磷酸氟達拉濱、波舒替尼、尼洛替尼、美琥他辛、阿那曲唑、卡培他濱、來曲唑、紫杉醇、吉西他濱、氟維司群、他莫昔芬、拉帕替尼、托瑞米芬、伊沙匹隆、艾立布林、阿苯達唑、伊維菌素、乙胺嗪、阿苯達唑、多西環(huán)素、氯生太爾、馬拉韋羅、恩夫韋肽、脫氧胸腺嘧啶核苷、齊多夫定、司他夫定、去羥肌苷、扎西他濱、阿巴卡韋、拉米夫定、恩曲他濱、替諾福韋、奈韋拉平、地拉韋啶、依非韋倫、利匹韋林、拉替拉韋、艾維雷韋、洛匹那韋、茚地那韋、奈非那韋、氨普那韋、利托那韋、阿昔洛韋和藥物活性肽類。
適合的成像劑的實例包括，但不限于，熒光團，例如用于熒光顯微鏡檢查的或用于體內(nèi)成像的其中熒光團在紅外范圍內(nèi)具有發(fā)射光譜的Alexa Fluor系列的光學(xué)成像探針；可以用于正電子發(fā)射斷層攝影術(shù)(PET)的γ-發(fā)射體，例如氟脫氧葡萄糖或螯合劑，以螯合磁共振成像探針，例如釓或鐵。
對于式(I)的化合物，當X’是-O-或-S-時，基團是即表示單鍵。然而，當X’是N時，表示兩個單獨的鍵，即不是雙鍵，它們使氮原子連接至構(gòu)成藥物活性劑的組成部分的兩個單獨的原子。對于示例性的化合物，化合物1、6和7，其中藥物活性劑是具有如下化學(xué)結(jié)構(gòu)的舍曲林：
兩個單獨的鍵為從氮原子到1,2,3,4-四氫萘部分的鍵和從氮原子到甲基的鍵，此時連接基鍵合至舍曲林的仲氮原子。例如，當藥物活性劑是具有如下結(jié)構(gòu)的替諾福韋時：
兩個單獨的鍵為從氮原子到嘌呤部分的鍵和從氮原子到氫原子的鍵，此時連接基鍵合至可利用的伯胺。類似地，如果藥物活性劑是具有如下結(jié)構(gòu)的拉貝洛爾：
并且連接基鍵合至可利用的酰胺基團，則兩個單獨的鍵為從氮原子到羧基碳原子的鍵和從氮原子到氫原子的鍵。針對式(I)的化合物提及不是想暗示氮原子通過雙鍵鍵合至藥物活性劑。
為避免任何疑慮，所涉及的“相當于直鏈C20烷基的長度”是指20個單數(shù)鍵合的碳原子理論上展開的長度。
在本發(fā)明的一些優(yōu)選的實施方案中，關(guān)于通式(I)，適用如下定義的一個或多個：
a)R1和R2獨立地表示H或C2-C28脂肪酸的殘基。
b)R1表示H，且R2表示C2-C28脂肪酸的殘基。
c)R2表示H，且R1表示C2-C28脂肪酸的殘基。
d)R1和R2各自表示棕櫚酸。
e)-X-是-O-。
f)-X-是-NH-。
g)-X-是-S-。
h)-Y-表示任選被取代的-C3-C20烷基-、-C3-C20烯基-或-C3-C20炔基-，其中所述烷基、烯基或炔基上的碳原子的一個或多個可以被NH、S、O、C5-C8芳族或脂族環(huán)狀基團或C5-C8芳族或脂族雜環(huán)基團替代，條件是所述烷基、烯基或炔基不超過相當于直鏈C20烷基的長度。
i)-Y-表示-C3-C20烷基-、-C3-C20烯基-或-C3-C20炔基-，它們?nèi)芜x地被烷基取代。
j)-Y-表示-C3-C20烷基-、-C3-C20烯基-或-C3-C20炔基-，它們?nèi)芜x地被甲基取代。
k)-Z-是C(O)R3-，此時-L-是-X'-，且R3是自我毀滅的基團。
l)R3是自我毀滅的基團，其選自乙縮醛、三甲基鎖、對羥基芐基羰基或翻轉(zhuǎn)酯的自我毀滅的基團。
m)-Z-是-C(O)-，此時-L-是-X'-。
n)X'是O。
o)X'是S。
p)X'是N。
q)X'是N(R4)。
r)R4是H。
s)R4是C1-C4烷基。
t)R4是甲基。
在一個優(yōu)選的實施方案中，-Z-是-C(O)-，此時-L-是-X'-。
因此，在另一個實施方案中，本發(fā)明提供式(I)的化合物，其表示為式(II)：
其中
R1和R2獨立地表示H或C2-C28脂肪酸的殘基；
-X-選自-O-、-NH-和-S-；
-Y-表示任選被取代的-C3-C20烷基-、-C3-C20烯基-或-C3-C20炔基-，其中所述烷基、烯基或炔基上的碳原子的一個或多個可以被NH、S、O、C5-C8芳族或脂族環(huán)狀基團或C5-C8芳族或脂族雜環(huán)基團替代，條件是所述烷基、烯基或炔基不超過相當于直鏈C20烷基的長度；
表示藥物活性劑的殘基；
-L-是-X'-或-X'C(O)-；
-Z-是-C(O)-，此時-L-是-X'-；或
-Z-不存在，此時-L-是-X'C(O)-；且
X’選自O(shè)、S和NR4；且
R4是H或C1-C4烷基；或
其藥學(xué)上可接受的鹽。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供式(I)的化合物，其表示為式(III)：
其中
R1、R2、-X-和-Z-如對式(I)所定義；
R5和R6各自選自氫和C1-C4烷基；且
n是1至18；或
其藥學(xué)上可接受的鹽。
在另一個實施方案中，式(III)的化合物選自表1中列出的那些化合物。
表1.下式的化合物：
1TML＝三甲基鎖自我毀滅的基團；2PHB＝對羥基芐基羰基自我毀滅的基團；3ASI＝乙縮醛自我毀滅的基團。
在一個實施方案中，所述藥物活性劑是睪酮或其衍生物或類似物。睪酮替代療法(TRT)常用于具有性腺功能減退癥(特征在于異常低血清睪酮水平的障礙)的患者，以使其血清睪酮水平恢復(fù)至正常范圍且由此緩解性腺功能減退癥的許多癥狀，例如情緒紊亂、性功能障礙等。
因此，在一個實施方案中，本發(fā)明提供式(I)的化合物，其表示為式(IV)：
其中R1、R2和X如對式(I)所定義；
R5和R6各自選自氫和C1-C4烷基；
-Z-是-C(O)-或-C(O)R3-；
R3是自我毀滅的基團；且
n是1至18；或
其藥學(xué)上可接受的鹽。
在另一個實施方案中，式(IV)的化合物選自表2中列出的那些化合物。
表2.式(IV)的化合物：
1ASI＝乙縮醛自我毀滅的基團；2TML＝三甲基鎖自我毀滅的基團；3PHB＝對羥基芐基羰基自我毀滅的基團；4FSI＝翻轉(zhuǎn)酯自我毀滅的基團。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供治療或預(yù)防其中增加的睪酮水平是有益的疾病或障礙的方法，其包括對有此需要的受試者施用治療有效量的式(IV)的化合物。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供式(IV)的化合物在制備用于治療或預(yù)防其中增加的睪酮水平是有益的疾病或障礙的藥劑中的用途。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供式(IV)的化合物，其用于治療或預(yù)防其中增加的睪酮水平是有益的疾病或障礙。
其中所述增加的睪酮水平可能是有益的疾病和障礙包括，但不限于性腺功能減退癥、因骨髓衰竭導(dǎo)致的貧血、因腎衰竭導(dǎo)致的貧血、慢性呼吸衰竭、慢性心力衰竭、類固醇依賴性自身免疫疾病、艾滋病消耗、遺傳性血管水腫或蕁麻疹、晚期乳腺癌或絕經(jīng)。
在另一個實施方案中，所述藥物活性劑是麥考酚酸(MPA)。MPA對淋巴細胞中的嘌呤合成途徑起作用且是廣泛應(yīng)用的用于治療自身免疫疾病和器官移植排斥的免疫抑制劑。
因此，在另一個實施方案中，本發(fā)明提供式(I)的化合物或，其表示為式(VII)：
其中R1、R2、X和X'如對式(I)所定義；
R5和R6各自選自氫和C1-C4烷基；且
n是1至18；或
其藥學(xué)上可接受的鹽。
在另一個實施方案中，式(VII)的化合物選自表3中列出的那些化合物。
表3.式(VII)的化合物：
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供治療或預(yù)防自身免疫疾病和器官移植排斥的方法，其包括對有此需要的受試者施用治療有效量的式(VII)的化合物。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供式(VII)的化合物在制備用于治療或預(yù)防自身免疫疾病和器官移植排斥的藥劑中的用途。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供式(VII)的化合物，其用于治療或預(yù)防自身免疫疾病和器官移植排斥。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供促進藥物活性劑淋巴轉(zhuǎn)運和系統(tǒng)性釋放的方法，其包括使式(VI)的前藥殘基或其藥學(xué)上可接受的鹽綴合至所述藥物化合物：
其中
R1和R2獨立地表示H或C2-C28脂肪酸的殘基；
-X-選自-O-、-NH-和-S-；
-Y-表示任選被取代的-C3-C20烷基-、-C3-C20烯基-或-C3-C20炔基-，其中所述烷基、烯基或炔基上的碳原子的一個或多個可以被NH、S、O、C5-C8芳族或脂族環(huán)狀基團或C5-C8芳族或脂族雜環(huán)基團替代，條件是所述烷基、烯基或炔基不超過相當于直鏈C20烷基的長度；
-Z-是-C(O)-、-C(O)R3-或-CH2-；
R3是自我毀滅的基團；且
表示點，其中連接基綴合至藥物活性劑。
在一個實施方案中，對如上文所定義的化合物的Y和Z進行選擇，以有利于藥物活性劑穩(wěn)定地轉(zhuǎn)運至腸淋巴。在另一個實施方案中，對Y和Z進行選擇，以有利于藥物活性劑在淋巴、淋巴細胞、淋巴組織、具有高脂肪酶活性的組織例如脂肪組織、一些癌癥、肝臟或體循環(huán)中釋放。在另一個實施方案中，對Y和Z進行選擇，以有利于藥物活性劑轉(zhuǎn)運至腸淋巴并且有利于藥物活性劑在淋巴、淋巴細胞、淋巴組織、具有高脂肪酶活性的組織例如脂肪組織、一些癌癥、肝臟或體循環(huán)中釋放。
本發(fā)明的化合物用于穩(wěn)定地將藥物活性劑轉(zhuǎn)運至腸淋巴并且在淋巴、淋巴細胞、淋巴組織、具有高脂肪酶活性的組織例如脂肪組織、一些癌癥、肝臟或體循環(huán)中釋放藥物活性劑。本發(fā)明的化合物特別地用于轉(zhuǎn)運和釋放得益于避免首過代謝的藥物活性劑，例如，展示出大于50％首過代謝的化合物。在一個實施方案中，預(yù)期所述藥物活性劑展示出大于60％的首過代謝。在另一個實施方案中，所述藥物活性劑展示出大于70％的首過代謝。在另一個實施方案中，所述藥物活性劑展示出大于80％的首過代謝。在另一個實施方案中，所述藥物活性劑展示出大于90％的首過代謝。
可以得益于穩(wěn)定地轉(zhuǎn)運至腸淋巴并且在淋巴、淋巴細胞、淋巴組織、具有高脂肪酶活性的組織例如脂肪組織、一些癌癥、肝臟或體循環(huán)的藥物活性劑包括，但不限于睪酮、麥考酚酸、雌激素(雌激素)、嗎啡、美托洛爾、雷洛昔芬、阿法沙龍、他汀類藥物例如阿托伐他汀、噴他佐辛、普萘洛爾、L-DOPA、丁丙諾啡、咪達唑侖、利多卡因、氯丙嗪、阿米替林、去甲替林、噴他佐辛、硝酸異山梨酯、三硝酸甘油酯、氧烯洛爾、拉貝洛爾、維拉帕米、沙丁胺醇、環(huán)硫雄醇、美法侖、洛伐他汀和藥物活性肽類。
本發(fā)明的化合物還用于所述藥物活性劑在淋巴系統(tǒng)內(nèi)的靶向釋放，例如在淋巴、淋巴細胞和淋巴組織以及具有高脂肪酶活性的組織例如脂肪組織、一些癌癥或肝中。
可以得益于在淋巴系統(tǒng)或脂肪組織內(nèi)靶向釋放的藥物活性劑包括，但不限于非甾類抗炎藥(NSAIDS，例如阿司匹林、布洛芬、萘普生)、COX-2抑制劑(例如塞來昔布)、皮質(zhì)類固醇抗炎藥(例如潑尼松龍、地塞米松)、抗瘧藥(例如羥氯喹)、環(huán)磷酰胺、PPAR激動劑(例如貝特類)、亞硝基脲類、鉑、甲氨蝶呤、硫唑嘌呤、巰嘌呤、氟尿嘧啶、放線菌素D、蒽環(huán)類、絲裂霉素C、博來霉素、光輝霉素、作用于抑免蛋白的藥物(例如環(huán)孢素、他克莫司、西羅莫司)、柳氮磺吡啶、來氟米特、麥考酚酯、阿片樣物質(zhì)、芬戈莫德、多球殼菌素、苯丁酸氮芥、多柔比星、奈拉濱、可的松、地塞米松、潑尼松、普拉曲沙、長春堿、硼替佐米、噻替派、奈拉濱、鹽酸柔紅霉素、氯法拉濱、阿糖胞苷、達沙替尼、甲磺酸伊馬替尼、鹽酸普納替尼、硫酸長春新堿、鹽酸苯達莫司汀、磷酸氟達拉濱、波舒替尼、尼洛替尼、美琥他辛、阿那曲唑、卡培他濱、來曲唑、紫杉醇、吉西他濱、氟維司群、他莫昔芬、拉帕替尼、托瑞米芬、伊沙匹隆、艾立布林、阿苯達唑、伊維菌素、乙胺嗪、多西環(huán)素、氯生太爾、馬拉韋羅、恩夫韋肽、脫氧胸腺嘧啶核苷、齊多夫定、司他夫定、去羥肌苷、扎西他濱、阿巴卡韋、拉米夫定、恩曲他濱、替諾福韋、奈韋拉平、地拉韋啶、依非韋倫、利匹韋林、拉替拉韋、艾維雷韋、洛匹那韋、茚地那韋、奈非那韋、氨普那韋、利托那韋、阿昔洛韋和免疫抑制劑例如麥考酚酸、環(huán)孢菌素、他克莫司和西羅莫司。
作為一般性的策略，本發(fā)明的化合物可以通過如下路徑之一合成。
方案1.本發(fā)明的未被取代的烷基-連接的化合物的合成，其中L是X’，且X’是O
如方案1中所示，可以通過使酸-甘油三酯IV與包含醇的藥物活性劑(A-OH)在標準酯-鍵形成條件下反應(yīng)，制備本發(fā)明的化合物，其中-Y-是未被取代的烷基。在大部分情況中，可以通過在吡啶的存在下用1,3-二酰基甘油III處理由酸酐I(n＝1)或二酰氯II(n>1)(得自相應(yīng)的二羧酸)獲得所述酸-甘油三酯IV。
為了合成化合物，其中-Y-是α-取代或β-取代的烷基，酸酐I或二酰氯II通過方案1中所述的路徑轉(zhuǎn)化成酸-甘油三酯IV并非典型地可行，因為原料是不對稱的。因此，經(jīng)由方案1的合成將導(dǎo)致形成混合的酸-甘油三酯產(chǎn)物。在這些情況中，連接基單元可以由更為簡單的原料構(gòu)建，且然后按照順序在適合的點與二?；视虸II合并，最終得到酸-甘油三酯IV。
方案2.本發(fā)明的α-取代的化合物的合成
為了合成包含α-烷基取代的烷基連接基的化合物，可以通過衍生自醇VI的醛與穩(wěn)定的內(nèi)鹽VII之間的維蒂希反應(yīng)組裝用于間隔基的所需碳骨架，得到α-烷基-α,β-不飽和的酯VIII。在該酯水解釋放游離酸IX后，與二?；视虸II在標準條件下偶合，得到甘油三酯X。一步氫化-氫解得到飽和醇XI，首先使用PCC將其氧化，得到醛XII，然后進一步在Pinnick條件下氧化，得到期望的α-取代的酸-甘油三酯IV。
方案3.本發(fā)明的β-取代的化合物的合成
為了合成包含β-烷基取代的烷基連接基的化合物，上述方案1中概括的方法可以用于其中n＝1的特定情況，因為β-取代基維持二酰氯II中的對稱性。上述方案3提供用于合成包含β-烷基取代基的化合物的方法，在此情況中，其中n>1。最終，使用強堿例如n-BuLi使TMS乙炔脫質(zhì)子化，然后添加作為親電體的烷基溴XIII，導(dǎo)致形成甲硅烷基炔XIV。在去甲硅烷基化后，PdII和CuI介導(dǎo)的炔XV與烯醇三氟甲磺酸酯XVI的Sonogashira交叉偶合得到包含所需β-烷基取代基的烯炔XVII。烯炔XVII的催化氫化得到β-甲基-ω-羥基酯XVIII，其可以被轉(zhuǎn)化成TBDPS醚XIX，用于導(dǎo)入甘油酯官能團的制備。然后通過在加壓堿性條件下(2M KOH的EtOH溶液，在60℃)水解酯XIX來進行，然后使得到的酸XX與二酰基甘油III進行標準偶合，得到甘油三酯XXI。然后使用TBAF去甲硅烷基得到羥基甘油三酯XI，可以按照與方案2中概括的類似的方式將其轉(zhuǎn)化成目標酸-甘油三酯IV。
方案4.化合物的合成，其中L是–X’C(O)-，且X’是O或S
如果藥物活性劑帶有可以綴合形成本發(fā)明化合物的羧酸基團，則該化合物通?？梢愿鶕?jù)方案4制備。為了在甘油酯與期望的連接基之間生成酯鍵，使ω-鹵代羧酸XXII與1,3-二?；视虸II在標準偶合條件的存在下偶合，得到ω-鹵代甘油三酯類XXIII。包含羧酸的藥物活性劑的綴合隨后可以通過用適合的羧酸酯親核體置換鹵素離去基進行，得到本發(fā)明的化合物XXIV。在此情況中，其中鹵代羧酸XXII不是商購的，從更簡單的前體合成是期望的。對于較短的鏈(n＝2、3)，α-烷基或β-烷基取代的實例或長鏈(例如：n＝12)未取代的實例，可以通過相應(yīng)內(nèi)酯類的開環(huán)得到必要的酸XXII(參見實施例6，化合物aj–am)。對于長鏈α-烷基或β-烷基實例(n>3)，必要的鹵代甘油三酯類XXIII可以由上述方案2和3中所述的羥基甘油三酯XI制備。
如果本發(fā)明的化合物需要純化，則可以使用多種技術(shù)例如重結(jié)晶和色譜技術(shù)，包括高效液相色譜法(HPLC)和正向或反相硅膠色譜法。所述化合物可以用核磁共振(NMR)質(zhì)譜法和/或其它適合的方法表征。
應(yīng)當理解，本發(fā)明的化合物可以以一種或多種立體異構(gòu)體形式存在(例如非對映異構(gòu)體)。本發(fā)明在其范圍內(nèi)包括所有這些分離(例如對映體分離)或組合(包括外消旋混合物和非對映異構(gòu)體混合物)的立體異構(gòu)體形式。
本發(fā)明由此還涉及關(guān)于氨基酸殘基的不對稱中心的基本上純的立體異構(gòu)體形式的化合物，例如大于約90％de，例如約95％至97％de或大于99％de，以及混合物，包括其外消旋混合物。這類非對映異構(gòu)體可以通過不對稱合成，例如采用手性中間體來制備，或可以通過常規(guī)方法拆分混合物，例如色譜法或應(yīng)用拆分試劑。
如果所述化合物包含一個或多個可以質(zhì)子化或脫質(zhì)子化的官能團(例如在生理pH下)，則該化合物可以作為藥學(xué)上可接受的鹽制備和/或分離。應(yīng)當理解，所述化合物在指定pH下可以為兩性離子形式。本申請中所用的表述“藥學(xué)上可接受的鹽”是指所指定的化合物的鹽，其中該鹽適合于作為藥物施用。這類鹽可以通過分別使酸或堿與胺或羧酸基團反應(yīng)形成。
藥學(xué)上可接受的酸加成鹽可以由無機酸和有機酸制備。無機酸的實例包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。有機酸的實例包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸等。
藥學(xué)上可接受的堿加成鹽可以由無機堿和有機堿制備，衍生自無機堿的相應(yīng)的平衡離子包括鈉、鉀、鋰、銨、鈣和鎂鹽。有機堿包括伯、仲和叔胺類、取代的胺類包括天然存在的取代的胺類和環(huán)胺類，包括異丙基胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、氨丁三醇、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、普魯卡因、海巴明(hydrabamine)、膽堿、甜菜堿、乙二胺、葡糖胺、N-烷基葡糖胺、可可堿、嘌呤、哌嗪、哌啶和N-乙基哌啶。
酸/堿加成鹽傾向于比相應(yīng)的游離酸/堿形式更溶于水性溶劑。
本發(fā)明的化合物可以為晶型或為溶劑合物(例如水合物)，并且預(yù)期兩者均屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)。術(shù)語“溶劑合物”是溶質(zhì)和溶劑形成的可變化學(xué)計算量的復(fù)合物。這類溶劑不應(yīng)當干擾溶質(zhì)的生物活性。作為實例，溶劑可以為水、乙醇或乙酸。溶劑化方法通常使本領(lǐng)域公知的。
本發(fā)明化合物的施用途經(jīng)預(yù)期包括口服和腸施用。因此，該活性化合物可以用惰性稀釋劑或可同化的可食用載體配制，或可以將其包封在硬殼膠囊或軟殼膠囊內(nèi)，或可以將其壓制成片劑，或可以將其直接摻入膳食食物。為了口服治療施用，可以將活性化合物與賦形劑摻合并且以可攝入片劑、口含或舌下片、藥片、膠囊、酏劑、混懸液、糖漿劑、糯米紙囊劑等的形式使用。活性化合物在這類治療上有用的組合物中的量使得可以得到適合的劑量。
所述片劑、藥片、丸劑、膠囊等還可以包含如下文所列出的成分：可以加入粘合劑，例如樹膠、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠；賦形劑，例如磷酸二鈣；崩解劑，例如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、藻酸等；潤滑劑，例如硬脂酸鎂；以及甜味劑，例如蔗糖、乳糖或糖精，或矯味劑，例如薄荷、冬青油或櫻桃香精。當劑型是膠囊時，除上述類型的物質(zhì)外，它還可以包含液體載體。各種其它材料可以作為包衣衣料提供，否則可以改變劑型的物理形式。例如，可以用蟲膠、糖或它們兩者給片劑、丸劑或膠囊包衣。糖漿劑或酏劑可以包含活性化合物、作為甜味劑的蔗糖、作為防腐劑的對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯、染料和矯味劑例如櫻桃或橙子香精。當然，用于制備任意單位劑型的任意材料應(yīng)當是藥學(xué)純的且在使用量上基本上是無毒的。此外，可以將本發(fā)明的化合物摻入緩釋制品和制劑，包括能夠?qū)⒒钚噪奶禺愋缘剡f送至腸的特定區(qū)域的那些。
