專(zhuān)利名稱(chēng)：新的羧酸衍生物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的羧酸衍生物及其制備方法和應(yīng)用。
內(nèi)皮素是由21個(gè)氨基酸組成的肽，它通過(guò)血管內(nèi)皮合成并釋放。內(nèi)皮素以三種同工型ET-1、ET-2和ET-3形式存在。在下文中，“內(nèi)皮素”或“ET”表示一種或所有同工型的內(nèi)皮素。內(nèi)皮素是一種有效的血管收縮劑并對(duì)血管緊張性(der GefB(yǎng)tonus)有較強(qiáng)的作用。據(jù)知這種血管收縮作用是通過(guò)內(nèi)皮素與其受體結(jié)合產(chǎn)生的(自然，332,1988,411-415；FEBS Letters,231,1988,440-444和生物化學(xué)和生物物理學(xué)研究通訊，154,1988,868-875)。
內(nèi)皮素的增加或異常釋放對(duì)外周、腎和腦血管產(chǎn)生長(zhǎng)時(shí)間的血管收縮作用，可導(dǎo)致疾病。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道在高血壓、急性心肌損傷、肺高血壓、雷諾氏病、動(dòng)脈硬化和呼吸道哮喘患者中發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮素血漿水平的升高(日本高血壓雜志，12,(1989),79；J.Vascular Med.Biology 2,(1990)207；美國(guó)化學(xué)會(huì)志264,(1990)2868)。
因此，特異性抑制內(nèi)皮素與受體結(jié)合的物質(zhì)，也能拮抗各種上述的內(nèi)皮素生理作用，因而是有價(jià)值的藥物。
我們發(fā)現(xiàn)某些羧酸衍生物是內(nèi)皮素受體的良好抑制劑。
本發(fā)明涉及式Ⅰ的羧酸衍生物
其中R是四唑、腈、COOH基團(tuán)或可被水解為COOH的基團(tuán)，并且其他的取代基具有如下含義R2是氫、羥基、NH2、NH(C1-C4烷基)、N(C1-C4烷基)2、鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基或C1-C4烷硫基，或者如下所示CR2與CR12相連形成5或6元環(huán)；X 是氮或CR12，其中R12是氫或C1-C5烷基，或者CR12與CR2或CR3一起形成5或6元亞烷基或亞鏈烯基環(huán)，該環(huán)可被一個(gè)或多個(gè)
C1-C4烷基取代，并且在各種情況下，亞烷基可被氧、硫、-NH或-N C1-C4烷基替換；Y 是氮或次甲基；R3是氫、羥基、NH2、NH(C1-C4烷基)、N(C1-C4烷基)2、鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基、-NH-O-C1-C4烷基、C1-C4烷硫基；或者如下所示CR3與CR12相連形成5或6元環(huán)；R4和R5(可以相同或不同)是苯基或萘基，它們各自可被一個(gè)或多個(gè)下述的基團(tuán)取代鹵素、硝基、氰基、羥基、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基、苯氧基、C1-C4烷硫基、氨基、C1-C4烷基氨基或C1-C4二烷基氨基；或苯基或萘基，它們可在鄰位通過(guò)直鏈鍵、亞甲基、亞乙基或亞乙烯基、氧或硫原子或者是SO2-、NH-、或N-烷基相互相連，或C3-C7環(huán)烷基；R6是氫、C1-C8烷基、C3-C6鏈烯基、C3-C6炔基或C3-C8環(huán)烷基，所述這些基團(tuán)各自可被下述基團(tuán)取代一次或多次鹵素、羥基、巰基、羧基、硝基、氰基、C1-C4烷氧基、C3-C6鏈烯氧基、C1-C4炔氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4鹵代烷氧基、C1-C4烷基羰基、C1-C4烷氧羰基、C3-C8烷羰基烷基、C1-C4烷基氨基、二-C1-C4烷基氨基、苯基或苯氧基，或者被鹵素、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基或C1-C4烷硫基取代一次或多次，例如一次至三次的苯基或者苯氧基；是苯基或萘基，它們各自可被下述的取代基取代一次或多次鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基、苯氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基氨基、C1-C4二烷基氨基、亞甲二氧基(dioxomethylen)或亞乙二氧基(dioxoethylen)；是含有一至三個(gè)氮原子和/或一個(gè)硫或氧原子的五或六元芳香雜環(huán)系，所述環(huán)系可帶有一至四個(gè)鹵素原子和/或一至兩個(gè)下述的取代基C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基、C1-C4烷硫基、苯基、苯氧基、苯甲?；?phenylcarbonyl)，
其中苯基還可以帶有一至五個(gè)鹵素原子和/或一至三個(gè)下述取代基C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基和/或C1-C4烷硫基；Z 是硫或氧。
