專利名稱：：樹形聚甘油硫酸酯和磺酸酯及其對炎性疾病的用途的制作方法樹形聚甘油硫酸酯和磺酸酯及其對炎性疾病的用途本發(fā)明涉及樹形聚甘油硫酸酯和磺酸酯的新穎的化合物種類及其制備和在治療疾病，特別是炎性疾病中的用途，并且涉及其作為選擇蛋白抑制劑和選擇蛋白指示劑的用途。樹形聚甘油硫酸酯和磺酸酯還適用于影像診斷學，特別是關于炎性疾病的影像i貪斷學。
背景技術：
：炎癥是對組織損傷和病原體侵入的基本應答，其中由于白細胞的抗微生物活性、分泌活性和吞噬活性，白細胞起著關鍵的作用。在所有形式的炎癥反應中均觀察到白細胞募集到血管內(nèi)皮并隨后遷移至周圍組織中。白細胞遷移至組織中是由白細胞粘附至血管壁上開始的。這允許白細胞在感染源中積聚并允許實現(xiàn)防雄卩反應。在白細胞和內(nèi)皮細胞上的多種血管細胞粘附分子介導和調(diào)控血細胞在血管壁上的粘附。該過程是以連續(xù)相連的分子相互作用的級聯(lián)反應方式發(fā)生。首先，選擇蛋白，即凝集素樣粘附分子家族，介導白細胞在內(nèi)皮表面上的"?？?和"滾動"。這導致白細胞的減速并允許與內(nèi)皮表面上的諸如趨化因子的信號分子接觸。這些信號分子刺激白細胞表面上的整聯(lián)蛋白活化，然后該整聯(lián)蛋白又介導這些細胞在內(nèi)皮表面上的有效結合。免疫球蛋白(Ig)超家族的成員用作該整聯(lián)蛋白的配體。此時穩(wěn)定粘附的白細胞能夠以定向方式移動并能夠活躍地穿過內(nèi)皮細胞層。如前所述，通過(三種)選擇蛋白及其配體間的瞬時受體-配體相互作用來介導內(nèi)皮上白細胞的最初接觸和滾動[l]。隨后通過活化的整聯(lián)蛋白與免疫球蛋白(Ig)超家族的粘附分子之間的相互作用保證了白細胞與內(nèi)皮的緊密接觸[2]。除了所需防御作用和組織損傷的修復外，來自血流的白細胞的未受控制的遷移還能夠是病理相關的并能夠?qū)е陆M織損傷[3]。內(nèi)皮細胞粘附分子在急性和慢性炎性過程中的普遍存在使其成為診斷和治療的合適的靶標結構[綜述參見4]。選擇蛋白是結合碳水化合物的粘附分子，其有助于增強白細胞在免疫防御過程中粘附至發(fā)炎組織的血管內(nèi)皮上。根據(jù)其細胞來源，選擇蛋白可分為L-選擇蛋白(白細胞)、E-選擇蛋白(內(nèi)皮)和P-選擇蛋白(血小板和內(nèi)皮)。由于其蛋白結構及其特定分子結合特性，選擇蛋白引起白細胞粘附；在相應配體的臨時結合后，白細胞沿著血管壁邊從流暢的血流中經(jīng)歷了"滾動減速"。然后，其它粘附分子介導白細胞緊密結合至內(nèi)皮上及其為了完成其防御功能的外滲。在發(fā)現(xiàn)選擇蛋白后不久并在90年代初期闡明其結構之后，選擇蛋白在醫(yī)藥研究領域成為引人注目的靶標結構。除了其在免疫應答中的生理學功能之外，在病理過程中還觀察到選擇蛋白表達的失調(diào)，所述病理過程例如類風濕性關節(jié)炎、哞喘、糖尿病和缺血/再灌注，以及在轉(zhuǎn)移性癌細胞的組織侵入期間觀察到它的存在。這激發(fā)了對抑制選擇蛋白的化合物進行深入細致的探索。E-選擇蛋白和P-選擇蛋白以及L-選擇蛋白配體以炎癥依賴性方式在微血管內(nèi)皮上表達，L-選擇蛋白在白細胞上出現(xiàn)[l，2]。對于所報導的選擇蛋白，僅有幾種高度親和的配體是已知的。大體上，它們具有粘蛋白樣結構，例如長延伸的糖蛋白，該結構具有許多個作為實際結合表位的碳水化合物側鏈，該側鏈以糖苷形式連接在所述結構的富絲氨酸或富蘇氨酸的蛋白骨架上。通過受體與高柔韌性配體的結合物的快速形成和解離，在脈管的剪切流中介導細胞滾動。結合所必需的碳水化合物表位是帶有特異性連接的海藻糖和末端的唾液酸(N-乙?；窠?jīng)氨酸)的、基于N-乙酰基乳糖胺的寡糖。四糖唾液酸化的LewisX(sLeX)是顯著相關的結合表位。sLeX用作結構-功能關系的標準配體以表征結合特性以及探求選擇蛋白抑制劑。很久以來，已知sLeX是選擇蛋白的重要結合伙伴以及多價是靶向阻斷白細胞粘附的關鍵，這些研究成果是開發(fā)多種選擇蛋白抑制劑的基礎[綜述參見5]。到目前為止，盡管可以得到高親和的抑制劑，但靶標選拷，蛋白還未導致開發(fā)出市場準備完畢的治療方法[5]。目前，通過使用炎性細胞因子TNFce的阻斷劑(英夫利西單抗(infliximab),依那西普(etanercept)[6,7])，實現(xiàn)了類風濕性關節(jié)炎和牛皮癬情況下的治療性干預。此外，依法利珠單抗(efalizumab)[7]，抗-整聯(lián)蛋白抗體，在市場上出售，其被批準用于全身治療牛皮癬。在臨床試驗中測試了更多的化合物，例如全-選擇蛋白拮抗劑雙莫昔氨莫司(bimosiamose)(l,6-雙[3-(3-羧曱基苯基)-4-(2-o;-D-吡喃甘露糖基氧基)苯基]己烷)，其屬于小分子藥物類，并且是具有糖苷結構的抑制選擇蛋白的化合物，其具有比sLeX基本上更高的對選擇蛋白的親和性(試驗由RevotarAG，He皿igsdorf進行)。雙莫昔氨莫司被期望用于哮喘、牛皮癬、特應性皮炎和再灌注損傷[8]。已經(jīng)描述了帶有硫酸化的sLeX結構的線性新含糖聚合物(neoglycopolymer)且其能夠獲得在低納米摩爾范圍的ICso值[5,9],還描述了硫酸化的樹形聚環(huán)氧乙烷(PEO)含糖聚合物[IO]。因此，本發(fā)明的一目的是提供易于合成并且適用于治療疾病，特別是治療炎性疾病的化合物和化合物類型。通過提供樹形聚甘油磺酸酯，本發(fā)明解決了所述目的。本發(fā)明的樹形聚甘油磺酸酯的特征在于a)高分子聚甘油核，其由在多官能團的起動分子(startermolecule)上的具有通式(RO-CH2)2CH-OR的甘油重復單元組成，所述起動分子是具有1至1,000個OH基團的多羥基化合物，優(yōu)選1至4個OH基團，其中！