專利名稱：一種金錢菇三螺旋多糖的制備及其結(jié)構(gòu)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及多糖的制備和結(jié)構(gòu)鑒定領(lǐng)域，確切地說(shuō)是一種金錢菇三螺旋多糖的制備及其結(jié)構(gòu)。
背景技術(shù)：
多糖是由單糖分子通過(guò)糖苷鍵連接而成的高分子化合物。多糖具有多種生物活性，例如，抗氧化、抗腫瘤、降血糖、抗菌等。同時(shí)多糖的生物活性與其化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間結(jié)構(gòu)有著密切的聯(lián)系，因此研究其結(jié)構(gòu)能夠?yàn)檫M(jìn)一步研究其生物活性提供基礎(chǔ)和如提。金錢菇，是香菇的一種，因其外形像古時(shí)的金幣，因此取名金錢菇。它含有多種化學(xué)成分，具有調(diào)節(jié)人體新陳代謝、幫助消化、降低血壓、減少膽固醇、預(yù)防肝硬變、消除膽結(jié)石、防治佝僂病等功效。近年來(lái)，人們?cè)絹?lái)越關(guān)注金錢菇的藥用價(jià)值，開(kāi)始認(rèn)識(shí)到金錢菇多糖的生物活性。目前，水提殘?jiān)苯颖贿z棄，沒(méi)有得到很好地利用，而在水提殘?jiān)羞€含有活性物質(zhì)多糖，研究殘?jiān)械幕钚远嗵蔷哂兄匾囊饬x。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是在于提供一種從金錢菇三螺旋多糖的制備其結(jié)構(gòu)表征方法，通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn):
一種金錢菇三螺旋多糖的制備，其特征在于包括以下步驟:
(O 金錢菇水提殘?jiān)闹苽?將金錢菇粉碎過(guò)6(Γ100目篩，用乙醇脫色脫脂后，依次經(jīng)過(guò)25 ° C左右水提、90 ° C左右水提后得到的殘?jiān)礊樗釟堅(jiān)?br> (2)多糖混合提取液的配制 :配制5% NaOH與0.05% NaBH4混合溶液；
(3)提取過(guò)程:往水提殘?jiān)屑尤肓弦罕葹閘:3(Tl:40的多糖混合提取液，提取2^3 h，三層紗布過(guò)濾，提取兩次，離心，合并提取液；
(4)中和脫色:加入乙酸中和至中性后再用H2O2脫色；
(5)透析:使用透析袋進(jìn)行透析處理，然后通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至原體積的1/3 1/5 ；
(6)離心:在濃縮液中加入丙酮，靜置、離心，收集沉淀；
(7)多糖的獲得:沉淀用蒸餾水溶解后進(jìn)行透析、濃縮、冷凍干燥處理，得到多糖.所述的一種金錢菇三螺旋多糖的制備，其特征在于步驟(4)中所用乙酸的濃度為5%，H2O2的濃度為30%，脫色溫度為45 55 ° C，脫色時(shí)間為I 2 h。所述的一種金錢菇三螺旋多糖的制備，其特征在于步驟(5)中使用的透析袋的截留分子量為3500 Da，先用自來(lái)水流水透析3飛天，再改用蒸餾水透析3飛天。所述的一種金錢菇三螺旋多糖的制備，其特征在于步驟(6)中加入丙酮的量為濃縮液的I 1.5倍，靜置時(shí)間為24 36 h，離心轉(zhuǎn)速為8000 10000 r/min，離心時(shí)間為30 60min。所述的金錢菇三螺旋多糖的結(jié)構(gòu)，其特征在于:(1)三螺旋結(jié)構(gòu)的確定:采用黏度測(cè)定實(shí)驗(yàn)和剛果紅實(shí)驗(yàn)確定其螺旋結(jié)構(gòu)；
(2)結(jié)構(gòu)表征:用FT-1R、GC、NMR確定其一級(jí)結(jié)構(gòu)。所述的一種金錢菇三螺旋多糖的結(jié)構(gòu)，其特征在于步驟(I)中剛果紅實(shí)驗(yàn)中配置的多糖溶液濃度為2 mg/mL，剛果紅溶液濃度為80 Mmol/L和NaOH溶液濃度范圍為