式Ⅰ化合物或制備它們的中間體，如式Ⅱ和Ⅳ可帶有一個(gè)或多個(gè)非對(duì)稱(chēng)的取代碳原子。這些化合物可以純對(duì)映體或純非對(duì)映體或者它們的混合物形式存在。優(yōu)選采用對(duì)映體純化合物作為活性物質(zhì)。
本發(fā)明還涉及上述羧酸衍生物用于生產(chǎn)藥物，尤其是產(chǎn)生內(nèi)皮受體抑制劑的用途。
其中Z是硫或氧的通式Ⅳ化合物(包括對(duì)映體純形式的)可按照P44 36 951.8中描述的方法制備。
其中取代基具有通式Ⅰ中上述定義的本發(fā)明化合物可例如通過(guò)將其中取代基具有上述定義的通式Ⅳ的羧酸衍生物與通式Ⅴ化合物反應(yīng)，
其中R13是鹵素或R14-SO2-，其中R14可以是C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基或苯基。該反應(yīng)優(yōu)選在加有堿的惰性溶劑或稀釋劑中在室溫至溶劑沸點(diǎn)的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行，所述堿用以脫去中間體Ⅳ的質(zhì)子。
這類(lèi)溶劑或稀釋劑的實(shí)例是脂族、脂環(huán)族或芳族烴，它們可以是氯代的，如己烷、環(huán)己烷、石油醚、石腦油、苯、甲苯、二甲苯、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、氯乙烷、三氯乙烷，醚類(lèi)如異丙基醚、丁基醚、甲基叔丁基醚、環(huán)氧丙烷、二氧六環(huán)和四氫呋喃，腈類(lèi)如乙腈和丙腈，酰胺類(lèi)如二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺和N-甲基吡咯烷酮，亞砜和砜類(lèi)如二甲亞砜和環(huán)丁砜。
式Ⅴ化合物是公知的，它們可購(gòu)得或可按照常規(guī)方法制備。
可使用的堿是堿金屬或堿土金屬氫化物如氫化鈉、氫化鉀或氫化鈣，碳酸鹽如堿金屬碳酸鹽(如碳酸鈉或碳酸鉀)，堿金屬或堿土金屬氫氧化物如氫氧化鈉或氫氧化鉀，有機(jī)金屬化合物如丁基鋰，或者堿金屬氨基化物如二異丙基氨基鋰。
式Ⅰ化合物可從相應(yīng)的羧酸，即從其中R是COOH的式Ⅰ化合物開(kāi)始制備，首先將其以常規(guī)方法轉(zhuǎn)化為活性形式，如酰鹵、酸酐或imidazolide形式，然后將其與合適的羥基化合物HOR8反應(yīng)。該反應(yīng)可在常規(guī)溶劑中進(jìn)行并通常需加入堿，其中上述的堿是適用的。這兩步也可簡(jiǎn)化，如使羧酸在脫水劑如碳二亞胺的存在下作用于羥基化合物。
此外，式Ⅰ化合物也可從相應(yīng)的羧酸鹽開(kāi)始制備，所述羧酸鹽中R是COR1并且R1是OM，其中M可以是堿金屬陽(yáng)離子或等當(dāng)量的(dasquivalent)堿土金屬陽(yáng)離子。這些鹽可與許多其中A是常規(guī)的親核離去基團(tuán)的式R1-A的化合物反應(yīng)，所述離去基團(tuán)是例如鹵素(如氯、溴、碘)或者未取代的或被鹵素、烷基或鹵代烷基取代的芳基或烷基磺酰基，如甲苯磺酰基或甲磺?；蚴瞧渌牡犬?dāng)量離去基團(tuán)。帶有反應(yīng)性取代基A的式R1-A化合物是公知的或可方便地經(jīng)驗(yàn)知識(shí)獲得。該反應(yīng)可在常規(guī)溶劑中進(jìn)行，有益地是在加入堿的條件下進(jìn)行，其中上述的堿是適用的。
式Ⅰ中的基團(tuán)R可有很大變化。R是例如，基團(tuán)
其中R1具有下述含義a)氫；b)Succinylimidoxy；c)通過(guò)氮原子連接的5元芳香雜環(huán)，如吡咯基、吡唑基、咪唑基或三唑基，它們可帶有一個(gè)或兩個(gè)鹵原子或者一個(gè)或兩個(gè)C1-C4烷基或者一個(gè)或兩個(gè)C1-C4烷氧基。d)R1還可以是基團(tuán)
其中k可假設(shè)為0、1和2的值，p可假設(shè)為1、2、3和4的值，并且R7是C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基、C3-C6鏈烯基、C3-C6炔基或未取代的或可被一個(gè)或多個(gè)如，一至三個(gè)下述基團(tuán)取代的苯基鹵素、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、羥基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、巰基、氨基、C1-C4烷基氨基、C1-C4二烷基氨基；e)R19還可以是基團(tuán)OR8，其中R8是氫、堿金屬陽(yáng)離子(如鋰、鈉、鉀)或堿土金屬陽(yáng)離子(如鈣、鎂和鋇)或生理可耐受的有機(jī)銨離子(如三C1-C4烷基銨或銨離子)；C3-C8環(huán)烷基，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基、環(huán)辛基；C1-C8烷基，尤其是C1-C4烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、仲丁基、異丁基、叔丁基；CH2-苯基，可被一個(gè)或多個(gè)下述基團(tuán)取代鹵素、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、