專利名稱：結(jié)晶特立帕肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甲狀旁腺素的純結(jié)晶形式。更具體地說，本發(fā)明涉及特立帕肽，PTH(1-34)的結(jié)晶形式以及該激素片段的制備和純化方法。
背景技術(shù)：
甲狀旁腺激素(PTH)是一種哺乳動物甲狀旁腺分泌的，84個氨基酸的產(chǎn)物，其通過對多種組織包括骨的作用控制血清鈣水平。某些形式的PTH對人類的研究證明其具有對骨的合成代謝作用，在將其用于治療骨質(zhì)疏松癥和相關(guān)骨疾病方面引起相當(dāng)明顯的關(guān)注。
以牛和人激素的N-末端34個氨基酸(所有公開報道均認為其生物學(xué)上等同于全長激素)為例，已經(jīng)證實，當(dāng)經(jīng)皮下途徑以脈動方式對人給藥甲狀旁腺激素時，甲狀旁腺激素尤其促進骨生長。已經(jīng)證明，與PTH略微不同的一種形式，人PTH(1-38)具有相似的結(jié)果。
PTH制劑由新鮮或凍干激素重構(gòu)，并加入各種形式的載體、賦形劑和介質(zhì)。大多數(shù)在水基介質(zhì)如鹽水、或通常用乙酸酸化的水中制備，用于穩(wěn)定激素。大多數(shù)報道的制劑還加入白蛋白作為穩(wěn)定劑(參見，例如，Reeve等，英國醫(yī)學(xué)雜志(Br.Med.J.)，1980，2806228；Reeve等，柳葉刀，1976，11035；Reeve等，Calcif.Tissue Res.，1976，21469；Hodsman等，Bone Miner，1990，9(2)137；Tsai等，臨床內(nèi)分泌代謝雜志(J．Clin．Endocrinol Metab.)，1989，69(5)1024；Isaac等，激素代謝研究(Horm.Metab.Res.)1980，12(9)487；Law等，臨床研究雜志(J.C1in Invest.)1983，72(3)1106；和Hulter，J.Clin Hypertens，1986，2(4)360)。其他報道的制劑中加入賦形劑，例如甘露醇，其存在于凍干激素中或者存在于重構(gòu)介質(zhì)中。應(yīng)用于人類研究的代表性制劑包括人PTH(1-34)(SEQ ID NO2)制劑，其在重構(gòu)之后，由甘露醇、熱滅活的人血清白蛋白，和作為吸收增強子的己酸(蛋白酶抑制劑)組成。(參見，Reeve等，1976，Calcif.Tissue Res.，21，增刊，469-477)；人PTH(1-38)制劑，在鹽水介質(zhì)中重構(gòu)(參見，Hodsman等，1991，14(1)，67-83)；和牛PTH(1-34)制劑，其在由乙酸調(diào)節(jié)pH的水介質(zhì)中，并含有白蛋白。還有一種人PTH(1-84)(SEQ ID NO1)的國際參照制劑，其由100ng與250μg人血清白蛋白偶聯(lián)的激素和1.25mg乳糖組成(1981)，以及牛PTH(1-84)，其由0.01M乙酸中的10μg凍干激素和0.1％w/v甘露醇組成(參見Martindale，附加藥典(The Extra Pharmacoepia)，藥學(xué)出版社，倫敦，第29版，1989，1338頁)。
