萃取與發(fā)酵耦聯(lián)分離發(fā)酵液中2,3-丁二醇的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種萃取與發(fā)酵偶聯(lián)分離發(fā)酵液中2,3-丁二醇的方法。該方法為：向2,3-丁二醇發(fā)酵液中加入一定量的糖或/和無機鹽，溶解，得到含糖混合液；向含糖混合液中加入有機溶劑，振蕩混合，混合液在15～40℃下靜置或離心至分相，上相為富含2,3-丁二醇的有機相，下相為富含糖的水相；上相在低于105℃條件下進(jìn)行減壓蒸餾除去有機溶劑和水，得2,3-丁二醇粗品；下相去除有機溶劑，加入水稀釋至糖濃度為80～200g/L，接入菌體，進(jìn)行2,3-丁二醇的發(fā)酵。本發(fā)明的方法操作簡單、分離能耗低，實現(xiàn)了發(fā)酵與分離的耦合，是一種具有工業(yè)應(yīng)用前景的從發(fā)酵液中分離2,3-丁二醇的方法。
【專利說明】萃取與發(fā)酵耦聯(lián)分離發(fā)酵液中2, 3- 丁二醇的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及到微生物發(fā)酵液的分離技術(shù)，特別涉及一種利用萃取技術(shù)耦合發(fā)酵分離發(fā)酵液中2，3- 丁二醇的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]2，3- 丁二醇是一種重要的化工原料和液體燃料，被廣泛應(yīng)用于化工、醫(yī)藥、食品、燃料及航空航天等多個領(lǐng)域。2，3- 丁二醇脫氫得到雙乙酰，是食品風(fēng)味添加劑和抗菌添加劑。2，3-丁二醇催化脫水形成甲乙酮，是高效的液體燃料添加劑，也是良好的低沸點溶劑，應(yīng)用于樹脂、油墨、膠水、潤滑劑等行業(yè)；脫水得到1，3-丁二烯，可用來合成橡膠、聚亞胺酯等材料；酯化形式2，3- 丁二醇可應(yīng)用于藥物、化妝品、洗滌劑等。2，3- 丁二醇有較高的燃燒值且辛烷值非常高，是優(yōu)質(zhì)的液體燃料，可用于航空航天等領(lǐng)域。由于2，3- 丁二醇具有2個手性原子，異構(gòu)體較多，化學(xué)法合成較困難且過程繁瑣、不易操作，能耗大、成本高，所以2，3- 丁二醇的生產(chǎn)主要以可再生資源為原料，通過微生物代謝將單糖轉(zhuǎn)化為目標(biāo)產(chǎn)物。生物轉(zhuǎn)化法生產(chǎn)2，3-丁二醇，發(fā)酵液中除目標(biāo)產(chǎn)物外，還有乙酸、乙醇、乳酸、琥珀酸等副產(chǎn)品，以及可溶性蛋白、核酸、多糖以及大量的菌體、有機鹽、無機鹽等小分子，導(dǎo)致發(fā)酵液成分十分復(fù)雜。2，3- 丁二醇沸點高，并具有強親水性，且發(fā)酵液中產(chǎn)物濃度較低，導(dǎo)致其提取工藝復(fù)雜、成本偏高。因此，2，3- 丁二醇的分離提純是阻礙其規(guī)?；?、工業(yè)化生產(chǎn)的瓶頸問題。
[0003]為了經(jīng)濟高效的從發(fā) 酵液中分離目標(biāo)產(chǎn)物，發(fā)展了很多的分離方法，包括蒸發(fā)、蒸餾、膜過濾、全蒸發(fā)、離子交換層析、液液萃取、反應(yīng)萃取等等，其中萃取因易放大、低能耗，工業(yè)化前景良好。傳統(tǒng)的蒸餾和精餾法分離2，3- 丁二醇能耗巨大，發(fā)酵液中生物大分子的存在導(dǎo)致傳熱效率下降、產(chǎn)品收率較低。逆流汽提法曾被認(rèn)為是最適合于2，3- 丁二醇的分離提取方法，但這種分離方法能耗較大。鹽析作用分離發(fā)酵液中的2，3- 丁二醇，其回收率較高。Afschar等利用碳酸鉀鹽析分離糖蜜發(fā)酵液中的2，3-丁二醇，其回收率可達(dá)94% -96%。