羥基、C1-C4烷氧基、巰基、C1-C4烷硫基、氨基、C1-C4烷基氨基、C1-C4二烷基氨基、C3-C6鏈烯基或C3-C6炔基，該基團(tuán)也可帶有一至五個(gè)鹵素原子；R8還可以是帶有一至五個(gè)鹵素原子和/或一至三個(gè)下列基團(tuán)的苯基硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、羥基、C1-C4烷氧基、巰基、C1-C4烷硫基、氨基、C1-C4烷基氨基、C1-C4二烷基氨基；通過(guò)氮原子連接的并含有一至三個(gè)氮原子的5元芳香雜環(huán)，可帶有一或兩個(gè)鹵素原子和/或一或兩個(gè)下列基團(tuán)C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、苯基、C1-C4鹵代烷氧基和/或C1-C4烷硫基。特別值得一提的是1-吡唑基、3-甲基-1-吡唑基、4-甲基-1-吡唑基、3,5-二甲基-1-吡唑基、3-苯基-1-吡唑基、4-苯基-1-吡唑基、4-氯-1-吡唑基、4-溴-1-吡唑基、1-咪唑基、1-苯并咪唑基、1,2,4-三唑-1-基、3-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-甲基-1,2,4-三唑-1-基、1-苯并三唑基、3,4-二氯咪唑-1-基；f) 還可以是基團(tuán)
其中R9是上述特別的C1-C4烷基、C3-C6鏈烯基、C3-C6炔基、C3-C8環(huán)烷基，這些基團(tuán)還可帶有C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基和/或上述的苯基；尤其是上述的未取代或取代的苯基；g)R1是基團(tuán)
其中R9具有上述含義；h)R1還可以是
其中R10和R11可以相同或不同并具有下述含義氫、C1-C7烷基、C3-C7環(huán)烷基、C3-C7鏈烯基、C3-C7炔基、芐基、苯基，如上所述它們是未取代或取代的，或者R10和R11一起形成C4-C7亞烷基鏈，該鏈可閉合形成環(huán)，所述環(huán)是未取代的或取代的，例如被C1-C4烷基取代，并且還可含有雜原子，如氧、硫或氮，如-(CH2)4-、-(CH2)5-、-(CH2)6-、-(CH2)7-、-(CH2)2-O-(CH2)2-、-CH2-S-(CH2)2-、-CH2-NH-(CH2)2-、-(CH2)2-N-(CH2)2-。
從生物作用的角度看，優(yōu)選的式Ⅰ羧酸衍生物、其純對(duì)映體或純非對(duì)映體形式或者它們的混合物中的取代基具有下述含義R2是氫、羥基、N(C1-C4烷基)2、尤其是在R1中所提及的C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基、C1-C4烷硫基和鹵素原子，尤其是氯、甲基、甲氧基、乙氧基、二氟甲氧基和三氟甲氧基，或者如下所示CR2與CR12相連形成5或6元環(huán)；X 是氮或CR12，其中R12是氫或烷基，或者其中CR12與CR2或CR3一起形成5或6元亞烷基或亞鏈烯基環(huán)，在各種情況下，亞甲基可被氧或硫替換，如-CH2-CH2-O-、-CH=CH-O-、-CH2-CH2-CH2-O-、-CH=CH-CH2O-，尤其是氫、-CH2-CH2-O-、-CH(CH3)-CH(CH3)-O-、-C(CH3)=C(CH3)-O-、-CH=C(CH3)-O-或-C(CH3)=C(CH3)-S；Y 是氮或次甲基；R3是氫、羥基、N(C1-C4烷基)2、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基、C1-C4烷硫基和鹵素原子，尤其是氯、甲基、甲氧基、乙氧基、二氟甲氧基和三氟甲氧基，或者如上所示CR3與CR12相連形成5或6元環(huán)； R4和R5可以相同或不同，它們是苯基或萘基，它們各自可被一個(gè)或多個(gè)，如一至三個(gè)下述的基團(tuán)取代鹵素、硝基、氰基、羥基、巰基、氨基、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基氨基、二C1-C4烷基氨基、C1-C4烷基羰基、C1-C4烷氧基羰基；或者苯基或萘基，它們可在鄰位通過(guò)直鏈鍵、亞甲基、亞乙基或亞乙烯基、氧或硫原子，或者是SO2、NH、或N-烷基彼此相通，或者是C3-C7環(huán)烷基；R6是上述的C1-C8烷基、C3-C6鏈烯基、C3-C6炔基或C3-C8環(huán)烷基，所述這些基團(tuán)各自可被下述基團(tuán)取代一次或多次鹵素、羥基、巰基、羧基、硝基、氰基、C1-C4烷氧基、C3-C6鏈烯氧基、C1-C4炔氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4鹵代烷氧基、C1-C4烷基羰基、羥基羰基、C1-C4烷氧羰基、C1-C4烷基氨基、二-C1-C4烷基氨基、未取代或取代的苯基或苯氧基，尤其是上述的；
是苯基或萘基，它們各自可被下述的取代基取代一次或多次鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基、苯氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基氨基、C1-C4二烷基氨基；是含有一至三個(gè)氮原子和/或一個(gè)硫或氧原子的五或六元芳香雜環(huán)系，所述環(huán)系可帶有一至四個(gè)鹵素原子和/或一至兩個(gè)下述基團(tuán)C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基、C1-C4烷硫基、苯基、苯氧基、苯甲?；?，還可以是帶有一至五個(gè)鹵素原子和/或一至三個(gè)下述基團(tuán)的苯基C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基和/或C1-C4烷硫基，尤其是在R4中所述的；Z 是硫或氧。