甲狀旁腺激素的商業(yè)開發(fā)需要研制一種在儲藏穩(wěn)定性和易于制備方面可接受的制劑。因為它是一種蛋白質(zhì)，因此與傳統(tǒng)小分子量藥物相比非常不穩(wěn)定，然而，甲狀旁腺激素制劑面臨著制藥工業(yè)不常遇到的挑戰(zhàn)。而且，象其它已經(jīng)成功地配制的蛋白質(zhì)一樣，PTH對氧化、脫酰胺基和水解尤其敏感，需要其N-末端和C-末端序列保持完整，以便保留生物活性。
發(fā)明概述本發(fā)明提供制備迄今為止沒有報道過的甲狀旁腺素(PTH)片段的結(jié)晶形式的制備方法。該激素的結(jié)晶形式的優(yōu)點在于產(chǎn)物的純度和貯存穩(wěn)定性。因此，例如，PTH的結(jié)晶形式可以容易地溶解于用于非經(jīng)腸給藥的小瓶中的滅菌溶液中。作為結(jié)晶物質(zhì)，如果期望，PTH還可以配制成其它組合物，例如片劑、膠囊劑或栓劑。
因此，本發(fā)明的第一方面是選自PTH(1-34)，PTH(1-37)，PTH(1-38)和PTH(1-41)的甲狀旁腺素的新的結(jié)晶形式，特別是結(jié)晶人PTH(1-34)(SEQID NO2)，一般公知為特立帕肽，呈四方體片狀晶體或立方體晶體形式，兩者具有P422間隔基和下面的晶胞常數(shù)a=b=91.071埃，c=37.665埃，α=β=γ=90°。
本發(fā)明第二方面是純化甲狀旁腺素的方法，包括步驟(a)以每毫升大約5-40mg的濃度提供所述激素的水溶液；(b)將所述溶液與一貯存溶液混合，該貯存溶液含有濃度為約5至約50體積百分比的有機溶劑和一緩沖液，該緩沖溶液的濃度為將pH保持在約6.0和約12.0之間；和(c)使得到的溶液在大約室溫和大約4℃之間的溫度下靜置預(yù)定時間，直到片狀結(jié)晶形成。
本發(fā)明的第三方面是純化甲狀旁腺素的方法，其中包括步驟
(a)提供濃度為約5-40mg/ml的所述激素的水溶液；(b)將所述溶液與一貯存溶液混合，該貯存溶液含有濃度為大約0.5M至2.5M的磷酸鹽或甲酸鹽沉淀劑和任選一含水緩沖溶液，該緩沖溶液的濃度為將pH保持在約4.0和6.0之間；和(c)使得到的溶液在大約室溫和大約4℃之間的溫度下靜置預(yù)定時間，直到立方體結(jié)晶形成。
本發(fā)明的第四方面是選自PTH(1-34)，PTH(1-37)，PTH(1-38)和PTH(1-41)的甲狀旁腺素的新的結(jié)晶形式，特別是具有P622間隔基和下面的晶胞常數(shù)的六方晶形式的結(jié)晶人PTH(1-34)(SEQ ID NO2)a=b=30.169埃，c=110.597埃，α=β=90°，γ=120°。
最后，作為第五方面，本發(fā)明提供純化甲狀旁腺素的方法，包括(a)以在大約10至大約30體積百分比的甘油中的大約5-40mg/ml的濃度提供選自PTH(1-34)，PTH(1-37)，PTH(1-38)和PTH(1-41)的甲狀旁腺素的溶液；(b)所述溶液與一貯存溶液混合，該貯存溶液含有濃度為大約5至大約50體積百分比的有機溶劑、濃度為大約0.5M至3.0M的硫酸銨和一緩沖液，該緩沖液的濃度為保持溶液的pH在大約3.0和大約7.0之間；和(c)使得到的溶液在大約室溫和大約4℃之間的溫度下靜置預(yù)定時間，直到六方晶形成。
附圖的簡要描述

圖1是從實施例1生長的PTH(1-34)晶體的照片。