但該方法中鹽使用量偏高且發(fā)酵液需要進(jìn)行一系列的預(yù)處理，操作過于繁瑣，不適于大規(guī)模的工業(yè)化應(yīng)用。反應(yīng)萃取能降低產(chǎn)品的親水性而提高分配系數(shù)；但是，反應(yīng)劑也能和副產(chǎn)物及雜質(zhì)反應(yīng)。有機溶劑萃取法是分離2，3-丁二醇的有效方法，但因2，3-丁二醇的高親水性導(dǎo)致回收率偏低且溶劑使用量巨大，只限于實驗室規(guī)模而不適用于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。傳統(tǒng)的高分子聚合物雙水相體系萃取條件溫和，容易放大，可連續(xù)操作；但由于水溶性高聚物大多粘度較大，不易定量操作，難以揮發(fā)，需要反萃取，使后續(xù)分離較為麻煩，且高聚物一般價格比較昂貴，其工業(yè)化應(yīng)用受到限制。我們開發(fā)了利用有機溶劑和無機鹽組成的新型雙水相體系鹽析萃取發(fā)酵液中的1，3-丙二醇和2，3- 丁二醇(中國專利:CN101012151A ；CN101012152A)的技術(shù)，取得令人滿意的結(jié)果。該技術(shù)操作簡單、條件溫和、選擇性高、能耗小。雖然該技術(shù)中鹽的用量低于鹽析，但濃度仍很高，下相的鹽必須回收利用以便降低分離成本。
[0004]目前，還沒有分離方法簡單、分離效果好、能耗低，適用于工業(yè)化生產(chǎn)的從發(fā)酵液中分離2，3- 丁二醇的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于，針對上述目前鹽析萃取法分離發(fā)酵液中2，3- 丁二醇時下相的高濃度鹽回收困難、廢水排放多等的問題，提出一種萃取與發(fā)酵偶聯(lián)分離發(fā)酵液中2，3- 丁二醇的新方法，該方法將發(fā)酵液中加入糖或糖和少量無機鹽萃取2，3- 丁二醇，萃取2，3- 丁二醇后的下相經(jīng)稀釋后直接用于2，3- 丁二醇的發(fā)酵從而實現(xiàn)下相的重復(fù)利用，避免了鹽析萃取下相鹽需要回收的問題，是一種很有工業(yè)應(yīng)用前景的從發(fā)酵液中分離2，3-丁二醇的方法。
[0006]為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:
[0007]一種萃取與發(fā)酵偶聯(lián)分離發(fā)酵液中2，3- 丁二醇的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟:
[0008]I)將糖或/和可溶性無機鹽溶解于2，3- 丁二醇發(fā)酵液中，得含糖混合液；
[0009]2)向步驟I)的含糖混合液中加入有機溶劑，振蕩混合，混合液在15~40°C下靜置或離心至分相，得到上層的有機相和下層的水相共存體系；
[0010]3)步驟2)中的有機相，在低于105°C條件下進(jìn)行減壓蒸餾除去有機溶劑和水，得2，3- 丁二醇粗品；
[0011]4)步驟2)中所述的水相，去除有機溶劑，加入水稀釋至糖濃度為80~200g/L，接入菌體，進(jìn)行2，3- 丁二醇的發(fā)酵。
[0012]在上述技術(shù)方案中，步驟4)中所述的水相去除有機溶劑后加入水稀釋至糖濃度優(yōu)選為100~150g/L，更優(yōu)選為110~130g/L。
[0013]進(jìn)一步地，在上述技術(shù)方案中，所述的2，3- 丁二醇發(fā)酵液為含菌體的2，3- 丁二醇發(fā)酵液或去除菌體的2，3- 丁二醇發(fā)酵清液，2，3- 丁二醇發(fā)酵液中2，3- 丁二醇的濃度為40~160g/L，優(yōu)選為60~120g/L,更優(yōu)選為80~100g/L。