^H或更多的甘油單元，所述核的支化度為0至100%,優(yōu)選60%,且其平均分子量為100g/mo1至1,000,000g/mo1，優(yōu)選l，OOOg/mo1至20,000g/mo1，b)用-S03H或-S03Na基團取代甘油單元的一個或多個OH基團或在甘油單元的一個或多個OH基團上連接低聚物間隔基，所述低聚物間隔基的通式為-(CH2)n-或-[(CH2)m-0)]n-,其中m為1至100并且n為1至50,000,且在其上結合-S03H或-S03Na基團，因此得到1%至100%的磺化度，優(yōu)選1%至30%，和c)分子量為110g/mol至1,500,000g/mol，優(yōu)選1,100g/mol至30,00012g/mol。通過在縮水甘油的開環(huán)聚合期間，分別使用具有(多)官能團的起動分子或引發(fā)劑制備所述高分子聚甘油核。起動分子或引發(fā)劑分別為具有1至1000個OH基團的多羥基化合物，優(yōu)選1至100個OH基團且更優(yōu)選1至4個OH基團。起動分子的通式為R-(OH)x，其中R能夠是在陰離子聚合條件下穩(wěn)定的任何分子，且x是1至1000,優(yōu)選1至100且更優(yōu)選1至4。優(yōu)選地，所用的引發(fā)劑是三官能團引發(fā)劑或四官能團引發(fā)劑，例如l,l,l-三羥曱基丙烷(TMP)作為優(yōu)選的三官能團引發(fā)劑或季戊四醇(PE)作為優(yōu)選的四官能團引發(fā)劑。起動分子或引發(fā)劑能夠分別帶有更多的雜官能團，例如特別是SH基團、NH2基團。在具體實施方案中，所述起動分子含有OH基團和/或更多的雜官能團(如SH、NH2)。本領域技術人員已知更多合適的引發(fā)劑。取決于對引發(fā)劑和聚合條件的選擇，所述高分子聚甘油核達到一定的支化度和具有窄的多分散性的可任意調(diào)整的分子量。根據(jù)本發(fā)明，使用支化度為0至100%的高分子聚甘油核。優(yōu)選地，使用高支化的結構，優(yōu)選30%至80%的支化度，特別優(yōu)選60%的支化度。本發(fā)明的高分子聚甘油核的平均分子量優(yōu)選100g/mo1至1,000,000g/mo1,更優(yōu)選500g/mo1至100,000g/mo1,其中特別優(yōu)選1,000g/mo1至20,000g/mo1。將本發(fā)明的高分子聚甘油核進行磺化。優(yōu)選地，在催化量的諸如氫氧化鉀的堿存在下使用乙烯基磺酸的鈉鹽作為磺化試劑。所達到的磺化度優(yōu)選1%至100%,特別優(yōu)選10%至30%，更特別優(yōu)選30%至100%。本發(fā)明的"磺化度，，意指高分子聚甘油核的甘油單元的被官能化的OH基團的百分比。官能化或者是由用-S03H或-S03Na基團取代甘油單元的一個或多個OH基團而引起的，或者是由在甘油單元的一個或多個OH基團上連接低聚物間隔基而引起的。所述低聚物間隔基具有以下通式-(CH2)n-或-[(CH2)m-0)]n-13其中m為1至100，優(yōu)選1至50，更優(yōu)選1至10且還更優(yōu)選2，并且n為1至50,000,優(yōu)選1至5,000,更優(yōu)選1至100并且在其上結合-S03H或-S03Na基團。低聚物間隔基例如是低聚乙二醇(OEG)鏈、聚乙二醇(PEG)鏈、脂肪族碳水化合物鏈或其它線性聚醚。取決于對本發(fā)明的高分子聚甘油核和磺化條件、即磺化度的選擇，本發(fā)明的所述樹形聚甘油磺酸酯的分子量優(yōu)選為110g/mol至1,500,000g/mol，更優(yōu)選為600g/mol至150,000g/mol且特別優(yōu)選1,100g/mol至30,000g/mol。本發(fā)明的樹形聚甘油磺酸酯的特別優(yōu)選的實施方案具有a)高分子聚甘油核，其平均分子量(Mn)為2,500g/mol至20,000g/mol且支化度為60%,該支化度對應于樹形支化度，和b)磺化度為10%至30%，這是通過用乙烯基磺酸的鈉鹽進行磺化而獲得。本發(fā)明的樹形聚甘油磺酸酯的特別優(yōu)選的實施方案具有平均分子量為5,000g/mol的高分子聚甘油核、4%的磺化度和5,200g/mol的分子量，例如實施例2中的化合物3b(參見表2)。本發(fā)明的樹形聚甘油磺酸酯的又一特別優(yōu)選的實施方案具有平均分子量為20,000g/mol的高分子聚甘油核、8%的磺化度和21,800g/mol的分子量，例如實施例2中的化合物3d(參見表2)。本發(fā)明還通過提供樹形聚甘油硫酸酯解決所述目的。本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯的特征在于a)高分子聚甘油核，其由在多官能團的起動分子上的具有通式(RO-CH2)2CH-OR的甘油重復單元組成，所述起動分子是具有1至1,000個OH基團的多羥基化合物，優(yōu)選1至4個OH基團，其中R二H或更多的甘油單元，所述核的支化度為0至100%,優(yōu)選60%,且其平均分子量為100g/mol至1,000,000g/mol，優(yōu)選1,000g/mol至20,000g/mol，更優(yōu)選2,000g/mol至7,500g/mol,b)用-OS03H或-OS03Na基團取代甘油單元的一個或多個OH基團或在甘油單元的一個或多個OH基團上連接低聚物間隔基，所述低聚物間隔基的通式為-(CH2)n-或-[(CH2)m-0)]n-,其中Hl為1至100并且n為1至50,000，且在其上結合-OS03H或-OS03Na基團，因此得到1%至100%的硫酸化度，以及c)分子量為200g/mol至5,000,000g/mol，優(yōu)選2,000g/mol至50,000g/mol，更優(yōu)選5,000g/mol至13,500g/mol。通過在縮水甘油的開環(huán)聚合期間，分別使用具有(多)官能團的起動分子或引發(fā)劑制備所述高分子聚甘油核。起動分子或引發(fā)劑分別為具有1至l，OOO個OH基團的多羥基化合物，優(yōu)選1至100個OH基團且更優(yōu)選1至4個OH基團。起動分子的通式為R-(OH)x，其中R能夠是在陰離子聚合條件下穩(wěn)定的任何分子，x是1至1,000，優(yōu)選1至100且更優(yōu)選1至4。