圖2是從實施例4生長的PTH(1-34)晶體的照片。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及最穩(wěn)定貯存形式的甲狀旁腺素片段的純結(jié)晶形式和在用于對人類患者給藥的藥物組合物中的直接應(yīng)用。
結(jié)晶材料還可以加入作為活性成分的人PTH片段或其變體，或大鼠、豬或牛的PTH，按照Kimmel等(內(nèi)分泌學(xué)，1993，32(4)1577)的報道經(jīng)骨質(zhì)疏松癥卵巢切除大鼠模型證明該PHT具有人PTH的活性。
甲狀旁腺激素片段最好加入至少頭34個N-末端殘基，例如PTH(1-34)(SEQ ID NO；2)、PTH(1-37)、PTH(1-38)和PTH(1-41)。PTH的變體形式的替代物加入改善PTH穩(wěn)定性和半衰期的1-5個氨基酸取代基，例如在8和/或18位用亮氨酸或其它改善PTH抗氧化穩(wěn)定性的疏水氨基酸取代蛋氨酸殘基，和在25-27區(qū)用對胰蛋白酶不敏感的氨基酸(例如組氨酸或其它改善PTH抗蛋白酶穩(wěn)定性的氨基酸)取代氨基酸。這些形式的PTH都包括在本文一般使用的術(shù)語“甲狀旁腺激素”中。優(yōu)選的激素是也公知為特立帕肽的人PTH(1-34)(SEQ ID NO2)。該激素可以通過已知的重組或合成方法得到，例如美國專利4086196(引入本文作為參考)所述。
本發(fā)明所涉及的PTH結(jié)晶可以從含有緩沖液和任選地，有機溶劑或鹽的貯存或沉淀溶液中制備或生長，將試劑的濃度和pH小心控制在規(guī)定的范圍內(nèi)。任何公知的基本結(jié)晶技術(shù)可以用于激素晶體的生長。例如，通過使用定位滴定(sitting drop)，懸滴(hanging drop)，引晶和/或批量結(jié)晶儀器，在室溫和低至約4℃下，生長晶體。對于大規(guī)模制備，批量方法顯然是優(yōu)選的。
在懸滴方法中，將一小滴蛋白質(zhì)溶液放置在蓋玻片或玻璃板上，將其倒置在溶液孔上并密封?？字械娜芤汉谐恋韯?，其也以較少量存在于蛋白質(zhì)滴中。沉淀劑的功能是兩方面的。首先，孔中的溶液最初處于比蛋白質(zhì)滴低的蒸汽壓下，使得蒸發(fā)以蒸汽壓間的差別所限定的速度和蒸汽(通常是水)必須擴散的距離進行。第二，沉淀劑通過與蛋白質(zhì)競爭可得的溶劑而降低了溶液中蛋白質(zhì)的溶解度，因此由于從蛋白質(zhì)滴蒸發(fā)，使得溶液變得蛋白質(zhì)過飽和。在包括pH，蛋白質(zhì)濃度和溫度的合適的條件下發(fā)生蛋白質(zhì)或大分子的結(jié)晶。
批量方法通常包括向蛋白質(zhì)水溶液中緩慢加入沉淀劑直到溶液正好變得混濁，在此時密封容器并無干擾放置預(yù)定時間。
用上述任何方法使用堿性條件或者酸性條件都可以獲得PTH結(jié)晶。
在堿性條件下，首先以純化凍干的形式獲得PTH片段。凍干的蛋白質(zhì)以大約5mg/ml至大約40mg/ml的濃度，優(yōu)選以大約5mg/ml至大約20mg/ml的濃度，溶解于水中。然后，該含水的蛋白質(zhì)溶液與含有大約5至大約50體積百分比、優(yōu)選大約10至大約20體積百分比的有機溶劑和保持pH范圍大約為6.0-12.0的量的緩沖液的貯存溶液混合。水溶液與貯存溶液優(yōu)選以1∶1的比例混合。
