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一種抗體及其制備方法和應(yīng)用與流程

文檔序號:11931444閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種抗體,所述抗體通過將亞克隆細胞A(保藏編號:CCTCC C201544)或B(保藏編號:CCTCC C201545)分泌生產(chǎn)的。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體,其特征在于,所述抗體由亞克隆細胞A(保藏編號:CCTCC C201544)或B(保藏編號:CCTCC C201545)分泌生產(chǎn)后使用親和層析柱純化出純化獲得。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的抗體,其特征在于,所述亞克隆細胞A或B的篩選方法如下:

1)使用抗VEGF重組蛋白作為免疫原免疫小鼠,收集免疫前血清和免疫后血清進行初步ELISA抗體篩選,免疫后6個月按時收集血清進行檢測,同時保留所有血清樣品供檢測;

2)獲得陽性血清后,將選定的動物進行細胞融合;融合后的細胞放入96孔板進行培養(yǎng),對培養(yǎng)細胞上清再進行一次正向篩選和反向篩選;將篩選到的陽性克隆放入24孔板進行擴增培養(yǎng),對培養(yǎng)上清重新進行一次正向篩選和反向篩選,再對確定的陽性克隆進行一次亞克隆篩選,并對產(chǎn)生的抗體進行類型鑒別,挑選出IgG1或IgG2類型的陽性克隆;隨后進行抗體表位分析并確定不同抗體間的配對情況,并評估所有陽性克隆與抗原間的相對親和力,挑選親和力及配對情況最好的一對抗體進行亞克隆;

3)對挑選好的亞克隆母細胞進行進一步的不超過3代的亞克隆,并對每一個亞克隆培養(yǎng)細胞上清進行正向篩選和反向篩選;對于每個母細胞,培養(yǎng)出亞克隆細胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗體,其特征在于,所述抗VEGF重組蛋白為康柏西普或阿柏西普。

5.權(quán)利要求1或2所述的抗體在利用ELISA法檢測血清中蛋白藥物濃度中的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用,其特征在于,所述蛋白藥物為康柏西普或阿柏西普。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用,其特征在于,所述ELISA法為夾心ELISA法。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用,其特征在于所述ELISA法為夾心ELISA法,所述血清中蛋白藥物為游離性康柏西普或阿柏西普。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用,其特征在于所述ELISA法為夾心ELISA法,所述血清中蛋白藥物為與結(jié)合型康柏西普或結(jié)合型阿柏西普。

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