還可以通過胃或食管直接內(nèi)窺管經(jīng)腸施用液體制劑。
在一個實施方案中，通過口服將本發(fā)明的化合物與食物一起施用以促進轉(zhuǎn)運至腸淋巴。
在另一個實施方案中，將本發(fā)明的化合物與以脂質(zhì)為基質(zhì)的制劑一起經(jīng)口施用，以促進與或不與共同施用的食物一起轉(zhuǎn)運至腸淋巴。
用于口服遞送的以脂質(zhì)為基質(zhì)的制劑是本領(lǐng)域公知的且可以包括，例如基本上非水的媒介物，其典型地包含一種或多種脂質(zhì)成分。脂質(zhì)載體和得到的脂質(zhì)制劑可以有用地如下所述根據(jù)其共有公同特征，按照脂質(zhì)制劑分類系統(tǒng)(LFCS)進行分類(Pouton，C.W.，Eur.J.Pharm.Sci.11(增刊2)，S93-S98，2000；Pouton，C.W.，Eur.J.Pharm.Sci.29278-287，2006)。
因此，脂質(zhì)載體和得到的脂質(zhì)制劑可以包含油/脂質(zhì)和/或表面活性劑，任選地與助溶劑。I型制劑包括需要消化的油或脂質(zhì)，例如單、二和三-甘油酯類及其組合。II型制劑是不溶于水的SEDDS，其包含用于I型制劑的脂質(zhì)和油與其它不溶于水的表面活性劑。III型制劑為SEDDS或自-微乳化的遞藥系統(tǒng)(SMEDDS)，其包含用于I型制劑的脂質(zhì)和油與其它水溶性表面活性劑和/或助溶劑(IIIa型)或更大比例的水溶性成分(IIIb型)。IV型制劑主要包含親水性表面活性劑和助溶劑(例如PEG、丙二醇和二甘醇一乙醚)并且用于難溶于水、而非親脂性的藥物。任意這類脂質(zhì)制劑(I-IV型)是本申請中關(guān)注的。
在一些實施方案中，脂質(zhì)載體包含一種或多種油或脂質(zhì)，不含其它表面活性劑、輔助表面活性劑或輔助乳化劑或助溶劑，認為它們主要油一種或多種油或脂質(zhì)組成。在另外一些實施方案中，脂質(zhì)載體包含一種或多種油或脂質(zhì)與一種或多種不溶于水的表面活性劑、任選地與一種或多種助溶劑。在另外一些實施方案中，脂質(zhì)載體包含一種或多種油或脂質(zhì)與一種或多種水溶性表面活性劑、任選地與一種或多種助溶劑。在一些實施方案中，脂質(zhì)載體包含油/脂質(zhì)、表面活性劑和助溶劑的混合物。在一些實施方案中，脂質(zhì)載體主要由一種或多種表面活性劑/輔助表面活性劑/輔助乳化劑和/或溶劑/助溶劑組成。
可以用于本發(fā)明的油或脂質(zhì)的實例包括杏仁油、巴巴蘇油、黑醋栗種子油、琉璃苣油、介花油、蓖麻油、椰子油、鱈魚肝油、玉米油、棉籽油、月見草油、魚油、葡萄籽油、芥菜籽油、橄欖油、棕櫚仁油、棕櫚油、花生油、菜籽油、紅花油、芝麻油、鯊魚肝油、大豆油、向日葵油、胡桃油、小麥胚芽油、鱷梨油、糠油、氫化蓖麻油、氫化椰子油、氫化棉籽油、氫化棕櫚油、氫化大豆油、部分氫化大豆油、氫化植物油、辛酸/癸酸甘油三酯、分級分離的甘油三酯、三癸酸甘油酯、三己酸甘油酯、三辛酸甘油酯、三辛酸/癸酸甘油酯、三辛酸/癸酸甘油酯、三辛酸/硅酸/月桂酸甘油酯、三辛酸/硅酸/亞油酸甘油酯、三辛酸/硅酸/硬脂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、單月桂酸甘油酯、山崳酸甘油酯、單亞油酸甘油酯、三亞油酸甘油酯、三油酸甘油酯、三十一酸甘油酯、甘油基三硬脂酸酯亞油酸甘油酯、飽和聚乙二醇化甘油酯、主要包含C8-C12脂肪酸鏈的合成中鏈甘油三酯、主要包含C8-C12脂肪酸鏈的中鏈甘油三酯、主要包含>C12脂肪酸鏈的長鏈甘油三酯、修飾的甘油三酯、分級分離的甘油三酯及其混合物。
可以用于本發(fā)明的單酸甘油酯和甘油二酯的實例包括具有8－40個碳原子的脂肪酸鏈的一-和二酯類，包括水解的椰子油(例如MCM)、水解的玉米油(例如MaisineTM35-1)。在一些實施方案中，單酸甘油酯和甘油二酯是具有8－18個碳鏈長度的脂肪酸鏈的甘油的單-或二-飽和脂肪酸酯類(例如單硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、單辛酸甘油酯、二辛酸甘油酯、單癸酸甘油酯和二癸酸甘油酯)。
用于脂質(zhì)制劑的適合的表面活性劑包括C8-C22脂肪酸的丙二醇一-和二-酯，例如，但不限于丙二醇單辛酸酯、丙二醇二辛酸酯、丙二醇單月桂酸酯，其以商品名例如90、PG、FCC銷售；糖脂肪酸酯類，例如，但不限于棕櫚酸蔗糖酯、月桂酸蔗糖酯、硬脂酸蔗糖酯；脫水山梨糖醇脂肪酸酯類，例如，但不限于月桂山梨坦、棕櫚山梨坦、油酸山梨坦；聚氧乙烯水山梨糖醇脂肪酸酯類，例如，但不限于聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85；聚氧乙烯一-和二-脂肪酸酯類，包括，但不限于聚氧乙烯40硬脂酸酯和聚氧乙烯40油酸酯；C8-C22脂肪酸的聚氧乙烯一-和二-酯類的混合物和C8-C22脂肪酸的甘油一-、二-和三-酯類，其銷售商品名為例如44/14、50/13、聚氧乙烯蓖麻油化合物，例如，但不限于聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙烯40氫化蓖麻油和聚氧乙烯60氫化蓖麻油，其作為商品名例如EL、RH40、RH60銷售；聚氧乙烯烷基醚，包括，但不限于聚氧乙烯20十六烷基十八烷基醚和聚氧乙烯10油醚；DL-.α.-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯，其可以作為商品名銷售；甘油一-、二-和三-酯；C8-C22脂肪酸的甘油一-、二-和三-酯；蔗糖一-、二-和三-酯；磺基琥珀酸二辛酸鈉；聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物，例如，但不限于泊洛沙姆124、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407；C8-C22脂肪醇的聚氧乙烯醚類，包括，但不限于聚氧乙烯月桂醇、聚氧乙烯鯨蠟醇、聚氧乙烯十八烷醇、聚氧乙烯油醇，其銷售的商品名為例如35、58、7898；或它們的任意兩種或多種的混合物。
輔助乳化劑或輔助表面活性劑可以用于制劑。適合的輔助乳化劑或輔助表面活性劑可以是磷酸甘油酯；磷脂，例如卵磷脂或游離脂肪酸，其在室溫下為液體，例如異硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、棕櫚酸、硬脂酸、月桂酸、癸酸、辛酸和己酸。
適合的溶劑/助溶劑包括乙醇、丙二醇、聚乙二醇、二甘醇一乙醚和甘油。
聚合物也可以用于制劑以抑制藥物沉淀。已經(jīng)證實一定范圍的加合物可以影響這些特性且是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。適合的聚合物包括羥丙基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素乙?；晁狨?、其它纖維素衍生的聚合物例如甲基纖維素；聚(甲基)丙烯酸酯類，例如Eudragit系列聚合物，包括Eudragit E100、聚乙烯吡咯烷酮或例如Warren等人Mol.Pharmaceutics 2013，10，2823-2848中所述的其他聚合物。
制劑還可以包含本領(lǐng)域技術(shù)人員通常已知以脂質(zhì)為基質(zhì)的制劑中包括的材料，例如丁羥茴醚(BHA)或丁羥甲苯(BHT)和固化劑，例如微孔二氧化硅，例如偏硅酸鋁鎂(Neusilin)。
在另一個實施方案中，所述化合物可以與酶抑制劑一起經(jīng)口施用以增加前藥在胃腸道或腸細胞中的穩(wěn)定性。在一些實施方案中，關(guān)注所述酶抑制劑抑制胰脂肪酶，其實例包括，但不限于Alli和奧利司他。在其它實施方案中，關(guān)注所述酶抑制劑抑制細胞脂肪酶，例如一?；视椭久?，其實例包括，但不限于JZL184(4-硝基苯基-4-[雙(1,3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯-5-基)(羥基)甲基]哌啶-1-甲酸酯)。
盡管如上文所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可以以單獨的活性成分施用于受試者，但是其它活性成分與所述化合物一起施用屬于本發(fā)明的范圍。在一個或多個實施方案中，關(guān)注本發(fā)明的化合物的兩種或多種的組合施用于受試者。
本發(fā)明還提供藥物組合物，其包含治療有效量的如上文所定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與至少一種藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
術(shù)語“組合物”預(yù)期包括活性成分與作為載體的包囊材料的制劑，得到膠囊，其中活性成分(與或不與另一種載體)被載體包圍。
正如本領(lǐng)域技術(shù)人員易于理解的，藥學(xué)上可接受的載體的性質(zhì)取決于被治療的病癥和哺乳動物的性質(zhì)。認為特定載體或遞送系統(tǒng)的選擇易于由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定。在制備包含活性混合物的任意制劑的過程中，應(yīng)當謹慎考量，以確保化合物的活性不在該過程中被破壞，且該化合物能夠達到其作用部位而不受破壞。在一些情形中，有必要通過本領(lǐng)域公知的方式保護化合物，例如，微囊化。
本領(lǐng)域技術(shù)人員易于采樣常規(guī)方法確定用于本發(fā)明化合物的適合的制劑。鑒定優(yōu)選的pH范圍和適合的賦形劑例如抗氧化劑是本領(lǐng)域常規(guī)的。緩沖系統(tǒng)常用于提供期望范圍的pH值，并且包括羧酸緩沖液，例如乙酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽和琥珀酸鹽。各種抗氧化劑可以利用于這類制劑，包括酚類化合物，例如BHT或維生素E、還原劑例如甲硫氨酸或亞硫酸鹽和金屬螯合劑例如EDTA。
藥學(xué)上可接受的媒介物和/或稀釋劑包括任意和所有的溶劑、分散介質(zhì)、包衣衣料、抗菌劑和抗真菌劑、等滲和吸收延遲劑等。這類介質(zhì)和試劑在藥物活性物質(zhì)中的應(yīng)用是本領(lǐng)域眾所周知的。除了任意常用介質(zhì)或試劑與活性成分不相容，其在治療組合物中的應(yīng)用被考慮。還可以將補充的活性成分摻入組合物。
還可以將所述化合物與一種或多種其它治療劑以組合方式施用。該組合能夠單獨、依次或同時施用上文所述的化合物與其它活性成分。該組合物可以以藥物組合物的形式提供。
本申請中所用的，術(shù)語“組合”是指組合物或套件產(chǎn)品，其中如上述所定義的組合伴侶可以以依賴性或獨立方式施用或通過使用與差別用量的組合伴侶的不同固定組合來施用，即同時或在不同時間點施用。然后，例如，可以將組合伴侶同時或按年代交錯施用，對于套件的不同組成部分，其可以在不同的時間點和等同或不同時間間隔施用。組合中施用的組合伴侶的總量的比例可變，例如，以符合待治療患者亞群的需求或單一患者的需求，單一患者的不同需求可以歸因于該患者的年齡、性別、體重等。
尤其有利的是配制單位劑型形式的組合物，其易于施用且劑量均勻。本申請中所用的單位劑型是指適合于作為待治療哺乳動物受試者的單元劑量的物理分散單元；每個單元包含預(yù)定量的活性物質(zhì)，經(jīng)計算其與所需的藥學(xué)上可接受的媒介物結(jié)合產(chǎn)生期望的治療作用。用于本發(fā)明新的單位劑型的規(guī)格根據(jù)如下因素指定并且直接取決于如下因素：(a)活性物質(zhì)的獨特特征和所實現(xiàn)的特定治療作用；以及(b)本領(lǐng)域中混合用于治療活受試者的疾病的活性物質(zhì)的內(nèi)在限制，所述受試者具有患病的條件，其中身體健康如本申請中詳細描公開的受損。
如上所述，可以混合主要活性成分，以便利和有效地以治療有效量與適合的藥學(xué)上可接受的媒介物一起在單位劑型中施用。例如，單位劑型可以包含用量為0.25μg－約2000mg的主要活性成分。按照比例表示，活性化合物的存在量約為0.25μg－約2000mg/mL載體。在包含補充活性成分的組合物的情況中，可以參照所述成分的常用劑量和施用方式確定劑量。
如本申請中所用的，術(shù)語“有效量”是指當根據(jù)期望的施藥方案施用時提供期望的治療活性的化合物用量。施藥可以為1次或在數(shù)分鐘或數(shù)小時間隔1次，或在這些期限的任意一個內(nèi)連續(xù)進行。適合的劑量可以在約0.1納克/千克體重－1克/千克體重/劑量的范圍。典型劑量為1微克－1克/千克體重/劑量，例如1毫克-1克/千克體重/劑量。在一個實施方案中，該劑量可以為1毫克-500毫克/千克體重/劑量。在另一個實施方案中，該劑量可以為1毫克-250毫克/千克體重/劑量。在另一個實施方案中，該劑量可以為1毫克-100毫克/千克體重/劑量，例如至多50毫克/體重/劑量。
本申請中所用的，術(shù)語“治療”涵蓋動物，優(yōu)選哺乳動物，更優(yōu)選人的病癥或疾病的任意治療，且包括其中睪酮水平增加為有益的任意疾病或障礙的治療。本申請中所用的，術(shù)語“預(yù)防”涵蓋動物，優(yōu)選哺乳動物，更優(yōu)選人的病癥或疾病的預(yù)防，且包括其中睪酮水平增加為有益的任意疾病或障礙的預(yù)防。
現(xiàn)在參照下列非限制性實施例描述本發(fā)明。下列實施例是通式(I)的代表，并且提供了用于制備本發(fā)明示例性化合物的詳細方法。
實施例1.用于制備式(I)的化合物的方法，其中Y表示未被取代的烷基且L表示X'，其中X'是O。
a)5-((1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)氧基)-5-氧代戊酸(IV)
將4-(二甲氨基)吡啶(64.4mg，0.527mmol)加入甘油二酯III(300mg，0.527mmol)和戊二酸酐I(120mg，1.05mmol)在吡啶/THF/CH2Cl2(各1.5mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌2天。用乙酸乙酯(20mL)稀釋該反應(yīng)體系，用1M HCl和鹽水(各20mL)洗滌，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。進行硅膠色譜法(10％-15％乙酸乙酯/己烷)，得到酸甘油三酯IV(140mg，39％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.26(m，1H)，4.31(dd，J＝11.9，4.3Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.9，5.9Hz，2H)，2.44(t，J＝7.4Hz，2H)，2.42(t，J＝7.4Hz，2H)，2.31(t，J＝7.6Hz，4H)，1.96(pent，J＝7.3Hz，2H)，1.67–1.54(m，4H)，1.49–1.18(m，48H)，0.88(t，J＝6.8Hz，6H)。
b)辛二酰二氯(II)
將辛二酸(84.2mg，0.483mmol)和DMF(1滴)在亞硫酰氯(351μL，4.83mmol)中的混合物回流加熱1.5小時。將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，用甲苯(5mL)稀釋，減壓濃縮，得到二酰氯II(102mg，定量)，為黃色油狀物，不經(jīng)純化使用。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.90(t，J＝7.2Hz，4H)，1.78–1.68(m，4H)，1.42–1.35(m，4H)。
c)8-((1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)氧基)-8-氧代辛酸(IV)
將甘油二酯III(50.0mg，0.0879mmol)和吡啶(71.1μL，0.879mmol)在CH2Cl2(2mL)中的溶液加入辛二酰二氯II(102mg，0.483mmol)在CH2Cl2(1.5mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌3.5小時。將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，用水(10mL)和1M HCl(3mL)稀釋，用乙酸乙酯(3×15mL)萃取水層。用1M HCl(30mL)和鹽水(2×30mL)洗滌合并的有機萃取物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(20％-50％乙酸乙酯/己烷)，得到酸甘油三酯IV(29.5mg，46％)，為淡黃色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.25(m，1H)，4.29(dd，J＝11.9，4.3Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.9，5.9Hz，2H)，2.37–2.28(m，8H)，1.68–1.56(m，8H)，1.39–1.21(m，52H)，0.87(t，J＝6.8Hz，6H)。
d)10-(1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)癸二酸1-((3R,5S,8S,9S,10S,13S,14S,17S)-17-乙酰基-10,13-二甲基-11-氧代十六氫-1H-環(huán)戊并[a]菲-3-基)酯(2)
將4-(二甲氨基)吡啶(DMAP，5.2mg，42.5μmol)、EDC·HCl(20.4mg，106μmol)和阿法沙龍(22.6mg，68.0μmol)加入酸-TG IV(32.0mg，42.5μmol)在CH2Cl2(1.5mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌22小時。用CH2Cl2(5mL)稀釋該反應(yīng)體系，加入硅膠，減壓濃縮該混合物。通過硅膠色譜法純化(15％-20％乙酸乙酯/己烷)，得到化合物2(20.5mg，45％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.25(m，1H)，5.00(m，1H)，4.29(dd，J＝11.9，4.4Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.9，5.9Hz，2H)，2.71(t，J＝9.0Hz，1H)，2.56(d，J＝11.9Hz，1H)，2.48(d，J＝12.0Hz，1H)，2.34–2.18(m，10H)，2.09(s，3H)，1.86–1.37(m，18H)，1.36–1.07(m，62H)，1.00(s，3H)，0.87(t，J＝6.8Hz，6H)，0.57(s，3H)。
e)10-(1-((叔丁氧基羰基)(異丙基)氨基)-3-(4-(2-甲氧基乙基)苯氧基)丙-2-基)癸二酸1-(1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)酯(XXV)
將4-(二甲氨基)吡啶(DMAP，5.6mg，45.4μmol)和EDC·HCl(17.4mg，90.0μmol)加入預(yù)先制備的N-Boc-美托洛爾(16.7mg，45.4μmol)和酸-TG IV(34.2mg，45.4μmol)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌19小時。然后減壓濃縮該反應(yīng)體系，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(10％-25％乙酸乙酯/己烷)，得到被保護的前藥XXV(23.3mg，47％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.12(d，J＝8.5Hz，2H)，6.83–6.78(m，2H)，5.33(m，1H)，5.25(m，1H)，4.29(dd，J＝11.9，4.4Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.9，5.9Hz，2H)，4.22–3.98(m，3H)，3.55(t，J＝7.1Hz，2H)，3.47(m，1H)，3.34(s，3H)，3.31(m，1H)，2.81(t，J＝7.1Hz，2H)，2.33–2.27(m，8H)，1.64–1.56(m，8H)，1.46(s，9H)，1.37–1.20(m，56H)，1.18(d，J＝6.8Hz，3H)，1.14(d，J＝6.7Hz，3H)，0.87(t，J＝6.9Hz，6H)。