優(yōu)選地，所用的引發(fā)劑是三官能團引發(fā)劑或四官能團引發(fā)劑，例如l,l,l-三羥甲基丙烷(TMP)作為優(yōu)選的三官能團引發(fā)劑或季戊四醇(PE)作為優(yōu)選的四官能團引發(fā)劑。起動分子或引發(fā)劑能夠分別帶有更多的雜官能團，例如特別是SH基團、NH2基團。在具體實施方案中，所述起動分子含有OH基團和/或更多的雜官能團(如SH、NH2)。本領域技術人員已知更多合適的引發(fā)劑。取決于對引發(fā)劑和聚合條件的選擇，所述高分子聚甘油核達到一定的支化度和具有窄的多分散性的可任意調(diào)整的分子量。根據(jù)本發(fā)明，使用支化度為0至100%的高分子聚甘油核。優(yōu)選地，使用高支化的結構，優(yōu)選30%至80%的支化度，特別優(yōu)選60%的支化度。本發(fā)明的高分子聚甘油核的平均分子量優(yōu)選100g/mol至l，OOO,OOOg/mol，更優(yōu)選500g/mol至100,000g/mol,其中特別優(yōu)選1,000g/mol至20,000g/mol以及2,000g/mol至7,500g/mol。將本發(fā)明的高分子聚甘油核進行硫酸化。優(yōu)選地，使用S03和吡啶的配合物作為硫酸化試劑，且其濃度為與所述高分子聚甘油核的OH基團等摩爾。通過S03與聚甘油的OH基團的比例能夠調(diào)節(jié)所得官能化，15即硫酸化為0至100%。所達到的硫酸化度優(yōu)選1%至100%,特別優(yōu)選70%至95%，更特別優(yōu)選75%至92%。本發(fā)明的"硫酸化度"意指高分子聚甘油核的甘油單元的被官能化的OH基團的百分比。官能化或者是由用-OS03H或-OS03Na基團取代甘油單元的一個或多個OH基團而引起的，或者是由在甘油單元的一個或多個OH基團上連接低聚物間隔基而引起的。所述低聚物間隔基具有以下通式_(CH2)n-或-[(CH2)m-0)]n-其中m為1至100，優(yōu)選1至50,更優(yōu)選1至10且還更優(yōu)選2，并且n為1至50,000，優(yōu)選1至5，000,更優(yōu)選1至100并且在其上結合-OS03H或-OS03Na基團。低聚物間隔基例如是低聚乙二醇(OEG)鏈、聚乙二醇(PEG)鏈、脂肪族碳水化合物鏈或其它線性聚醚。取決于對本發(fā)明的高分子聚甘油核和硫酸化條件、即硫酸化度的選擇，本發(fā)明的所述樹形聚甘油硫酸酯的分子量優(yōu)選200g/mol至5,000,000g/mol,更優(yōu)選2,000g/mol至50,000g/mol且特別優(yōu)選5,000g/mol至13,500，特別優(yōu)選5,500g/mol或11,000g/mol或21,500g/mol或41,000g/mol或6,800g/mol或8,600g/mol或12,300g/mol。本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯的特別優(yōu)選的實施方案具有平均分子量為2,500g/mol的高分子聚甘油核、85%的硫酸化度和5,500g/mol的分子量，例如分別為實施例1中的化合物2a(參見表l)或?qū)嵤├?中的dPGS2500/85化合物(參見表3)。本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯的另一特別優(yōu)選的實施方案具有平均分子量為5,000g/mol的高分子聚甘油核、79%的硫酸化度和10,500g/mol的分子量，例如實施例1中的化合物2b(參見表1)。本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯的另一特別優(yōu)選的實施方案具有平均分子量為2,500g/mol的高分子聚甘油核、92%的石克酸化度和6，800g/mol的分子量，例如實施例4中的化合物dPGS2500/92(參見表3)。本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯的另一特別優(yōu)選的實施方案具有平均分子量為4,000g/mol的高分子聚甘油核、84%的硫酸化度和8，600g/mol的分子量，例如實施例4中的化合物dPGS4000/84(參見表3)。本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯的另一特別優(yōu)選的實施方案具有平均分子量為6,000g/mol的高分子聚甘油核、76%的硫酸化度和12,300g/mol的分子量，例如實施例4中的化合物dPGS6000〃6(參見表3)。通過使用本發(fā)明的樹形聚甘油磺酸酯和/或本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯作為用于治療疾病的藥物進一步解決了所述目的。本發(fā)明的化合物能夠例如在用作藥劑時以藥物組合物的形式提供，所述藥物組合物包含一種或多種本發(fā)明的化合物以及藥物可接受的載體。優(yōu)選地，這些藥物組合物具有單位劑型，例如片劑、丸劑、膠嚢劑、粉劑、顆粒劑、無菌腸胃外溶液劑或混懸劑。本領域技術人員已知更多的劑型。藥劑或藥物組合物包含治療有效量的藥物或若干藥物，即治療有效量的一種或多種本發(fā)明的化合物。技術人員能夠根據(jù)待治療的疾病并考慮患者的狀態(tài)而確定治療有效量。藥劑或藥物組合物能夠適當?shù)匕s5mg至l，OOOmg、優(yōu)選約10mg至500mg的本發(fā)明的化合物。取決于所需的應用途徑(例如口服、腸胃外給藥)，藥物可接受的載體和/或賦形劑能夠具有多種形式。合適的載體和賦形劑是本領域公知的并且能夠由本領域技術人員選擇。載體包括惰性的藥物賦形劑，例如粘合劑、助懸劑、潤滑劑、矯味劑、增甜劑、防腐劑、著色劑和包衣劑。能夠通過使用本發(fā)明的樹形聚甘油磺酸酯和/或本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯而治療的疾病優(yōu)選炎性疾病。