一種芳基萘型木脂素在制備抗前列腺癌藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種芳基萘型木脂素在制備抗前列腺癌藥物中的應(yīng)用，所述的芳基萘型木脂素是指下述化合物：6-羥基-4β-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-3α-羥甲基-7-甲氧基-3,4-二氫-2-萘醛，本發(fā)明還提供了芳基萘型木脂素類化合物的提取方法。本發(fā)明優(yōu)點在于：該化合物經(jīng)人前列腺癌細胞（PC-3，22RV1和C4-2）體外試驗，發(fā)現(xiàn)該芳基萘型木脂素可抑制不同類型前列腺癌細胞的增殖、侵襲和遷移，具有良好的抗前列腺癌活性，因此可用于制備抗前列腺癌藥物。
【專利說明】一種芳基萘型木脂素在制備抗前列腺癌藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種芳基萘型木脂素類化合物6-羥基-4 β - (4-羥基-3-甲氧基苯基)-3 α -羥甲基-7-甲氧基_3，4_ 二氫-2-萘醛在制備抗前列腺癌藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]前列腺癌是男性泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率和死亡率高，嚴重危害人類健康(Ahmedin Jemal, Rebecca Siegel, Jiaquan Xu and Elizabeth Ward.Cancer statistics, 2010.CA Cancer J Clin 2010, 60:277-300.)?？剐奂に刂委熓峭砥谇傲邢侔┑挠行е委煼椒ㄖ?，但經(jīng)過一段時間后幾乎所有患者病變將持續(xù)進展，轉(zhuǎn)變?yōu)槿莸挚剐郧傲邢侔?castration-resistant prostate cancer, CRPC),預(yù)后欠佳，CRPC患者的生存期很少超過12個月(Thompson I, Thrasher JB, Aus G, et al.Guideline for the management of clinically localized prostate cancer: 2007update.Urology 2007，177 (6): 2106-2131.)。目前，CRPC的發(fā)生機制尚不完全清楚，臨床仍缺乏有效的治療藥物。因此，尋求高效低毒的藥物治療CRPC是前列腺癌研究的主攻方向之一 O
[0003]馬鞭草科牡荊屬L.)植物全世界約有250種(裴鑒，陳守良.中國植物志[M]65 (I).北京:科學出版社，1982: 131)，主要分布于熱帶和溫帶地區(qū)。我國有14種，7變種，3變型，主產(chǎn)長江以南地區(qū)，少數(shù)種類向西北經(jīng)秦嶺至西藏高原，向東北經(jīng)華北至遼寧等地亦有分布，資源豐富。該屬多種植物具有較高`的藥用價值，其中較為常用白勺有單葉蔓笄[J Kiiez trifolia L.var.simp Ii ci folia Cham.,M.M V- trifolia L.,黃笄[J K negundo L.，牡荊 K negundo var.cannabifolia (Sieb.et Zucc.) Hand.-Mazz.以及穗花牡荊K agnus-castus L.,它們的葉、果實、根等多個部位都作藥用。其中，黃荊分布于我國20余省市，其中以四川盆地和秦巴山區(qū)資源最為豐富。黃荊的果實即黃荊子，具祛風解表，止咳平喘，理氣消食止痛的傳統(tǒng)功效(國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草[M].上?？茖W技術(shù)出版社，1999 (6): 596 - 598)。此外，黃荊子在民間還常被用作“化學閹割劑”用于抗雄激素治療(Bhargava SK.Antiandrogeniceffects of a flavonoid—rich fraction of Vitex negundo seeds: a histologicaland biochemical study in dogs.J Ethnopharmacol 1989， 27: 327 - 339 ；Das S，Parveen S， Kundra CPj Pereira BM.Reproduction in male rats is vulnerable totreatment with the flavonoid—rich seed extracts of Vitex negund0.PhytotherRes.2004, 18(1):8-13.)。目前，有關(guān)黃荊子的藥理活性研究主要集中在抗炎鎮(zhèn)痛、抗腫瘤以及抗氧化等方面，從中報導的化學成分主要類型有木脂素類、萜類(環(huán)烯醚萜、倍半萜、二萜和三萜)、黃酮類、植物留類等(李春正，蘇艷芳，靳先軍.牡荊屬植物化學成分及生物活性研究進展.中草藥[J]，2005，36(6):930-938)。