f)10-(1-(異丙基氨基)-3-(4-(2-甲氧基乙基)苯氧基)丙-2-基)癸二酸1-(1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)酯(3)
將三氟乙酸(TFA)(7.7μL，0.104mmol)加入Boc氨基甲酸酯XXV(23.0mg，0.0209mmol)在CH2Cl2(1mL)中的溶液中，將該反應(yīng)體系在室溫攪拌6小時。此時，TLC分析顯示反應(yīng)緩慢進展，因此再加入TFA(15.4μL，0.208mmoL)，將該混合物在室溫再攪拌18小時。加入三乙胺(Et3N，50μL)，在N2氣流中濃縮該反應(yīng)體系，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(含有1％Et3N的20％-40％-60％乙酸乙酯/己烷)，得到化合物3(19.0mg，91％)，為無色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.16–7.09(m，2H)，6.87–6.81(m，2H)，5.29–5.18(m，2H)，4.29(dd，J＝11.9，4.4Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.9，5.9Hz，2H)，4.11–4.08(m，2H)，3.55(t，J＝7.1Hz，2H)，3.34(s，3H)，2.99–2.88(m，2H)，2.86–2.77(m，3H)，2.35–2.28(m，8H)，1.69–1.49(m，8H)，1.37–1.16(m，56H)，1.05(d，J＝6.2Hz，6H)，0.88(t，J＝6.8Hz，6H)。
g)10-(4-(6-羥基-3-(4-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)苯甲酰基)苯并[b]噻吩-2-基)苯基)癸二酸1-(1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)酯(4)的合成：
在雷洛昔芬(RAL)的情況中，其包含兩個酚羥基，對母體分子進行單保護是必不可少的，以防止在隨后的偶合步驟中形成混合的單?；碗p?；a(chǎn)物。在堿的存在下用1當量的TBSCl處理雷洛昔芬得到區(qū)域異構(gòu)體一甲硅烷基醚的混合物，通過色譜法可以將其部分分離。極性較低的酚異構(gòu)體XXVI與酸-TG IV在標準條件下偶合得到被保護的前藥XXVII。使用TBAF除去甲硅烷基保護基得到化合物4。應(yīng)當注意，也可以采用該方法將酚XXVI的區(qū)域異構(gòu)體轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的異構(gòu)體前藥。
g)(i)(6-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-(4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基)(4-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)苯基)甲酮(XXVI)
將4-(二甲氨基)吡啶(DMAP，108mg，0.882mmol)加入在DMF(10mL)中的鹽酸雷洛昔芬(180mg，0.353mmol)中，將該混合物在室溫攪拌1小時。將該反應(yīng)體系冷卻至0℃，加入叔丁基(氯)二甲基硅烷(TBSCl，53.2mg，0.353mmol)，將得到的混合物在室溫再攪拌2.5小時。用乙酸乙酯(60mL)稀釋該反應(yīng)體系，用水(2×50mL)、飽和NaHCO3水溶液(50mL)和鹽水(50mL)洗滌有機相，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(含有1％Et3N的0％-12.5％MeOH/CH2Cl2)，得到被保護的一甲硅烷基醚XXVI(25.0mg，12％)，為黃色油狀物，以及大量的混合區(qū)域異構(gòu)體一甲硅烷基醚和未反應(yīng)的雷洛昔芬的級分。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.68(d，J＝8.8Hz，2H)，7.47(d，J＝8.7Hz，1H)，7.30(d，J＝2.0Hz，1H)，7.22(d，J＝8.5Hz，2H)，6.87(dd，J＝8.7，2.0Hz，1H)，6.65(d，J＝7.9Hz，4H)，4.06(t，J＝5.9Hz，2H)，2.75(t，J＝5.9Hz，2H)，2.55–2.47(m，4H)，1.65–1.58(m，4H)，1.48–1.41(m，2H)，0.92(s，9H)，0.11(s，6H)。
g)(ii)10-(4-(6-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-(4-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)苯甲?；?苯并[b]噻吩-2-基)苯基)癸二酸1-(1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)酯(XXVII)
將4-(二甲氨基)吡啶(DMAP，2.4mg，19.9μmol)和EDC·HCl(9.5mg，49.8μmol)加入酸-TG IV(15.0mg，19.9μmol)和XXVI(11.7mg，19.9μmol)在CH2Cl2(0.6mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌6小時。用CH2Cl2(5mL)稀釋該反應(yīng)體系，加入硅膠，減壓濃縮該混合物。通過硅膠色譜法純化(含有1％Et3N的0％-1.5％MeOH/CH2Cl2)，得到被保護的前藥XXVII(16.0mg，61％)，為無色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.74–7.67(m，3H)，7.59(d，J＝2.1Hz，1H)，7.30–7.23(m，2H)，7.06(dd，J＝8.8，2.1Hz，1H)，6.73(d，J＝8.8Hz，2H)，6.67(d，J＝8.6Hz，2H)，5.26(m，1H)，4.29(dd，J＝11.9，4.3Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.9，5.9Hz，2H)，4.07(t，J＝6.0Hz，2H)，2.74(t，J＝5.9Hz，2H)，2.58(t，J＝7.5Hz，2H)，2.53–2.44(m，4H)，2.35–2.27(m，6H)，1.82–1.73(m，2H)，1.68–1.53(m，10H)，1.49–1.39(m，4H)，1.38–1.19(m，54H)，0.93(s，9H)，0.87(t，J＝6.8Hz，6H)，0.12(s，6H)。
g)(iii)10-(4-(6-羥基-3-(4-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)苯甲酰基)苯并[b]噻吩-2-基)苯基)癸二酸1-(1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)酯(4)
在0℃將氟化四正丁基銨(TBAF，0.1M的THF溶液，70.0μL，7.0μmol)和乙酸(1.0M的THF溶液，10.0μL，10.0μmol)加入TBS醚XXVII(7.1mg，5.4μmol)在THF(0.4mL)中的溶液中，將該混合物在0℃攪拌50分鐘。用乙酸乙酯(20mL)稀釋該反應(yīng)體系，用水和鹽水(15mL)洗滌，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(含有1％Et3N的0％-2％MeOH/CH2Cl2)，得到化合物4(4.9mg，75％)，為淡黃色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.77(d，J＝8.8Hz，1H)，7.66(d，J＝8.9Hz，2H)，7.59(d，J＝2.1Hz，1H)，7.19(d，J＝8.6Hz，2H)，7.08(dd，J＝8.8，2.2Hz，1H)，6.67(d，J＝7.3Hz，2H)，6.61(d，J＝8.6Hz，2H)，5.26(m，1H)，4.30(dd，J＝11.9，4.3Hz，2H)，4.15(dd，J＝11.9，5.9Hz，2H)，4.09(t，J＝5.7Hz，2H)，2.77(t，J＝5.8Hz，2H)，2.62–2.50(m，6H)，2.37–2.27(m，6H)，1.82–1.73(m，2H)，1.69–1.55(m，10H)，1.50–1.19(m，58H)，0.87(t，J＝6.8Hz，6H)。
實施例2.用于制備式(I)的化合物的方法，其中Y表示α-甲基取代的烷基，且L表示X'，其中X'是O。
h)(E)-10-(芐氧基)-2-甲基癸-2-烯酸甲酯(VIII)
將氯鉻酸吡啶(PCC，39.7mg，0.184mmol)和C鹽(Celite)(30mg)加入醇VI(29.0mg，0.123mmol)在CH2Cl2(1.5mL)中的溶液中，將該反應(yīng)該體系在室溫攪拌1.5小時。通過短硅膠墊過濾得到的深色混懸液，用50％乙酸乙酯/己烷洗脫，減壓濃縮洗脫液，得到粗醛，即刻再溶于甲苯(1.5mL)。加入內(nèi)鹽VII(85.5mg，0.245mmol)，將該混合物回流加熱20小時。將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(5％-8％乙酸乙酯/己烷)，得到α,β-不飽和甲酯VIII(26.2mg，70％)，為黃色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.38–7.26(m，5H)，6.76(m，1H)，4.50(s，2H)，3.73(s，3H)，3.46(t，J＝6.6Hz，2H)，2.10–2.02(m，2H)，1.83(d，J＝1.3Hz，3H)，1.65–1.58(m，2H)，1.47–1.28(m，8H)。
i)(E)-10-(芐氧基)-2-甲基癸-2-烯酸(IX)
將氫氧化鈉溶液(2.0M，256μL，0.512mmol)加入在甲醇(0.9mL)和水(0.65mL)中的酯VIII(26.0mg.0.0854mmol)中，將該混合物在室溫攪拌30分鐘，然后在0℃攪拌20小時。通過添加1M HCl將該反應(yīng)體系酸化至pH 1，用水(5mL)稀釋，用乙酸乙酯(4×15mL)萃取水相。用鹽水(40mL)洗滌合并的有機萃取物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗酸IX(24.8mg，定量)，為無色油狀物，不經(jīng)純化使用。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.39–7.26(m，5H)，6.91(td，J＝7.5，1.3Hz，1H)，4.51(s，2H)，3.47(t，J＝6.6Hz，2H)，2.23–2.15(m，2H)，1.83(d，J＝0.7Hz，3H)，1.67–1.56(m，2H)，1.49–1.25(m，8H)。
j)(E)-二棕櫚酸2-((10-(芐氧基)-2-甲基癸-2-烯?；?氧基)丙-1,3-二基酯(X)
將4-(二甲氨基)吡啶(DMAP，10.4mg，0.0854mmol)、EDC·HCl(40.9mg，0.214mmol)和甘油二酯III(77.7mg，0.137mmol)加入酸IX(24.8mg，0.0854mmol)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌17小時。用CH2Cl2(5mL)稀釋該反應(yīng)體系，加入硅膠，減壓濃縮該混合物。通過硅膠色譜法純化(3％-7.5％乙酸乙酯/己烷)，得到甘油三酯X(44.6mg，62％，2步)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.37–7.24(m，5H)，6.76(m，1H)，5.30(m，1H)，4.50(s，2H)，4.31(dd，J＝11.8，4.5Hz，2H)，4.22(dd，J＝11.8，5.8Hz，2H)，3.46(t，J＝6.6Hz，2H)，2.31(t，J＝7.5Hz，4H)，2.16(dt，J＝7.4，7.4Hz，2H)，1.81(d，J＝1.1Hz，3H)，1.66–1.55(m，6H)，1.47–1.19(m，56H)，0.88(t，J＝6.9Hz，6H)。
k)二棕櫚酸2-((10-羥基-2-甲基癸酰基)氧基)丙-1,3-二基酯(XI)
將在三-頸燒瓶中的芐基醚X(40.0mg，47.6μmol)在乙酸乙酯(5mL)中的溶液抽真空2次，用N2氣吹掃在，然后加入披鈀碳(10％w/w，12.7mg，11.9μmol)，將得到的混懸液再抽真空，用N2吹掃2次。給燒瓶配備H2氣囊，抽真空，用H2吹掃3次，將該反應(yīng)混合物在室溫在1atm的H2氣氛中攪拌3小時。通過C鹽墊過濾該反應(yīng)體系，用乙酸乙酯洗滌，減壓濃縮，得到飽和醇XI(32.1mg)，為無色油狀物，不經(jīng)純化使用。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.27(m，1H)，4.29(dd，J＝11.7，3.9Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.9，6.1Hz，2H)，3.63(t，J＝6.6Hz，2H)，2.44(m，1H)，2.30(t，J＝7.6Hz，4H)，1.67–1.50(m，8H)，1.42–1.20(m，58H)，1.14(d，J＝7.0Hz，3H)，0.88(t，J＝6.9Hz，6H)。
l)二棕櫚酸2-((2-甲基-10-氧代癸?；?氧基)丙-1,3-二基酯(XII)
在0℃將氯鉻酸吡啶(PCC，15.2mg，70.4μmol)加入醇XI(26.5mg，35.2μmol)和C鹽(20mg)在CH2Cl2(1mL)中的混懸液中，將該混合物在室溫攪拌1小時。通過短硅膠墊過濾該反應(yīng)體系，用50％乙酸乙酯/己烷洗脫，減壓濃縮濾液，得到粗醛XII(26.4mg)，為黃色油狀物，未經(jīng)進一步純化使用它。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.76(t，J＝1.8Hz，1H)，5.27(m，1H)，4.29(ddd，J＝11.9，4.3，3.1Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.9，6.1Hz，2H)，2.42(m，1H)，2.41(td，J＝7.3，1.8Hz，2H)，2.30(t，J＝7.5Hz，4H)，1.67–1.54(m，8H)，1.44–1.18(m，56H)，1.14(d，J＝7.0Hz，3H)，0.88(t，J＝6.9Hz，6H)。
m)10-((1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)氧基)-9-甲基-10-氧代癸酸(IV)
將亞氯酸鈉(28.6mg，0.317mmol)和磷酸二氫鈉(NaH2PO4，29.5mg，0.246mmol)在水(0.5mL)中的溶液滴加到在t-BuOH(1mL)和2,3-二甲基-2-丁烯(0.2mL)中的醛XII(26.4mg，0.0352mmol)中，將該反應(yīng)體系在室溫攪拌1.5小時。用水(5mL)稀釋該反應(yīng)體系，用己烷(3×5mL)萃取水層。干燥合并的有機萃取物(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗酸IV(27.0mg)，為無色油狀物，未經(jīng)進一步純化使用它。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.27(m，1H)，4.29(ddd，J＝11.8，4.3，3.2Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.9，6.1Hz，2H)，2.43(m，1H)，2.36-2.28(m，6H)，1.65–1.55(m，8H)，1.38–1.19(m，56H)，1.14(d，J＝7.0Hz，3H)，0.88(t，J＝7.0Hz，6H)。
實施例3.用于制備式(I)的化合物的方法，其中Y表示β-甲基取代的烷基，且L表示X'，其中X'是O。
n)(7-(芐氧基)庚-1-炔-1-基)三甲基硅烷(XIV)
在–78℃將正丁基鋰(n-BuLi，1.6M的己烷溶液，765μL，1.23mmol)緩慢地加入TMS-乙炔(198μL，1.40mmol)在THF(1.5mL)中的溶液中，將該混合物在–78℃攪拌5分鐘，然后溫?zé)嶂潦覝?，再攪?5分鐘。將該反應(yīng)體系再冷卻至–50℃，滴加溴化物XIII(90.0mg，0.350mmol)在THF(1mL)中的溶液，將該混合物在–50℃攪拌15分鐘，然后在室溫攪拌17小時。用鹽水(15mL)稀釋該反應(yīng)體系，用乙酸乙酯(3×15mL)萃取水相。用鹽水(30mL)洗滌合并的有機萃取物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(4％-5％乙酸乙酯/己烷)，得到TMS炔XIV(45.9mg，48％)，為無色油狀物，其還包含去甲硅烷基化的炔XV(9.7mg，通過1H NMR級分為14％)和少量PPh3。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.37–7.26(m，5H)，4.50(s，2H)，3.48(t，J＝6.5Hz，2H)，2.23(t，J＝7.0Hz，2H)，1.68–1.60(m，2H)，1.58–1.42(m，4H)，0.14(s，7H)。
o)((庚-6-炔-1-基氧基)甲基)苯(XV)
在0℃將氟化四丁基銨(TBAF，1.0M的THF溶液，201μL，0.201mmol)滴加到甲硅烷基炔XIV和炔XV(合并55.6mg，0.215mmol)在THF(1mL)中的7：2混合物中，將該混合物在室溫攪拌1小時。用水(5mL)和飽和水溶液NH4Cl(3mL)稀釋該反應(yīng)體系，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取水相。用鹽水(20mL)洗滌合并的有機萃取物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(4％乙酸乙酯/己烷)，得到炔XV(37.5mg，53％，2步)，為無色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.39–7.27(m，5H)，4.51(s，2H)，3.49(t，J＝6.5Hz，2H)，2.21(td，J＝6.9，2.6Hz，2H)，1.95(t，J＝2.7Hz，1H)，1.70–1.61(m，2H)，1.60–1.48(m，4H)。
p)(Z)-10-(芐氧基)-3-甲基癸-2-烯-4-炔酸乙酯(XVII)
