一種鐵皮石斛有效部位的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鐵皮石斛有效部位的制備方法，首先選用高濃度醇水系統(tǒng)提取鐵皮石斛中以聯芐為代表的脂溶性提取物，將該提取物以大孔樹脂法進行精制，可得到聯芐含量大于50％的總聯芐有效部位，其藥渣用水提醇沉法制備鐵皮石斛總多糖；兩步所得經干燥，混合均勻可得到鐵皮石斛總有效部位提取物。該工藝克服了傳統(tǒng)水煎、泡茶等方式對于以聯芐為代表的鐵皮石斛脂溶性活性成分提取率極低的缺點，大幅提高了鐵皮石斛有效成分的利用效率，并經藥理學抗氧化動物實驗和抗腫瘤細胞毒實驗，證明其活性比傳統(tǒng)水提物具有顯著提高，兼具高提取率、高活性的特點。
【專利說明】一種鐵皮石斛有效部位的制備方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥【技術領域】，具體是一種鐵皮石斛有效部位的制備方法。

【背景技術】
[0002] 鐵皮石斛是蘭科石斛屬多年生草本植物，其主要藥用部位是新鮮或干燥莖，主要 分布于安徽、浙江、廣西、湖南、云南、貴州等地，是傳統(tǒng)名貴中藥材。鐵皮石斛具有益胃生 津，滋陰清熱之功效，用于陰傷津虧，口干煩渴，胃陰不足，食少干嘔，病后虛熱不退，陰虛火 旺，骨蒸勞熱，目暗不明，筋骨痿軟等癥?！渡褶r本草經》將其列為上品，道家養(yǎng)生經典《道藏》 將它譽為"中華九大仙草"之首。
[0003] 鐵皮石斛中主要含有水溶性的多糖、脂溶性的聯芐類，還含有少量的水溶性的氨 基酸、水溶性的微量元素、水溶性的酚酸類，以及微量的偏脂溶性的石斛生物堿、脂溶性的 石斛倍半萜、偏脂溶性的芴酮類化合物、偏脂溶性的木脂素、水溶性的酚類、偏脂溶性的黃 酮、脂溶性的留體等，其中聯芐類具有抗腫瘤、抗氧化等重要藥理活性作用。傳統(tǒng)的鐵皮石 斛相關產品，包括各種小復方保健品、泡茶楓斗、多糖，其工藝均為水提或水提濃縮浸膏，這 種傳統(tǒng)的水提取工藝顯然不能將發(fā)揮抗腫瘤、抗氧化等重要藥理活性作用的聯芐類化合物 和其他脂溶性成分很好的提取出來，導致產品工藝粗放、療效差、資源浪費嚴重。


【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種鐵皮石斛有效部位的制備方法，大大提高了總多糖和 總聯芐類的提取率。
[0005] 為實現上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：
[0006] -種鐵皮石斛有效部位的制備方法，包括脂溶性總聯芐的提取和水溶性總多糖的 提取。
[0007] 作為本發(fā)明進一步的方案：所述脂溶性總聯芐的提取步驟為：將鐵皮石斛按固液 比加入8-12倍量65% -95 %的高濃度乙醇水溶液，加熱至70-KKTC，回流提取2-3次，每 次2_3h ;合并提取液，減壓濃縮得脂溶性提取物；以適量乙醇溶解該提取物，再加到大孔 樹脂柱上，取其25% -75 %的乙醇水溶液洗脫部分，濃縮得到總聯芐有效部位；所述水溶 性總多糖的提取步驟為：以脂溶性總聯芐的提取步驟所剩藥渣為原料，加入8-12倍量水， 70-100°C加熱回流提取2-3次，每次2-3h，濃縮至1/10-1/12的體積，加入4-6倍量95%的 乙醇進行醇沉，過濾，干燥粉碎得總多糖；將總聯芐有效部位與總多糖干燥粉均勻混合，得 到鐵皮石斛總有效部位提取物。
[0008] 作為本發(fā)明進一步的方案：所述脂溶性總聯芐的提取步驟為：將鐵皮石斛按固 液比加入12倍量80%的乙醇水溶液，加熱至92°C，回流提取2次，每次3h ;合并提取液， 減壓濃縮得脂溶性提取物；以適量乙醇溶解該提取物，再加到D101大孔樹脂柱上，取其 40% -60%的乙醇水溶液洗脫部分，濃縮得到總聯芐有效部位。
[0009] 與現有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：克服了傳統(tǒng)水煎、泡茶等方式對于以聯芐 為代表的鐵皮石斛脂溶性活性成分提取率極低的缺點，大幅提高了鐵皮石斛有效成分的利 用效率，并經藥理學抗氧化動物實驗和抗腫瘤細胞毒實驗，證明其活性比傳統(tǒng)水提物具有 顯著提高，兼具高提取率、高活性的特點。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0010] 圖1是鐵皮石斛脂溶性提取物的HPLC-DAD色譜圖，波長為280nm ;
[0011] 圖2是鐵皮石斛脂溶性提取物的HPLC-MS液相色譜圖，波長為280nm ;
[0012] 圖3是鐵皮石斛脂溶性提取物的HPLC-MS液相色譜圖中色譜峰1的一級質譜圖；
[0013] 圖4是鐵皮石斛脂溶性提取物的HPLC-MS液相色譜圖中色譜峰2的一級質譜圖；
[0014] 圖5是鐵皮石斛脂溶性提取物的HPLC-MS液相色譜圖中色譜峰3的一級質譜圖；
[0015] 圖6是鐵皮石斛脂溶性提取物的HPLC-MS液相色譜圖中色譜峰4的一級質譜圖；
[0016] 圖7是鐵皮石斛脂溶性提取物的HPLC-MS液相色譜圖中色譜峰5的一級質譜圖；
[0017] 圖8是鐵皮石斛脂溶性提取物的HPLC-MS液相色譜圖中色譜峰6的一級質譜圖；
[0018] 圖9是鐵皮石斛脂溶性提取物的HPLC-MS液相色譜圖中色譜峰7的一級質譜圖；
[0019] 圖10是鐵皮石斛脂溶性提取物的HPLC-MS液相色譜圖中色譜峰8的一級質譜圖。