其中，芳基萘型木脂素類成分為黃荊子中的主要特征性成分之一，包括6-羥基-4 β - (4-羥基-3-甲氧基苯基)-3 α -羥甲基-7-甲氧基-3，4-二氫-2-萘醒、Vitedoin A、Vitedoamine A> Vitrofolals E-F、去四氫刺柏木脂體(detetrahydroconidendrin)、Vitedoamine B、和 Vitexdoins A-1 等(OnoM, Nishida Y, Masuoka C， Li JC, Okawa M, Ikeda T, Nohara T.Lignan derivativesand a norditerpene from the seeds of Vitex negund0.J.Nat.Prod., 2004, 67(12): 2073 - 2075 ；Zheng CJ, Huang BK, Han T, Zhang QY, Zhang H, Rahman K, QinLP.Nitric oxide scavenging lignans from Vitex negundo seeds.J.Nat.Prod.,2009，72 (9): 1627 - 1630 ；Zheng CJ, Zhang Xff, Han T, Jiang YP, Tang JY, Br5mmeD, Qin LP.Ant1-1nflammatory and ant1-osteoporotic lignans from Vitex negundoseeds.Fitoterapia 2014, 10.1016/j.fitote.2013.12.006.)。現(xiàn)代藥理試驗表明，黃荊子中的芳基萘型木脂素類化合物具有多種生物活性，其中6-羥基-4 β-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-3 α-羥甲基-7-甲氧基-3，4-二氫-2-萘醛具有鎮(zhèn)痛活性(Zheng CJ，Tang WZ,Huang BK, Han T, Zhang QY, Zhang H, Qin LP.Bioactivity-guided fractionation foranalgesic properties and constituents of Vitex negundo L.seeds.Phytomedicine.2009，16: 560 - 567) ;6-羥基-4 β-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-3a-羥甲基-7-甲氧基-3，4-二氫-2-萘醒和 Vitexdoins A-E 具有抗炎活性(Zheng CJ, Huang BK,Han T, Zhang QY, Zhang H, Rahman K, Qin LP.Nitric oxide scavenging lignansfrom Vitex negundo seeds.J.Nat.Prod., 2009, 72 (9): 1627 - 1630 ；Chawla AS,Sharma AK, Handa SS.A lignan from Vitex negundo seeds.Phytochemistry, 1992,31 (12): 4378 - 4379) ;6-羥基-4β-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-3 a-羥甲基-7-甲氧基-3，4-二氫-2-萘醒、Vitedoin A、Vitedoamine A> Vitrofolals E-F、去四氫刺柏木脂體(detetrahydroconidendrin)具有抗氧化活性(0no M, Nishida Y, Masuoka C，Li JC,Okawa M, Ikeda T, Nohara T.Lignan derivatives and a norditerpene from the seedsof Vitex negund0.J.Nat.Prod., 2004，67 (12): 2073 - 2075)等。
[0004]至今未見芳基萘型木脂素6-羥基-4 β-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-3 α -羥甲基-7-甲氧基-3，4- 二氫-2-萘醛用于治療前列腺癌方面的報道?！?br/>【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種芳基萘型木脂素在制備抗前列腺癌藥物中的應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明的再一的目的是，提供芳基萘型木脂素類化合物的提取方法。
[0007]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
一種芳基萘型木脂素在制備抗前列腺癌藥物中的應(yīng)用，所述的芳基萘型木脂素是指下述化合物:6_羥基-4 β-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-3α-羥甲基-7-甲氧基_3，4_ 二氫-2-萘醒。