[0014]進(jìn)一步地，在上述技術(shù)方案中，在步驟I)所述的糖在含糖混合液中的濃度為100~500g/L，優(yōu)選為150~400g/L，更優(yōu)選為250~350g/L ;所述可溶性無機鹽在含糖混合液中的濃度為I~100g/L,優(yōu)選為10~50g/L,更優(yōu)選為15~25g/L。
[0015]進(jìn)一步地，在上述技術(shù)方案中，在步驟2)中所述的含糖混合液與有機溶劑的體積比為0.5~2:1，優(yōu)選為I~1.5:1，更優(yōu)選為1:1。
[0016]進(jìn)一步地，在上述技術(shù)方案中，步驟I)中所述的糖為葡萄糖、木糖、果糖、阿拉伯糖、蔗糖、麥芽糖、菊芋、糖蜜、木糖母液中的一種或兩種以上以任何比例混合的混合物，其中優(yōu)選為木糖、果糖、葡萄糖、蔗糖；更優(yōu)選為葡萄糖。在本發(fā)明中，步驟I)所述的糖不局限于所述的糖，本領(lǐng)域技術(shù)人員還可以采用根據(jù)公知常識能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案的其他單糖、二糖、多糖、以及主要成分為上述糖類的工業(yè)副產(chǎn)物或廢棄物。
[0017]進(jìn)一步地，在上述技術(shù)方案中，所述可溶性無機鹽為硫酸銨、磷酸氫二鉀、磷酸氫二銨中的一種或兩 種以上的混合物，優(yōu)選為磷酸氫二銨。
[0018]進(jìn)一步地，在上述技術(shù)方案中，步驟2)中所述的有機溶劑為甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇、戊醇、油醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、碳酸二甲酯、碳酸二乙酯、丙酮、二氧六環(huán)、四氫呋喃中一種或兩種以上的混合溶液，其中優(yōu)選為正丙醇、異丙醇、正丁醇、叔丁醇、戊醇中的一種或兩種以上的混合溶液，更優(yōu)選為異丙醇、叔丁醇、戊醇中的一種或兩種以上的混合溶液，最優(yōu)選為叔丁醇。
[0019]進(jìn)一步地，在上述技術(shù)方案中，在步驟4)中所述的去除有機溶劑的方法為減壓蒸餾或氣提法，其中減壓蒸餾的溫度為20~50°C，壓力為-0.08~-0.1MPa ;氣提法采用的氣體為CO2。
[0020]本發(fā)明中，利用糖和有機溶劑萃取2，3-丁二醇的萃取操作方式可以是間歇的，也可以是連續(xù)的；對于分配系數(shù)較小的體系可以采用多級萃取的方式。
[0021]本發(fā)明中，所述2，3-丁二醇發(fā)酵液可以用絮凝、過濾、微濾或離心的方法進(jìn)行預(yù)處理，除去菌體；如果不經(jīng)預(yù)處理直接進(jìn)行萃取操作，菌體分布于下相。
[0022]本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有以下有益效果:
[0023](I)萃取用糖的來源廣泛且廉價，糖不與目標(biāo)成分反應(yīng)，糖是環(huán)境溫和的，如不改變環(huán)境的PH ；
[0024](2)富含2，3- 丁二醇的有機相中的有機溶劑可回收后重復(fù)利用，且有機溶劑的比熱遠(yuǎn)比水的低，可以極大降低蒸餾過程中回收2，3- 丁二醇的能耗；
[0025](3)與傳統(tǒng)的鹽析萃取過程中所用的鹽相比，所需的糖濃度較低，避免了傳統(tǒng)鹽析萃取過程的高鹽濃度，對設(shè)備沒有腐蝕；
[0026](4)水相的糖 可循環(huán)利用于發(fā)酵過程，減少了污水的處理和排放，提高了殘余底物的利用率。
[0027]綜上，本發(fā)明采用萃取與發(fā)酵偶聯(lián)的方法分離一個典型的生物基化學(xué)品一2，3-丁二醇，該方法將糖溶解于2，3-丁二醇發(fā)酵液后用有機溶劑萃取得到2，3-丁二醇，萃取率達(dá)到80%以上，下相經(jīng)稀釋后直接用于2，3-丁二醇的發(fā)酵從而實現(xiàn)下相的重復(fù)利用，避免了鹽析萃取下相鹽需要回收的問題。本發(fā)明的方法操作簡單、分離能耗低，實現(xiàn)了發(fā)酵與分離的耦合，是一種具有工業(yè)應(yīng)用前景的從發(fā)酵液中分離2，3- 丁二醇的方法。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0028]圖1為葡萄糖/叔丁醇體系的相圖。