作為例子，但是不作為限制，所用的有機溶劑可以是甲醇、乙醇、異丙醇、MPD、聚乙二醇、乙二醇、或者它們的混合物?？梢员阌萌魏尉彌_液，優(yōu)選任何生物緩沖液，例如三(羥甲基)氨基甲烷鹽，例如馬來酸鹽或鹽酸鹽，或者甘氨酸緩沖液。根據(jù)所期望的pH，也可以使用堿金屬鹽。例如可以使用如檸檬酸鈉這樣的檸檬酸鹽源作為弱堿性緩沖液。
堿性條件下的結(jié)晶作用提供片狀結(jié)晶。特別地，例如，使用上述堿性條件在室溫和4℃下在大約48小時內(nèi)生長出特立帕肽片狀結(jié)晶，其大約尺寸是0.1mm×0.1mm×0.05mm。
在酸性條件下，用相同的方法在大約5mg/ml至大約40mg/ml的濃度，優(yōu)選大約5mg/ml至大約20mg/ml的濃度的水溶液中制備PTH片段。含有蛋白質(zhì)的水溶液與含有鹽和/或?qū)H保持在大約4.0和6.0之間的量的緩沖液的貯存溶液混合。蛋白質(zhì)和緩沖溶液優(yōu)選以1∶1比例混合。
貯存溶液含有沉淀劑鹽，例如濃度為大約0.5M至大約2.5M的磷酸鹽、甲酸鹽。
貯存溶液中使用的緩沖液可以是pH范圍為4.0-6.0的任何生物可接受的緩沖液。這樣的緩沖液是例如以其各自堿金屬鹽例如鈉和/或鉀形式的各種磷酸鹽，甲酸鹽，乙酸鹽，酒石酸鹽等等，包括它們的混合物。當(dāng)將磷酸鹽或甲酸鹽用作沉淀劑鹽時，只有在需要是才可以加入另外的緩沖液。
酸性介質(zhì)中的結(jié)晶作用提供立方體狀晶體。因此，例如，使用上述酸性條件在室溫和4℃下在大約48小時內(nèi)生長出特立帕肽立方體狀晶體，其大約大小是0.1mm×0.1mm×0.1mm。
本發(fā)明優(yōu)選的實施方案是特立帕肽，人PTH(1-34)(SEQ ID NO2)的結(jié)晶形式。通過上述方法制備的結(jié)晶特立帕肽通過X-射線結(jié)晶學(xué)表征為具有對稱或P422間隔基和具有下面晶胞常數(shù)的下列細胞大小的四面體片狀或立方體晶體的晶體體系a=b=91.071埃，c=37.665埃，α=β=γ=90°。
在另一個實施方案中，如上所述獲得的PTH片段溶解于含有大約10至大約30體積百分比，優(yōu)選大約20體積百分比甘油的其中蛋白質(zhì)濃度是大約5mg/ml至大約40mg/ml，優(yōu)選大約5mg/ml至大約20mg/ml的溶液中。然后，將甘油蛋白質(zhì)溶液與一貯存溶液混合，該貯存溶液含有大約5至大約50體積百分比、優(yōu)選大約5至20體積百分比的有機溶劑和將pH范圍保持在大約3.0至大約7.0的量的緩沖液。蛋白質(zhì)溶液和貯存溶液優(yōu)選以1∶1比例混合。
有機溶劑是前面描述的那些。異丙醇是優(yōu)選的。前面描述的緩沖液也可以根據(jù)3-7范圍內(nèi)所需的pH使用。優(yōu)選的緩沖液是檸檬酸鹽，例如檸檬酸鈉。除上述溶劑和緩沖液外，貯存溶液含有大約0.5M-3.0M濃度的沉淀劑鹽，例如硫酸銨。
甘油介質(zhì)中的結(jié)晶作用提供六方晶狀晶體。因此，例如，使用上述條件在室溫和4℃下在大約12-24小時內(nèi)生長了人PTH(1-34)(SEQ ID NO2)的六方晶狀晶體，其大約大小是0.2mm×0.2mm×0.6mm。該六方晶狀晶體的X-射線結(jié)晶學(xué)顯示具有對稱或P622間隔基和具有下面晶胞常數(shù)的下面晶胞大小的晶體體系a=b=30.169 埃，c=110.597埃，α=β=90°，γ=120°。