使用N2氣給PdCl2(PPh3)2(16.8mg，0.0240mmol)在DMF(1.5mL)中的混懸液脫氣5分鐘，然后加入在DMF(2mL)中的CuI(9.1mg，0.0480mmol)、Et3N(66.8μL，0.480mmol)和脫氣的炔XV(48.5mg，0.240mmol)和三氟甲磺酸烯醇酯XVI(94.3mg，0.360mmol)。使用N2氣流給該混合物再脫氣5分鐘，然后在0℃加熱1小時。將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30mL)稀釋，用1M HCl、飽和水溶液NaHCO3、水和鹽水(各20mL)洗滌，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。進行硅膠色譜法(4％-5％乙酸乙酯/己烷)，得到烯炔XVII(46.6mg，62％)，為淡黃色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.37–7.24(m，5H)，5.92(m，1H)，4.50(s，2H)，4.17(q，J＝7.1Hz，2H)，3.48(t，J＝6.5Hz，2H)，2.45(t，J＝7.0Hz，2H)，2.01(d，J＝1.4Hz，3H)，1.69–1.59(m，4H)，1.56–1.49(m，2H)，1.27(t，J＝7.1Hz，3H)。
q)10-羥基-3-甲基癸酸乙酯(XVIII)
給在雙-頸燒瓶中的芐基醚XVII(31.4mg，0.100mmol)在乙酸乙酯(8mL)中的溶液抽真空2次，用N2氣吹掃，然后加入披鈀碳(10％w/w，26.6mg，0.0250mmol)，將得到的混懸液再抽真空，用N2吹掃3次。給燒瓶配備H2氣囊，抽真空，用H2吹掃3次，將該反應(yīng)混合物在室溫在1atm H2氣氛中攪拌1小時。通過C鹽墊過濾該反應(yīng)體系，用乙酸乙酯洗滌，減壓濃縮，得到飽和醇XVIII(23.0mg，定量)，為無色油狀物，未經(jīng)進一步純化使用它。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.12(q，J＝7.1Hz，2H)，3.63(t，J＝6.6Hz，2H)，2.28(dd，J＝14.6，6.1Hz，1H)，2.09(dd，J＝14.6，8.1Hz，1H)，1.94(m，1H)，1.60–1.50(m，2H)，1.25(t，J＝6.6Hz，3H)，1.40–1.13(m，10H)，0.92(d，J＝6.6Hz，3H)。
r)10-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-3-甲基癸酸乙酯(XIX)
將咪唑(9.6mg，0.141mmol)和叔丁基(氯)二苯基硅烷(TBDPSCl，50.8μL，0.195mmol)加入醇XVIII(18.0mg，0.0781mmol)在DMF(3mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌16小時。用(20mL)乙酸乙酯稀釋該反應(yīng)體系，用鹽水(2×15mL)洗滌，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(含有0.5％Et3N的4％乙酸乙酯/己烷)，得到TBDPS醚XIX(33.7mg，92％)，為無色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.70–7.64(m，4H)，7.45–7.33(m，6H)，4.13(q，J＝7.1Hz，2H)，3.65(t，J＝6.5Hz，2H)，2.28(dd，J＝14.6，6.0Hz，1H)，2.09(dd，J＝14.6，8.2Hz，1H)，1.94(m，1H)，1.60–1.50(m，2H)，1.38–1.21(m，3H)，1.05(s，J＝2.9Hz，2H)，1.05(s，9H)，0.93(d，J＝6.6Hz，3H)。
s)10-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-3-甲基癸酸(XX)
將氫氧化鉀溶液(2.0M，427μL，0.853mmol)加入在乙醇(2mL)中的酯XIX(40.0mg.0.0853mmol)中，將該混合物在80℃加熱2小時。通過添加1M HCl將該反應(yīng)體系酸化至pH 1，減壓除去有機溶劑。用水(5mL)稀釋殘余物，用乙酸乙酯(3×15mL)萃取水相，用鹽水(30mL)洗滌合并的有機萃取物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗酸XX(37.6mg，定量)，為無色油狀物，不經(jīng)進一步純化使用。當在高濃度下運行時，觀察到1H和13C NMR光譜中的信號倍增(4：1之比)，這啟示可能溶液中存在單體和二聚化物質(zhì)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.74–7.63(m，4H)，7.45–7.34(m，6H)，3.65(t，J＝6.5Hz，2H)，2.35(dd，J＝15.0，5.9Hz，1H)，2.14(dd，J＝15.0，8.2Hz，1H)，1.95(m，1H)，1.61–1.50(m，2H)，1.38–1.18(m，10H)，1.04(s，9H)，0.96(d，J＝6.6Hz，3H)。
t)二棕櫚酸2-((10-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-3-甲基癸酰基)氧基)丙-1,3-二基酯(XXI)
將4-(二甲氨基)吡啶(DMAP，10.1mg，0.0831mmol)、EDC·HCl(39.8mg，0.208mmol)和甘油二酯III(70.9mg，0.125mmol)加熱到酸XX(36.6mg，0.0831mmol)在CH2Cl2(2.5mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌21小時。用CH2Cl2(5mL)稀釋該反應(yīng)體系，加入硅膠，減壓濃縮該混合物。通過硅膠色譜法純化(4％-5％乙酸乙酯/己烷)，得到甘油三酯XXI(39.9mg，48％，2步)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.69–7.64(m，4H)，7.44–7.34(m，6H)，5.28(m，1H)，4.29(ddd，J＝11.8，4.2，0.6Hz，2H)，4.14(dd，J＝12.0，5.9Hz，2H)，3.65(t，J＝6.5Hz，2H)，2.37–2.27(m，5H)，2.11(dd，J＝14.7，8.4Hz，1H)，1.92(m，1H)，1.67–1.50(m，8H)，1.39–1.14(m，56H)，1.04(s，9H)，0.93(d，J＝6.6Hz，3H)，0.88(t，J＝6.9Hz，6H)。
u)二棕櫚酸2-((10-羥基-3-甲基癸?；?氧基)丙-1,3-二基酯(XI)
在0℃將氟化四丁基銨(TBAF，1.0M的THF溶液，98.3μL，98.3μmol)加入TBDPS醚XXI(39.0mg，39.3μmol)在THF(2.5mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌3小時。用水(10mL)稀釋該反應(yīng)體系，用乙酸乙酯(3×15mL)萃取，用鹽水(30mL)洗滌有機萃取物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(10％-20％乙酸乙酯/己烷)，得到醇XI(21.8mg，74％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.28(m，1H)，4.29(dd，J＝11.9，4.3Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.9，5.9Hz，2H)，3.64(t，J＝6.6Hz，2H)，2.36–2.27(m，5H)，2.12(dd，J＝14.7，8.2Hz，1H)，1.93(m，1H)，1.65–1.52(m，6H)，1.39–1.16(m，58H)，0.93(d，J＝6.6Hz，3H)，0.88(t，J＝6.9Hz，6H)。
v)二棕櫚酸2-((3-甲基-10-氧代癸?；?氧基)丙-1,3-二基酯(XII)
在0℃將氯鉻酸吡啶(PCC，12.0mg，55.8μmol)加入醇XI(21.0mg，27.9μmol)和C鹽(15mg)在CH2Cl2(1.5mL)中的混懸液中，將該混合物在室溫攪拌1.75小時。通過短硅膠墊過濾該反應(yīng)體系，用洗脫乙酸乙酯，減壓濃縮濾液，得到粗醛XII(20.9mg，定量)，為黃色油狀物，未經(jīng)進一步純化使用它。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.76(s，1H)，5.28(m，1H)，4.29(dd，J＝11.6，3.5Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.6，5.7Hz，2H)，2.42(t，J＝7.1Hz，2H)，2.36–2.25(m，5H)，2.12(dd，J＝14.5，8.3Hz，1H)，1.93(m，1H)，1.72–1.53(m，6H)，1.42–1.05(m，56H)，0.93(d，J＝6.5Hz，3H)，0.88(t，J＝6.6Hz，6H)。
w)10-((1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)氧基)-8-甲基-10-氧代癸酸(IV)
將亞氯酸鈉(22.7mg，0.251mmol)和磷酸二氫鈉(NaH2PO4，23.4mg，0.195mmol)在水(1mL)中的溶液滴加到在t-BuOH(1.5mL)和2,3-二甲基-2-丁烯(0.3mL)中的醛XII(20.9mg，0.0279mmol)中，將該反應(yīng)體系在室溫攪拌2.25小時。用水(10mL)稀釋該反應(yīng)體系，用乙酸乙酯(3×15mL)萃取水層。用鹽水(30mL)洗滌合并的有機萃取物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(含有0.5％AcOH的10％-20％乙酸乙酯/己烷)，得到酸IV(16.1mg，75％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.27(m，1H)，4.29(dd，J＝11.9，4.3Hz，2H)，4.14(dd，J＝12.0，6.0Hz，2H)，2.37–2.27(m，7H)，2.12(dd，J＝14.7，8.2Hz，1H)，1.93(m，1H)，1.67–1.55(m，6H)，1.40–1.14(m，56H)，0.93(d，J＝6.6Hz，3H)，0.88(t，J＝6.9Hz，6H)。
x)10-((8R,9S,10R,13S,14S,17S)-10,13-二甲基-3-氧代-2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環(huán)戊并[a]菲-17-基)3-甲基癸二酸1-(1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)酯(19)
將4-(二甲氨基)吡啶(DMAP，2.5mg，20.6μmol)、EDC·HCl(9.9mg，51.4μmol)和睪酮(10.7mg，37.1μmol)加入酸-TG IV(13.6mg，17.7μmol)在CH2Cl2(1mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌17小時。用CH2Cl2(5mL)稀釋該反應(yīng)體系，加入硅膠，減壓濃縮該混合物。通過硅膠色譜法純化(15％乙酸乙酯/己烷)，得到化合物19(10.1mg，55％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.73(s，1H)，5.27(m，1H)，4.61(dd，J＝9.0，7.9Hz，1H)，4.29(dd，J＝11.9，3.8Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.9，6.0Hz，2H)，2.48–2.24(m，11H)，2.23–1.99(m，4H)，1.93(m，1H)，1.85(m，1H)，1.77(m，1H)，1.72–1.22(m，68H)，1.19(s，3H)，1.16–0.96(m，4H)，0.93(d，J＝6.6Hz，3H)，0.88(t，J＝6.9Hz，6H)，0.83(s，3H)。
下表4中提供其它示例性的式(I)的化合物。
表4.下式的有代表性的化合物的1H NMR數(shù)據(jù)：
實施例4.用于制備式(I)的化合物的方法，其中Z表示C(O)R3，R3表示乙縮醛自我毀滅的基團，且L表示X'，其中X'是O或N(R4)。
方案5：具有乙縮醛自我毀滅的連接基的化合物的合成
為了合成包含位于藥物活性劑與烷基間隔給之間的乙縮醛自我毀滅連接基的化合物，以有利于母體分子的系統(tǒng)性釋放(Wittman，M.D.等人Bioorg.Med.Chem.Lett.2001，11，811-814)，帶有醇的藥物活性劑必須被官能化且活化，然后如方案5中所概括的與酸-甘油三酯IV綴合。在乙酐和乙酸的混合物中用DMSO處理醇導(dǎo)致形成(甲硫基)甲基(MTM)醚XXVIII。使用磺酰氯活化MTM醚形成推定的亞砜種類，其可以與酸-甘油三酯IV的羧酸酯反應(yīng)，得到帶有乙縮醛的化合物XXIX。
y)(8R,9S,10R,13S,14S,17S)-10,13-二甲基-17-((甲硫基)甲氧基)-1,2,6,7,8,9,10,11-12,13,14,15,16,17-十四氫-3H-環(huán)戊并[a]菲-3-酮(XXVIII)
將乙酸(44μL，0.769mmol)和乙酐(140μL，1.48mmol)加入在DMSO(216μL，3.04mmol)中的睪酮(36.1mg，0.125mmol)中，將該混合物在室溫攪拌2天和18小時。此時對該反應(yīng)混合物的LCMS分析顯示無未反應(yīng)的睪酮且55％得到期望的MTM醚的轉(zhuǎn)化率，其中大量其它包含睪酮的種類構(gòu)成物料平衡。在適度不同條件下以相同等級進行總計5次反應(yīng)(參見下表)，然后合并用于分離期望的產(chǎn)物。用水(15mL)稀釋合并的反應(yīng)混合物，用10％K2CO3溶液中和。用乙酸乙酯(3×20mL)萃取水相，用飽和水溶液NaHCO3(40mL)和鹽水(40mL)洗滌合并的有機萃取物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(含有1％Et3N的10％-15％乙酸乙酯/己烷)，得到睪酮MTM醚XXVIII(113mg，52％)，為淡黃色固體。
溶劑混合物：A＝54:35:11v/v DMSO:Ac2O:AcOH(總計400μL)
B＝1.2:1:0.8v/v DMSO:Ac2O:AcOH(總計375μL)
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.73(s，1H)，4.67(d，J＝11.2Hz，1H)，4.58(d，J＝11.2Hz，1H)，3.68(t，J＝8.4Hz，1H)，2.48–2.24(m，4H)，2.13(s，3H)，2.08–1.97(m，2H)，1.93–1.80(m，2H)，1.75–1.22(m，8H)，1.19(s，3H)，1.07–0.90(m，3H)，0.82(s，3H)。
z)(((8R,9S,10R,13S,14S,17S)-10,13-二甲基-3-氧代-2,3,6,7-8,9,10,11,12,13,14-15,16,17-十四氫-1H-環(huán)戊并[a]菲-17-基)氧基)甲基己二酸1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基酯(21)
在0℃將磺酰氯(0.81M的CH2Cl2溶液，100μL，80.9μmol)加入MTM醚XXVIII(22.3mg，63.9μmol)在CH2Cl2(0.8mL)中的溶液中，將該反應(yīng)體系在0℃攪拌30分鐘，然后在室溫再攪拌1小時。在N2氣流中濃縮該反應(yīng)體系，減壓干燥。然后將粗殘余物再溶于CH2Cl2(0.8mL)，加入預(yù)先攪拌20分鐘的酸-TG IV(29.7mg，42.6μmol)和DBU(7.6μL，51.1μmol)在甲苯(0.8mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌1.5小時。用CH2Cl2(20mL)稀釋該反應(yīng)體系，用飽和NaHCO3水溶液(15mL)和鹽水(15mL)洗滌有機相，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(10％-12.5％乙酸乙酯/己烷)，得到化合物21(18.8mg，44％)，為淡黃色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.72(s，1H)，5.30–5.21(m，3H)，4.29(dd，J＝11.9，4.4Hz，2H)，4.13(dd，J＝11.6，5.5Hz，2H)，3.53(dd，J＝8.3，8.3Hz，1H)，2.48–2.22(m，12H)，2.08–1.98(m，2H)，1.92–1.80(m，2H)，1.75–1.50(m，13H)，1.49–1.20(m，49H)，1.18(s，3H)，1.17–0.83(m，5H)，0.87(t，J＝6.9Hz，6H)，0.79(s，3H)。
方案6.具有經(jīng)修飾的乙縮醛自我毀滅的連接基的胺前藥的合成。
在此情況中，其中藥物活性劑包含伯或仲胺，可以使用修飾形式的乙縮醛自我毀滅的基團，其中還包括氨基甲酸酯連接物(參見方案6)。胺與氯甲酸氯甲酯反應(yīng)得到氨基甲酸氯甲酯XXX。然后通過在回流的甲苯中用衍生自酸-TG IV的羧酸酯處理置換鹵化物離去基，得到修飾的ASI前藥XXXI。
aa)((1S,4S)-4-(3,4-二氯苯基)-1,2,3,4-四氫萘-1-基)(甲基)氨基甲酸氯甲酯(XXX)
在0℃將氯甲酸氯甲酯(8.3μL，93.3μmol)和吡啶(14.1μL，175μmol)加入鹽酸舍曲林(20.0mg，58.3μmol)在CH2Cl2(4.5mL)中的溶液中，將該混合物在0℃攪拌30分鐘，然后在室溫攪拌4小時。用CH2Cl2(20mL)稀釋該反應(yīng)體系，用飽和NaHCO3水溶液(2×20mL)和鹽水(各20mL)洗滌有機相，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(10％-15％乙酸乙酯/己烷)，得到氨基甲酸氯甲酯XXX(20.5mg，88％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.34(d，J＝8.3Hz，1H)，7.29(m，1H)，7.23–7.19(m，2H)，7.08(s，br，1H)，6.97(m，1H)，6.81(m，1H)，5.93–5.83(m，2H)，5.51(dd，J＝10.5，6.4Hz，0.6H)，5.33(m，0.4H)，4.20(m，1H)，2.77(s，1.2H)，2.72(s，1.8H)，2.29(m，1H)，2.02(m，1H)，1.79(m，2H)。注意：級分整合反映出存在～3：2的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，這歸因于受限的圍繞N-甲基氨基甲酸酯官能團旋轉(zhuǎn)。
ab)3-甲基戊二酸1-(1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)5-(((((1S,4S)-4-(3,4-二氯苯基)-1,2,3,4-四氫萘-1-基)(甲基)氨基甲?；?氧基)甲基)酯(7)