特別優(yōu)選的式Ⅰ羧酸衍生物、其對(duì)映體純或非對(duì)映體純形式或者它們的混合物中的取代基具有下述含義R2C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、三氟甲基或如下所述與R12相連形成5或6元環(huán)；X 是氮或CR12，其中R12是氫或烷基，或者CR12與CR2或CR3一起形成4或5元亞烷基或亞鏈烯基環(huán)，如-CH2-CH2-CH2-或-CH=CH-CH2-，其中在各種情況下，亞甲基可被氧或硫替換，如-CH2-CH2-O-、-CH=CH-O-,-CH2-CH2-CH2-O-、-CH=CH-CH2O-，尤其是氫、-CH2-CH2-O-、-CH(CH3)-CH(CH3)-O-、-C(CH3)=C(CH3)-O-、-CH=C(CH3)-O-或-C(CH3)=C(CH3)-S；Y 是氮或次甲基；R3是R1中提及的C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基或者CR3如上所示與CR12相連形成5或6元環(huán)；R4和R5可以相同或不同，它們是苯基，它們各自可被一個(gè)或多個(gè)，如一至三個(gè)下述的基團(tuán)取代鹵素、硝基、羥基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基或者R4和R5是苯基，它們可在鄰位通過(guò)直鏈鍵、亞甲基、亞乙基或亞乙烯基、氧或硫原子，或者是SO2、NH、或N-烷基相連；或者R4和R5是C3-C7環(huán)烷基；R6是C1-C8烷基、C3-C6鏈烯基或C3-C8環(huán)烷基，所述這些基團(tuán)各自可被下述基團(tuán)取代一次或多次鹵素、巰基、羧基、羥基、硝基、氰基、C1-C4烷氧基、C3-C6鏈烯氧基、C1-C4烷硫基；是苯基或萘基，它們各自可被下述的取代基取代一次或多次鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基、苯氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基氨基、C1-C4二烷基氨基；是含有一個(gè)氮原子和/或一個(gè)硫或氧原子的五或六元芳香雜環(huán)系，所述環(huán)系可帶有一至四個(gè)鹵素原子和/或一至兩個(gè)下述基團(tuán)C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、苯基、苯氧基、苯甲?；€可以是帶有一至五個(gè)鹵素原子和/或一至三個(gè)下述基團(tuán)的苯基C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基和/或C1-C4烷硫基；Z 是硫或氧。
下表中列出了優(yōu)選化合物的實(shí)例。
表Ⅰ
<
<p>表Ⅰ
<p>本發(fā)明的化合物提供了一種新的治療劑，可用于治療高血壓、肺動(dòng)脈高血壓、心肌梗塞、心絞痛、急性腎衰、腎功能低下、腦血管痙攣、腦缺血、蛛網(wǎng)膜下出血、偏頭痛、哮喘、粥樣硬化、內(nèi)毒素性休克、內(nèi)毒素誘發(fā)的器官衰竭、血管內(nèi)凝血、血管成形術(shù)后再狹窄、良性前列腺增生或由缺血或中毒引起的高血壓或腎衰，以及癌癥，尤其是前列腺癌和皮膚癌。本發(fā)明還涉及式Ⅰ化合物與腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)抑制劑的聯(lián)合應(yīng)用。RAS抑制劑公開(kāi)于例如EP634175中。
本發(fā)明的聯(lián)合應(yīng)用還適于治療式Ⅰ化合物本身對(duì)其就有效的疾病，尤其是用于治療高血壓和慢性心衰。
本發(fā)明的化合物在下列試驗(yàn)中表現(xiàn)出良好的效果受體結(jié)合研究使用ETA受體相比＞60％ETB克隆的人ETA受體表達(dá)CHO細(xì)胞的豚鼠小腦膜進(jìn)行結(jié)合研究。膜的制備使ETA受體表達(dá)的CHO細(xì)胞在含10％胎牛血清、1％谷氨酰胺、100E/ml青霉素和0.2％鏈霉素的F12培養(yǎng)基(Gibco BRL,Gaithersbrug,MD,USA)中生長(zhǎng)。48小時(shí)后，細(xì)胞用PBS洗滌并與含0.05％胰蛋白酶的PBS培養(yǎng)5分鐘。然后用F12培養(yǎng)基中和，細(xì)胞通過(guò)于300xg離心收集。為溶解細(xì)胞，將沉淀粗粗地用溶解緩沖液(5mM tris-HCl,pH7.4,含10％甘油)洗滌，然后以107個(gè)細(xì)胞/ml溶解緩沖液濃度于4℃保溫30分鐘。將膜在20000xg離心10分鐘，將沉淀貯存于液氮中。