PTH片段尤其是特立帕肽的結(jié)晶形式的好處是一旦獲得，該結(jié)晶物質(zhì)提供最純和最穩(wěn)定形式的活性治療成分。因此，本發(fā)明結(jié)晶物質(zhì)可以以比激素或其溶液的先前形式更長的貯存期限貯存。然后，可以將結(jié)晶物質(zhì)直接用來制備對患者給藥的藥物組合物。因此，例如，結(jié)晶PTH可以和無菌溶液一起直接溶解裝入小瓶或藥筒中，用于非經(jīng)腸給藥。
PTH溶液含有醫(yī)學(xué)有效量的PTH，醫(yī)學(xué)有效量是參考治療或醫(yī)學(xué)診斷中所用的量而使用。加入本制劑中的甲狀旁腺激素的特定量可以根據(jù)選擇的PTH的類型和該制劑的預(yù)期最終應(yīng)用預(yù)先確定。在一項應(yīng)用中，本制劑用于治療目的，特別是用于治療骨質(zhì)疏松癥。骨質(zhì)疏松癥治療需要經(jīng)注射、理想的是經(jīng)皮下注射給藥重構(gòu)制劑，以反映規(guī)定的治療方案的單位劑量給藥，但，例如，對于人PTH(1-34)(SEQ ID NO2)，為每位患者25-1000μgPTH/ml注射液，理想的注射體積為0.02-1.3mL。因此，理想的是，將結(jié)晶PTH與緩沖劑和賦形劑相結(jié)合，形成含濃度范圍為25-1000μg/ml，優(yōu)選100-500μg/ml PTH的水溶液。
在一個實施方案中，提供了重構(gòu)到約1mL(0.8-1.2 mL)重構(gòu)介質(zhì)中時，形成100-500μg人PTH(1-34)(SEQ ID NO2)的單位容器形式的制劑，因此小瓶中裝有約1mL PTH水溶液制劑，用于隨后的冷凍干燥。
得到含所需量和濃度的緩沖劑、賦形劑和PTH的水溶液后，將各小瓶中裝入所述溶液至所需體積。本發(fā)明的優(yōu)點在于上述溶液可以用無菌水制備，不需要進行冷凍干燥處理。
除了其治療用途外，可以配制并給藥本發(fā)明的PTH組合物以輔助醫(yī)學(xué)診斷，特別是協(xié)助診斷低血鈣患者的甲狀旁腺機能減退和假甲狀旁腺機能減退。除了PTH的劑量，PTH制劑的組成將保持與本文所述的用于治療用途的相同。靜脈輸注的、等于200國際單位PTH活性的單劑量的人PTH(1-34)(SEQ ID NO2)制劑適用于該診斷目的。然后通過確定給藥的PTH的效果或尿cAMP水平來進行診斷，其中cAMP升高表明甲狀旁腺功能減退病癥，而不是其假形。
既然現(xiàn)在獲得純結(jié)晶形式的PTH片段，從而可以制備用于治療或診斷給藥的其它劑型，例如片劑、膠囊劑和栓劑等等。
下列實施例用于說明本發(fā)明，而不是用于對其進行限制。
實施例實施例1從事先純化和凍干的材料制備重組人rhPTH(1-34)(SEQ ID NO2)。該凍干的蛋白質(zhì)以5mg/ml至20mg/ml的濃度溶解于水中。在硅包被的玻璃蓋玻片上將蛋白質(zhì)與貯存溶液(20％異丙醇，0.2M檸檬酸鈉，0.1M三(羥甲基)氨基甲烷的HCl緩沖液，pH=8.0)以1∶1的比例混合。將載玻片倒置并密封在含有1毫升貯存溶液的孔上方。在48-96小時內(nèi)出現(xiàn)四方體片狀結(jié)晶，大小是0.1mm×0.1mm×0.05mm。質(zhì)譜證實了該產(chǎn)物。圖1給出了晶體生長的照片。