[0029]圖2為葡萄糖用量和叔丁醇用量對2，3- 丁二醇分離效果的影響，其中圖1A為葡萄糖用量和叔丁醇用量對2，3- 丁二醇分配系數(shù)的影響；圖1B為葡萄糖用量和叔丁醇用量對2，3- 丁二醇回收率的影響。
【具體實施方式】
[0030]下述非限制性實施例可以使本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。下述實施例中，如無特殊說明，所使用的實驗方法均為常規(guī)方法，所用試劑等均可從化學(xué)或生物試劑公司購買。
[0031]以下結(jié)合技術(shù)方案詳細(xì)敘述本發(fā)明的【具體實施方式】。
[0032]1.在下述的實施例中用于2，3- 丁二醇發(fā)酵的菌株為陰溝腸桿菌(Enterobactercloacae)，是本實驗室誘變所得，保藏于中國普通微生物菌種保藏中心(CGMCC6053)。
[0033]種子培養(yǎng)基(IL):葡萄糖80g，(NH4) 2HP046.0g, KCl1.8g, EDTA0.51g,MgSO4.7H200.6g,微量元素:FeS04.7H200.0225g, ZnSO4.7H200.0075g, MnSO4.7H200.0038g,檸檬酸(λ 21g，檸檬酸鈉(λ 294g。
[0034]發(fā)酵培養(yǎng)基(IL):葡萄糖135g，(NH4)2HP0418.0g, KCll.8g，EDTA0.51g,MgS04.7H200.88g，微量元素:FeSO4.7Η200.0225g，ZnSO4.7Η200.0075g，MnSO4.7Η200.0038g，檸檬酸 0.21g，檸檬酸鈉 0.294g。
[0035]2.2，3- 丁二醇發(fā)酵液的制備:
[0036](I)將陰溝腸桿菌接種至種子培養(yǎng)基中，在35~38°C、200~300rpm搖床培養(yǎng)12 ~18h ；
[0037](2)將步驟(1)的菌培養(yǎng)液按10%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在37°C、200rpm搖床培養(yǎng)48~90h，得2，3- 丁二醇發(fā)酵液，發(fā)酵結(jié)束時殘?zhí)菨舛?0~15g/L。
[0038]在【具體實施方式】中，在步驟(1)中的菌培養(yǎng)液也可以采用發(fā)酵罐發(fā)酵，具體為:用Biotech5L全自動發(fā)酵罐，將步驟(1)中的菌培養(yǎng)液按10%的接種量接入到2L發(fā)酵培養(yǎng)基中，用5mol/L NaOH控制pH為5.8，在37°C、250r/min條件下發(fā)酵。發(fā)酵過程中保持通200ml/L.min的壓縮空氣，葡萄糖起始濃度為135g/L，發(fā)酵過程中補加固體葡萄糖，保持發(fā)酵過程中發(fā)酵液中葡萄糖濃度在20~100g/L左右，培養(yǎng)72~90h，得2，3- 丁二醇發(fā)酵液，發(fā)酵結(jié)束時殘?zhí)菨舛?0~15g/L。
[0039]按照上述方法制備得到的2，3-丁二醇發(fā)酵液中2，3-丁二醇的濃度為40~160g/L0
[0040]2，3- 丁二醇發(fā)酵液經(jīng)8000rpm, IOmin離心，除菌體,得到2，3- 丁二醇發(fā)酵清液。
[0041]3.從2，3-丁二醇發(fā)酵液或2，3-丁二醇發(fā)酵清液中分離2，3_ 丁二醇的方法，包括以下步驟:
[0042]I)將糖或/和無機鹽溶解于2，3- 丁二醇發(fā)酵液或2，3- 丁二醇發(fā)酵清液中，得含糖混合液；
[0043]2)向步驟I)的含糖混合液中加入有機溶劑，振蕩混合，混合液在15~40°C下用XH-C漩渦混勻器或電動攪拌機混勻，室溫靜置12小時分相，得到水相和有機相兩層液相共存體系，其中上相(有機相)富含2，3-丁二醇，其中有機溶劑回收可重復(fù)使用，下相(水相)富含糖；取樣測定上相和下相中2，3-丁二醇的濃度，計算2，3-丁二醇的分配系數(shù)(Kbd)和回收率(Y);并測定相比(R)，具體計算公式為:
[0044]①相比(R) = V±/VT其中丫±為上相的體積，Vt為下相的體積；
[0045]②分配系數(shù)(Kbd) =C上/C下，其中C上為上相中2，3-丁二醇濃度(g/L)，C下為下相中2，3- 丁二醇濃度(g/L)；
[0046]③回收率(Y) = C±V±/CV，其中C上和V上分別為上相中2，3-丁二醇的濃度和上相體積，C和V分別為上述步驟I)中的2，3-丁二醇發(fā)酵液或2，3-丁二醇發(fā)酵清液中的2，3- 丁二醇的濃度和2，3- 丁二醇發(fā)酵液或2，3- 丁二醇發(fā)酵清液的體積。
[0047]3)取步驟2)中的有機相，在低于105°C條件下進(jìn)行減壓蒸餾除去有機溶劑和水，得2，3- 丁二醇 粗品；
[0048]4)步驟2)中所述的水相，去除有機溶劑，加入水稀釋至糖濃度為80~200g/L，接入菌體，進(jìn)行2，3- 丁二醇的發(fā)酵。
[0049]在上述方法中，步驟I)所述的糖為葡萄糖、木糖、果糖、阿拉伯糖、蔗糖、麥芽糖、菊芋、糖蜜、木糖母液中的一種或兩種以上以任何比例混合的混合物，含糖混合液中所述糖的濃度為100~500g/L ;所述無機鹽為硫酸銨、磷酸氫二鉀、磷酸氫二銨中的一種或兩種以上以任何比例混合的混合物，含糖混合液中所述無機鹽的濃度為I~100g/L ;所述有機溶劑為甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇、戊醇、油醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、碳酸二甲酯、碳酸二乙酯、丙酮、二氧六環(huán)、四氫呋喃中一種或兩種以上以任意比例混合的混合溶液。
[0050]在上述方法中，步驟I)中可以單獨加入糖，也可以將糖和無機鹽同時加入，鹽的加入能起到縮短成相時間、提高產(chǎn)物分配系數(shù)、減少上相糖量和下相溶劑量等作用。
[0051]在上述方法中，步驟4)中，去除水相中的有機溶劑時，盡可能降低水相中殘余有機溶劑的含量，避免有機溶劑對細(xì)胞的毒性，有利于進(jìn)一步的發(fā)酵，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)需要可以控制水相中殘余有機溶劑的含量。在本發(fā)明【具體實施方式】中，去除有機溶劑至在最終發(fā)酵體系中的有機溶劑含量低于5g/L。
[0052]4.在2，3-丁二醇發(fā)酵液、2，3-丁二醇發(fā)酵清液、上相、下相中測定2，3-丁二醇含量的方法:采用氣相色譜法進(jìn)行測定2，3- 丁二醇的濃度，色譜柱為毛細(xì)管柱，30mX Φ0.32mm，厚度為0.25 μ m ;檢測器為氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度為210°C ;柱溫的起始溫度為60°C，以2V /s階升到70°C，再以30°C /s階升至180°C，保持5min ;后進(jìn)樣器，進(jìn)樣口溫度為210°C，進(jìn)樣量2 μ L，樣品為每組三個平行，取平均值。
[0053]實施例1不同糖對2，3- 丁二醇分離效果的影響