對于治療性干預，考慮全部的炎癥過程，其中白細胞從血流中的遷移是病理上相關的并且導致組織損傷。除了慢性炎性疾病外，例如類風濕性關節(jié)炎、哮喘和牛皮癬，還可以在缺血再灌注損傷或移植排斥的情況下使用本發(fā)明的樹形聚甘油磺酸酯和/或本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯。因此，本發(fā)明的化合物優(yōu)選用于治療慢性炎性疾病，特別是類風濕性關節(jié)炎、哞喘和牛皮癬，以及用于治療缺血再灌注損傷或移植排斥。更優(yōu)選地，所述炎性疾病為這樣的疾病，其中選擇蛋白介導的白細胞粘附是失調(diào)的。本發(fā)明的化合物的抗炎作用能夠，例如，歸因于由其介導的白細胞游出的減少。因此，大大降低了更多的免疫細胞被炎癥部位處分泌的細胞因子所活化(更詳細的細節(jié)參見實施例)。在慢性炎癥過程中，組織損傷后出現(xiàn)了纖維化。從而，兩種細胞因子起重要作用IFlSPy和TNFa。IFN^由特定群體的白細胞(T細胞和NK細胞)分泌并導致巨噬細胞的活化，其又1)產(chǎn)生水解酶及活性的氧和氮物質(zhì)，這些導致鄰近組織的^^壞，以及2)釋放TNFa，TNFa導致在鄰近內(nèi)皮上細胞粘附分子的表達增加以及白細胞的活化。因此，在炎性區(qū)域觀察到白細胞的募集增加。通過使用本發(fā)明的樹形聚甘油磺酸酯和/或本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯作為選擇蛋白抑制劑進一步解決了所述目的。因此，優(yōu)選地用作L-選擇蛋白和/或P-選擇蛋白的抑制劑。本發(fā)明的樹形聚甘油磺酸酯和/或本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯以高親和力(IQo分別為10nM或40nM，參見實施例3)結合L-選擇蛋白和P-選擇蛋白并因此阻止與其配體的相互作用。白細胞-內(nèi)皮的接觸減少了并且因此抑制了白細胞向炎癥部位增加的遷移。因此，本發(fā)明的樹形聚甘油磺酸酯和/或本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯適于抑制選擇蛋白介導的白細胞粘附。通過使用本發(fā)明的樹形聚甘油磺酸酯和/或本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯作為選擇蛋白指示劑進一步解決了所述目的。本發(fā)明的"選擇蛋白指示劑"特異性結合多種選擇蛋白或特異性結合選擇蛋白之一，諸如L-選擇蛋白和/或P-選擇蛋白，并因此能夠特別在體外、在細胞、組織、器官、組織切片中，但還是特別在體內(nèi)靶向、定位和/或顯現(xiàn)選擇蛋白。通過應用本專利申請的教導，技術人員能夠?qū)⒈景l(fā)明的化合物用作選擇蛋白指示劑。為了該目的，本發(fā)明的化合物優(yōu)選地被負載有信號分子或使信號分子與本發(fā)明化合物結合。優(yōu)選的信號分子是用諸如1241、1251、或"F的放射性同位素標記的分子；用染料標記的分子，特別是用諸如氨曱基香豆素、熒光素、花青、若丹明及其衍生物的熒光團或其它生色團標記的分子。信號分子還能夠是熒光供體或指示劑以及熒光受體或猝滅劑，其能夠特別用作每一熒光供體/指示劑和熒光受體/摔滅劑對(即，用作FRET對)。目前為止，通過可用的影像臨床診斷方法解決炎癥源的定位和表征并不令人滿意。對于采用本發(fā)明的樹形聚甘油磺酸酯和/或本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯特異性靶向炎癥區(qū)域，這些化合物被負載有信號供體(放射性同位素、NIR染料、磁鐵礦)并用于顯影。因此，必要條件是在炎癥區(qū)域的特異性結合(L-選擇蛋白和P-選擇蛋白)和信號積聚。因此，本發(fā)明的化合物優(yōu)選用于炎性疾病的診斷。從而，在炎性區(qū)域發(fā)生選擇蛋白的靶向。本發(fā)明的樹形聚甘油磺酸酯和/或本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯還用作肝素類似物并因此如同肝素一樣能夠特異性結合某些趨化因子。這些趨化因子是促炎細胞因子，特別是TNFa、IL-1、IL-6以及IL-8和MIP-1/3。本發(fā)明的樹形聚甘油磺酸酯和/或本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯對諸如INP/或TNFa的趨化因子的抑制性結合阻止了與趨化因子的受體的相互作用，這導致降低的組織損傷和白細胞外滲。由于其與諸如選捧蛋白、趨化因子、凝血因子、特別是L-選擇蛋白和P-選擇蛋白等蛋白的特異性相互作用，本發(fā)明的化合物優(yōu)選用于更多的體外應用-本發(fā)明的樹形聚甘油磺酸酯和/或本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯(類似于市售的肝素瓊脂糖凝膠)被固定在基質(zhì)上。取決于用途，例如所用的分離技術，優(yōu)選的用于固定的基質(zhì)或表面分別為無機的材料以及聚合的天然材料和聚合的合成材料。實例有基于硅的表面(例如玻璃、硅石)和多種官能化的和非官能化的聚合物(例如葡聚糖、瓊脂糖、瓊脂糖凝膠以及合成的親水性聚合物)。用于固定的基質(zhì)或表面還可分別選自無機氧化物表面、能磁化的或不能磁化的表面、含硅的表面、玻璃表面、二氧化硅膜、硅土、粘土和技術人員公知的更多的表面。用于固定的基質(zhì)或表面還能夠分別為顆粒、膜、基質(zhì)或固相。-本發(fā)明的化合物，優(yōu)選被固定的，用于配合物溶液或生物樣品(例如體液；血漿；全血；血清；更多源于血的樣品；細胞懸浮液；細>^包培品中純化特定蛋白(例如L-選擇蛋白、P-選擇蛋白、趨化因子、凝血因子)。-本發(fā)明的樹形聚甘油磺酸酯和/或本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯用作捕捉分子，例如在ELISA中。