將豚鼠小腦在Potter-Elvejhem勻漿器中勻漿并于1000xg差速離心10分鐘，上清液于20000xg重復(fù)離心。結(jié)合分析為進(jìn)行ETA和ETB結(jié)合分析，將膜以每次分析混合物為50μg蛋白的濃度懸浮在保溫緩沖液(50mM Tris-HCl,pH7.4,含5mM MnCl,40μg/ml桿菌肽和0.2％BSA)中，并在有或沒(méi)有試驗(yàn)物質(zhì)的存在下與25pM[125Ⅰ-ET1(ETA受體分析)或25pM[125Ⅰ-RZ3(ETB受體分析)進(jìn)行保溫。用10-7M ET1測(cè)定非特異性結(jié)合。30分鐘后，在Skatron磁棒收集器(Skatron,Lier,Norway)中濾過(guò)GF/B玻璃纖維濾器(Whatman,England)以分離游離的和結(jié)合的放射配體，濾液用冰冷的含0.2％BSA的tris-HCl緩沖液(pH7.4)洗滌。用Packard 2200 CA液體閃爍計(jì)數(shù)器定量濾器上收集的放射活性。用于尋找內(nèi)皮素受體(A亞型)拮抗劑的體外分析系統(tǒng)函數(shù)該分析系統(tǒng)是一種基于細(xì)胞的內(nèi)皮素受體分析的函數(shù)。當(dāng)某些細(xì)胞用內(nèi)皮素1(ET1)刺激時(shí)，它們表現(xiàn)出胞內(nèi)鈣濃度的增加。加入鈣敏染料可在完整細(xì)胞中測(cè)定這種鈣的增加。
從大鼠分離的1-成纖維細(xì)胞的內(nèi)源性A亞型內(nèi)皮素受體可通過(guò)如下加入熒光染料Fura 2-an進(jìn)行測(cè)定胰蛋白酶化后，將細(xì)胞再懸浮于緩沖液A(120mMNaCl,5mM Kcl,1.5mM MgCl2,1mM CaCl2,25mM HEPES,10mM葡萄糖，pH7.4)至2×106/ml密度并與Fura20-am(2μM)、普流羅克尼F-127(0.04％)和DMSO(0.2％)在37℃在黑暗處保溫30分鐘。然后將細(xì)胞用緩沖液A洗滌兩次并再懸浮至2×106/ml密度。
用Ex/Em 380/510于30℃連續(xù)記錄2×105個(gè)細(xì)胞/ml中的熒光信號(hào)。加入試驗(yàn)物質(zhì)，保溫3分鐘后，將加入ETl到細(xì)胞中，測(cè)定熒光的最大變化。采用未事先加入試驗(yàn)物質(zhì)時(shí)細(xì)胞對(duì)ET1的反應(yīng)作為對(duì)照并將此時(shí)的測(cè)定值設(shè)置為100％。體內(nèi)ET拮抗劑的試驗(yàn)將重250-300g的雄性SD大鼠用異戊巴比妥麻醉，施行人工換氣、迷走神經(jīng)切斷術(shù)并刺毀腦脊髓。對(duì)頸總動(dòng)脈和頸靜脈插導(dǎo)管。
對(duì)對(duì)照動(dòng)脈靜脈給予1μg/kg ET1使其血壓明顯升高，并保持相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間。
在給予ETl之前5分鐘，使試驗(yàn)動(dòng)物接受靜脈注射試驗(yàn)化合物(1mg/kg)。為測(cè)定ET-拮抗性，將試驗(yàn)動(dòng)物的血管升高與對(duì)照動(dòng)物進(jìn)行比較。內(nèi)皮素-1誘發(fā)小鼠“猝死”
該試驗(yàn)原理是通過(guò)用內(nèi)皮素受體拮抗劑預(yù)處理來(lái)抑制由內(nèi)皮素導(dǎo)致的小鼠心猝死(可能是對(duì)冠狀動(dòng)脈的收縮作用所致)。以5ml/kg體重的體積靜脈注射10nmol/kg內(nèi)皮素使動(dòng)物在數(shù)分鐘內(nèi)死亡。
每次檢測(cè)小組動(dòng)物的內(nèi)皮素-1的致死劑量。如果靜脈給予試驗(yàn)物質(zhì)，致死參考組的內(nèi)皮素-1注射通?？稍?分鐘之后進(jìn)行。對(duì)于其他給予方式，則該時(shí)間可延長(zhǎng)，如果合適可達(dá)到數(shù)小時(shí)。
記錄存活率和并測(cè)定24小時(shí)內(nèi)或在更長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)使由內(nèi)皮素誘發(fā)心臟死亡的動(dòng)物有50％免于死亡的有效劑量(ED50)。內(nèi)皮素受體拮抗劑對(duì)血管試驗(yàn)的函數(shù)在37℃pH7.3-7.4的Krebs-Henseleit溶液中，在開(kāi)始的2g緊張力和1小時(shí)的放松之后，先用K+誘導(dǎo)兔頸總動(dòng)脈段收縮。洗滌后，繪制內(nèi)皮素劑量-作用至最大程度。
在開(kāi)始繪制內(nèi)皮素劑量-作用圖之前15分鐘，將可能的內(nèi)皮素拮抗劑給予該動(dòng)脈的其他制品。計(jì)算內(nèi)皮素的作用對(duì)K+誘導(dǎo)的收縮的百分?jǐn)?shù)。有效的內(nèi)皮素拮抗劑使得內(nèi)皮素劑量-作用曲線向右移動(dòng)。
本發(fā)明的化合物可以常規(guī)方式經(jīng)口服或非胃腸途徑(皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi))給藥。也可采用蒸汽或噴霧經(jīng)鼻咽給藥。
劑量依賴(lài)于患者的年齡、適應(yīng)癥和體重以及給藥方式。活性物質(zhì)的每日劑量原則上口服給藥時(shí)為約0.5-50mg/kg體重，非胃腸給藥時(shí)為約0.1-10mg/kg體重。