將1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一-7-烯(DBU)(8.6μL，57.2μmol)和碘化四正丁基銨(TBAI，5.8mg，)加入酸-TG IV(20.5mg，29.4μmol)和氯甲基醚XXX(11.8mg，29.6μmol)在甲苯(1.5mL)中的溶液中，將該混合物回流加熱3小時。將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，用乙酸乙酯(15mL)稀釋，用水(3×15mL)和鹽水(2×15mL)洗滌有機相，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。進行硅膠色譜法(10％-20％乙酸乙酯/己烷)，得到化合物7(21.1mg，68％)，為無色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.33(d，J＝8.3Hz，1H)，7.31–7.27(m，1H)，7.21–7.16(m，2H)，7.09(d，J＝2.0Hz，1H)，6.96(d，J＝7.2Hz，1H)，6.80(td，J＝8.0，2.0Hz，1H)，5.89–5.82(m，2H)，5.49(dd，J＝10.3，6.5Hz，0.6H)，5.37–5.30(m，0.4H)，5.27(m，1H)，4.33–4.25(m，2H)，4.19(m，1H)，4.15–4.10(m，2H)，2.74(s，1.2H)，2.69(s，1.8H)，2.54–2.39(m，3H)，2.36–2.23(m，3H)，2.30(t，J＝7.5Hz，4H)，2.01(m，1H)，1.84–1.70(m，2H)，1.66–1.57(m，4H)，1.33–1.20(m，48H)，1.05(d，J＝6.2Hz，2H)，1.02(d，J＝6.0Hz，1H)，0.88(t，J＝6.9Hz，6H)。注意：級分整合反映出存在～3：2的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，這歸因于受限的圍繞N-甲基氨基甲酸酯官能團旋轉(zhuǎn)。
實施例5.用于制備式(I)的化合物的方法，其中Z表示C(O)R3，且R3表示三甲基鎖自我毀滅的基團，且L表示X'，其中X'是O、NR4或S(O)2NH。
方案7.帶有三甲基鎖自我毀滅的連接基的化合物的合成。
為了合成包含‘三甲基鎖’(TML)自我毀滅的連接基的前藥(Levine，M.N.；Raines，R.T.Chem.Sci.2012，3，2412-2420)，該連接基還位于藥物活性劑與烷基間隔基之間，以有利于母體分子的系統(tǒng)釋放，必須用TML部分使酸-甘油三酯IV官能化，然后如方案7中所概括的與藥物活性劑綴合。酸-TG IV與TML酚XXXII在標準條件下偶合得到甘油三酯XXXIII，可以按照與方案4中所述類似的方式將其轉(zhuǎn)化成期望的酸XXXVI?？梢栽谒嵝詶l件下(10-樟腦磺酸)使TBS醚XXXIII脫保護，用2-步法使得到的醇XXXIV氧化，得到酸XXXVI。然后可以在標準條件下與包含醇、胺或磺酰胺的藥物活性劑偶合，得到目標化合物XXXVII。
ac)(2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-甲基丁-2-基)-3,5-二甲基苯基)己二酸1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基酯(XXXIII)
將4-(二甲氨基)吡啶(DMAP，4.0mg，33.1μmol)和EDC·HCl(12.6mg，66.2μmol)加入酸-TG IV(30.0mg，43.0μmol)和酚XXXII(10.7mg，33.1μmol)在CH2Cl2(1mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌16小時。用CH2Cl2(5mL)稀釋該反應(yīng)體系，加入硅膠，減壓濃縮該混合物。通過硅膠色譜法純化(4％-6％乙酸乙酯/己烷)，得到TML甘油三酯XXXIII(19.8mg，59％)，為無色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.80(d，J＝2.0Hz，1H)，6.52(d，J＝1.9Hz，1H)，5.27(m，1H)，4.31(dd，J＝11.9，4.3Hz，2H)，4.15(dd，J＝11.9，5.9Hz，2H)，3.47(t，J＝7.5Hz，1H)，2.55(t，J＝7.1Hz，2H)，2.51(s，3H)，2.39(t，J＝7.0Hz，2H)，2.31(t，J＝7.6Hz，4H)，2.22(s，3H)，2.02(t，J＝7.5Hz，1H)，1.82–1.72(m，4H)，1.65–1.56(m，4H)，1.45(s，6H)，1.36–1.20(m，48H)，0.88(t，J＝6.9Hz，6H)，0.84(s，9H)，-0.03(s，6H)。
ad)(2-(4-羥基-2-甲基丁-2-基)-3,5-二甲基苯基)己二酸1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基酯(XXXIV)
將10-樟腦磺酸的溶液(0.122M的MeOH溶液，10μL，1.2μmol)加入在CH2Cl2(0.4mL)和MeOH(0.4mL)中的TBS醚XXXIII(6.1mg，6.1μmol)中，將該混合物在室溫攪拌1小時。用水(5mL)稀釋該反應(yīng)體系，用(3×10mL)乙酸乙酯萃取水層。用飽和水溶液NaHCO3和鹽水(各20mL)洗滌合并的有機萃取物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗醇XXXIV(6.1mg，定量)，為無色油狀物，未經(jīng)進一步純化使用它。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.82(d，J＝1.4Hz，1H)，6.53(d，J＝1.2Hz，1H)，5.27(m，2H)，4.31(dd，J＝11.9，4.3Hz，2H)，4.15(dd，J＝11.9，5.8Hz，2H)，3.53(t，J＝7.2Hz，2H)，2.58(t，J＝7.0Hz，2H)，2.52(s，3H)，2.40(t，J＝6.9Hz，2H)，2.31(t，J＝7.6Hz，4H)，2.23(s，3H)，2.04(t，J＝7.2Hz，2H)，1.82–1.72(m，4H)，1.65–1.53(m，4H)，1.48(s，6H)，1.36–1.13(m，48H)，0.88(t，J＝6.7Hz，6H)。
ae)(3,5-二甲基-2-(2-甲基-4-氧代丁-2-基)苯基)己二酸1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基酯(XXXV)
在0℃將氯鉻酸吡啶(PCC，2.6mg，12.2μmol)加入醇XXXIV(5.4mg，6.1μmol)和C鹽(5mg)在CH2Cl2(0.5mL)中的混懸液中，將該混合物在室溫攪拌1小時。通過短硅膠墊過濾該反應(yīng)體系，用50％乙酸乙酯/己烷洗脫，減壓濃縮濾液。得到粗醛XXXV(5.4mg，定量)，為黃色油狀物，未經(jīng)進一步純化使用它。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.53(t，J＝2.6Hz，1H)，6.84(d，J＝1.4Hz，1H)，6.57(d，J＝1.8Hz，1H)，5.27(m，1H)，4.31(dd，J＝11.9，4.3Hz，2H)，4.15(dd，J＝11.9，5.9Hz，2H)，2.80(d，J＝2.6Hz，2H)，2.57(t，J＝7.1Hz，2H)，2.53(s，3H)，2.40(t，J＝7.0Hz，2H)，2.31(t，J＝7.6Hz，5H)，2.24(s，3H)，1.83–1.72(m，4H)，1.65–1.56(m，4H)，1.55(s，6H)，1.35–1.16(m，48H)，0.88(t，J＝6.7Hz，6H)。
af)3-(2-((6-((1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)氧基)-6-氧代己?；?氧基)-4,6-二甲基苯基)-3-甲基丁酸(XXXVI)
將高錳酸鉀溶液(0.0775M的1：1丙酮/水溶液，200μL，15.5μmol)加入在丙酮(0.5mL)和水(0.1mL)中的醛XXXV(12.5mg，0.0340μmol)中，將該混合物在室溫攪拌18小時。用水(10mL)稀釋該反應(yīng)體系，使用1M HCl酸化至pH 2，用乙酸乙酯(3×15mL)萃取水層。用鹽水(30mL)洗滌合并的有機萃取物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(10％-20％乙酸乙酯/己烷)，得到酸XXXVI(9.5mg，75％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.82(d，J＝1.3Hz，1H)，6.56(d，J＝1.7Hz，1H)，5.26(m，1H)，4.32(dd，J＝11.9，4.4Hz，2H)，4.15(dd，J＝11.9，5.8Hz，2H)，2.82(s，2H)，2.60(t，J＝7.0Hz，2H)，2.55(s，3H)，2.40(t，J＝6.9Hz，2H)，2.31(t，J＝7.6Hz，4H)，2.22(s，3H)，1.84–1.72(m，4H)，1.66–1.49(m，4H)，1.58(s，6H)，1.36–1.19(m，48H)，0.88(t，J＝6.8Hz，6H)。
ag)(2-(4-(((8R,9S,10R,13S,14S,17S)-10,13-二甲基-3-氧代-2,3,6,7,8,9,10,11,12,13-14,15,16,17-十四氫-1H-環(huán)戊并[a]菲-17-基)氧基)-2-甲基-4-氧代丁-2-基)-3,5-二甲基苯基)己二酸1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基酯(22)
將4-(二甲氨基)吡啶(DMAP，1.8mg，14.4μmol)、EDC·HCl(6.9mg，36.1μmol)和睪酮(7.5mg，26.0μmol)加入酸XXXVI(13.0mg，14.4μmol)在CH2Cl2(1mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌26小時。用CH2Cl2(5mL)稀釋該反應(yīng)體系，加入硅膠，減壓濃縮該混合物。通過硅膠色譜法純化(15％-20％乙酸乙酯/己烷)，得到化合物22(8.6mg，51％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.80(d，J＝1.8Hz，1H)，6.55(d，J＝1.7Hz，1H)，5.72(s，1H)，5.27(m，1H)，4.45(dd，J＝9.1，7.3Hz，1H)，4.31(dd，J＝11.9，4.4Hz，2H)，4.15(dd，J＝11.9，5.8Hz，2H)，2.80(ABq，2H)，2.58(t，J＝7.0Hz，2H)，2.54(s，3H)，2.48–2.23(m，10H)，2.21(s，3H)，2.11–1.97(m，2H)，1.86–1.47(m，16H)，1.55(s，6H)，1.43–1.19(m，49H)，1.17(s，3H)，1.12–0.82(m，4H)，0.88(t，J＝6.9Hz，6H)，0.65(s，3H)。
ah)(2-(4-(((1S,4S)-4-(3,4-二氯苯基)-1,2,3,4-四氫-萘-1-基)(甲基)氨基)-2-甲基-4-氧代丁-2-基)-3,5-二甲基苯基)己二酸1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基酯(1)
將4-(二甲氨基)吡啶(DMAP，0.9mg，7.8μmol)、EDC·HCl(4.4mg，23.3μmol)，Et3N(5.0μL，66.6μmol)和鹽酸舍曲林(5.3mg，15.5μmol)加入酸XXXVI(7.0mg，7.8μmol)在CH2Cl2(0.5mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌16小時。用CH2Cl2(3mL)稀釋該反應(yīng)體系，加入硅膠，減壓濃縮該混合物。通過硅膠色譜法純化(10％-20％乙酸乙酯/己烷)，得到化合物1(5.6mg，61％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.32(d，J＝8.3Hz，0.7H)，7.31(d，J＝8.3Hz，0.3H)，7.25–7.11(m，2H)，7.09–7.02(m，1.3H)，6.97–6.90(m，1H)，6.87–6.78(m，2.4H)，6.72(dd，J＝8.3，2.0Hz，0.3H)，6.58(d，J＝1.5Hz，0.7H)，6.55(d，J＝1.5Hz，0.3H)，5.88(dd，J＝10.7，6.3Hz，0.7H)，5.25(m，1H)，4.94(dd，J＝10.8，5.7Hz，0.3H)，4.30(dd，J＝11.9，4.4Hz，2H)，4.20–4.14(m，1H)，4.14(dd，J＝11.9，4.4Hz，2H)，3.07(d，J＝15.4Hz，0.7H)，3.00(d，J＝4.9Hz，0.6H)，2.82(d，J＝15.4Hz，0.7H)，2.64(s，2.1H)，2.62–2.53(m，5.3H)，2.48(t，J＝7.1Hz，0.6H)，2.39(t，J＝7.1Hz，1.4H)，2.31(t，J＝7.6Hz，4.6H)，2.23(s，2.1H)，2.21(s，0.9H)，1.99–1.91(m，1H)，1.85–1.72(m，4H)，1.71–1.53(m，13H)，1.36–1.19(m，48H)，0.88(t，J＝6.9Hz，6H)。注意：級分整合反映出存在旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的～7：3混合物，這歸因于受限的圍繞N-甲基酰胺官能團的旋轉(zhuǎn)。
下表5中提供了其它示例性的包含三甲基鎖的式(I)的化合物的表征數(shù)據(jù)。
表5.有代表性的化合物的1H NMR數(shù)據(jù)
實施例6.用于制備式(I)的化合物的方法，其中Y表示未取代的或短鏈(n＝2、3)α-甲基或β-甲基取代的烷基，且L表示X'C(O)，其中X'是O。
ai)二棕櫚酸2-((4-溴丁?；?氧基)丙-1,3-二基酯(XXIII)
將4-(二甲氨基)吡啶(DMAP，64.4mg，0.527mmol)和N,N′-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC，218mg，1.05mmol)依次加入4-溴丁酸(XXII)(141mg，0.844mmol)和III(300mg，0.527mmol)在CH2Cl2(12mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌19小時。用CH2Cl2(15mL)稀釋得到的混懸液，冷卻至0℃，通過C鹽過濾，再用CH2Cl2(20mL)洗滌。用1M HCl、水、飽和水溶液NaHCO3和鹽水(各30mL)洗滌有機相，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。進行硅膠色譜法(5％乙酸乙酯/己烷)，得到溴甘油三酯XXIII(352mg，93％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.27(m，1H)，4.32(dd，J＝12.0，4.2Hz，2H)，4.14(dd，J＝12.0，6.0Hz，2H)，3.46(t，J＝6.5Hz，2H)，2.53(t，J＝7.1Hz，2H)，2.32(t，J＝7.6Hz，4H)，2.20–2.15(m，2H)，1.65–1.58(m，4H)，1.36–1.21(m，48H)，0.88(t，J＝6.9Hz，3H)。
在一些情況中，其中ω-鹵代羧酸XXII不是商購的，可以如下所述通過使用相應(yīng)的內(nèi)酯類、然后開環(huán)來進行合成。
aj)氧雜環(huán)十六烷-2-酮(XXXVIII)
在0℃將間-氯過苯甲酸(m-CPBA，70％純，687mg，2.79mmol)加入環(huán)戊并癸酮(500mg，2.23mmol)在CH2Cl2(6mL)中的溶液中，將該反應(yīng)體系在室溫攪拌4天和22小時。3天后對取得的等分的反應(yīng)體系的1H NMR分析顯示74％的酮消耗率，此時，再加入一部分m-CPBA(150mg)。4天和22小時后，用CH2Cl2(20mL)稀釋該反應(yīng)體系，用飽和水溶液NaHCO3(3×20mL)、水(20mL)和鹽水(20mL)洗滌，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。進行硅膠色譜法(5％-10％乙酸乙酯/己烷)，得到內(nèi)酯XXXVIII(463mg，86％)，為無色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.15–4.11(m，2H)，2.35–2.29(m，2H)，1.71–1.58(m，4H)，1.45–1.27(m，20H)。
ak)15-碘十五酸(XXII)
將氯三甲基硅烷(TMSCl，242μL，1.91mmol)加入XXXVIII(153mg，0.636mmol)和碘化鈉(286mg，1.91mmol)在乙腈(1.5mL)中的混懸液中，將該混合物回流加熱21小時。將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，用水(10mL)和10％Na2S2O3水溶液(10mL)稀釋，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。用鹽水(40mL)洗滌合并的有機萃取物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。進行硅膠色譜法(50％乙酸乙酯/己烷)，得到碘酸XXII(87.4mg，37％，70％純)，為黃色油狀物。觀察到在色譜后1H NMR光譜中的幾個雜質(zhì)信號的強度增加，疑似兩個次要成分之一是通過水解碘化物官能團形成的羥酸(δ3.53，羥基；δ3.18，碘)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.18(t，J＝7.1Hz，2H)，2.34(t，J＝7.5Hz，2H)，1.86–1.78(m，2H)，1.68–1.57(m，2H)，1.42–1.22(m，20H)。
al)3-甲基四氫-2H-吡喃-2-酮(XXXIX)
在0℃將正丁基鋰溶液(1.0M的己烷溶液，5.49mL，5.49mmol)滴加到二異丙基胺(910μL，6.49mmol)在THF(4mL)中的溶液中，將該混合物在0℃攪拌30分鐘，得到LDA淡黃色溶液，然后將其冷卻至–40℃。通過套管滴加冷的(–40℃)δ-戊內(nèi)酯(500mg，4.99mmol)在THF(4mL)中的溶液，將得到的混合物在–40℃攪拌10分鐘，然后冷卻至–78℃。然后滴加碘甲烷(466μL，7.49mmol)，將該混合物緩慢地溫?zé)嶂?℃，歷時4小時。通過緩慢添加乙酸(320μL)使反應(yīng)停止，用乙酸乙酯(10mL)和水(15mL)稀釋，用乙酸乙酯(3×15mL)萃取水相。用飽和NaHCO3水溶液和鹽水(各30mL)洗滌合并的有機萃取物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。硅膠色譜法(含有1％Et3N的15％-17.5％乙酸乙酯/己烷)，得到α-甲基-δ-戊內(nèi)酯XXXIX(144mg，25％)，為無色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.37–4.26(m，2H)，2.58(ddt，J＝11.1，7.0，7.0Hz，1H)，2.09(tt，J＝12.4，6.2Hz，1H)，1.98–1.83(m，2H)，1.54(ddt，J＝13.4，11.1，7.4Hz，1H)，1.26(d，J＝6.9Hz，3H)。
am)4-甲基四氫-2H-吡喃-2-酮(XL)
在0℃將甲基鋰(1.0M的Et2O溶液，2.00mL，2.00mmol)加入CuI(190mg，1.00mmol)在Et2O(2mL)中的混懸液中，將淡黃色反應(yīng)混合物即刻冷卻至–40℃。通過套管滴加5,6-二氫-2H-吡喃-2-酮(43.1μL，0.50mmol)在Et2O(2mL)中的溶液，將該反應(yīng)體系在–40℃攪拌10分鐘，然后在0℃攪拌10分鐘，在室溫攪拌30分鐘。在–40℃通過注射器將得到的黃色混懸液轉(zhuǎn)入劇烈攪拌的飽和NH4Cl水溶液(5mL)和乙酸乙酯(5mL)的混合物中，將猝滅的反應(yīng)體系緩慢地溫?zé)嶂潦覝?，歷時30分鐘。用水(5mL)稀釋該反應(yīng)體系，用乙酸乙酯(3×15mL)萃取，用1M Na2S2O3和鹽水(各30mL)洗滌合并的有機萃取物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗的β-甲基-δ-戊內(nèi)酯XL(22.7mg，40％)，為黃色油狀物，未經(jīng)進一步純化使用它。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.42(ddd，J＝11.4，4.9，4.0Hz，1H)，4.27(ddd，J＝11.4，10.6，3.8Hz，1H)，2.68(m，1H)，2.17–2.06(m，2H)，1.92(dqd，J＝13.8，3.9，1.5Hz，1H)，1.52(m，1H),1。