[0054]按照上述3 (從2，3- 丁二醇發(fā)酵液或2，3_ 丁二醇發(fā)酵清液中分離2，3_ 丁二醇的方法)中步驟I)-3)所述的方法從2，3-丁二醇發(fā)酵清液中分離2，3-丁二醇。其中，2，3-丁二醇發(fā)酵清液中2，3- 丁二醇的濃度為85.54g/L，2，3- 丁二醇發(fā)酵清液中加入不同種的糖(糖的種類，如表1)溶解后，加入不同有機溶劑(有機溶劑種類，如表1)，混合、常溫下靜置、分相，取樣測定上相和下相中2，3-丁二醇的濃度，計算2，3-丁二醇的分配系數(shù)(Kbd)和回收率(Y);并測定相比(R)，結(jié)果如表1。有機溶劑與2，3-丁二醇發(fā)酵清液的體積比為1:1，糖的用量為發(fā)酵清液30% (w/v) 0
[0055]表1.不同種類的糖對2，3- 丁二醇分離效果的影響
[0056]
【權(quán)利要求】
1.一種萃取與發(fā)酵偶聯(lián)分離發(fā)酵液中2，3-丁二醇的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟: 1)將糖或/和無機鹽溶解于2，3-丁二醇發(fā)酵液中，得含糖混合液； 2)向步驟I)的含糖混合液中加入有機溶劑，振蕩混合，混合液在15~40°C下靜置或離心至分相，得到上層的有機相和下層的水相共存體系； 3)步驟2)中的有機相，在低于105°C條件下進(jìn)行減壓蒸餾除去有機溶劑和水，得2，3-丁二醇粗品； 4)步驟2)中所述的水相，去除有機溶劑，加入水稀釋至糖濃度為80~200g/L，接入菌體，進(jìn)行2，3-丁二醇的發(fā)酵。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟I)中所述的2，3-丁二醇發(fā)酵液為含菌體的2，3- 丁二醇發(fā)酵原液或去除菌體的2，3- 丁二醇發(fā)酵清液，所述2，3- 丁二醇發(fā)酵液中2，3- 丁二醇的濃度為40~160g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟I)中所述的糖在含糖混合液中的濃度為100~500g/L，所述無機鹽在含糖混合液中的濃度為I~100g/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟2)中所述的含糖混合液與有機溶劑的體積比為0.5~2:1。
5.根據(jù)權(quán)利要 求1所述的方法，其特征在于，步驟I)中所述的糖為葡萄糖、木糖、果糖、阿拉伯糖、蔗糖、麥芽糖、菊芋、糖蜜、木糖母液中的一種或兩種以上的混合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述無機鹽為硫酸銨、磷酸氫二鉀、磷酸氫二銨中的一種或兩種以上的混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)中所述的有機溶劑為甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇、戊醇、油醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、碳酸二甲酯、碳酸二乙酯、丙酮、二氧六環(huán)、四氫呋喃中一種或兩種以上的混合溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟4)中所述的去除有機溶劑的方法為減壓蒸餾或氣提法，其中減壓蒸餾的溫度為20~50°C，壓力為-0.08~-0.1MPa ;氣提法采用的氣體為CO2。
【文檔編號】C07C29/86GK104003844SQ201410223050
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年5月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月23日
【發(fā)明者】戴建英, 劉春嬌, 修志龍 申請人:大連理工大學(xué)