新化合物可以常規(guī)固體或液體藥物劑型使用，如未包衣或(膜)包衣片、膠囊、粉末劑、顆粒劑、栓劑、溶液、軟膏、霜?jiǎng)┗驀婌F劑形式。這些劑型可以常規(guī)方式生產(chǎn)。為此，可將活性物質(zhì)與常用藥物助劑，如片劑粘合劑、填充劑、防腐劑、片劑崩解劑、流動(dòng)調(diào)節(jié)劑、增塑劑、潤(rùn)濕劑、分散劑、乳化劑、溶劑、緩釋劑、抗氧劑和/或拋射劑(參見(jiàn)Sucher等制藥技術(shù)，Thieme-Verlat,Stuttgart,1991)。以這些方式獲得的劑型一般含0.1-90％(重量)活性物質(zhì)。
合成實(shí)施例實(shí)施例12-羥基-3-甲氧基-3,3-二苯基丙酸甲酯將5g(19.6mmol)3,3-二苯基-2,3-環(huán)氧丙酸甲酯溶于50ml無(wú)水甲醇中，并在0℃加入0.1ml三氟化硼乙醚化物。將混合物在0℃攪拌2小時(shí)，然后在室溫再攪拌12小時(shí)。蒸除溶劑，殘余物加到乙酸乙酯中，該溶液用碳酸氫鈉溶液和水洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。蒸除溶劑后，剩余5.5g(88％)淺黃色油狀物。
實(shí)施例22-(2,6-二甲氧基-4-嘧啶基氧)-3-甲氧基-3,3-二苯基丙酸甲酯將1.15g(4mmol)2-羥基-3-甲氧基-3,3-二苯基丙酸甲酯溶于10ml二甲基甲酰胺中，加入276mg(2mmol)碳酸鉀。然后加入524mg(3mmol)2,6-二甲氧基-4-氯嘧啶，并將該混合物在100℃攪拌6小時(shí)。然后用10ml水小心地水解，用檸檬酸將pH調(diào)至5，用乙酸乙酯萃取后，有機(jī)相用水洗滌，然后經(jīng)硫酸鎂干燥，并蒸除溶劑。油狀殘余物(1.9g)經(jīng)硅膠色譜，得到617mg有少量雜質(zhì)的油。
實(shí)施例32-(2,6-二甲氧基-4-嘧啶基氧)-3-甲氧基-3,3-二苯基丙酸將550mg(1.3mmol)2-(2,6-二甲氧基-4-嘧啶基氧)-3-甲氧基-3,3-二苯基丙酸甲酯溶于5ml二氧六環(huán)中，加入2.6ml 1N KOH，并將該混合物在100℃攪拌3小時(shí)。該溶液用300mg水稀釋并用乙酸乙酯萃取除去未反應(yīng)的酯。然后水相用稀鹽酸調(diào)pH至1-2并用乙酸乙酯萃取。經(jīng)硫酸鎂干燥后，蒸除溶劑，殘余的泡沫(425mg)經(jīng)MPLC純化，得到205mg(40％)的泡沫狀產(chǎn)物。
實(shí)施例42-(4-甲基-2-喹啉基氧)-3-甲氧基-3,3-二苯基丙酸甲酯將5.7mg(20mmol)2-羥基-3-甲氧基-3,3-二苯基丙酸甲酯溶于90ml二甲基甲酰胺中，加入0.98g(22mmol)氫化鈉(55％油分散液)。攪拌15分鐘后，加入3.9g(22mmol)2-氯-4-甲基喹啉。將該暗紅色溶液在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，然后小心地用20ml水水解，隨后用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相用水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，蒸除溶劑。殘余物(8.1g)然后經(jīng)硅膠色譜，得到2.6g非純凈的油狀產(chǎn)物。
實(shí)施例52-(4-甲基-2-喹啉基氧)-3-甲氧基-3,3-二苯基丙酸將1.8g(4.2mmol)2-(4-甲基-2-喹啉基氧)-3-甲氧基-3,3-二苯基丙酸甲酯溶于25ml二氧六環(huán)中，加入8.4ml 1N KOH溶液，將該溶液在60℃攪拌20小時(shí)。該溶液用300ml水稀釋并用乙酸乙酯萃取除去未反應(yīng)的酯和雜質(zhì)。然后水相用稀鹽酸調(diào)pH至1-2并用乙酸乙酯再萃取,經(jīng)硫酸鎂干燥并蒸除溶劑，得到1.0g泡沫。將其溶于少量乙酸乙酯中，使其在室溫放置過(guò)夜，期間分離出265mg白色結(jié)晶產(chǎn)物。對(duì)母液重復(fù)該過(guò)程，得到另外的166mg產(chǎn)物?？偸章?31mg=^25%]]>FP:131-133℃MS:M+=413實(shí)施例62-(2-叔丁基-6-三氟甲基-4-嘧啶基氧)-3-甲氧基-3,3-二苯基丙酸芐基酯將2.0g(5.5mmol)2-羥基-3-甲氧基-3,3-二苯基丙酸芐基酯(參見(jiàn)P44 36 851.8)溶于20ml二甲基甲酰胺，加入0.76g(5.5mmol)碳酸鉀。然后加入1.32g(5.5mmol)2-叔丁基-6-三氟甲基-4-氯嘧啶，將該混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，然后在100℃攪拌5小時(shí)。為完成反應(yīng)，再加入0.5g嘧啶和0.5g氫化鈉并將該混合物于60℃再攪拌6小時(shí)。最后將其傾入冰水中并用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用飽和的氯化鈉溶液洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，蒸除溶劑。油狀殘余物(3.5g)在正庚烷/乙酸乙酯(5％)中結(jié)晶。吸濾沉淀并干燥。