所述樹形聚甘油硫酸酯和磺酸酯具有很強的抗炎潛力，因為其結合了所報導的抑制劑的優(yōu)點-容易合成(成本效益)-生物相容性(與硫酸乙酰肝素/肝素高度相似)-對L-選擇蛋白和P-選擇蛋白具有高親和性(IC5o分別10nM或40nM,體外測量)。在Biacore中體外分析顯示，取決于其大小，其活性(結合L-選擇蛋白和P-選擇蛋白)增強。-與抑制白細胞活化的趨化因子結合。還公開了本發(fā)明的樹形聚甘油硫酸酯作為白細胞-內(nèi)皮相互作用的抑制劑，其中L-選擇蛋白和P-選擇蛋白配體的結構被簡化為硫酸酯基團并與聚甘油骨架連接。在接觸性皮炎小鼠模型中安全地使用了所述化合物并抑制了免疫應答(還參見實施例和附圖)。通過以下附圖和實施例對本發(fā)明進行說明。圖1.#多菜#油碗凝的合成才黃。圖2.#承,#油橫凝游的合成才黃。圖3.摩遂的#形,#油碗^游#丄-遂脊f^潔謬潛合的浙劍斧^。L-選擇蛋白與其合成的配體(sLeX-酪氨酸硫酸鹽)的結合被設定為100%(對照值)。聚甘油核的平均分子量[g/mol]:2a，2500;2c,10,000;2d，20,000。全部聚甘油硫酸酯的硫酸化度為約80%(還參見表1)。20圖4.#多,#滋碗凝游2c對遂舉蛋冷的^爭浙賴^^。與合成的配體(sLeX-酪氨酸硫酸鹽)的結合被分別設定為100%(對照值)。圖5.#多菜#滋餘蘭參2</#丄-遞舉*冷豕沐潛合的磁凝化,^^戰(zhàn)爭押孝沐見以10nM的濃度使用該衍生物。L-選擇蛋白與其合成的配體(sLeX-酪氨酸硫酸鹽)的結合被設定為100%(對照值)。圖6.謝多,伊油^;^游的,辦「J尸GS」。圖7.不###^"勿應,秀的增遂。增殖試—瞼阿爾瑪藍染料(AlamarBlue)。與潑尼松龍相對照，T細胞的存活力未受不同濃度的dPGS的影響。圖8.呆^^A謬尋P5MCi恥敏源亡。A:PBMC+dPGS(+/-CD3刺激)B:PBMC+dPGS(+/-LPS刺激)細月包凋亡4全測AnnexinV讀出圖9.dPOS在^^炎炎細應fDC)尹釆^^yriw^為、必。鼠樹突狀細胞+dPGS(+/-LPS)檢測ELISA。圖10.在入r勿應^^貞示A^A77VFa為、必的"f豫。PBMC+/-抗CD3珠+dPGS檢測ELISA。圖11.WOS的遂#"蛋冷潛合#并^使用聚合物核的Mn為4,000g/mol且硫酸化度為84%的dPGS(dPGS4000/85)。圖12.遞舉蛋冷的錄合該*^^多,#滋的磁^化。使用聚合物核的Mn為6,000g/mol的dPGS(dPG6000)。圖13.c/尸as對遂舉蛋^的潛合該^f裙的義小和磁^化卓。圖14.^,惑^:tm4-資爭的^^^孩廢^^:^漠型,was尸f瓶水，多成。dPGS被注入小鼠的頸褶。21圖15.在,慈^rM4-謬,的賞^^凝廢^發(fā)^^d尸(^攀瓶在細應的if丸dPGS被注入小鼠的頸褶。圖16.^亞度^7M4-謬尋的f乂^凝y^嫂^:^^^型^犖瓶水靡成。圖17.在亞度'^:rM4-謬爭的fj^接廯^乂j^,型^^pas餘ji:在勿/s和替尹^在紐應的處河。A:粒細胞(過氧化物酶活性)B:嗜中性粒細胞(彈性蛋白酶活性)，歸一化至介質(zhì)(=0)圖18.Ji5(^犖瓶^癥命位的/丄-2的求產(chǎn)。亞慢性TMA激發(fā)，耳勻漿(earhomogenate)的ELISA。實施例實施例1:樹形聚甘油硫酸酯的合成基本上按照[11]中所述進行樹形聚甘油硫酸酯的合成辦從Fluka(Buchs,瑞士)購買S(V吡啶配合物。該試劑不經(jīng)過進一步純化就使用。在進一步使用前，溶劑N，N-二曱基曱酰胺(DMF,p.a.質(zhì)量，購自Roth,卡爾斯魯厄，德國)用CaH2干燥并經(jīng)4A分子篩儲存。在51燒杯中，在蒸餾水中用再生纖維素管(SpectraPore6/Roth)進行滲析，其中所述溶劑在48小時內(nèi)更換3次。7.葛襯財絲聚甘油l是具有樹形(樹樣的)分支的、易于獲得的、明確定義的聚合物，其通過縮水甘油的受控陰離子聚合而得到[12-14]。1的支化度(60%)低于理想的甘油樹枝狀聚合物(100%)[15]。然而，物理化學特性是類似的[16]。通過單體和引發(fā)劑的比例能夠容易地調(diào)節(jié)分子量(1，000-30,000g/mol)和聚合度(DP),并且得到窄的多分散性(通常<2.0)[14]。由于脂肪族聚醚的生物相容特性，大體上具有相似特性的多羥基化合物(例如多糖類、聚(乙二醇)類)被預期為聚甘油[13]。此外，詳細研究了低聚甘油(2-10個單體單元)的毒理學特性并證明其可作為營養(yǎng)添加劑和藥理學添加劑[16，17]。因此，樹形聚甘油l應當適于作為藥物的高功能載體并且適于產(chǎn)生樹形聚陰離子(聚硫酸酯、聚羧酸酯、聚磺酸酯)。此外，如前所述[14]，對于la-c的情況，使用l,l,l-三(羥曱基)丙烷(TMP)作為引發(fā)劑來制備聚甘油(PG)la(Mn=2,500g/mol，Mw/Mn=1.6)、lb(Mn=5,000g/mol，Mw/Mn=1.6)、lc(Mn=10,000g/mol,Mw/Mn=1.8)，而對于Id的情況則使用季戊四醇(PE)作為引發(fā)劑來制備聚甘油(PG)ld(Mn=20,000g/mol,Mw/Mn<2.0)。2.俯在BrukerARX300光譜儀中，在濃度為100mg/ml的D20中記錄&NMR和13CNMR圖鐠，分別在300MH或75.4MH中操作。在BrukerIFS88FT-IR中使用KBr板進行IR測量。使用元素分析測定化合物2a-d的硫酸化度(ds)(表1)。3.^妒磁碗虔凝時合成'通過修改Alban等人描述的已有的硫酸化]8-l，3-葡聚糖的方法[18],使用不同分子量的樹形聚甘油(la-d)作為核聚合物以及S(V吡啶配合物作為硫酸化試劑在作為溶劑的干燥DMF中進行聚甘油硫酸酯的合成(參見方案1)。S(V吡啶配合物在DMF中的濃度及其摩爾比(S03每OH基團)在所有情況下均保持恒定。合成方案參見圖1。在60。