該四方體片狀晶體的X-射線結(jié)晶學(xué)顯示具有P422間隔基和下面的晶胞常數(shù)a=b=91.071埃，c=37.665埃，α=β=γ=90°。
實施例2按照實施例1重復(fù)相同的實驗，并且與10％異丙醇，10％聚乙二醇，pH=8.5的0.1M甘氨酸緩沖液的貯存溶液混合。
實施例3批量結(jié)晶濃度為10mg/ml的rhPTH(SEQ ID NO1)與50％異丙醇、100mM三(羥甲基)氨基甲烷，pH=7.5，0.2M檸檬酸鈉的貯存溶液以1∶1的比例在試管中混合。在48-96小時內(nèi)出現(xiàn)結(jié)晶，大小是0.1mm×0.1mm×0.05mm。
實施例4以和實施例1相同的方式制備蛋白質(zhì)，并且以1∶1的比例與貯存溶液(0.8M磷酸鉀，0.8M磷酸鈉，pH5.0)混合。室溫下，在48小時內(nèi)出現(xiàn)立方體結(jié)晶，大小是0.1nm×0.1mm×0.1mm。圖2給出了晶體生長的照片。
該立方體晶體的X-射線結(jié)晶學(xué)顯示具有P422間隔基和下面的晶胞常數(shù)a=b=91.071埃，c=37.665埃，α=β=γ=90°。
實施例5以和實施例1相同的方式制備蛋白質(zhì)，并且以1∶1的比例與貯存溶液(0.8M甲酸鈉，pH4.5的0.1M乙酸鈉緩沖液)混合。出現(xiàn)如實施例4的相同晶體。
實施例6從事先純化和凍干的材料制備rhPTH(1-34)(SEQ ID NO2)。該凍干的蛋白質(zhì)以5mg/ml至20mg/ml的濃度溶解于20％的甘油中。蛋白質(zhì)與貯存溶液(2.4M硫酸銨，5％異丙醇，0.2M檸檬酸鈉緩沖液，pH=5.0)以1∶1的比例在硅包被的玻璃蓋玻片上混合。將載玻片倒置并密封在含有1毫升貯存溶液的孔上方。在12-24小時內(nèi)出現(xiàn)六方晶晶體，大小是0.2mm×0.2mm×0.6mm。
該六方晶晶體的X-射線結(jié)晶學(xué)顯示具有P622間隔基和下面的晶胞常數(shù)a=b=30.169埃，c=110.597埃，α=β=90°，γ=120°。
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權(quán)利要求
1.一種結(jié)晶形式的甲狀旁腺素，其選自PTH(1-34)、PTH(1-37)、PTH(1-38)和PTH(1-41)。
2.權(quán)利要求1的結(jié)晶激素，所述激素是人PTH(1-34)。
3.權(quán)利要求2的結(jié)晶激素，是具有P422間隔基和下面的晶胞常數(shù)的四方體片狀形式a=b=91.071埃，c=37.665埃，α=β=γ=90°。
4.權(quán)利要求2的結(jié)晶激素，是具有P422間隔基和下面的晶胞常數(shù)的立方體結(jié)晶形式a=b=91.071埃，c=37.665埃，α=β=γ=90°。
5.權(quán)利要求2的結(jié)晶激素，是具有P622間隔基和下面的晶胞常數(shù)的六方晶結(jié)晶形式a=b=30.169埃，c=110.597埃，α=β=90°，γ=120°。
