一種制備艾塞那肽的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種制備艾塞那肽的方法，解決了現(xiàn)有技術(shù)存在的成本高，收率低，雜質(zhì)（des-Glu15,Glu16-艾塞那肽）含量較大，不適合規(guī)?；a(chǎn)的問(wèn)題。本發(fā)明的具體步驟為：A）以氨基樹(shù)脂為起始樹(shù)脂，通過(guò)Fmoc固相合成法，按照艾塞那肽主鏈肽序依次偶聯(lián)具有N端Fmoc保護(hù)且側(cè)鏈保護(hù)的氨基酸，其中，肽序15-17的氨基酸偶聯(lián)反應(yīng)中，溶液DMF中添加其體積20%的2,2,2-三氟乙醇和1.5mol/L的尿素；B）肽樹(shù)脂裂解后，第一次純化采用反相填料，第二次純化采用陰離子樹(shù)脂，脫鹽后可以使雜質(zhì)des-Glu15,Glu16-艾塞那肽含量降低到0.1%以下，凍干，得到艾塞那肽。本發(fā)明提供了一種成本低、純度高，適合規(guī)?；a(chǎn)的艾塞那肽的制備工藝，此工藝既能有效控制des-Glu15,Glu16-艾塞那肽含量又不影響艾塞那肽的收率。
【專利說(shuō)明】一種制備艾塞那肽的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種多肽類藥物的制備方法，是一種合成的具有胰高血糖素樣肽-1 (GLP-1)受體激動(dòng)劑的II型糖尿病的治療特效藥-艾塞那肽的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]艾塞那肽,英文名:Exenatide,為一直鏈39肽,結(jié)構(gòu)式如下:
【權(quán)利要求】
1.一種制備艾塞那肽的方法，提供了一種成本低、純度高，適合規(guī)模化生產(chǎn)的艾塞那肽制備工藝，此工藝既能有效控制des-Glu15，GlU16-艾塞那肽含量又不影響艾塞那肽的收率問(wèn)題，其特征在于，所述方法包括以下步驟: 步驟1，以氨基樹(shù)脂為起始樹(shù)脂，通過(guò)Fmoc固相合成法，按照艾塞那肽主鏈肽序依次偶聯(lián)具有N端Fmoc保護(hù)且側(cè)鏈保護(hù)的氨基酸，其中，肽序15-17的氨基酸偶聯(lián)反應(yīng)中，溶液DMF中添加其體積20 %的2，2，2-三氟乙醇和1.5 mo I/L的尿素； 步驟2，肽樹(shù)脂裂解后，第一次純化采用反相填料，第二次純化采用陰離子樹(shù)脂，脫鹽后可以使雜質(zhì)des-Glu15，Glu16-艾塞那肽含量降低到0.1 %以下，凍干，得到艾塞那肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是: 其中，步驟I所述的固相合成方法，I)采用0.10-0.35 mmol/g的氨基樹(shù)脂為起始樹(shù)脂；2)采用由體積比為1:4的哌啶和DMF組成的去保護(hù)液脫除氨基樹(shù)脂上的Fmoc保護(hù)基；3)在偶聯(lián)劑系統(tǒng)的存在下,氨基樹(shù)脂和Fmoc-Ser(tBu) -OH偶聯(lián)得到Fmoc-Ser (tBu)-樹(shù)脂；4)重復(fù)步驟2)、3)，按照艾塞那肽主鏈肽序依次偶聯(lián)具有N端Fmoc保護(hù)且側(cè)鏈保護(hù)的氨基酸，其中，肽序15-17的氨基酸偶聯(lián)反應(yīng)中，溶液DMF中添加其體積20 %的2，2，2-三氟乙醇和1.5 mol/L的尿素，由于2，2，2-三氟乙醇可以破壞β結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，減輕肽鏈間聚集的傾向，可以提高肽鏈的溶劑化程度；而使用尿素分子對(duì)氫鍵的干擾作用破壞肽鏈的β_折疊，可以提高Fmoc-Glu (OtBu) -OH的縮合率。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是: 其中，步驟2所述的純化方法，將粗肽用水溶解后，I)第一次用C18柱純化，純化條件:流動(dòng)相為=A相:0.1 %TFA ；B相:乙腈；梯度程序?yàn)?15 % B，60 min內(nèi)至60 % B ;檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm ;收集目的峰餾分；2)第二次用陰離子交換柱(UniDEAE-1O);流動(dòng)相:A為緩沖液I溶液(10 mmol/L醋酸銨水溶液用稀氨水調(diào)節(jié)其pH值為7.30±0.20):乙腈=90:10 ；B為緩沖液II溶液(10 mmol/L醋酸銨+100 mmol/L氯化鈉水溶液用醋酸調(diào)節(jié)其pH值為4.50±0.20):乙腈=90:10 ;梯度程序?yàn)?100 % A，60 min內(nèi)至100 % B ;檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm ;收集目的峰餾分；3)脫鹽條件:流動(dòng)相:A相:20 mmol/L乙酸銨的水溶液:乙腈=95:5 ；Bff1:水:乙腈=95:5 ；Cff1:0.03 %醋酸的水溶液:乙腈=95:5 ；Dff1:0.03 %醋酸的水溶液:乙腈=50:50 ;梯度程序?yàn)?以流動(dòng)相A等梯度洗脫15分鐘，轉(zhuǎn)換成流動(dòng)相B等梯度洗脫10分鐘，轉(zhuǎn)換成流動(dòng)相C等梯度洗脫10分鐘，轉(zhuǎn)換成流動(dòng)相D等梯度洗脫25分鐘；檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm ;收集目的峰餾分；可以使des-Glu15，Glu16-艾塞那肽含量降低到0.1%以下，旋蒸濃縮，凍干得到艾塞那肽。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征是:
所述氨基樹(shù)脂選自Rink amide AM樹(shù)脂、Rink amide MBHA樹(shù)脂、Sieber樹(shù)脂；所述偶聯(lián)劑系統(tǒng)包括縮合劑和反應(yīng)溶劑，所述縮合劑選自DIC/H0Bt、PyB0P/H0Bt/DIEA或HATU/HOBt/DIEA ;所述反應(yīng)溶劑選自DMF、DCM、NMP, DMSO或他們之間的組合。
【文檔編號(hào)】C07K1/06GK103992401SQ201410179385
【公開(kāi)日】2014年8月20日 申請(qǐng)日期:2014年4月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月30日
【發(fā)明者】路楊, 楊東暉, 陳曉航, 周亮 申請(qǐng)人:杭州諾泰制藥技術(shù)有限公司