C、氬氣氣氛下，將10.75g(67.5mmol)S(V吡啶配合物的67.5mlDMF溶液在4小時內(nèi)逐滴加入攪拌中的5.0g聚甘油(la、lb、lc、Id)(67.5mmolOH基團)的25mlDMF溶液。將該反應混合物在60°C下再攪拌2小時并在室溫下攪拌18小時后，加入50ml蒸餾水。立即將1MNaOH加入該水溶液中直至pH達到11。真空濃縮得到粗產(chǎn)物，通過在水中滲析將其進一步純化。蒸發(fā)溶劑后得到聚甘油硫酸酯2a-d淡黃色固體，將其用P202進一步干燥。在蒸餾水中滲析后，以良好的收率(50-75%)且高純度(根據(jù)^NMR，〉98。/。)獲得聚甘油硫酸酯(2a-d)。產(chǎn)量7.49g(2a);8.96g(2b);7.01g(2c);6.86g(2d)。&NMR(300MHz,D20):S(ppm)0.98[t，3H,23Ci/3CH2C(CH20)3-PG-OS03Na],1.48[m,2H，CH3C//2C-(CH20)3-PG-OS03Na]，3.40-4.00[m,CH3CH2C(Ci/20)rPG-OS03Na]，4.19，4.33,4.38[PG-OSOsNa],4.72[PG-OCH2CH(OS03Na)C//2OS03Na]。注意對于2d的情況，0.98和1.48處的峰不適用。13C麗R(D20,75.4MHz):5(ppm)66.9，67.6,68.2,69.4,70,3，75.8，77.2,78.3[PG-OS03Na]。IR(KBr):i;(cm-1)3470[OH]，2930[CH]，1260[S-O]，780[C-O-S]。元素分析后的硫含量:2a:15.38%S，2b:14.28%S,2c:15.20%S，2d:13.96%。通過^-NMR光譜法，未觀察到聚甘油核的降解。使用與OH基團等摩爾的S(V吡啶濃度,全部游離OH基團中約85%的OH基團被硫酸化(表1)。如此高的硫酸化度表明聚甘油比多糖(24)更易于;克酸化。表l樹形聚甘油硫酸酯2a-c的表征<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>3通過NMR和/或GPC(DMF)測定。b通過元素分析得到硫酸化度(ds);c使用聚合物核的Mn和官能化的實驗測量來計算。Mn=聚甘油核的平均分子量；DPn=聚甘油核的聚合度；通過NMR、IR和元素分析對全部起始材料la-d和產(chǎn)物2a-d進行詳細分析，證實這些樹形聚甘油硫酸酯的結構和官能化程度。在沉淀后通過使用&NMR數(shù)據(jù)測定非官能化的聚甘油的分子量。實施例2:樹形聚甘油磺酸酯的合成絲從Sigma-Aldrich公司購買乙烯基磺酸的鈉鹽(25%重量比的水溶液)并且不經(jīng)過進一步純化就使用。對于合成的磺酸酯在水中的滲析，使用來自Roth公司(SpectraPor6)、MWCO為1,000g/mo1的再生纖維素制成的滲析管。丄漆為、f秉賴凝參見實施例1么賄NMR光語法在分別為300MHz或75.4MHz下，在100mg/ml濃度的D20中用BrukerARX300光鐠儀記錄}HNMR和13CNMR圖i普，在BrukerIFS88FT-IR中使用KBr板進行IR測定。使用元素分析測定磺化度。3.,廿磁被凝付合^合成方案參見圖2。將10g聚甘油lb、Id(2.0mmol;約135謹olOH基團)溶于20ml水中并加入757mg(13.5mmol)氬氧化鉀的1ml水溶液，達到聚甘油的OH基團的10%去質(zhì)子化。在冰浴下將反應溶液冷卻至約5。C。然后，經(jīng)滴液漏斗在4小時內(nèi)緩慢加入25%重量比的水溶液形式的乙烯基磺酸的鈉鹽(26.347g;202.5mmol)。添加完畢后，將反應混合物加熱至RT并再攪拌3天。真空除去溶劑后，通過在水中滲析24小時進一步純化所得粗產(chǎn)品，其中更換3次水。然后，真空濃縮粗產(chǎn)品并在干燥器中經(jīng)五氧化二磷干燥以除去剩余的水。所得到的合成的聚甘油硫酸酯3b、3d是淡黃色高度粘稠的液體形式，官能化程度為3%至10%。產(chǎn)量3b6.58g，3d:5.48g。!H-腿R(D20,300MHz):S(ppm)=0.88[t，3H，CH^CH2C(CH20)3-PG-CH2CH2S03Na]，1.42[m,2H，25CH3￡H2C(CH20)rPG-CH2CH2S03Na]，3.21[t，2H,CH3CH2C(CH20)3-PG-CH2Qi2S03Na]3.35-4.05[m，CH,CH,C(CH2OVPG-CH2CH，S(XNal;13C-NMR(D20，75.4MHz):S(ppm)=53.0[PG-CH2￡H2S03Na],63.3，65.1CH2CH2S03Na],68.2[PG-￡H2CH2S03Na]，71.4,72.9，74,7,80.5,82.0,CH2CH2S03Na]。元素分析結果3b:0.58%S,3d:1.30%S。通過^-NMR光語法，未觀察到聚甘油核的降解。表2樹形聚甘油磺酸酯3b和3d的表征_聚甘油PG核的Mn~~『=100%時的Mn(理磺化度b~~Mn(試驗)磺酸酯[g/mol]_論)[g/mol]_[%][g/mol]"~^5,00013，900^5，2003d20,00055,300821，,b通過元素分析得到的磺化度；Mn=聚甘油核的平均分子量；實施例3:樹形聚甘油硫酸酯與選擇蛋白的體外結合在竟爭性結合測定中，在BiacoreX中通過表面等離子共振儀分析聚甘油硫酸酯與L-、P-和E-選擇蛋白的結合。在該方法中，首先將選擇蛋白固定在膠體金顆粒上。然后測量分析物與選擇蛋白配體sLeX-酪氨酸硫酸鹽的結合，該選擇蛋白配體與傳感器芯片偶聯(lián)。當聚甘油疏酸酯與選擇蛋白的配體的結合域的相互作用是特異性時，通過用聚甘油硫酸酯預孵育分析物，該分析物與芯片-偶聯(lián)的配體的結合以濃度-依賴性方式降低。在這種情況下，觀察到結合信號的降低。圖3顯示出所選的樹形聚甘油硫酸酯對L-選擇蛋白配體結合的濃度-依賴性抑制作用。隨著分子量的增加，具有相似疏酸化度的聚甘油硫酸酯顯示出增強的抑制潛能。