收率1.6g≌52％MS:M+=564實(shí)施例72-(2-叔丁基-6-三氟甲基-4-嘧啶基氧)-3-甲氧基-3,3-二苯基丙酸將2.0g(5.5mmol)2-(2-叔丁基-6-三氟甲基-4-嘧啶基氧)-3-甲氧基-3,3-二苯基丙酸芐基酯溶于250ml甲醇，加入20mg鈀碳(5％)，將該化合物在氫氣中在室溫?cái)嚢?小時(shí)。停止加氫后，濾過(guò)硅藻土除去催化劑，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上抽除溶劑。
收率1.0g≌98％1H-NMR(360Mhz,CHCl3,ppm)1.35(s,9H)；3.3(s,3H)；6.3(s,1H)；6.8(s,1H)；7.15-7.45(m,10H)表1中列出的混合物可以類(lèi)似方式制備。實(shí)施例8采用上述結(jié)合分析方法測(cè)定下面化合物的受體結(jié)合數(shù)據(jù)。
結(jié)果示于表2。表2受體結(jié)合數(shù)據(jù)(K1值)
權(quán)利要求
1．式Ⅰ的羧酸衍生物
其中R是四唑、腈或基團(tuán)
其中R1具有下述含義a)氫；b)Succinylimidoxy；c)通過(guò)氮原子連接的5元芳香雜環(huán)，如吡咯基、吡唑基、咪唑基或三唑基，它們可帶有一個(gè)或兩個(gè)鹵原子或者一個(gè)或兩個(gè)C1-C4烷基或者一個(gè)或兩個(gè)C1-C4烷氧基。d)R1還可以是基團(tuán)
其中k可假設(shè)為0、1和2的值，p可假設(shè)為1、2、3和4的值，并且R7是C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基、C3-C6鏈烯基、C3-C6炔基或未取代的或可被一個(gè)或多個(gè)如，一至三個(gè)下述基團(tuán)取代的苯基鹵素、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、羥基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、巰基、氨基、C1-C4烷基氨基、C1-C4二烷基氨基；e)R1還可以是基團(tuán)OR8，其中R8是氫、堿金屬陽(yáng)離子如鋰、鈉、鉀或堿土金屬陽(yáng)離子如鈣、鎂和鋇或生理可耐受的有機(jī)銨離子如三C1-C4烷基銨(tertires C1-C4-Alkyl-ammonium)或銨離子；C3-C8環(huán)烷基，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基、環(huán)辛基；C1-C8烷基，尤其是C1-C4烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基；CH2-苯基，可被一個(gè)或多個(gè)下述基團(tuán)取代鹵素、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、羥基、C1-C4烷氧基、巰基、C1-C4烷硫基、氨基、C1-C4烷基氨基、C1-C4二烷基氨基、C3-C6鏈烯基或C3-C6炔基，該基團(tuán)也可帶有一至五個(gè)鹵素原子；R8還可以是帶有一至五個(gè)鹵素原子和/或一至三個(gè)下列基團(tuán)的苯基硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、羥基、C1-C4烷氧基、巰基、C1-C4烷硫基、氨基、C1-C4烷基氨基、C1-C4二烷基氨基；通過(guò)氮原子連接的并含有一至三個(gè)氮原子的5元芳香雜環(huán)，可帶有一或兩個(gè)鹵素原子和/或一或兩個(gè)下列基團(tuán)C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、苯基、C1-C4鹵代烷氧基和/或C1-C4烷硫基，特別值得一提的是1-吡唑基、3-甲基-1-吡唑基、4-甲基-1-吡唑基、3,5-二-甲基-1-吡唑基、3-苯基-1-吡唑基、4-苯基-1-吡唑基、4-氯-1-吡唑基、4-溴-1-吡唑基、1-咪唑基、1-苯并咪唑基、1,2,4-三唑-1-基、3-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-甲基-1,2,4-三唑-1-基、1-苯并三唑基、3,4-二氯-1-咪唑基；f) 還可以是基團(tuán)
其中R9是例如尤其是上述的C1-C4烷基、C3-C6鏈烯基、C3-C6炔基、C3-C8環(huán)烷基，這些基團(tuán)還可帶有上述的C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基和/或苯基；未取代或取代的苯基，尤其是上述的；g)R1是基團(tuán)
其中R9具有上述含義；h)R1還可以是
其中R10和R11可以相同或不同并具有下述含義氫、C1-C7烷基、C3-C7環(huán)烷基、C3-C7鏈烯基、C3-C7炔基、芐基、苯基，如上所述它們是未取代或取代的，或者R10和R11一起形成C4-C7亞烷基鏈，該鏈可閉合形成環(huán)，所述環(huán)是未取代的或取代的，例如被C1-C4烷基取代，并且還可含有雜原子，如氧、硫或氮，如-(CH2)4-、-(CH2)5-、-(CH2)6-、-(CH2)7-、-(CH2)2-O-(CH2)2-、-CH2-S-(CH2)2-、-CH2-NH-(CH2)2-、-(CH2)2-N-(CH2)2-；其他的取代基具有下述含義R2是氫、羥基、NH2、NH(C1-C4烷基)、N(C1-C4烷基)2、鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基或C1-C4烷硫基，或者CR2與CR12如下所示相連形成5或6元環(huán)；X 