an)(E)-6-(4-(烯丙氧基)-6-甲氧基-7-甲基-3-氧代-1,3-二氫異苯并呋喃-5-基)-4-甲基-己-4-烯酸烯丙酯(XLI)
將1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一-7-烯(DBU)(602μL，4.03mmol)和烯丙基溴(238μL，2.82mmol)加入麥考酚酸(250mg，0.809mmol)在DMF(15mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌18小時。用乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)稀釋該反應(yīng)體系，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取水相。用水和鹽水(各40mL)洗滌合并的有機萃取物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。進行硅膠色譜法(30％乙酸乙酯/己烷)，得到烯丙酯XLI(292mg，93％)，為無色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.09(ddt，J＝17.1，10.4，5.9Hz，1H)，5.86(ddt，J＝17.2，10.4，5.7Hz，1H)，5.37(dq，J＝17.2，1.5Hz，1H)，5.30–5.15(m，4H)，5.13(s，2H)，4.78(dt，J＝5.9，1.3Hz，2H)，4.52(dt，J＝5.7，1.4Hz，2H)，3.76(s，3H)，3.41(d，J＝6.5Hz，2H)，2.44–2.39(m，2H)，2.35–2.27(m，2H)，2.17(s，3H)，1.79(s，3H)。
ao)(E)-6-(4-(烯丙氧基)-6-甲氧基-7-甲基-3-氧代-1,3-二氫異苯并呋喃-5-基)-4-甲基己-4-烯酸(XLII)
將酯XLI(44.0mg，0.110mmol)在2M NaOH(330μL，0.660mmol)中、水(1mL)和MeOH(1.3mL)的混合物在室溫攪拌1.5小時。用1M HCl將該反應(yīng)體系酸化至pH 1，用水(5mL)稀釋，然后用乙酸乙酯(3×15mL)萃取。用鹽水(30mL)洗滌合并的有機萃取物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。進行硅膠色譜法(40％-60％乙酸乙酯/己烷)，得到酸XLII(32.7mg，83％)，為無色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.09(m，1H)，5.36(ddd，J＝17.2，3.1，1.5Hz，1H)，5.25–5.16(m，2H)，5.13(s，2H)，4.77(dt，J＝5.9，1.3Hz，2H)，3.76(s，3H)，3.42(d，J＝6.7Hz，2H)，2.45–2.39(m，2H)，2.35–2.25(m，2H)，2.17(s，3H)，1.79(s，3H)。
ap)E)-二棕櫚酸2-((4-((6-(4-(烯丙氧基)-6-甲氧基-7-甲基-3-氧代-1,3-二氫異苯并呋喃-5-基)-4-甲基己-4-烯?；?氧基)丁酰基)氧基)丙-1,3-二基酯(XLIII)
將1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一-7-烯(DBU)(18.5μL，124μmol)加入XLII(30.6mg，85.0μmol)和溴化物XXIII(55.5mg，77.3μmol)在甲苯(2mL)中的混懸液中，將該混合物回流加熱3.5小時。將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，通過添加1M HCl(3-4滴)酸化，用水(10mL)稀釋。用乙酸乙酯(3×15mL)萃取水相，用水和鹽水(各30mL)洗滌合并的有機萃取物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。進行硅膠色譜法(15％-20％乙酸乙酯/己烷)，得到MPA甘油三酯XLIII(56.2mg，73％)，為無色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.10(ddt，J＝17.2，10.4，5.9Hz，1H)，5.37(dq，J＝17.2，1.5Hz，1H)，5.29–5.15(m，3H)，5.13(s，2H)，4.78(dt，J＝5.9，1.3Hz，2H)，4.30(dd，J＝11.9，4.4Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.9，5.8Hz，2H)，4.06(t，J＝6.4Hz，2H)，3.77(s，3H)，3.42(d，J＝6.8Hz，2H)，2.41–2.35(m，4H)，2.34–2.25(m，6H)，2.18(s，3H)，1.97–1.88(m，2H)，1.79(s，3H)，1.65–1.52(m，4H)，1.35–1.19(m，48H)，0.88(t，J＝6.9Hz，6H)。
aq)(E)-二棕櫚酸2-((4-((6-(4-羥基-6-甲氧基-7-甲基-3-氧代-1,3-二氫異苯并呋喃-5-基)-4-甲基己-4-烯?；?氧基)丁?；?氧基)丙-1,3-二基酯(30)
將1,3-二甲基巴比妥酸(12.4mg，79.2μmol)和Pd(PPh3)4(9.2mg，7.92μmol)加入在CH2Cl2(3mL)中的烯丙基醚XLIII(39.5mg，39.6μmol)，將該混合物在30℃攪拌2小時。將該反應(yīng)混合物直接上短硅膠墊，用乙酸乙酯(40mL)洗脫，減壓濃縮濾液，得到粗產(chǎn)物。進行硅膠色譜法(15％-20％乙酸乙酯/己烷)，得到化合物30(36.2mg，96％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)(s，1H)，5.30–5.21(m，2H)，5.20(s，2H)，4.30(dd，J＝11.9，4.4Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.9，5.8Hz，2H)，4.06(t，J＝6.4Hz，2H)，3.76(s，3H)，3.38(d，J＝7.0Hz，2H)，2.43–2.35(m，4H)，2.34–2.27(m，6H)，2.15(s，3H)，1.97–1.89(m，2H)，1.80(s，3H)，1.65–1.52(m，4H)，1.34–1.21(m，48H)，0.87(t，J＝6.9Hz，3H)。
ar)二棕櫚酸2-((5-((2-乙酰氧基苯甲酰基)氧基)戊?；?氧基)丙-1,3-二基酯(8)
將1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一-7-烯(DBU)(14.7mL，98.4mmol)加入乙酰水楊酸(阿司匹林，14.8mg，81.9mmol)和溴化物XXIII(40.0mg，54.7mmol)在甲苯(2mL)中的混懸液中，將該混合物回流加熱3.5小時。將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，然后用乙酸乙酯(5mL)和水(15mL)稀釋。分離水層，用1M HCl酸化至pH 2，然后用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。用水和鹽水(各40mL)洗滌合并的有機萃取物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。進行硅膠色譜法(10％乙酸乙酯/己烷)，得到化合物8(23.9mg，53％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.01(dd，J＝7.9，1.6Hz，1H)，7.56(ddd，J＝8.1，7.5，1.7Hz，1H)，7.31(td，J＝7.7，1.2Hz，1H)，7.10(dd，J＝8.1，1.0Hz，1H)，5.26(m，1H)，4.31(dd，J＝11.9，4.3Hz，2H)，4.28(t，J＝6.9Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.9，5.9Hz，2H)，2.40(t，J＝6.9Hz，2H)，2.35(s，3H)，2.30(t，J＝7.6Hz，4H)，1.83–1.74(m，4H)，1.64–1.54(m，4H)，1.35–1.19(m，48H)，0.88(t，J＝6.9Hz，6H)。
as)二棕櫚酸2-((6-(((3R,5R)-7-(2-(4-氟苯基)-5-異丙基-3-苯基-4-(苯基氨基甲?；?-1H-吡咯-1-基)-3,5-二羥基庚?；?氧基)己?；?氧基)丙-1,3-二基酯(9)的合成
在阿托伐他汀(ATV)的情況中，二元醇官能團需要被掩蔽為丙酮化合物(亞異丙基乙縮醛)，以防止其干擾隨后的反應(yīng)。如上所述在回流的甲苯中用DBU和ω-溴-TG XXIII處理ATV丙酮化合物XLIV，得到被保護的前藥XLV。然后在酸性條件下暴露二元醇，得到化合物9。
as(i)2-((4R,6R)-6-(2-(2-(4-氟苯基)-5-異丙基-3-苯基-4-(苯基氨基甲?；?-1H-吡咯-1-基)乙基)-2,2-二甲基-1,3-二烷-4-基)乙酸(XLIV)
將對甲苯磺酸(p-TsOH，10.1mg，0.053mmol)加入在2,2-二甲氧基丙烷(1.5mL)和丙酮(1.5mL)中的阿托伐他汀(160mg，0.265mmol)中，將該混合物在室溫攪拌15小時。用乙酸乙酯(30mL)稀釋該反應(yīng)體系，用水(25mL)和鹽水(2×25mL)洗滌有機相，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(20％-30％-50％乙酸乙酯/己烷)，得到丙酮化合物-酸XLIV(72.2mg，46％)，為無色泡沫體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.22–7.13(m，9H)，7.07(d，J＝7.7Hz，2H)，7.03–6.97(m，3H)，6.86(br s，1H)，4.20(m，1H)，4.09(m，1H)，3.85(m，1H)，3.71(m，1H)，3.57(m，1H)，2.54(dd，J＝15.8，6.8Hz，1H)，2.43(dd，J＝15.8，5.6Hz，1H)，1.71–1.61(m，2H)，1.53(d，J＝7.1Hz，6H)，1.38(s，3H)，1,36(m，1H)，1.34(s，3H)，1.09(m，1H)。
as(ii)2-((6-(2-((4R,6R)-6-(2-(2-(4-氟苯基)-5-異丙基-3-苯基-4-(苯基氨基甲?；?-1H-吡咯-1-基)乙基)-2,2-二甲基-1,3-二烷-4-基)乙酰氧基)己?；?氧基)-丙-1,3-二基二棕櫚酸酯(XLV)
將1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一-7-烯(DBU)(4.3μL，29.0μmol)加入丙酮化合物-酸XLIV(11.6mg，19.3μmol)和ω-溴-TG XXIII(12.0mg，16.1μmol)在甲苯(1.5mL)中的溶液中，將該混合物回流加熱2.5小時。將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30mL)稀釋，用水(25mL)、飽和NaHCO3水溶液(25mL)和鹽水(25mL)洗滌有機相，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。進行硅膠色譜法(20％乙酸乙酯/己烷)，得到ATV-甘油三酯XLV(13.0mg，64％)，為無色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.23–7.12(m，9H)，7.06(d，J＝7.8Hz，2H)，7.03–6.94(m，3H)，6.86(br s，1H)，5.25(m，1H)，4.30(dd，J＝11.9，4.4Hz，2H)，4.19(m，1H)，4.14(dd，J＝11.9，5.8Hz，2H)，4.07(m，1H)，4.07(t，J＝6.6Hz，2H)，3.82(m，1H)，3.70(m，1H)，3.57(m，1H)，2.48(dd，J＝15.7，7.0Hz，1H)，2.36–2.27(m，7H)，1.70–1.58(m，10H)，1.53(d，J＝7.1Hz，6H)，1.36(s，3H)，1.29(s，3H)，1.44–1.20(m，51H)，1.05(m，1H)，0.88(t，J＝6.9Hz，6H)。
as(iii)二棕櫚酸2-((6-(((3R,5R)-7-(2-(4-氟苯基)-5-異丙基-3-苯基-4-(苯基氨基甲?；?-1H-吡咯-1-基)-3,5-二羥基庚?；?氧基)己酰基)氧基)丙-1,3-二基酯(9)
將對甲苯磺酸(1.6mg，8.4mmol)加入丙酮化合物XLV(35.2mg，27.9mmol)在CH2Cl2(0.5mL)和MeOH(1mL)中的溶液中，將該反應(yīng)體系在室溫攪拌5.5小時。用稀釋該反應(yīng)體系CH2Cl2(20mL)，用飽和NaHCO3水溶液(15mL)和鹽水(15mL)洗滌有機相，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(20％-35％乙酸乙酯/己烷)，得到化合物9(14.6mg，43％)，為無色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.22–7.13(m，9H)，7.06(d，J＝7.6Hz，2H)，7.02–6.96(m，3H)，6.85(br s，1H)，5.25(m，1H)，4.30(dd，J＝11.9，4.4Hz，2H)，4.16(m，1H)，4.14(dd，J＝11.9，5.6Hz，2H)，4.10(t，J＝7.5Hz，2H)，4.10(m，1H)，3.94(m，1H)，3.74(m，1H)，3.58(m，1H)，2.40(d，J＝6.1Hz，2H)，2.33(t，J＝7.4Hz，2H)，2.31(t，J＝7.6Hz，4H)，1.73–1.51(m，10H)，1.54(d，J＝7.4Hz，6H)，1.50–1.34(m，3H)，1.33–1.20(m，49H)，0.88(t，J＝6.9Hz，1H)。
下表6中提供了其它示例性的式(I)的化合物，其中L表示X'C(O)。表6.式(I)的有代表性的化合物的1H NMR數(shù)據(jù)
實施例7.用于制備式(I)的化合物的方法，其中Z表示C(O)R3，且R3表示對羥基芐基羰基(PHB)自我毀滅的基團，且L表示X'，其中X'是O、S或NR4。
方案8.帶有對羥基芐基羰基自我毀滅的連接基的化合物的合成
為了合成包含對羥基芐基(PHB)羰基自我毀滅的基團的前藥，首先將對羥基芐醇(XLVI)的伯羥基保護為甲硅烷基醚，使游離酚羥基與酸-TG IV偶合，得到PHB甘油三酯XLVIII。除去硅保護基后，可以通過用氯甲酸對硝基苯酯(PNP)處理活化伯醇XLIX，得到PNP碳酸酯L。通過與藥物活性劑(AX’H)在堿性條件下反應(yīng)置換PNP基團，得到期望的PHB前藥LI。
at)4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯酚(XLVII)
將咪唑(85.1mg，1.25mmol)和叔丁基(氯)二甲基硅烷(TBSCl，90.4mg，0.600mmol)加入4-羥基芐醇(XLVI)(62.1mg，0.500mmol)在DMF(4mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌45分鐘。用乙酸乙酯(30mL)稀釋該反應(yīng)體系，用水(30mL)、飽和NaHCO3水溶液(30mL)和鹽水(30mL)洗滌有機相，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到TBS醚XLVII(119mg，定量)，為無色油狀物，未經(jīng)進一步純化使用它。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.21–7.15(m，2H)，6.83–6.78(m，2H)，4.66(s，2H)，0.93(s，9H)，0.08(s，6H)。
au)10-(4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-苯基)癸二酸1-(1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)酯(XLVIII)
將4-(二甲氨基)吡啶(DMAP，11.8mg，0.0966mmol)和EDC·HCl(46.3mg，0.241mmol)加入酸-TG IV(80.0mg，0.106mmol)和酚XLVII(23.0mg，0.0966mmol)在CH2Cl2(2.5mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌18小時。用CH2Cl2(10mL)稀釋該反應(yīng)體系，加入硅膠，減壓濃縮該混合物。通過硅膠色譜法純化(5％-7.5％-10％乙酸乙酯/己烷)，得到PHB甘油三酯XLVIII(60.7mg，65％，2步)，為無色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.35–7.28(m，2H)，7.05–6.99(m，2H)，5.26(m，1H)，4.72(s，2H)，4.29(dd，J＝11.9，4.3Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.9，5.9Hz，2H)，2.53(t，J＝7.5Hz，2H)，2.32(t，J＝7.5Hz，2H)，2.30(t，J＝7.5Hz，4H)，1.78–1.70(m，2H)，1.67–1.55(m，6H)，1.43–1.20(m，56H)，0.93(s，9H)，0.87(t，J＝6.8Hz，6H)，0.09(s，6H)。
av)10-(4-(羥基甲基)苯基)癸二酸1-(1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)酯(XLIX)
將10-樟腦磺酸(2.1mg，8.91μmol)加入在CH2Cl2(0.8mL)和MeOH(0.8mL)中的TBS醚XLVIII(57.8mg，59.4μmol)中，將該混合物在室溫攪拌2小時。用CH2Cl2(20mL)稀釋該反應(yīng)體系，用飽和NaHCO3水溶液和鹽水(各20mL)洗滌有機相，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(25％-35％乙酸乙酯/己烷)，得到醇XLIX(46.9mg，92％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.41–7.32(m，2H)，7.10–7.01(m，2H)，5.25(m，1H)，4.67(s，2H)，4.28(dd，J＝11.9，4.3Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.9，5.9Hz，2H)，2.54(t，J＝7.5Hz，2H)，2.31(t，J＝7.5Hz，2H)，2.30(t，J＝7.5Hz，4H)，1.89(br s，1H)，1.78–1.70(m，2H)，1.65–1.55(m，6H)，1.46–1.20(m，56H)，0.87(t，J＝6.9Hz，6H)。