如圖3可知，化合物2d的ICso值為約10nM。為了進一步表征選擇蛋白特異性結合，得到了用聚甘油衍生物2c預孵育后L-、P-和E-選擇蛋白的抑制曲線(參見圖4)。其在此顯示出，L-選擇蛋白被所述衍生物2c最大地抑制(IC50=10nM)，對于P-選擇蛋白，該化合物的IC5o為30nM,而E-選擇蛋白未被抑制。以衍生物2d(PG核的Mn=20,000[g/mol])作為實例，研究了樹形聚甘油的硫酸化度對L-選擇蛋白結合的影響。衍生物2d采用的濃度為10nM并且硫酸化度為10%、38%和76%。此外，測定了聚甘油硫酸酯對分析物L-選擇蛋白與固定的配體sLeX-酪氨酸硫酸鹽之間的相互作用的影響(竟爭性結合測定，見上)。對照值設定為100%，該值對應于由L-選擇蛋白與芯片-偶聯(lián)的配體sLeX-酪氨酸之間的相互作用產(chǎn)生的結合信號。通過使用10nM的不同硫酸化度的聚甘油衍生物預孵育分析物L-選擇蛋白，測量到隨著硫酸化度的增加，L-選擇蛋白-結合信號降低，這在圖5中顯示為相對于對照值的百分比值。10%硫酸化度的2d顯然表現(xiàn)出其在預孵育階段不足以與L-選擇蛋白發(fā)生作用結合信號與對照值相當。38%硫酸化度的2d將L-選擇蛋白配體結合降低至結合信號對照值的約60%而76%硫酸化度的2d將其降低至對照值的約45%。這些測量表明硫酸化度與結合親和性呈正相關。此外，為了實現(xiàn)與L-選擇蛋白的相互作用，特定的硫酸化度的閾值看來是必需的。實施例4:樹形聚甘油(dPG)和硫酸化的衍生物(dPGS)樹形聚甘油是明確定義的具有樹形分支的聚合物。如實施例1中所述進行具體的合成。能夠容易地調(diào)節(jié)聚合度和支化度且能夠獲得窄的多分散性。如實施例1中所述，我們合成了分子量(MW)在240Da和6,000Da之間的不同核結構。使用S(V吡啶配合物作為硫酸化試劑進一步使所述化合物官能化。通過元素分析測定樹形聚甘油骨架上負載的硫酸酯的百分比(石克酸化度)，且其為10%至92%。在4°C下儲存dPG和dPGS，水溶液在-20。C下儲存6個月后仍是穩(wěn)定的。dPGS的實例參見圖6。表3樹形聚甘油硫酸酯(dPGS)的表征<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>2ddPG=樹形聚甘油dPGS=樹形聚甘油硫酸酯*重新測定的分子量實施例5:聚甘油硫酸酯的細胞毒性和免疫調(diào)節(jié)特性為了測定本發(fā)明的聚陰離子dPGS是否能夠安全地用于細胞培養(yǎng)和小鼠體內(nèi)，詳細地表征了作為實例的化合物dPGS6000/76。為了測試細胞毒性，我們用單核細胞系THP-1進行了增殖測定?；衔飀PGS6000/76直到濃度為10時也未顯示出對細胞增殖的抑制作用(參見圖7)。當在高至30j^M的dPGS600(W6存在下培養(yǎng)外周血單核細胞(PBMC)24h時，不考慮細胞刺激僅觀察到凋亡細胞的少許增力口(參見圖8)。接著，我們檢測了dPGS對細胞免疫調(diào)節(jié)活性的影響。在鼠樹突狀細胞(參見圖9)和人類PBMC的T細胞片段中(參見圖IO)表征了細胞因子的釋放。與對照(不添加dPGS)相比較，mTNFa和huIL-2的濃度不發(fā)生顯著改變。實施例6:樹形聚甘油硫酸酯阻斷選擇蛋白-配體的體外結合為了評價dPGS的在體外的選擇蛋白-結合，我們使用了非常靈敏的、基于Biacore的竟爭性結合測定，如實施例3所迷，該測定允許確定抑制性化合物的50%抑制濃度(105())。分析dPGS的選擇蛋白特異性。雖然E-選擇蛋白結合不受28dPGS4000/84影響，但L-選擇蛋白和P-選擇蛋白被有效抑制且ICso值分別為8nM和30nM(參見圖11)。(這些實驗如實施例3中所述來進行并進行再確認。)然后，選擇蛋白結合的硫酸酯依賴性由在相同骨架上具有不同官能化的化合物得到證實。在30nM的明確濃度下，研究衍生物的抑制作用(參見圖12)。沒有硫酸酯或有10%硫酸酯的核結構dPG6000不影響L-選擇蛋白配體結合，而38%和76%^酸化將所述相對結合分別降低至55%或26%。(這些實驗如實施例3所述來進行并進行再確認。)然后表征了樹枝狀聚合物的核大小對選擇蛋白的抑制作用的影響(參見圖13)。合成了分子量為240Da(3個單體單元)至6,000Da(80個單體單元)的樹形聚甘油并將其進一步高度硫酸化。官能化的程度為76%至92%。小的化合物縮三甘油(TGS)240/83在高至高微摩爾濃度時對L-選擇蛋白結合未表現(xiàn)出抑制作用，但對于化合物Dpgs2500/85，其ICso為80nM。通過將硫酸化度再增加7%,所得化合物dPGS2500/92的ICso值進一步降低至4nM。顯而易見地，選擇蛋白結合需要聚合物核的臨界大小但在聚合物骨架上的硫酸酯基團的密度(硫酸化度)似乎還更重要。進一步增加核結構且使官能化相等并不改善選擇蛋白結合。為了對照，將L-選擇蛋白和P-選擇蛋白結合聚合物肝素包含于本研究中。該多硫酸化的葡糖胺聚糖的平均分子量為15,000Da且每個二糖帶有約2.4個>5克酸酯。該化合物對L-選擇蛋白結合的ICso值是15mM并因此比dPGS2500/92大約4000倍。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>dPGS6000/766,0007612,3005肝素(UFH)n.d.n.d,~15，00010,000TGS24083650沒有抑制dPG=樹形聚甘油dPGS=樹形聚甘油硫酸酯TGS=縮三甘油n.d.未片企觀'J實施例7:在急性和亞慢性皮膚炎癥模型中dPGS降低白細胞的補充我們接著研究了樹形聚甘油硫酸酯在鼠模型中對皮膚炎癥的影響。在急性TMA誘導的炎癥應答中，化合物dPGS6000/76防止水腫形成并因此防止耳腫脹。在30mg/kg的劑量下，其抗炎效果與皮質(zhì)類固醇潑尼松龍相當(參見圖14)。該抗炎效果歸因于dPGS介導的粒細胞遷出的降低(參見圖1"。在亞慢性炎癥模型中，TMA激發(fā)后8天，dPGS的保護效果仍然顯著。