0.00^0.50 mol/L，梯度為 0.05 mol/L，測(cè)量波長(zhǎng)范圍為 200 nm 800 nm。所述的一種金錢菇三螺旋多糖的結(jié)構(gòu)，其特征在于步驟(2)中FT-1R的波長(zhǎng)掃描范圍為400(T400 cnT1，采用KBr壓片法測(cè)試；GC處理方法為糖醇乙酰酯法；NMR中的溶劑為DMS0-1/6。本發(fā)明所提取的金錢菇三螺旋多糖為雜多糖，主要由葡萄糖組成，同時(shí)含有少量的甘露糖、半乳糖和木糖。糖鏈主鏈結(jié)構(gòu)為盧-(I — 3)-D-葡聚糖，帶有(1 — 6)連接支鏈。本發(fā)明具有如下優(yōu)·點(diǎn):(1)本發(fā)明用的是水提金錢菇之后的殘?jiān)?，可以持續(xù)利用，節(jié)省成本，擴(kuò)展了金錢菇的應(yīng)用領(lǐng)域；(2)本發(fā)明用堿提殘?jiān)械亩嗵牵瑪U(kuò)寬了糖的范圍，可以更加明確金錢菇的藥用價(jià)值；(3)本發(fā)明對(duì)提取的多糖進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，為更好地開(kāi)發(fā)利用金錢菇多糖提供了重要的理論支撐。


圖1為實(shí)施例剛果紅實(shí)驗(yàn)結(jié)果；
圖2為實(shí)施例金錢菇堿提多糖的紅外光譜；
圖3為實(shí)施例金錢菇多糖的氣相色譜圖4為實(shí)施例金錢菇堿提多糖的核磁共振圖。
具體實(shí)施例方式下面將進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容:
(1)金錢菇水提殘?jiān)闹苽?將金錢菇粉碎過(guò)60目篩，用乙醇脫色脫脂后，依次經(jīng)過(guò)25° C、90 ° C水提后得到的殘?jiān)此釟堅(jiān)?br> (2)多糖提取液的配制:配制含5%Na0H/0.05% NaBH4混合溶液；
(3)提取過(guò)程:往水提殘?jiān)屑尤肓弦罕葹?:40的混合提取液，提取2h，三層紗布過(guò)濾，提取兩次，離心，合并提取液；
(4)中和脫色:加入5%的乙酸中和至中性后再用30%的H2O2在50° C下脫色I(xiàn) h，直至顏色變?yōu)闊o(wú)色為止；
(5)透析:使用截留分子量為3500Da的透析袋進(jìn)行透析處理，先用自來(lái)水流水透析5天，再改用蒸餾水透析5天，然后通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至原體積的1/3 1/5 ；
(6)離心:在濃縮液中緩慢加入濃縮液f1.5倍體積的丙酮，靜置24 h后，離心并收集沉淀，其中離心轉(zhuǎn)速為10000 r/min,離心時(shí)間為30 min ；
(7)多糖樣品的獲得:沉淀用蒸餾水溶解后進(jìn)行透析、濃縮、冷凍干燥處理，得到多糖樣
品;
(8)三螺旋結(jié)構(gòu)的確定:通過(guò)黏度測(cè)定實(shí)驗(yàn)測(cè)得其特性粘度為1380cm3/g，剛果紅實(shí)驗(yàn)中，金錢菇多糖與剛果紅試劑形成的絡(luò)合物的最大吸收波長(zhǎng)相對(duì)于剛果紅試劑發(fā)生紅移，綜合表明該糖具有三螺旋結(jié)構(gòu)；(9)結(jié)構(gòu)表征:用FT-1R、GC、NMR確定其一級(jí)結(jié)構(gòu)，F(xiàn)T-1R的波長(zhǎng)掃描范圍為400(Γ400cnT1，采用KBr壓片法測(cè)試；GC處理方法為糖醇乙酰酯法；NMR中的溶劑為DMSO-式。紅外分析結(jié)果表明，在3380 cnT1處出現(xiàn)了一寬峰，是由于-OH的伸縮振動(dòng)；在2919 cnT1處出現(xiàn)的吸收峰，是由于C-H伸縮振動(dòng)引起的，這一吸收峰是糖類的特征吸收峰，在1057 cnT1處的吸收峰是吡喃糖苷的特征吸收峰，而在897 cnT1處的特征吸收峰，說(shuō)明該糖樣中含有β-D-葡聚糖。氣相色譜分析發(fā)現(xiàn)該糖主要由葡萄糖組成，同時(shí)還含有少量的甘露糖、半乳糖和木糖。核磁共振實(shí)驗(yàn)表明葡萄糖鏈上的C原子的化學(xué)位移為5 103.47 (Cl), δ74.169(C2), δ 86.754 (C3), δ 68.850 (C4)，δ 76.568 (C5)，δ 61.331 (C6), δ103.370 (Cl，), ^ 70.390 (C6，)，經(jīng)分析及與文獻(xiàn)對(duì)比表明制備的金錢菇多糖為主鏈結(jié)構(gòu)為β-(I — 3)-D-葡聚糖，并帶有(1 — 6)連接支鏈的葡聚糖。
權(quán)利要求