aw)10-(4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲-基)苯-基)癸二酸1-(1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)酯(L)
在0℃將氯甲酸4-硝基苯酯(13.9mg，69.1μmol)和吡啶(7.8μL，96.0μL)加入在CH2Cl2(2mL)中的醇XLIX(33.0mg，38.4μmol)中，將該混合物在0℃攪拌20分鐘，然后在室溫攪拌2.5小時。用CH2Cl2(20mL)稀釋該反應(yīng)體系，用飽和NaHCO3水溶液和鹽水(各20mL)洗滌有機相，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(10％-20％乙酸乙酯/己烷)，得到PNP碳酸酯L(38.7mg，98％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.30–8.23(m，2H)，7.49–7.43(m，2H)，7.41–7.35(m，2H)，7.15–7.09(m，2H)，5.28(s，2H)，5.26(m，1H)，4.30(dd，J＝11.9，4.3Hz，2H)，4.15(dd，J＝11.9，5.9Hz，2H)，2.56(t，J＝7.5Hz，2H)，2.32(t，J＝7.5Hz，2H)，2.31(t，J＝7.5Hz，4H)，1.79–1.71(m，2H)，1.66–1.55(m，6H)，1.45–1.20(m，56H)，0.87(t，J＝6.9Hz，6H)。
ax)10-(4-((((((8R,9S,10R,13S,14S,17S)-10,13-二-甲基-3-氧代-2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環(huán)戊并[a]-菲-17-基)氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)癸二酸1-(1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)酯(28)
將4-(二甲氨基)吡啶(DMAP，6.2mg，50.8μmol)和DIPEA(0.16M的CH2Cl2溶液，80.0μL，12.7μmol)加入睪酮(11.7mg，40.6μmol)和PNP碳酸酯L(26.0mg，25.4μmol)在CH2Cl2(0.8mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌4天和20小時。用CH2Cl2(20mL)稀釋該反應(yīng)體系，用飽和NaHCO3水溶液和鹽水(各2×15mL)洗滌，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(10％-20％乙酸乙酯/己烷)，得到化合物28(9.8mg，33％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.43–7.38(m，2H)，7.10–7.05(m，2H)，5.73(s，1H)，5.26(m，1H)，5.12(s，2H)，4.52(dd，J＝8.9，7.8Hz，1H)，4.29(dd，J＝11.9，4.3Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.9，5.9Hz，2H)，2.54(t，J＝7.5Hz，2H)，2.47–2.17(m，11H)，2.02(m，1H)，1.89–1.81(m，2H)，1.78–1.54(m，12H)，1.47–1.19(m，59H)，1.18(s，3H)，1.10–0.93(m，4H)，0.87(t，J＝6.8Hz，6H)，0.85(s，3H)。
ay)10-(4-(((((1S,4S)-4-(3,4-二氯苯基)-1,2,3,4-四氫萘-1-基)(甲基)氨基甲?；?氧基)甲基)苯基)癸二酸1-(1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)酯(6)
將4-(二甲氨基)吡啶(DMAP，6.3mg，51.2μmol)和DIPEA(0.59M的CH2Cl2溶液，10.0μL，5.9μmol)加入鹽酸舍曲林(10.0mg，29.3μmol)和PNP碳酸酯L(15.0mg，14.6μmol)在CH2Cl2(0.6mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌18小時。用CH2Cl2(25mL)稀釋該反應(yīng)體系，用飽和NaHCO3水溶液(3×20mL)和鹽水(20mL)洗滌，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。通過硅膠色譜法純化(3％-6％乙酸乙酯/甲苯)，得到化合物6(11.3mg，65％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.46–7.28(m，3.5H)，7.25–7.16(m，2.5H)，7.12–7.02(m，3H)，6.95(d，J＝7.2Hz，1H)，6.81(m，1H)，5.51(m，0.6H)，5.36(m，0.4H)，5.27(m，1H)，5.20(s，2H)，4.29(dd，J＝11.9，4.3Hz，2H)，4.19(m，1H)，4.15(dd，J＝11.9，5.6Hz，2H)，4.15(dd，J＝11.6，5.6Hz，1H)，2.73(s，1.2H)，2.69(s，1.8H)，2.59–2.52(m，2H)，2.36–2.24(m，7H)，2.00(m，1H)，1.83–1.69(m，4H)，1.66–1.55(m，6H)，1.45–1.19(m，56H)，0.88(t，J＝6.9Hz，6H)。注意：級分整合反映出存在～3：2的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，這歸因于受限的圍繞N-甲基氨基甲酸酯官能團的旋轉(zhuǎn)。
實施例8.用于制備式(I)的化合物的方法，其中Z表示C(O)R3，且R3表示翻轉(zhuǎn)酯自我毀滅的基團，且L表示X'，其中X'是O、S或N(R4)。
方案9：帶有翻轉(zhuǎn)酯自我毀滅(FSI)的連接基的化合物的合成
設(shè)計翻轉(zhuǎn)酯的自我毀滅的(FSI)基團，以通過環(huán)化機制釋放游離藥物活性劑?？梢酝ㄟ^使藥物活性劑(A-X’H)與4-溴丁酸(XXII)偶合合成FSI前藥，得到溴化物L(fēng)II。使用衍生自酸-TG IV的羧酸酯置換溴化物L(fēng)II生成目標FSI前藥LIII中的期望的酯鍵。
az)4-溴丁酸(8R,9S,10R,13S,14S,17S)-10,13-二甲基-3-氧代-2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環(huán)戊并[a]菲-17-基酯(LII)
將4-(二甲氨基)吡啶(DMAP，15.5mg，0.130mmol)和DCC(43.8mg，0.210mmol)加入睪酮(29.9mg，0.100mmol)和4-溴丁酸(XXII)(21.0mg，0.130mmol)在CH2Cl2(3mL)中的溶液中，將該混合物在室溫攪拌24小時。再加入0.6eq.酸、1eq.DCC、0.6eq.DMAP，將該混合物在室溫再攪拌2天。用CH2Cl2(10mL)稀釋該反應(yīng)體系，加入硅膠，減壓濃縮該混合物。通過硅膠色譜法純化(25％乙酸乙酯/己烷)，得到溴化物L(fēng)II(26.7mg，59％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.73(s，1H)，4.62(dd，J＝9.1，7.9Hz，1H)，3.47(t，J＝6.5Hz，2H)，2.50(td，J＝7.1，1.0Hz，2H)，2.47–2.23(m，4H)，2.22–2.13(m，3H)，2.06–1.99(m，1H)，1.85(m，1H)，1.78(m，1H)，1.74–1.63(m，2H)，1.61–1.53(m，2H)，1.52–1.32(m，3H)，1.23–1.15(m，1H)，1.19(s，3H)1.11–0.91(m，3H)，0.83(s，3H)。
ba)5-(4-(((8R,9S,10R,13S,14S,17S)-10,13-二甲基-3-氧代-2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環(huán)戊并[a]菲-17-基)氧基)-4-氧代丁基)3-甲基戊二酸1-(1,3-雙(棕櫚酰氧基)丙-2-基)酯(29)
將1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一-7-烯(DBU)(19μL，125.7μmol)加入酸-TG IV(43.8mg，62.9μmol)、溴化物L(fēng)II(27.5mg，62.9μmol)和碘化四丁基銨(TBAI，11.6mg，31.4μmol)在甲苯(3mL)中的混懸液中，將該混合物回流加熱6小時。將該反應(yīng)體系冷卻至室溫，然后用乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)稀釋，用(3×10mL)乙酸乙酯萃取水層。用水(20mL)和鹽水(20mL)洗滌合并的有機萃取物，干燥(MgSO4)，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。進行硅膠色譜法(15％-35％乙酸乙酯/己烷)，得到化合物29(18.6mg，28％)，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.72(s，1H)，5.26(m，1H)，4.61(dd，J＝9.1，7.9Hz，1H)，4.29(ddd，J＝11.9，4.3，1.6Hz，2H)，4.12(m，4H)，2.50–2.12(m，16H)，2.03–1.92(m，3H)，1.84(m，1H)，1.77(m，1H)，1.74–1.54(m，8H)，1.53–1.32(m，2H)，1.31–1.21(m，49H)，1.18(s，3H)，1.16(m，1H)，1.10–1.01(m，2H)，1.02(d，J＝6.5Hz，3H)，0.95(m，1H)，0.87(t，J＝6.9Hz，6H)，0.83(s，3H)。
實施例8.大鼠中的淋巴轉(zhuǎn)運研究
為了證實本發(fā)明中所述的前藥能夠促進轉(zhuǎn)運入淋巴，在大鼠中進行研究，其中給腸系膜淋巴管插套管以能夠連續(xù)采集腸系膜淋巴。然后將包含所關(guān)注的化合物的脂質(zhì)制劑施用于動物，采集淋巴，隨后對淋巴中的藥物濃度定量。
如上所述制備本發(fā)明的化合物或?qū)φ栈衔锏囊灾|(zhì)為基質(zhì)的制劑(Trevaskis，N.L.等人，Pharmaceutical Research，2005，22(11)，1863-1870)。簡言之，將約2mg的化合物(在化合物35和化合物1的情況中為1mg)、40mg油酸和25mg吐溫80在玻璃小瓶中混合，直到平衡(適度加熱(低于50℃)可以應(yīng)用短期)。隨后將由5.6mL(磷酸緩沖鹽水(PBS，pH 7.4)組成的水相加熱到脂質(zhì)相中(在對照化合物的情況中，包括麥考酚酸、酒石酸美托洛爾、阿托伐他汀鈣、阿司匹林和鹽酸舍曲林，將化合物各自溶于PBS而非脂質(zhì)相，用于制備包含對照化合物的制劑)，通過在室溫下用超聲處理機超聲處理乳化該制劑2分鐘，所述超聲處理機安裝有以240μm振幅和20kHz頻率運行的3.2毫米微探頭尖。使用HPLC-MS驗證全部制劑中的化合物濃度。
選擇雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠用于淋巴轉(zhuǎn)運研究，其中藥物活性劑為麥考酚酸(MPA)、美托洛爾(MET)、阿托伐他汀(ATV)、舍曲林(SER)或塞來昔布(CEL)。選擇雌性SD大鼠用于其中睪酮為藥物活性劑的研究。這必須消除雄性大鼠中相對高和可變水平的內(nèi)源性睪酮，它可干擾外源性施用的睪酮的定量。將大鼠(240-320g)維持標準膳食并且禁食過夜，可以自由引水，然后進行實驗。在37℃將麻醉的大鼠置于加熱墊上，如上所述(Edwards等人Advanced Drug Delivery Reviews2001，50(1)，45-60)將套管插入十二指腸(用于制劑施用和再水化)、腸系膜淋巴管(用于淋巴采集)和頸動脈(用于采血)。術(shù)后，將大鼠通過以2.8mL/h十二指腸輸注生理鹽水再水化0.5h。將脂質(zhì)制劑以2.8mL/h輸注入十二指腸2h，此后，將輸注改變?yōu)?.8mL/h生理鹽水，用于其余的實驗。將淋巴連續(xù)采集6－8h，進入預(yù)先稱重的包含10μL 1,000IU/mL肝素的埃彭道夫管。每小時改變1次采集管，通過重量分析法測定淋巴流量。將每小時的淋巴樣品的等分部分儲存在-80℃，然后測定。
將淋巴中的藥物濃度表示為總藥物且包括游離藥物和與不同甘油酯連接的藥物。通過水解淋巴(以從任意再酯化的甘油酯中釋放藥物)測定，然后評價游離藥物。
根據(jù)采集的淋巴體積和淋巴中測定的濃度的乘積計算每小時采集期間轉(zhuǎn)運入淋巴的MPA、TST、MET、ATV、SER或CEL衍生物。圖1示例了十二指腸內(nèi)輸注制劑0－2h后麻醉的腸系膜淋巴管插管的雌性SD大鼠中累積總的睪酮相關(guān)衍生物的淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)與時間的關(guān)系。每種制劑包含2mg示例性的化合物或?qū)φ掌肥凰岵G酮(TU)，它們均分散于40mg油酸、25mg吐溫80和5.6ml PBS中。對于上述由Scriba等人所述的化合物TU(n＝4)和化合物11(n＝3)和化合物10和化合物14n＝1，將數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM，其中睪酮與甘油三酯單元通過琥珀酸偶聯(lián)(化合物41，n＝4)。嵌入的圖表示棒形圖形式的終點數(shù)據(jù)點(轉(zhuǎn)運入淋巴的累積％劑量，歷時8h)。正如從圖1和表7中顯而易見的，示例性化合物各自顯著地增強了睪酮遞送至腸淋巴，約為對照TU的7-9倍。
表7.十二指腸內(nèi)輸注給麻醉的腸系膜淋巴管插管的大鼠后總化合物(所施用劑量的％)的淋巴轉(zhuǎn)運(數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM，此時n≥3)。
圖2示例了十二指腸內(nèi)輸注制劑0－2h后麻醉的腸系膜淋巴管插管的雄性SD大鼠中累積包含總MPA的化合物的淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)與時間的關(guān)系。制劑包含2mg單獨的示例性的化合物或MPA，它們均分散于40mg油酸、25mg吐溫80和5.6ml PBS中。將數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM。得自動物的數(shù)據(jù)：n＝5，MPA；n＝3，化合物30、化合物34；n＝6，化合物31；n＝4，化合物32、化合物33和化合物35。嵌入的圖表示棒形圖形式的終點數(shù)據(jù)點(轉(zhuǎn)運入淋巴的累積％劑量，歷時8h)。
圖2和表8示例本發(fā)明的化合物顯著地增加MPA的淋巴轉(zhuǎn)運，與單獨的MPA相比增加43～132倍。延伸連接基長度增強了MPA的轉(zhuǎn)運，其中化合物30將MPA的淋巴轉(zhuǎn)運改善了施用劑量的7.1％，而化合物34增強了轉(zhuǎn)運至22.1％。連接基長度與轉(zhuǎn)運增加之間的相關(guān)性可能歸因于單酸甘油酯中間體易于再酯化，因為烷基鏈越長，則更易于接近模擬因天然甘油三酯消化產(chǎn)生的單酸甘油酯。有意義地，進一步觀察到增加連接基長度無效，且施用化合物35(其中-Y–是C20烷基)導(dǎo)致淋巴轉(zhuǎn)運低于使用化合物34(其中-Y–是C14烷基)得到的結(jié)果。正如可以從圖3和表8中看出的，用硫酯替代藥物活性劑與連接基之間的酯鍵不會改變得到的化合物的淋巴轉(zhuǎn)(參見，例如化合物31和化合物40)。
表8.給麻醉的腸系膜淋巴管插管的大鼠十二指腸內(nèi)輸注后中總化合物的淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)(數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM)。
正如從圖4、圖19和表9中顯而易見的，用α或β甲基防止酯連接至甘油酯亞單位可以增加化合物的管腔穩(wěn)定性并且促進淋巴轉(zhuǎn)運。當與其直鏈對應(yīng)物化合物10或化合物13相比時，化合物18中的β甲基支鏈或化合物16中的α甲基支鏈顯著地穩(wěn)定胃腸液中的單酸甘油酯中間體(參見圖19)。這使得單酸甘油酯-模擬中間體更易于被吸收，并且在腸細胞中再酯化，因此在淋巴藥物轉(zhuǎn)運中顯著增加。
表9.給麻醉的腸系膜淋巴管插管的大鼠十二指腸內(nèi)輸注后中總化合物的淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)(數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM，此時n≥3；或平均值±范圍，此時n＝2)。
類似地，間隔基中具有甲基取代的TG模擬前藥(連接烷基間隔基至甘油酯骨架的α-或β-酯鍵)改善了MPA在GI腔中的穩(wěn)定性(圖23)，并且導(dǎo)致MPA的體內(nèi)淋巴轉(zhuǎn)運的傾向于更好的趨勢(圖5和表10)。圖5和表10示例與化合物31(8.2％)相比化合物36(9.1％)和化合物38(12.1％)的淋巴轉(zhuǎn)運改善，且化合物37(12.6％)和化合物39(28.4％)導(dǎo)致淋巴轉(zhuǎn)運分別高于化合物32(9.6％)和化合物34(22.1％)。
表10.給麻醉的腸系膜淋巴管插管的大鼠十二指腸內(nèi)輸注后中總MPA相關(guān)衍生物的淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)(數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM)。
當與在1’(或3’)位上綴合或通過醚鍵連接的化合物相比，本發(fā)明在甘油三酯2’位上通過酯鍵綴合的化合物更有效地促進淋巴轉(zhuǎn)運。
本發(fā)明的發(fā)明人的數(shù)據(jù)揭示出位置和官能團特異性對于MPA前藥的有效淋巴靶向而言是重要的。在圖6和表11中，本發(fā)明的化合物例如化合物30和化合物32成功地將MPA淋巴收率提高43～60倍。相反，化合物(其中MPA直接綴合在甘油單元的1’(或3’)位(化合物42))、化合物(其中MPA-連接基部分通過醚鍵綴合至甘油單元，其中-Y-的等效物是C4烷基(化合物43)或C6烷基(化合物44)或化合物(其中MPA通過醚鍵綴合在甘油單元的1’位上，且–Y-的等效物是C8烷基(化合物45)對于淋巴轉(zhuǎn)運而言是不良底物，導(dǎo)致淋巴轉(zhuǎn)運與單獨的MPA的淋巴轉(zhuǎn)運類似。
表11.給麻醉的腸系膜淋巴管插管的大鼠十二指腸內(nèi)輸注后總MPA相關(guān)衍生物的淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)(數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM)。
圖7－11和表12提供了額外的證據(jù)，即TG模擬前藥策略可以擴展至除MPA和睪酮以外的化合物。所述圖呈現(xiàn)了給麻醉的腸系膜淋巴管插管的大鼠ID輸注后中總化合物的淋巴轉(zhuǎn)運(劑量的％)。數(shù)據(jù)顯示MET(圖7)、ATV(圖8)和ASP(圖9)的淋巴轉(zhuǎn)運在分別施用化合物3、9和8之后得到提高。
