制造含有叔氨基的脂質(zhì)的方法
【專利摘要】在分子中具有至少一個(gè)夾在相鄰的兩個(gè)順式形式的雙鍵之間的亞甲基的陽(yáng)離子脂質(zhì)的生產(chǎn)中，從順式形式向反式形式的異構(gòu)化受到抑制。使由下式(I)所表示的化合物：R1-X…(I)(式中，R1表示在分子中具有至少一個(gè)夾在相鄰的兩個(gè)順式形式的雙鍵之間的亞甲基并具有8至24的碳數(shù)的烴基，X表示釋放基團(tuán))與(B)在分子中具有叔氨基和羥基各至少一個(gè)的化合物，在具有5至10的碳數(shù)的飽和烴類溶劑中，在堿催化劑存在下進(jìn)行反應(yīng)。
【專利說(shuō)明】制造含有叔氨基的脂質(zhì)的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及用于制造含有叔氨基的脂質(zhì)的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 近年來(lái)，基因療法成為能夠預(yù)期在基因水平上使引起各種疾病的異常情況恢復(fù)和 正?；尼t(yī)學(xué)治療。然而，基因是非常不穩(wěn)定的。例如，在將基因原樣給藥的情形中，基因 經(jīng)歷由體內(nèi)的核酸酶等造成的分解。因此，用于基因療法的載體的選擇是非常重要的。
[0003] 過(guò)去使用的病毒載體是表現(xiàn)出高度基因轉(zhuǎn)移效率的有效載體。然而，已經(jīng)報(bào)道了 臨床試驗(yàn)與死亡相關(guān)聯(lián)的情況，使得對(duì)安全性存在顧慮。因此，具有高安全性和高基因?qū)?效率的非病毒載體的開(kāi)發(fā)已變成主流，并且已在世界各地進(jìn)行積極研究。
[0004] 非病毒載體包括諸如聚乙烯亞胺的陽(yáng)離子聚合物與基因的復(fù)合物（多聚物-核酸 復(fù)合物（polyplex))，和由陽(yáng)離子脂質(zhì)制成的脂質(zhì)體與基因的復(fù)合物（脂質(zhì)-核酸復(fù)合物 (Iipoplex))〇
[0005] 最重要的是，由于容易被官能化以便取決于所混合的脂質(zhì)的類型而在血液中具有 提高的持留性、積累到靶細(xì)胞等，脂質(zhì)-核酸復(fù)合物是目前最通常使用的載體，并且極有希 望進(jìn)入實(shí)際應(yīng)用。
[0006] 對(duì)于脂質(zhì)-核酸復(fù)合物的典型實(shí)例來(lái)說(shuō)，Wheeler等報(bào)道了將含有用作致融脂質(zhì) 的二油?；字Ｒ掖及罚―OPE)、陽(yáng)離子脂質(zhì)等的穩(wěn)定化的質(zhì)粒脂質(zhì)離子（SPLP)用聚乙 二醇脂質(zhì)包衣（NPL 1)。在所述報(bào)告中，對(duì)于陽(yáng)離子脂質(zhì)來(lái)說(shuō)，為了提高藥物遞送效率，使用 具有致融性質(zhì)并含有一個(gè)不飽和鍵例如油烯基的脂質(zhì)（例如DODAC (二油烯基二甲基氯化 銨））。
[0007] 此外，有報(bào)告指出，通過(guò)使用具有至少兩個(gè)不飽和鍵例如亞油烯基并表現(xiàn)出提高 的柔性的陽(yáng)離子脂質(zhì)，藥物遞送效率與以往相比進(jìn)一步提高（PTL 1)。另外，存在著使用類 似的陽(yáng)離子脂質(zhì)的報(bào)告（PTL 2)。
[0008] 對(duì)于其中使用的陽(yáng)離子脂質(zhì)來(lái)說(shuō)，脂質(zhì)部分與具有陽(yáng)離子基團(tuán)的骨架使用醚基鍵 合。與脂質(zhì)部分和具有陽(yáng)離子基團(tuán)的骨架使用酯基鍵合的陽(yáng)離子脂質(zhì)等相反，由于不發(fā)生 水解，因此表現(xiàn)出顯著的穩(wěn)定性。
[0009] -般來(lái)說(shuō)，在合成這樣的包含具有醚基的鍵的陽(yáng)離子脂質(zhì)的情形中，使用 Williamson等的方法，其中將具有陽(yáng)離子基團(tuán)和羥基的化合物與具有離去基團(tuán)的脂質(zhì)化合 物在有機(jī)溶劑中，在強(qiáng)堿存在下，在高溫下反應(yīng)。用于制造陽(yáng)離子脂質(zhì)化合物的具體方法的 實(shí)例，包括從含有陽(yáng)離子基團(tuán)（二甲基氨基）的3-二甲基氨基-1，2-丙二醇和長(zhǎng)鏈脂肪溴 化物或長(zhǎng)鏈脂肪甲磺酸酯，在芳香化合物溶劑例如苯、甲苯或二甲苯中，在強(qiáng)堿催化劑例如 氫氧化鈉或氫氧化鉀存在下，在高溫例如回流下進(jìn)行的生產(chǎn)（PTL 1和2)。
[0010] 總的來(lái)說(shuō)，已知在分子中具有夾在兩個(gè)順式形式的雙鍵之間的亞甲基的脂肪酸例 如亞油酸，由于所述亞甲基具有高反應(yīng)性，因此在高溫、堿等的條件下容易被氧化并且容易 異構(gòu)化。所述異構(gòu)化的脂肪酸（反式脂肪酸）表現(xiàn)出不同的生物活性。存在著例如過(guò)量攝 入增加死亡風(fēng)險(xiǎn)的報(bào)告。因此，可能在體內(nèi)發(fā)揮不利效應(yīng)。
[0011] 同時(shí)，已知具有一個(gè)雙鍵的脂肪酸例如油酸，由于在所述雙鍵的兩側(cè)包含亞甲基， 因此也經(jīng)歷氧化，盡管反應(yīng)性與亞油酸等的分子中夾在相鄰的兩個(gè)順式形式的雙鍵之間的 亞甲基的反應(yīng)性相比特別低，因此不容易發(fā)生異構(gòu)化。
[0012] [引用文獻(xiàn)列表]
[0013] [非專利文獻(xiàn)]
[0014] [NPL 1]Wheeler 等，基因治療（Gene Therapy) 6 :271-281(1999)
[0015] [專利文獻(xiàn)]
[0016] [PTL 1]日本未經(jīng)審查的專利申請(qǐng)公布（PCT申請(qǐng)的翻譯版本）No. 2008-501729
[0017] [PTL 2]日本未經(jīng)審查的專利申請(qǐng)公布（PCT申請(qǐng)的翻譯版本）No. 8-509953