6.一種純化甲狀旁腺素的方法，包括(a)提供濃度為約5-40mg/毫升的甲狀旁腺素的水溶液，該甲狀旁腺素選自PTH(1-34)，PTH(1-37)，PTH(1-38)和PTH(1-41)；(b)將所述溶液與一貯存溶液混合，該貯存溶液含有濃度為約5-50體積百分比的有機溶劑和一緩沖液，該緩沖液的濃度為將溶液的pH保持在大約6.0和大約12.0之間；和(c)使得到的溶液在大約室溫和大約4℃之間的溫度下靜置預(yù)定時間，直到片狀結(jié)晶形成。
7.權(quán)利要求6的方法，其中激素是人PTH(1-34)(SEQ ID NO2)。
8.權(quán)利要求6的方法，其中有機溶劑選自甲醇，乙醇，異丙醇，MPD，聚乙二醇，乙二醇和它們的混合物。
9.權(quán)利要求6的方法，其中激素濃度是大約5-20mg/ml。
10.權(quán)利要求6的方法，其中有機溶劑的濃度是大約10-20體積百分比。
11.權(quán)利要求6的方法，其中水溶液和貯存溶液以大約1∶1的比例混合。
12.一種純化甲狀旁腺素的方法，包括(a)提供濃度為大約5-40mg/毫升的甲狀旁腺素的水溶液，該甲狀旁腺素選自PTH(1-34)，PTH(1-37)，PTH(1-38)和PTH(1-41)；(b)將所述溶液與一貯存溶液混合，該貯存溶液含有濃度為約0.5M-2.5M的磷酸鹽或甲酸鹽沉淀劑鹽，和，任選一種含水緩沖液或其混合物，該緩沖液的濃度為將pH保持在大約4.0和大約6.0之間；和(c)使得到的溶液在大約室溫和大約4℃之間的溫度下靜置預(yù)定時間，直到立方體結(jié)晶形成。
13.權(quán)利要求12的方法，其中激素是人PTH(1-34)(SEQ ID NO2)。
14.權(quán)利要求12的方法，其中緩沖液選自磷酸鹽，甲酸鹽，乙酸鹽，酒石酸鹽和它們的混合物。
15.權(quán)利要求12的方法，其中激素濃度是大約5-20mg/ml。
16.權(quán)利要求12的方法，其中激素水溶液和緩沖溶液以大約1∶1的比例混合。
17.一種純化甲狀旁腺素的方法，包括(a)提供濃度為在約10-30體積百分比甘油中的約5-40mg/毫升的甲狀旁腺素的溶液，該甲狀旁腺素選自PTH(1-34)，PTH(1-37)，PTH(1-38)和PTH(1-41)；(b)將所述溶液與一貯存溶液混合，該貯存溶液含有濃度為約5-50體積百分比濃度的有機溶劑、濃度為約0.5M-3.0M的硫酸銨和一緩沖液，該緩沖液的濃度為將溶液的pH保持在大約3.0和大約7.0之間；和(c)使得到的溶液在大約室溫和大約4℃之間的溫度下靜置預(yù)定時間，直到六方晶形成。
18.權(quán)利要求17的方法，其中激素是人PTH(1-34)(SEQ ID NO2)。
19.權(quán)利要求17的方法，其中有機溶劑選自甲醇，乙醇，異丙醇，MPD，聚乙二醇，乙二醇和它們的混合物。
20.權(quán)利要求17的方法，其中激素濃度是大約5-20mg/ml。
21.權(quán)利要求17的方法，其中緩沖液是檸檬酸鹽。
22.權(quán)利要求17的方法，其中激素溶液和緩沖溶液以大約1∶1的比例混合。
全文摘要
本發(fā)明描述了甲狀旁腺素特別是特立帕肽的純的穩(wěn)定的結(jié)晶形式,以及制備和純化方法。
文檔編號C07K1/30GK1281467SQ98812144
公開日2001年1月24日 申請日期1998年12月8日 優(yōu)先權(quán)日1997年12月18日
發(fā)明者張發(fā)明 申請人:伊萊利利公司