【具體實施方式】
[0020] 下面將結合本發(fā)明實施例，對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述， 顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的 實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都 屬于本發(fā)明保護的范圍。
[0021] 本發(fā)明實施例中，一種鐵皮石斛有效部位的制備方法，包括脂溶性總聯芐的提取 和水溶性總多糖的提取。所述脂溶性總聯芐的提取步驟為：將鐵皮石斛按固液比加入8-12 倍量65%-95%的高濃度乙醇水溶液，加熱至70-1001：，回流提取2-3次，每次2-311 ;合并 提取液，減壓濃縮得脂溶性提取物；以適量乙醇溶解該提取物，再加到大孔樹脂柱上，取其 25% -75%的乙醇水溶液洗脫部分，濃縮得到總聯芐有效部位；所述水溶性總多糖的提取 步驟為：以脂溶性總聯芐的提取步驟所剩藥渣為原料，加入8-12倍量水，70-KKTC加熱回 流提取2-3次，每次2-3h，濃縮至1/10-1/12的體積，加入4-6倍量95%的乙醇進行醇沉， 過濾，干燥粉碎得總多糖；將總聯芐有效部位與總多糖干燥粉均勻混合，得到鐵皮石斛總有 效部位提取物。
[0022] 采用藥典標準方法醇沉-苯酚-硫酸顯色法測定總多糖提取率；以毛蘭素為對照 品，采用紫外分光光度法在280nm下測定總聯芐提取率。
[0023] 1、采用以下兩種方式檢測脂溶性提取物中總聯芐的含量
[0024] (1) HPLC-PAD法檢測脂溶性提取物中的聯芐類化合物
[0025] 方法：取出4ml提取液10000r離心lOmin，上清液蒸干后用甲醇復溶再轉移到自 動進樣瓶中，通過HPLC-PAD檢測。
[0026] 儀器：Waters 2695_2996Photodiode Array Detector 高效液相色譜儀。
[0027] 色譜條件：C0SM0SIL Packed 0DS 色譜柱（250_X4.6mm);柱溫 25°C ;檢測波長 280nm ;流動相為：甲醇-0. 1 %甲酸（20:80);流速為0. 8ml/min。
[0028] 結果：見附圖1和表1。圖1中的色譜峰列表及PAD紫外掃描結果，以及脂溶性提 取物和毛蘭素對照品的紫外數據：
[0029] 結論：結合聯芐UV特征吸收峰在280nm、220nm左右，說明該脂溶性提取物中含有 大量的具有聯芐UV特征吸收峰的化合物。
[0030] 表1PAD紫外掃描結果
[0031]

【權利要求】
1. 一種鐵皮石斛有效部位的制備方法，其特征在于，包括脂溶性總聯芐的提取和水溶 性總多糖的提取。
2. 根據權利要求1所述的鐵皮石斛有效部位的制備方法，其特征在于，所述脂溶性總 聯芐的提取步驟為：將鐵皮石斛按固液比加入8-12倍量65% -95%的高濃度乙醇水溶液， 加熱至70-KKTC，回流提取2-3次，每次2-3h ;合并提取液，減壓濃縮得脂溶性提取物；以 適量乙醇溶解該提取物，再加到大孔樹脂柱上，取其25% -75%的乙醇水溶液洗脫部分， 濃縮得到總聯芐有效部位；所述水溶性總多糖的提取步驟為：以脂溶性總聯芐的提取步 驟所剩藥渣為原料，加入8-12倍量水，70-100°C加熱回流提取2-3次，每次2-3h，濃縮至 1/10-1/12的體積，加入4-6倍量95%的乙醇進行醇沉，過濾，干燥粉碎得總多糖；將總聯芐 有效部位與總多糖干燥粉均勻混合，得到鐵皮石斛總有效部位提取物。
3. 根據權利要求2所述的鐵皮石斛有效部位的制備方法，其特征在于，所述脂溶性總 聯芐的提取步驟為：將鐵皮石斛按固液比加入12倍量80%的乙醇水溶液，加熱至92°C，回 流提取2次，每次3h ;合并提取液，減壓濃縮得脂溶性提取物；以適量乙醇溶解該提取物，再 加到D101大孔樹脂柱上，取其40% -60%的乙醇水溶液洗脫部分，濃縮得到總聯芐有效部 位。
【文檔編號】C08B37/00GK104258106SQ201410542193
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年10月14日 優(yōu)先權日:2014年10月14日
【發(fā)明者】陳賢良 申請人:寧波楓康生物科技有限公司