【發(fā)明內(nèi)容】

[0018] [技術(shù)問(wèn)題]
[0019] 也就是說(shuō)，為了通過(guò)相關(guān)領(lǐng)域中的方法，通過(guò)在分子中具有夾在相鄰的兩個(gè)順式 形式的雙鍵之間的亞甲基的化合物，例如亞油烯基團(tuán)，的醚化獲得含有叔氨基的陽(yáng)離子脂 質(zhì)，需要高溫和強(qiáng)堿條件。因此，存在著夾在順式形式的雙鍵之間的活性亞甲基的質(zhì)子被容 易地抽出，發(fā)生從順式形式向反式形式的異構(gòu)化，并且在目標(biāo)物質(zhì)中含有許多異構(gòu)體的問(wèn) 題。
[0020] [解決問(wèn)題的技術(shù)方案]
[0021] 為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明人進(jìn)行了深入研究。結(jié)果，在分子中具有至少一個(gè)夾在 相鄰的兩個(gè)順式形式的雙鍵之間的亞甲基的陽(yáng)離子脂質(zhì)的生產(chǎn)中，成功實(shí)現(xiàn)了從順式形式 向反式形式的異構(gòu)化的顯著抑制。
[0022] (1) -種用于制造含有叔氨基的脂質(zhì)的方法，該方法包括：
[0023] 使㈧由下述式⑴所表示的化合物
[0024] R1-X ... (I)
[0025] (在式中，R1表示在分子中具有至少一個(gè)夾在相鄰的兩個(gè)順式形式的雙鍵之間的 亞甲基并具有8至24的碳數(shù)的烴基，X表示釋放基團(tuán)）與（B)在分子中具有叔氨基和羥基 各至少一個(gè)的化合物，在具有5至10的碳數(shù)的飽和烴類溶劑中，在堿催化劑存在下進(jìn)行反 應(yīng)。
[0026] (2)上述的制造方法，其中，所述飽和烴類溶劑是己烷或甲基環(huán)己烷。
[0027] (3)上述的制造方法，其中，R1是亞油烯基。
[0028] (4)上述的制造方法，其中，所述項(xiàng)（B)的在分子中具有叔氨基和羥基各至少一個(gè) 的化合物選自由下述式（Π -1)所表示的化合物
[0029]

【權(quán)利要求】
1. 一種用于制造含有叔氨基的脂質(zhì)的方法，該方法包括： 使（A)由下述式（I)所表示的化合物 Ri-X. . . (I) (式中，Ri表示在分子中具有至少一個(gè)夾在相鄰的兩個(gè)順式形式的雙鍵之間的亞甲基 并具有8至24的碳數(shù)的姪基，X表示釋放基團(tuán)）與炬）在分子中具有叔氨基和輕基各至少 一個(gè)的化合物，在具有5至10的碳數(shù)的飽和姪類溶劑中，在堿催化劑存在下進(jìn)行反應(yīng)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述飽和姪類溶劑是己焼或甲基環(huán)己焼。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，Ri是亞油帰基。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述炬）項(xiàng)的在分子中具有叔氨基和 輕基各至少一個(gè)的化合物選自由下式（II-1)所表示的化合物
[在式中，Z表示具有1至8的碳數(shù)的二價(jià)至八價(jià)姪基，其可W采取直鏈、支鏈或環(huán)狀形 狀，ki滿足1《ki《7, k2滿足1《k2《3,并滿足2《ki+k2《8,并且Y是由下列結(jié)構(gòu)所 表示的官能團(tuán)之一，
(R2和R3獨(dú)立地表示具有1至8的碳數(shù)的直鏈、支鏈或環(huán)狀?yuàn)┗⑶襑表示0或NR4 (R4 表示具有1至3的碳數(shù)的焼基））]，W及由下式（II-2)所表示的化合物
(在式中，m表示1至4, R5表示具有1至4的碳數(shù)的直鏈或支鏈焼基或-(CH2)"-0H(n 表示1至4))。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的方法，其中，X是甲賴酸醋基（-OSO2CH3)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述堿催化劑是氨氧化鐘。

【文檔編號(hào)】C07D295/08GK104428280SQ201380035717
【公開(kāi)日】2015年3月18日 申請(qǐng)日期:2013年6月21日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月2日
【發(fā)明者】久保和弘, 丹下耕太, 太田雅己 申請(qǐng)人:日油株式會(huì)社