[0008]所述的前列腺癌是指激素非依賴性前列腺癌。
[0009]所述的前列腺癌是指激素依賴性前列腺癌。
[0010]為實現(xiàn)上述第二個目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
上述化合物以牡荊屬植物黃荊的果實為原料制備得到，制備方法可參考文獻ZhengCJj Huang BK，Han Tj Zhang QYj Zhang H，Rahman K，Qin LP.Nitric oxidescavenging lignans from Vitex negundo seeds.J.Nat.Prod., 2009, 72 (9):1627 - 1630 或文獻 Zheng CJ, Tang WZ, Huang BK, Han T, Zhang QY, Zhang H, Qin LP.Bioactivity-guided fractionation for analgesic properties and constituents ofVitex negundo L.seeds.Phytomedicine.2009, 16: 560 - 567。
[0011]上述化合物的制備方法包括如下步驟:芳基萘型木脂素類化合物的提取方法為:
(A)制備提取液:將黃荊果實粉碎后，用40~90%的乙醇熱提2~3次，每次溶媒用量為生藥量的8~10倍，每次提取時間為I~2小時，合并提取液；
(B)精制濃縮干燥:將上述提取液進行減壓濃縮，回收溶劑，濃縮液經(jīng)石油醚脫脂后，用乙酸乙酯萃取，濃縮得到乙酸乙酯部位；
(C)分離純化:將上述乙酸乙酯部位溶于水后上樣AB-8大孔吸附樹脂，收集60~80%乙醇洗脫部分，經(jīng)S印hadex LH-20凝膠柱色譜純化，80%甲醇-水為洗脫系統(tǒng)，得到上述芳基萘型木脂素。
[0012]本發(fā)明優(yōu)點在于:
1、本發(fā)明對芳基萘型木脂素發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開拓了一個新的應(yīng)用領(lǐng)域。
[0013]2、本發(fā)明的6-羥基-4 β - (4-羥基-3-甲氧基苯基)_3 α -羥甲基_7_甲氧基_3，
4-二氫-2-萘醛安全無毒，藥理作用強，預(yù)示著很好的藥用前景。
[0014]3、上述化合物經(jīng)人前列腺癌細胞(PC_3，22RV1和C4_2)體外試驗，發(fā)現(xiàn)該芳基萘型木脂素可抑制不同類型前列腺癌細胞的增殖、侵襲和遷移，具有良好的抗前列腺癌活性，因此可用于制備抗前列腺癌藥物。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]附圖1是芳基萘型木脂素6-羥基-4β_(4-羥基-3-甲氧基苯基)-3α-羥甲基-7-甲氧基-3，4-二氫-2-萘醛的化學結(jié)構(gòu)。
[0016]附圖2是化合物I對前列腺癌細胞增殖的抑制作用。
[0017]附圖3是化合物I抑制C4-2細胞侵襲和遷移。
[0018]附圖4是化合物I抑制PC-3細胞侵襲和遷移。
【具體實施方式】
[0019]實施例1:芳基萘型木脂素的制備
(O制備提取液:將黃荊果實藥材粉碎后，投入提取罐，用40~90%的乙醇熱提2~3次，每次溶媒用量約為生藥量的8~10倍，每次提取時間為I~2小時，合并提取液；
(2)精制濃縮干燥:將上述提取液進行減壓濃縮，回收溶劑，濃縮液經(jīng)石油醚脫脂后，用乙酸乙酯萃取，濃縮得到乙酸乙酯部位； (3)分離純化:將上述乙酸乙酯部位溶于水后上樣大孔吸附樹脂ΑΒ-8，上樣吸附后，用5倍量柱床體積的水洗除雜,再依次用體積分數(shù)為20、40、60、80、95%的乙醇洗脫，每次用量為6倍量柱床體積，收集合并60~80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮，濃縮液上樣凝膠柱色譜Sephadex LH-20,以80%甲醇-水為洗脫系統(tǒng)進行分離純化，得到芳基萘型木脂素6_羥基-4 β-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-3 α-羥甲基-7-甲氧基_3，4_ 二氫_2_萘醛。
[0020]結(jié)合1H-NMRj3C-NMI^ DEPT,COSY、HSQC, HMBC 以及 NOESY 等波譜數(shù)據(jù)(Zheng CJ, Huang BK, Han T, Zhang QY, Zhang H, Rahman K, Qin LP.Nitric oxidescavenging lignans from Vitex negundo seeds.J.Nat.Prod., 2009, 72 (9):1627 - 1630)，鑒定它的化學結(jié)構(gòu)見圖1。
[0021]實施例2:芳基萘型木脂素對人前列腺癌細胞(PC-3 (激素非依賴性前列腺癌細胞株)，22RV1 (激素依賴性前列腺癌細胞株)和C4-2 (激素非依賴性前列腺癌細胞株))增殖的影響
(一)細胞培養(yǎng)