1.一種金錢菇三螺旋多糖的制備，其特征在于包括以下步驟: (1)金錢菇水提殘?jiān)闹苽?將金錢菇粉碎過(guò)6(Γιοο目篩，用乙醇脫色脫脂后，依次經(jīng)過(guò)25 ° C左右水提、90 ° C左右水提后得到的殘?jiān)礊樗釟堅(jiān)? (2)多糖混合提取液的配制:配制5%NaOH與0.05% NaBH4混合溶液； (3)提取過(guò)程:往水提殘?jiān)屑尤肓弦罕葹閘:3(Tl:40的多糖混合提取液，提取2 3h，三層紗布過(guò)濾，提取兩次，離心，合并提取液； (4)中和脫色:加入乙酸中和至中性后再用H2O2脫色； (5)透析:使用透析袋進(jìn)行透析處理，然后通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至原體積的1/3 1/5； (6)離心:在濃縮液中加入丙酮，靜置、離心，收集沉淀； (7)多糖的獲得:沉淀用蒸餾水溶解后進(jìn)行透析、濃縮、冷凍干燥處理，得到多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的 一種金錢菇三螺旋多糖的制備，其特征在于步驟(4)中所用乙酸的濃度為5%，H2O2的濃度為30%，脫色溫度為45 55 ° C，脫色時(shí)間為I 2 h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金錢菇三螺旋多糖的制備，其特征在于步驟(5)中使用的透析袋的截留分子量為3500 Da,先用自來(lái)水流水透析3飛天，再改用蒸餾水透析3飛天。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金錢菇三螺旋多糖的制備，其特征在于步驟(6)中加入丙酮的量為濃縮液的廣1.5倍，靜置時(shí)間為2Γ36 h，離心轉(zhuǎn)速為8000~l0000 r/min，離心時(shí)間為30 60 min。
5.—種金錢燕三螺旋多糖的結(jié)構(gòu)，其特征在于: (1)三螺旋結(jié)構(gòu)的確定:采用黏度測(cè)定實(shí)驗(yàn)和剛果紅實(shí)驗(yàn)確定其螺旋結(jié)構(gòu)； (2)結(jié)構(gòu)表征:用FT-1R、GC、NMR確定其一級(jí)結(jié)構(gòu)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種金錢菇三螺旋多糖的結(jié)構(gòu)，其特征在于:步驟(I)中剛果紅實(shí)驗(yàn)中配置的多糖溶液濃度為2 mg/mL，剛果紅溶液濃度為80 Mmol/L和NaOH溶液濃度范圍為0.0(Γ0.50 mol/L，梯度為0.05 mol/L，測(cè)量波長(zhǎng)范圍為200 nm 800 nm。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種金錢菇三螺旋多糖的結(jié)構(gòu)，其特征在于步驟(2)中FT-1R的波長(zhǎng)掃描范圍為4000~400 cnT1，采用KBr壓片法測(cè)試；GC處理方法為糖醇乙酰酯法；NMR中的溶劑為DMSO-式。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種金錢菇三螺旋多糖的制備及其結(jié)構(gòu)，提供了一種金錢菇多糖的制備方法和其結(jié)構(gòu)特征，擴(kuò)大了金錢菇的應(yīng)用范圍和利用價(jià)值，包括金錢菇材料的準(zhǔn)備、多糖提取液的配制、提取過(guò)程、中和脫色、透析、離心、純化、結(jié)構(gòu)鑒定等特征步驟。所提取的金錢菇三螺旋多糖為雜多糖，主要由葡萄糖組成，同時(shí)含有少量的甘露糖、半乳糖和木糖。糖鏈主鏈結(jié)構(gòu)為β-(1→3)-D-葡聚糖，帶有(1→6)連接支鏈。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)(1)本發(fā)明用的是水提金錢菇之后的殘?jiān)?，可以持續(xù)利用，節(jié)省成本，擴(kuò)展了金錢菇的應(yīng)用領(lǐng)域；(2)本發(fā)明用堿提殘?jiān)械亩嗵?，擴(kuò)寬了糖的范圍，可以更加明確金錢菇的藥用價(jià)值；(3)本發(fā)明對(duì)提取的多糖進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確定，為更好地開(kāi)發(fā)利用金錢菇多糖提供了重要的理論支撐。
文檔編號(hào)C08B37/00GK103145866SQ201310078768
公開(kāi)日2013年6月12日 申請(qǐng)日期2013年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月12日
發(fā)明者王軍輝, 余順火, 杜逸群, 劉詠, 姚玉飛, 許浩, 單亮 申請(qǐng)人:合肥工業(yè)大學(xué)