dPGS治療的小鼠的耳厚度降低了但不如潑尼松龍陽性對照那樣有效(參見圖16)。此外，仍測量到粒細胞和嗜中性粒細胞浸潤的顯著減少(參見圖17)且其與潑尼松龍標準物相當。然后，我們通過測量小鼠耳勻漿中的細胞因子水平分析了幼稚T細胞的活化。在dPGS治療的小鼠中Thl-型IL-2和Th2-型IL-4的顯著的濃度依賴性降低還表明dPGS在TMA誘導的接觸性超敏反應中緩和了T細胞依賴性皮膚炎癥(參見圖18)。參考文獻1.Ley,K.(2003)Theroleofselectinsininflammationanddisease(選擇蛋白在炎癥和疾病中的作用).7VemfeMo/MW.，9(6):2638.2.Springer,T.A.(1990)Adhesionreceptorsoftheimmunesystem(免疫系統(tǒng)的粘附受體).A^we，346:425-434.3.Lefer,D.F.(2000)爿"肌iev.P/^rmaco/.7b;aco/,40:283-294.4.Boehncke,WHetal.(2005)Z)^mWo/，74(1):70-80.5.Simaneketal.,(1998)Selectin-carbohydrateinteractions:Fromnaturalligandstodesignedmimics(選擇蛋白-碳水化合物相互作用從天然配體到設計的模擬物).C&m.Aev.,98(2):833-862.6.BoehnckeWHetal.,(2006)Biologictherapiesforpsoriasis.Asystematicreview(牛皮癬的生物療法，系統(tǒng)評價).i/^w附ato/，33:1447-1451.7.Willburgeretal.，(2006)ZertifiziertemedizinischeFortbildung:PharmakologischeTherapiederrheumatoidenArthritis.ZtocAJCeW;103(1-2):A48-578.UlbrichH-，etal.(2003)Leukocyteandendothelialcelladhesionmoleculesastargetsfortherapeuticinterventionsininflammatorydisease(白細月包和內(nèi)皮細胞粘附分子作為靶標用于炎性疾病的治療性干預).7>e"&泡rm腳/5W"12:640-647.9.Mowery，Petal.(2004)SyntheticglycoproteinmimicsinhibitL-selectin-mediatedrollingandpromoteL-selectinshedding(合成6勺jf唐蛋白模擬物抑制L-選擇蛋白介導的滾動并促進L-選擇蛋白的脫落).所o/.7/:752-732.10.Rele，SMetal.(2005)Dendrimer-likePEOglycopolymersexhibitanti-inflammatoryproperties(樹枝狀聚合物樣的PEO含糖聚合物表現(xiàn)出抗炎特性).J爿m.CAe肌Soc,127:10132-10133.11.Ttirk，H.;Haag,R,andAlban，S.(2004)DendriticPolygylcerolSulfatesasNewHeparinAnaloguesandPotentInhibitorsoftheComplementSystem(樹形聚甘油硫酸酯作為新的肝素類似物和補體系統(tǒng)的有力抑制劑).5zoco"7MgateC/iew.15:162-167.12.Sunder,A.,Mtilhaupt,R.，Haag,R.,andFrey,H.(2000)HyperbranchedPolyetherPolyols:AModularApproachtoComplexPolymerArchitectures(超支化的聚醚多羥基化合物配合物聚合物結構的模塊方法).爿Jv.Mater12,;235-239.13.Frey,H.,andHaag,R.(2002)Dendriticpolyglycerol:anewversatilebiocompatiblematerial(樹形聚甘油新的多用途生物相容材剩-).Mo/.90:257-267.14.Sunder,A.,Hanselmann，R.，F(xiàn)rey，H.，andMiilhaupt,R.(1999)ControlledSynthesisofHyperbranchedPolyglycerolsbyRing-OpeningMultibranchingPolymerization(通過開環(huán)超支化聚合作用進行超支化聚甘油的可控合成).Afonromo/ecwfey32:4240-4246.15.Haag,R.，Sunder,A.,andStumb6,J.-F.(2000)AnApproachtoGlycerolDendrimersandPseudo-DendriticPolyglycerols(甘油樹枝狀聚合物與假畫初于形聚甘油的方法).乂爿m.C臉附.122，2954-2955.16.Wilson,R.,VanSchie,B丄，andHowes,D.(1998)OverviewofthePreparation,UseandBiologicalStudiesonPolyglycerolPolyricinoleate(PGPR)(聚甘油聚蓖麻酸酯(PGPR)的制備、用途和生物學研究綜述).FoodC7em.Todco/.36:711-718.17.Howes,D.,Wilson,R.,andJames,CT.(1998)TheFateofIngestedGlyceranEstersofCondensedCastorOilFattyAcids[Polyglycerol,32Polyricinoleate(PGPR)]inRat(大鼠中攝入的縮合的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