圖10提供了本發(fā)明進一步的證據(jù)，并且示例除羧酸終止的藥物例如MPA和羥基終止的藥物例如TST的實例外，例如胺終止的藥物例如舍曲林(SER)的淋巴藥物轉(zhuǎn)運也可以通過形成在藥物與甘油酯之間并入自我毀滅的連接基的甘油酯模擬前藥得以提高。圖10呈現(xiàn)了給麻醉的腸系膜淋巴管插管的大鼠ID輸注后中總化合物的淋巴轉(zhuǎn)運(劑量的％)(數(shù)據(jù)表示為并入三甲基鎖自我毀滅的基團和藥物活性劑舍曲林的化合物1的平均值±范圍(n＝2)，導(dǎo)致總舍曲林衍生物在淋巴中的轉(zhuǎn)運為41.0±7.0％。類似地，當與單獨的藥物相比時，修飾以包括對羥基苯甲酸酯自我毀滅基團(化合物6)或乙縮醛自我毀滅的基團和甲基的組合保護與甘油酯的酯鍵(化合物7)提供了在淋巴藥物轉(zhuǎn)運中的增強。作為另一個實例，即包含胺的前藥的三甲基鎖自我毀滅的前藥，非甾類抗炎藥塞來昔布(CEL，化合物5)的前藥的淋巴轉(zhuǎn)運如圖11中所示。
表12.給麻醉的腸系膜淋巴管插管的大鼠十二指腸內(nèi)輸注后總藥物的淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)(數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM，此時n≥3；或平均值±范圍，此時n＝2)。
實施例9.大鼠和狗中的藥物動力學(xué)(PK)研究
為了評價本發(fā)明的化合物的口服生物利用度，在大鼠和狗中進行藥物動力學(xué)研究。在大鼠研究中，麻醉雌性(用于睪酮相關(guān)研究)或雄性(用于阿法沙龍相關(guān)研究)Sprague-Dawley大鼠(240-320g)，并且給頸動脈插套管，然后施藥。然后使大鼠恢復(fù)意識并且禁食過夜，然后開始可自由引水的實驗。第二天早晨，通過經(jīng)口管飼法施用脂質(zhì)制劑中的化合物(除外阿法沙龍(ALP)和化合物2)，所述脂質(zhì)制劑包含分散于2mL PBS中的1-2mg化合物、40mg油酸和25mg吐溫80(如上述對大鼠中的淋巴轉(zhuǎn)運研究所述，差別僅在于小體積的PBS用于此處的有意識研究)。ALP的口服制劑包含懸浮于鹽水中1mL 0.5％(w/v)羧甲基纖維素和0.4％(v/v)吐溫80的7.5mg ALP)?；衔?的口服制劑包含分散于1mL PBS中的3mg化合物、20mg油酸和12.5mg吐溫80。從施用前5min到給藥后24h從頸動脈套管中采集血樣并且以5000rpm離心5min以分離血漿。在血樣采集期間，大鼠在施藥后可以隨時自由引水，但保持禁食再經(jīng)過8小時。將血漿樣品儲存在-80℃下，然后通過HPLC-MS-MS測定。在這種情況中，測定樣品的游離藥物(即無甘油酯連接的藥物)并且在測定前不水解(因為就此而言，使用淋巴樣品)。該數(shù)據(jù)因此反映出藥物轉(zhuǎn)運入淋巴且然后在體循環(huán)中從再酯化的藥物-甘油酯復(fù)合物中釋放。
為了進行狗的研究，使雌性灰狗保持在大的動物研究設(shè)施中至少5天，然后開始研究。使狗適應(yīng)至少4天，然后開始本研究。使狗禁食12h，直到施藥前30min為止。為了進行喂食狀態(tài)的研究(n＝4，TU或化合物13)，狗接受680g包含5％脂肪的標準商業(yè)狗食30分鐘，然后施藥。在禁食的研究中(n＝1，化合物13)，狗保持禁食，直到給藥后4h之后為止。在本研究的自始至終對于全部的狗均可自由取水。在本研究的當天，將20號靜脈內(nèi)導(dǎo)管插入頭靜脈以采血樣。在插套管后使狗自由運動(無約束)。為了進行喂食狀態(tài)的研究，給予狗安特爾(Andriol Testocaps)(商業(yè)化TU產(chǎn)品)或化合物13。安特爾由Merck Sharp&Dohme(澳大利亞)Pty Limited提供并且將其配制成軟膠囊，其包含12.0％(w/w)TU在丙二醇單月桂酸甘油酯(lauroglycol)FCC/蓖麻油[40：60％(w/w)]中的溶液，其中單個膠囊組成為40mg TU、丙二醇單月桂酸甘油酯FCC、蓖麻油、明膠、甘油和日落黃(E110)。將化合物13制備成基于長鏈脂質(zhì)的自乳化遞藥系統(tǒng)(SEDDS)，其由30.5％w/w大豆油、30.5％w/w Maisine 35-1、31.6％w/w Cremophor EL和7.4％w/w乙醇組成。將制劑填充入硬膠囊。將包含80mg TU的安特爾的2粒膠囊或包含總劑量為90mg化合物13的溶于2g SEDDS制劑的化合物13的2粒膠囊施用于喂食的灰狗，通過將所述膠囊盡可能地置于咽后部、關(guān)閉口腔并且摩擦咽喉以刺激吞咽來進行。隨后，通過注射器經(jīng)口施用50mL水。也給禁食的狗施用2?；衔?3的制劑用于禁食狀態(tài)研究。在經(jīng)口施用后，從施用前5min到給藥后10小時通過頭靜脈套管取血樣(各自約3mL)。通過在每次抽取血樣后流過小體積的肝素化鹽水(1-2IU/mL)維持導(dǎo)管的開放性。通過靜脈穿刺取24h時的血樣。通過離心分離血漿并且將血漿樣品的等分部分各自轉(zhuǎn)入埃彭道夫管，且儲存在-80℃下，然后通過LC-MS-MS分析。
圖12示例給有意識的頸動脈插管的雌性SD大鼠經(jīng)口管飼制劑后劑量歸一化睪酮血漿濃度。制劑包含1mg TU或2mg本發(fā)明的化合物，它們均包含分散于40mg油酸、25mg吐溫80和2ml PBS中的睪酮。將劑量校準至2mg/kg等效物劑量的睪酮。對于全部組(對于每個組，n＝4或3)，數(shù)據(jù)顯示為平均值±SEM。嵌入的圖是棒形圖形式的睪酮的劑量歸一化血漿AUC0-24h(nmol×h/L)的示意圖。
本發(fā)明帶有大于C5的連接基長度的化合物導(dǎo)致施用后睪酮的全身暴露(口服生物利用度)明顯增加。這通過圖12和表13顯示，其中盡管全部4種化合物的淋巴轉(zhuǎn)運類似，但是經(jīng)口施用化合物11、化合物13或化合物14后母體睪酮的全身暴露大于化合物41或化合物10施用后10-倍(劑量歸一化睪酮血漿AUC0-24h)(并且高于獲得的TU～12-27倍)(參見圖1和表7)。在這種情況中，較長的連接基顯然度與增強的藥物釋放而言是關(guān)鍵。
表13.給有意識的頸動脈插管的SD雌性大鼠經(jīng)口施用所述化合物后的藥物動力學(xué)參數(shù)(將劑量校準至2mg/kg等效物睪酮劑量且數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM)。
本發(fā)明的化合物在促進睪酮全身暴露中的用途也在不同動物、在狗中得以證實。這通過圖13和表14顯示。與大鼠的數(shù)據(jù)一致，在經(jīng)口施用化合物13后母體睪酮的全身暴露明顯大于(約8倍，劑量歸一化睪酮血漿AUC0-24h)施用TU后得到的全身暴露。注意，化合物13暴露的增加顯然不受與食物共同施用影響。
表14.給有意識的喂食或禁食狀態(tài)的灰狗經(jīng)口施用睪酮前藥后的藥物動力學(xué)參數(shù)(將劑量校準至2mg/kg等效物睪酮劑量)。數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM：TU(n＝4)和化合物13(n＝4)，在喂食狀態(tài)；以及n＝1，化合物13，在禁食狀態(tài)。
帶有與被α或β甲基保護的甘油酯的酯鍵的化合物增加長鏈類似物的睪酮的口服生物利用度。
正如從圖4和表9中顯而易見的，甲基支鏈TG模擬前藥通過穩(wěn)定MG中間體有利于睪酮的淋巴轉(zhuǎn)運。然而，甲基修飾也可能減少母體睪酮從前藥分子中的系統(tǒng)性釋放。正如圖14和表15中所示，例如，在施用化合物18后，血漿中睪酮的全身暴露低于其直鏈對應(yīng)物化合物10，不過，化合物18的淋巴轉(zhuǎn)運約為2倍以上(參見表9)。
為了改善淋巴轉(zhuǎn)運并且還允許全身睪酮釋放，發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，甲基取代與較長烷基鏈長的組合弱化了對于具有α或β甲基的化合物觀察到的暴露減少?？梢詮膱D14和表15中看出，如果甲基修飾后-Y–增加至C8烷基，則當與直鏈(化合物13)比較時，血漿中游離睪酮的釋放對于β甲基化的類似物而言時類似的，且釋放顯然在一定程度上延遲，從而提供了潛在的延長釋放。
表15.給有意識的頸動脈插管的SD雌性大鼠經(jīng)口施用化合物后的藥物動力學(xué)參數(shù)(將劑量校準至2mg/kg等效物睪酮劑量且數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM)。
在藥物活性劑與連接基之間并入自我毀滅的基團的化合物有利于母體藥物在全身系統(tǒng)中釋放，以達到高于酯連接的化合物的口服生物利用度。
正如在圖15和表16中看出的，在經(jīng)口施用化合物22和化合物26(具有三甲基鎖自我毀滅的基團)后，睪酮在血漿中的全身暴露高于分別施用化合物11和化合物13(不帶有自我毀滅的連接基的等效化合物，且得到化合物13是預(yù)先最佳性能執(zhí)行前藥之一)后得到的結(jié)果。當與TU比較時，睪酮的血漿AUC約高于施用化合物22后40倍，并且約高于施用化合物26后90倍。類似地，添加三甲基鎖自我毀滅的基團至β-甲基保護的睪酮前藥(其中淋巴轉(zhuǎn)運高(圖4)，但系統(tǒng)性釋放不完全(圖15))對于化合物25和27導(dǎo)致全身暴露明顯增加(約高于TU 60-100倍)。
表16.給有意識的頸動脈插管的SD雌性大鼠經(jīng)口施用所述化合物后的藥物動力學(xué)參數(shù)(將劑量校準至2mg/kg等效物睪酮劑量且數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM，此時n≥3；或平均值±范圍，此時n＝2)。
另外明顯的是，三甲基鎖自我毀滅的基團并非是唯一有效的自我毀滅的基團，而其它實例類似地有效。例如，在圖16和表17中，化合物21(具有乙縮醛自我毀滅的基團)導(dǎo)致全身睪酮水平高于化合物11。當添加乙縮醛自我毀滅的基團至β甲基保護的C5前藥時，這種作用甚至更為顯著(化合物23與化合物18比較)，其中當與TU比較時，自我毀滅的類似物導(dǎo)致睪酮的全身暴露增加90倍。
表17.給有意識的頸動脈插管的SD雌性大鼠經(jīng)口施用所述化合物后的藥物動力學(xué)參數(shù)(將劑量校準至2mg/kg等效物睪酮劑量且數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM)。
在自我毀滅的基團的潛在有益性的另一個示例中，圖17和表18中的數(shù)據(jù)提供了翻轉(zhuǎn)酯自我毀滅的基團(FSI)的用途證據(jù)?；衔?9的數(shù)據(jù)顯示，當與直鏈前藥(化合物10)和β甲基保護的化合物(化合物18)比較時，翻轉(zhuǎn)酯基團插入C5β甲基睪酮前藥導(dǎo)致經(jīng)口施用后全身睪酮水平顯著增加。當與TU比較時，添加對羥基芐基羰基(PHB)自我毀滅的基團(化合物28)也導(dǎo)致睪酮暴露增加，但有效性低于其它自我毀滅的基團。
表18.給有意識的頸動脈插管的SD雌性大鼠經(jīng)口施用所述化合物后的藥物動力學(xué)參數(shù)(將劑量校準至2mg/kg等效物睪酮劑量且數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM)。
進一步顯而易見，本發(fā)明的化合物能夠促進非睪酮的藥物的全身暴露，例如阿法沙龍(ALP)，即另一種具有高首過效應(yīng)的藥物(圖18和表19)。圖18示例給有意識的頸動脈插管的雄性SD大鼠經(jīng)口管飼制劑后的ALP血漿濃度。制劑包含鹽水中的1mL 0.5％(w/v)羧甲基纖維素和0.4％(v/v)吐溫80中的7.5mg ALP或分散于20mg油酸、12.5mg吐溫80和1ml PBS中的3mg化合物2。數(shù)據(jù)顯示為平均值±SEM(對于化合物2組(n＝4)；以及n＝1，對于對照化合物ALP組)。在經(jīng)口施用混懸液制劑中的ALP后，血漿濃度極低(低于量化限制(LOD，10ng/mL))，最可能的原因是ALP過度的首過代謝。數(shù)據(jù)在圖18中顯示為定性指示，即得到它們低于測定的量化限制。相反，當與對照化合物ALP比較時，化合物2導(dǎo)致ALP的全身暴露(口服生物利用度)顯而易見地明顯增加，不過，相對生物利用度的定量比較是不可能的，這歸因于ALP施用后ALP極低的暴露。
表19.給有意識的頸動脈插管的SD雄性大鼠經(jīng)口施用所述化合物后ALP的藥物動力學(xué)參數(shù)(將劑量校準至25mg/kg，ALP組；以及4mg/kg等效物ALP，化合物2組)。數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM：化合物2組(n＝4)；n＝1，ALP組。
實施例10.大鼠消化分泌液或豬胰腺脂肪酶導(dǎo)致的化合物體外水解
通過與大鼠消化分泌液一起溫育對MPA相關(guān)化合物進行體外水解。大鼠消化分泌液通過在導(dǎo)管進入十二指腸前(即低于胰腺分泌進入點)即刻給常用膽汁-胰管插套管采集自麻醉大鼠。這能夠同時采集膽汁和胰液。將消化分泌液連續(xù)采集2h，在此期間，將空白脂質(zhì)制劑(如大鼠淋巴轉(zhuǎn)運研究中所述制備，但不添加藥物)以2.8ml/h的速率輸注入十二指腸，以模擬施藥后的情況。將膽汁和胰液維持在37℃并且在采集0.5h內(nèi)十一，用于體外前藥水解實驗。通過將0.375mL大鼠消化分泌液與0.625ml載藥的脂質(zhì)制劑(如大鼠淋巴轉(zhuǎn)運研究中所述制備)一起溫育(在37℃)進行水解實驗。消化分泌液與制劑的體積比模擬膽汁和胰液的流速(～1.5mL/h)和體內(nèi)淋巴轉(zhuǎn)運研究過程中十二指腸內(nèi)制劑的輸注速率(2.8mL/h)。將10μL等分部分(在0、2、5、10、15、30、60、90、120、180min取的樣品)加入990μL乙腈：水(4：1，v/v)中以終止脂解，渦旋1min并且以4500g離心5分鐘，以沉淀蛋白質(zhì)，然后分析。通過HPLC-MS分析上清液的殘留化合物濃度，并且分析化合物水解的潛在產(chǎn)物。
為了提供較高流通量實驗，除非另有描述，否則通過與豬胰脂肪酶一起溫育進行TST相關(guān)化合物的體外水解。這提供了胰酶的更可再生的來源，有利于提高實驗的流通量，并且還是比采集的大鼠酶更大的挑戰(zhàn)(因為大鼠腸液中的酶活性低)。簡言之，在水解實驗前，通過將1g豬胰酶分散于5ml脂解緩沖液和16.9μl 5M NaOH中制備胰脂肪酶溶液。將該混懸液充分混合并且在5℃以3500rpm離心15分鐘，得到上清液。用NaOH調(diào)整至pH 6.5的0.474g三-馬來酸鹽(2mM)、0.206g CaCl2.H2O(1.4mM)和8.775g NaCl(150mM)制備1000ml量的脂解緩沖液。為了評價前藥在腸中水解的潛能，將20μl前藥溶液(1mg/ml溶于乙腈)、900μl模擬腸膠束溶液[用0.783g NaTDC(3mM)和0.291g磷酯酰膽堿(0.75mM)在500ml脂解緩沖液中制備]和100μl酶溶液在37℃下溫育。在溫育后0、5、10、15、30、60、90、120和180分鐘取20μl溫育溶液的樣品，并且加入180μl ACN中以終止脂解。渦旋該混合物并且以5000rpm離心5分鐘，以沉淀蛋白質(zhì)，然后分析。通過HPLC-MS分析上清液的殘留化合物濃度，并且分析化合物水解的潛在產(chǎn)物。
在與消化酶一起溫育時，前藥的單酸甘油酯形式極為快速地形成。模擬腸條件中的穩(wěn)定性因此根據(jù)通過腸消化過程生成的單酸甘油酯形式的穩(wěn)定性得到更好地評價。單酸甘油酯形式必須保持完整地被吸收并且在腸相比中再酯化，然后進入淋巴?；衔?0(n＝3)與化合物18(n＝1)和化合物13(n＝3)與化合物16(n＝3)的單酸甘油酯形式在體外與新鮮采集的大鼠膽汁和胰液(BPF)(化合物10和18)或豬胰脂肪酶(化合物13和16)一起溫育過程中的穩(wěn)定性特征顯示在α或β碳上包含甲基明顯地增加單酸甘油酯中間體的穩(wěn)定性(圖19)。當與化合物10比較時，這與化合物18的淋巴轉(zhuǎn)運增加和圖4中化合物16的高度淋巴轉(zhuǎn)運一致。
圖20－22提供了甲基取代以改善睪酮前藥包括包含自我毀滅的連接基的前藥的腔穩(wěn)定性的其它證據(jù)，其中自我毀滅的基團預(yù)期可以降低腔穩(wěn)定性。例如，在圖20中，化合物11或化合物13的單酸甘油酯形式在體外脂解試驗中并非高度穩(wěn)定，且這對于三-甲基鎖自我毀滅的類似物(化合物22和化合物26)而言是類似的或更差。相反，甲基取代的單酸甘油酯(化合物25和化合物27)在體外水解攻擊中明顯是穩(wěn)定的且導(dǎo)致睪酮暴露增加(圖15)。
在圖21中，對于乙縮醛自我毀滅的前藥而言，類似的比較顯而易見，其中化合物21(帶有自我毀滅的連接基)的腔穩(wěn)定性低于化合物11，而化合物24具有比化合物13差的穩(wěn)定性?；衔?3中的乙縮醛自我毀滅基團+β甲基保護的組合導(dǎo)致腔穩(wěn)定性(圖21)和體內(nèi)暴露(圖16)顯著增強。
對于翻轉(zhuǎn)至自我毀滅的基團，插入自我毀滅基團+β甲基取代的組合(化合物29)導(dǎo)致腔穩(wěn)定性比無自我毀滅基團的直鏈對應(yīng)物(化合物10)增加(圖22)和體內(nèi)睪酮暴露顯著增加(圖17)。
類似地，化合物31(n＝5)、化合物32(n＝4)、化合物34(n＝1)、化合物36(n＝2)、化合物37(n＝1)、化合物38(n＝1)和化合物39(n＝1)的單酸甘油酯形式在體外與新鮮采集的大鼠膽汁和胰液(BPF)一起溫育過程中的穩(wěn)定性特征比較示例在圖23對于MPA衍生物的描述中。數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM，此時n≥3；或平均值±范圍，此時n＝2。
當與直鏈對應(yīng)物比較時，具有連接基上帶有甲基取代的化合物(連接烷基至甘油酯骨架的α-或β-酯鍵)有效地減少了單酸甘油酯中間體在胃腸(GI)腔中的降解，導(dǎo)致體內(nèi)淋巴轉(zhuǎn)運增加。
化合物36以及化合物38與化合物31、化合物37與化合物32和化合物39與化合物34的單酸甘油酯消化產(chǎn)物的降解特性比較揭示出穩(wěn)定性方面的顯著性差異。前藥在GI腔中的穩(wěn)定性優(yōu)化還導(dǎo)致更好的體內(nèi)淋巴轉(zhuǎn)運趨勢。圖5和表10顯示化合物36(9.1％)或化合物38(12.1％)的淋巴轉(zhuǎn)運優(yōu)于化合物31(8.2％)；化合物37(12.6％)導(dǎo)致轉(zhuǎn)運高于化合物32(9.6％)；且化合物39(28.4％)導(dǎo)致轉(zhuǎn)運高于化合物34(22.1％)。
數(shù)據(jù)還證實包含直鏈連接基的前藥的單酸甘油酯(MG)中間體(例如化合物31和化合物32)在BPF中的降解相對快速?？赡苁沁@些MG中間體的不穩(wěn)定性因通過水解酶例如單?；视椭负鸵戎久阜纸鈱?dǎo)致。這因此降低了被吸收和因再酯化被利用的藥物綴合的MG-樣中間體的利用度。最終，這減少了藥物的淋巴轉(zhuǎn)運。防止MG中間體降解因此可以增強淋巴藥物轉(zhuǎn)運。這可以在結(jié)構(gòu)上(例如并入α或β甲基取代)或通過共同施用酶抑制劑實現(xiàn)，例如，圖24和表20中的數(shù)據(jù)顯示，通過與單?；视椭敢种苿?JZL184)和胰脂肪酶抑制劑(奧利司他)共同施用，化合物32的劑量的淋巴轉(zhuǎn)運從9.6％增加至18.8％(p<0.05)。
表20.給麻醉的腸系膜淋巴管插管的大鼠十二指腸內(nèi)輸注后總化合物的淋巴轉(zhuǎn)運(所施用劑量的％)(數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM)。
除非上下文中另有要求，否則貫穿于本說明書和如下權(quán)利要求書中的措詞“包含”和變化形式例如“含有”或“包括”應(yīng)當被理解為意指包含所述的整數(shù)或整數(shù)組或步驟組，但不排除任何其它整數(shù)或整數(shù)組。
本說明書中涉及的任何在先的出版物(或來源于它的信息)或已知的任何內(nèi)容不被視為且不應(yīng)當被視為承認或允許或任何形式的暗示在先出版物(或來源于它的信息)或已知內(nèi)容構(gòu)成本申請所致力的領(lǐng)域中的公知常識。
- 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊！