專利名稱：糖類衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有抗凝血酶素活性的糖類衍生物，含有它們的藥物組合物，以及所述糖類衍生物在制備藥物方面的應(yīng)用。
具有抗凝血酶素活性的糖類衍生物是已知的，例如EP84,999中公開(kāi)了硫酸化葡糖胺聚糖衍生物。EP529,715中公開(kāi)了其它與硫酸化葡糖胺聚糖有關(guān)的糖類衍生物，它們具有改進(jìn)的藥理學(xué)性質(zhì)。這些糖類衍生物不具有葡糖胺聚糖的特征官能團(tuán)，即游離羥基，N-硫酸基和N-乙酰基。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明式I糖類衍生物或其可藥用鹽具有抗-Xa活性，該活性顯著高于在非還原性末端的4-位上無(wú)甘油狀或二醇狀基團(tuán)的糖類
其中R1為H或CH2OSO3-；R2和R3彼此獨(dú)立為H，(1-6C)烷基或SO3-；R4為OSO3-或NHSO3-；n為0或1；p為1或2。
因子X(jué)a在凝血級(jí)聯(lián)系統(tǒng)方面起重要作用。它催化形成能調(diào)節(jié)凝血級(jí)聯(lián)系統(tǒng)最后步驟的凝血酶。凝血酶的最重要的作用在于裂解血纖蛋白原產(chǎn)生血纖蛋白單體，通過(guò)交聯(lián)它們形成不溶凝膠-血纖蛋白塊。
本發(fā)明化合物適用于治療和預(yù)防凝血酶介導(dǎo)的和凝血酶相關(guān)的疾病。這類疾病包括眾多血栓形成和前血栓形成(prothrombotic)病癥，其中凝血級(jí)聯(lián)系統(tǒng)被激活，這些病癥包括但不限于，深靜脈血栓形成，肺栓塞，血栓性靜脈炎，血栓形成或栓塞造成的動(dòng)脈閉塞，血管成形術(shù)或血栓溶解期間或之后引起的動(dòng)脈再閉塞，動(dòng)脈損傷或心臟病發(fā)作過(guò)程之后的再狹窄，術(shù)后靜脈血栓形成或栓塞，急性或慢性動(dòng)脈粥樣硬化，中風(fēng)，心肌梗塞形成，癌癥及其轉(zhuǎn)移，以及神經(jīng)變性疾病。本發(fā)明糖類衍生物也可用作平滑肌細(xì)胞增生的抑制劑，并用于治療血管生成，癌癥和逆轉(zhuǎn)錄病毒感染，如HIV。
進(jìn)一步，如果需要，在透析和外科手術(shù)方面，本發(fā)明化合物可用作抗凝劑和體外血路的抗凝血藥膜。
本發(fā)明化合物也可用作體內(nèi)或體外抗凝劑。
優(yōu)選的本發(fā)明糖類衍生物為式I化合物或其可藥用鹽，其中R2為(1-6C)烷基，R3為SO3-，R4為OSO3-，以及R1，n和p的定義同前。
更優(yōu)選的本發(fā)明糖類衍生物為其中R1為甲基的式I化合物。特別優(yōu)選的糖類衍生物為其中n為1及p為1的式I化合物。最優(yōu)選其中R1為CH2OSO3-的式I糖類衍生物。
術(shù)語(yǔ)(1-6C)烷基是指具有1至6個(gè)碳原子的支鏈或直鏈烷基，如甲基，乙基，異丙基，叔丁基，異戊基，己基等。優(yōu)選的烷基為(1-4C)烷基，如甲基，乙基，(異)丙基，正丁基和叔丁基。最優(yōu)選的烷基為甲基。
平衡帶電部分的抗衡離子為可藥用的抗衡離子，如氫，或者更優(yōu)選堿金屬或堿土金屬離子，象鈉，鈣，或鎂。
本發(fā)明糖類衍生物可通過(guò)將被保護(hù)的甘油狀或二醇狀部分偶連到被另外保護(hù)的四糖的非還原性末端的4-羥基基團(tuán)上制備，所述四糖可按照Weserduin P.，生物有機(jī)和醫(yī)學(xué)化學(xué)(Bioorg.andMed.Chem.)，2，1267-1280，1994中所述方法生產(chǎn)。此后，移去保護(hù)基，接著硫酸化化合物，產(chǎn)生式I糖類衍生物。
對(duì)于靜脈血栓形成的治療或平滑肌細(xì)胞增生的抑制，本發(fā)明化合物可經(jīng)腸或非腸道施用，并其對(duì)人而言，優(yōu)選日劑量為每千克體重0.001-10mg。當(dāng)口服、向頰或舌下施用本發(fā)明化合物時(shí)，如標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)，Gennaro等人，Remington’s PharmaceuticalSciences，(18th ed.，Mack Publishing Company，1990，特別是參見(jiàn)第8部分，藥物制劑及其制備)中所述，本發(fā)明化合物可與藥學(xué)上適宜的助劑混合，壓制成固態(tài)劑量單位形式，如丸劑，片劑，或加工成膠囊或栓劑。利用藥學(xué)上適宜的液體，本發(fā)明化合物也可以溶液，懸浮液，乳狀液形式的注射制劑形式施用，或以噴霧劑如鼻噴霧劑形式施用。
為制備劑量單位形式制劑如片劑，可考慮使用常規(guī)添加劑如填料，著色劑，聚合粘合劑等。一般來(lái)說(shuō)，不影響活性化合物作用的任何藥學(xué)上可接受的添加劑都可使用。
可與組合物一同施用的適當(dāng)載體包括乳糖，淀粉，纖維素衍生物等，或它們的混合物，它們以適當(dāng)量使用。
本發(fā)明用下述實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明。(各實(shí)施例請(qǐng)參見(jiàn)流程

圖1和2，中間體和最終產(chǎn)物用流程圖中的相應(yīng)編號(hào)表示)實(shí)施例1制備化合物7和8制備2氮?dú)鈿夥障?，?-芐氧基乙醇1(2.84ml)和氯甲基甲基硫醚(1.59ml)的乙二醇二甲醚(25ml)冷(0℃)溶液中加入在礦物油中的60％氫化鈉分散體(1.2g)，室溫?cái)嚢杌旌衔?0h。向反應(yīng)混合物中加入甲醇并續(xù)攪拌15分鐘。混合物用乙酸乙酯(100ml)稀釋，隨后用碳酸氫鈉水溶液和水洗滌，有機(jī)相用硫酸鎂干燥并真空濃縮。粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠柱色譜純化，得到2.5g的2。制備33的合成見(jiàn)生物有機(jī)和醫(yī)學(xué)化學(xué)，vol 2，no.11，pp1267-1280，1994(P.Westerduin等人)中所述。制備4
將3(125mg)，2(64mg)和粉狀分子篩(4埃)的在二氯甲烷(1.5ml)中的混合物在氮?dú)鈿夥罩袛嚢?5分鐘。冷卻(5℃)溶液并向其中加入新制備的含有N-碘代琥珀酰亞胺(68mg)和三氟甲磺酸(2.7μl)的1.5ml 1，2-二氯乙烷-二惡烷(1/1，v/v)溶液。10分鐘后，過(guò)濾紅色反應(yīng)混合物，用二氯甲烷稀釋，并依次用硫代硫酸鈉水溶液和碳酸氫鈉水溶液洗滌。有機(jī)層用硫酸鎂干燥并真空濃縮。殘留物通過(guò)懸浮在二氯甲烷-甲醇(2/1，v/v)中的Sep hadex LH-20的篩析色譜法純化，得到108mg的4。制備5向4(105mg)的四氫呋喃(7.3ml)冷溶液(-5℃)中加入30％過(guò)氧化氫水溶液(3.8ml)，攪拌10分鐘后，加入氫氧化鋰溶液(1.25M，1.7ml)。混合物于-5℃攪拌2小時(shí)，然后將溫度升至0℃。攪拌20小時(shí)后，將溫度升至20℃并續(xù)攪拌24小時(shí)。冷卻反應(yīng)混合物(0℃)，其后加入甲醇(7.0ml)和氫氧化鈉水溶液(4M，2.0ml)。攪拌1小時(shí)后，將溫度再升至20℃并繼續(xù)攪拌20小時(shí)。冷卻混合物(0℃)，用鹽酸(2N)酸化至pH3并用二氯甲烷提取。有機(jī)層用亞硫酸鈉水溶液(5％)洗滌，硫酸鎂干燥并真空濃縮。粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜純化，得到80mg的5。制備6向6(80mg)在水(7ml)和2-甲基-2-丙醇(7ml)混合物中的溶液中加入80mg載于木炭上的鈀(10％)。反應(yīng)混合物在氫氣氣氛中放置16小時(shí)。濾出催化劑并用2-甲基-2-丙醇/水混合物漂洗。將濾液和洗滌液真空濃縮并凍干，得到38mg的6。制備7和8將6(38mg)的水(0.8ml)溶液通過(guò)Dowex 50WX8H+柱用水洗脫，并將收集的各部分蒸發(fā)至干。與N，N-二甲基甲酰胺一同蒸發(fā)后，將殘留物溶于N，N-二甲基甲酰胺(2.5ml)，置于氮?dú)鈿夥罩?，加入三乙?三氧化硫配合物(287mg)?；旌衔镉?0℃攪拌過(guò)夜，冷卻至0℃，加入碳酸氫鈉水溶液(533mg)?；旌衔镉?0℃攪拌1小時(shí)，濃縮至少量體積，用懸浮在水∶乙腈9∶1(v/v)的Sephadex G-25柱脫鹽。粗產(chǎn)物通過(guò)Dowex50WX8Na+柱洗脫，并通過(guò)陰離子交換柱色譜(HPLC，Mono-Q5/5，氯化鈉梯度)純化，得到12mg的7{[α]20D＝+31.1(c＝1；水)}和18mg的8{[α]20D＝34.8(c＝0.93；水)}。實(shí)施例2制備化合物16制備101小時(shí)內(nèi)，將苯甲酰氯(26.3ml)的無(wú)水二惡烷(26ml)溶液滴加到甘油(10g)和吡啶(109ml)的冷混合液(-20℃)中。0℃攪拌所形成的混合物16小時(shí)，然后加入水。攪拌15分鐘后，濃縮混合物至其體積的1/5，用二氯甲烷稀釋，并用水，碳酸氫鈉水溶液和水洗滌。