是氮或CR12，其中CR12是氫或C1-C5烷基，或者CR12與CR2或CR3一起形成5或6元亞烷基或亞鏈烯基環(huán)，該環(huán)可被一個(gè)或兩個(gè)C1-C4烷基取代，并且在各種情況下，亞甲基可被氧、硫、-NH或-N C1-C4烷基替換；Y 是氮或次甲基；R3是氫、羥基、NH2、NH(C1-C4烷基)、N(C1-C4烷基)2、鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基、-NH-O-C1-C4烷基、C1-C4烷硫基；或者如上所示CR3與CR12相連形成5或6元環(huán)；R4和R5(可以相同或不同)是苯基或萘基，它們各自可被一個(gè)或多個(gè)下述的基團(tuán)取代鹵素、硝基、氰基、羥基、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基、苯氧基、C1-C4烷硫基、氨基、C1-C4烷基氨基或C1-C4二烷基氨基；或苯基或萘基，它們可在鄰位通過(guò)直鏈鍵、亞甲基、亞乙基或亞乙烯基、氧或硫原子，或者是SO2-、NH-、或N-烷基彼此相連，或C3-C7環(huán)烷基；R6是氫、C1-C8烷基、C3-C6鏈烯基、C3-C6炔基或C3-C8環(huán)烷基，所述這些基團(tuán)各自可被下述基團(tuán)取代一次或多次鹵素、羥基、巰基、羧基、硝基、氰基、C1-C4烷氧基、C3-C6鏈烯氧基、C1-C4炔氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4鹵代烷氧基、C1-C4烷基羰基、C1-C4烷氧羰基、C3-C8烷羰基烷基、C1-C4烷基氨基、二-C1-C4烷基氨基、苯基或苯氧基，或者被鹵素、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基或C1-C4烷硫基取代一次至多次，例如一次至三次的苯基或苯氧基；是苯基或萘基，它們各自可被下述的取代基取代一次或多次鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基、苯氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基氨基、C1-C4二烷基氨基、亞甲二氧基(Dioxomethylene)或亞乙二氧基(Dioxoethylene)；是含有一至三個(gè)氮原子和/或一個(gè)硫或氧原子的五或六元芳香雜環(huán)系，所述環(huán)系可帶有一至四個(gè)鹵素原子和/或一至兩個(gè)下述的取代基C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基、C1-C4烷硫基、苯基、苯氧基、苯甲?；€可以是帶有一至五個(gè)鹵素原子和/或一至三個(gè)下述取代基的苯基C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基和/或C1-C4烷硫基；Z 是硫或氧。
2．權(quán)利要求1的羧酸衍生物，其特征在于，R是COOH。
3．前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的羧酸衍生物，其特征在于，基團(tuán)R4和R5中所至少一個(gè)是苯基。
4．權(quán)利要求3的羧酸衍生物，其特征在于，的R4和R5都是苯基。
5．權(quán)利要求3的羧酸衍生物，其特征在于，R6是未取代的或被OH或C1-C4烷氧基取代的C1-C8烷基、并且Z是O。
6．前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的羧酸衍生物，其特征在于，X是CH。
7．前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的羧酸衍生物，其特征在于，基團(tuán)X、Y中的至少一個(gè)是氮(N)。
8．前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的羧酸衍生物，其特征在于基團(tuán)R2、R3中的至少一個(gè)是C1-C4烷基。
9．權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的化合物用于生產(chǎn)治療高血壓、肺動(dòng)脈高血壓、急性和慢性腎衰、慢性心衰、腦缺血、血管成形術(shù)后再狹窄、前列腺癌的藥物的應(yīng)用。
10．權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的化合物與腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)抑制劑聯(lián)合應(yīng)用的用途。
全文摘要
式Ⅰ的羧酸衍生物,其中的基團(tuán)具有說(shuō)明書(shū)所述含義,還描述了這些化合物的制備方法和它們作為藥物的用途。
文檔編號(hào)C07D215/227GK1216042SQ97193737
公開(kāi)日1999年5月5日 申請(qǐng)日期1997年4月4日 優(yōu)先權(quán)日1996年4月12日
發(fā)明者W·安貝格, A·克林, D·克林格, H·里謝爾斯, E·鮑曼, L·翁格爾, M·拉沙克, S·赫根勒德?tīng)? S·舒爾特 申請(qǐng)人:Basf公司