PC-3，22RV1和C4-2細胞培養(yǎng)體系為RPMI1640培養(yǎng)基(Gibco)，含10%胎牛血清(hyclone)UOO U/ml青霉素、100 U/ml鏈霉素于37° C、5%C02飽和濕度條件下培養(yǎng)。
[0022](二)細胞增殖測試
采用Cell Counting Kit_8試劑盒(CCK-8)，取一定數(shù)量指數(shù)生長期的PC-3，22RV1和C4-2細胞接種于96孔板，分空白對照組和給藥(所述的藥物是6-羥基-4 β - (4-羥基-3-甲氧基苯基)-3 α-羥甲基-7-甲氧基-3，4-二氫-2-萘醛)組(0.1，I和10 μ Μ)每組設(shè)6個復(fù)孔。細胞給藥后繼續(xù)孵育(24，48，72和96h)，分別培養(yǎng)至規(guī)定時間后，加CCK-8 10 μ I,繼續(xù)孵育2 h，酶標儀檢測450 nm處光密度(OD)值(630 nm為參照波長)，重復(fù)實驗3次。計算藥物IC5tl值，結(jié)果見圖2。
[0023]由圖2可見，與空白對照組比較，化合物I可顯著抑制3株不同類型前列腺癌細胞株的增殖，4個時間點的IC5tl值均在1-10μΜ之間，且隨時間延長抑制作用越強，顯示了良好的體外抗前列腺癌作用。
[0024]實施例3:芳基萘型木脂素對人前列腺癌細胞(PC-3和C4-2)侵襲和遷移的影響 Transwell小室實驗:用50 μ L的50 μ g/mL的細胞外基質(zhì)(1:8)稀釋液包被
Transwell 8 μ m小室基底膜的上室面，4° C風干過夜，37° C水化I h，加入IOOyL含
0.1%BSA的無血清培養(yǎng)基稀釋細胞(PC-3或C4-2細胞密度為4X 105/mL)，下室中加入含10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基。常規(guī)培養(yǎng)48 h，甲醛固定，0.1%結(jié)晶紫染色，光鏡下(10X)觀察，評估藥物對細胞侵襲能力的影響Jranswell小室基底膜的上室面不包被細胞外基質(zhì)，加入100 μ L含0.1%BSA的無血清培養(yǎng)基稀釋細胞，下室中加入含10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基，其它操作程序同上，評估藥物對細胞遷移能力的影響。結(jié)果見圖3和圖4。
[0025]由圖3和圖4可見，Transwell小室實驗顯示芳基萘型木脂素可顯著抑制PC_3或C4-2細胞侵襲與遷移。
[0026]上述實驗結(jié)果表明，苯代萘型木脂素6-羥基-4β_(4-羥基-3-甲氧基苯基)-3 α -羥甲基-7-甲氧基-3，4- 二氫-2-萘醛可顯著抑制人前列腺癌細胞的增殖、侵襲與遷移，具有良好的抗前列腺癌活性，因此可用于制備抗前列腺癌藥物。
[0027]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當指出，對于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進和補充，這些改進和補充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種芳基萘型木脂素在制備抗前列腺癌藥物中的應(yīng)用，所述的芳基萘型木脂素是指下述化合物:6_羥基-4 β-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-3 α-羥甲基-7-甲氧基_3，4_ 二氫-2-萘醒。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的前列腺癌是指激素非依賴性前列腺癌。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的前列腺癌是指激素依賴性前列腺癌。
4.權(quán)利要求1-3任一所述的芳基萘型木脂素類化合物的提取方法為: (A)制備提取液:將黃荊果實粉碎后，用40~90%的乙醇熱提2~3次，每次溶媒用量為生藥量的8~10倍，每次提取時間為I~2小時，合并提取液； (B)精制濃縮干燥:將上述提取液進行減壓濃縮，回收溶劑，濃縮液經(jīng)石油醚脫脂后，用乙酸乙酯萃取，濃縮得到乙酸乙酯部位； (C)分離純化:將上述乙酸乙酯部位溶于水后上樣ΑΒ-8大孔吸附樹脂，收集60~80%乙醇洗脫部分，經(jīng)S印hadex LH-20凝膠柱色譜純化，80%甲醇-水為洗脫系統(tǒng)，得到上述芳基萘型木脂素。`
【文檔編號】C07C45/78GK103860528SQ201410025746
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年1月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月21日
【發(fā)明者】孫穎浩, 鄭承劍, 任善成, 秦路平, 許傳亮 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學