有機(jī)層用硫酸鎂干燥并真空濃縮。所得油通過(guò)硅膠柱色譜純化，得到21g的10。制備11將二甲硫(1.45ml)加到10(600mg)的乙腈∶二氯甲烷(1∶1，v/v，；8ml)溶液中。冷卻反應(yīng)混合物至0℃，滴加入無(wú)水過(guò)氧化苯甲酰(3.63g)的乙腈∶二氯甲烷(1∶1，v/v；10ml)混合物。在20℃攪拌16h后，混合物用二氯甲烷稀釋并用碳酸氫鈉水溶液和水洗滌。有機(jī)層用硫酸鎂干燥并真空濃縮。在用硅膠柱色譜純化后，分離到400mg11。制備12用與P.Westerduin等人在生物有機(jī)和醫(yī)學(xué)化學(xué)，1994，vol2，no.11，pp.1267-1280中所述類似的方法，制備化合物12。
在產(chǎn)生12的反應(yīng)步驟過(guò)程中，用苯甲?；婕谆Ｗo(hù)糖醛酸。制備13用與化合物4所述類似的方法，通過(guò)偶聯(lián)化合物11到化合物12上制得化合物13。制備14將碳酸氫鈉(142mg)的水(2ml)懸浮液和Pd/C(400mg)加到13(480mg)的2-甲基-2-丙醇(60ml)溶液中。混合物在氫氣氣氛中放置16小時(shí)。濾出催化劑并用2-甲基-2-丙醇/水混合液洗滌。合并的濾液和洗滌液經(jīng)真空濃縮，得到315mg14，該產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。制備15取化合物14(315mg)溶于0.35N氫氧化鈉水溶液(10ml)。攪拌反應(yīng)混合物過(guò)夜，然后用1N鹽酸調(diào)節(jié)pH至8.5?；旌衔镉脩腋≡谒靡译妗萌野?0∶10∶0.1(v/v/v)的Sephadex G-25柱脫鹽。收集合適部分并真空濃縮。按與化合物14所述類似的方式，再氫解產(chǎn)物。經(jīng)處理和濃縮濾液及洗滌液后，混合物用懸浮在水∶乙腈∶三乙胺90∶10∶0.1(v/v/v)的Sephadex G-25柱脫鹽。收集合適部分并真空濃縮，并于Dowex 50WX8Na+柱上用水洗脫，最后凍干，得到165mg15。制備16將15(165mg)的溶液與N，N-二甲基甲酰胺一同蒸發(fā)，并溶于N，N-二甲基甲酰胺(11.0ml)。向反應(yīng)混合物中加入三乙胺三氧化硫配合物(1.31g)。在50℃攪拌16小時(shí)后，冷卻混合物(0℃)，加入碳酸氫鈉(2.43g)水溶液并于20℃繼續(xù)攪拌1小時(shí)，然后真空濃縮溶液。殘留物用懸浮在水-乙腈9∶1(v/v)的Sephadex G-25柱脫鹽，收集合適部分并真空濃縮。在Dowex 50WX8Na+洗脫后，產(chǎn)物通過(guò)Q-Sepha rose Hing Load柱純化，采用氯化鈉梯度，得到160mg16{[α]20D＝+24.0(c＝0.77；H2O)}。
權(quán)利要求
1.式I糖類衍生物或其可藥用鹽
其中R1為H或CH2OSO3-；R2和R3彼此獨(dú)立為H，(1-6C)烷基或SO3-；R4為OSO3-或NHSO3-；n為0或1；p為1或2。
2.權(quán)利要求1的糖類衍生物，其中R2為(1-6C)烷基，R3為SO3-，R4為OSO3-，以及R1、n和p的定義同上。
3.權(quán)利要求2的糖類衍生物，其中R2為甲基。
4.權(quán)利要求2或3的糖類衍生物，其中n為1和p為1。
5.權(quán)利要求2-4任一項(xiàng)所述的糖類衍生物，其中R1為CH2OSO3
6.一種藥物組合物，它包括權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的糖類衍生物和藥學(xué)上合適的助劑。
7.在治療方面應(yīng)用的權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的糖類衍生物。
8.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的糖類衍生物在制備治療或預(yù)防血栓形成或抑制平滑肌細(xì)胞增生的藥物方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及式Ⅰ糖類衍生物或其可藥用鹽:其中R
文檔編號(hào)C07H15/04GK1169433SQ9711111
公開(kāi)日1998年1月7日 申請(qǐng)日期1997年5月7日 優(yōu)先權(quán)日1996年5月8日
發(fā)明者C·A·A·伯克爾宛, P·韋斯特杜因 申請(qǐng)人:阿克佐諾貝爾公司, 薩諾費(fèi)公司