一種從海洋產(chǎn)品中分離純化提取活性肽的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種從海洋產(chǎn)品牡蠣中用酶法水解牡蠣蛋白和超濾柱層析技術(shù)分離純化牡蠣活性肽的方法。將牡蠣剝殼、清洗、勻漿、加入蒸餾水得到牡蠣漿液在低溫下提??；絮凝、離心去渣，取上清液，將上清液凍干后，用Sephacryl?s-100HR柱分離或?qū)⒛迪牆{液酶解、滅酶、離心去渣、凍干得到粗提物，粗提物進行凝膠柱層析；收集各峰，再用離子交換柱層析進行分離純化，收集有活性的各峰，凍干后，用凝膠柱脫鹽，得到牡蠣天然活性多肽純品。通過本發(fā)明的制備方法得到的牡蠣活性多肽純度較高，具有抗腫瘤活性，而且該活性肽是天然提取的物質(zhì)，提取過程中對其生物活性進行了有效的保護，可以作為藥品加以開發(fā)利用。
【專利說明】一種從海洋產(chǎn)品中分離純化提取活性肽的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001]本發(fā)明屬于海洋天然產(chǎn)物加工【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種牡蠣從海洋產(chǎn)品中制取活性肽的方法，利用酶法水解牡蠣蛋白和超濾柱層析技術(shù)分離純化牡蠣活性肽。
【背景技術(shù)】:
[0002]牡蠣(Oyster)是一種海產(chǎn)貝類。牡蠣在分類上屬于軟體動物門，瓣鰓綱，異柱目，牡蠣超科，牡蠣科，它是一種食藥兩用的雙殼貝海產(chǎn)品。在我國南北沿海均有養(yǎng)殖，特別是廣東省近幾年來發(fā)展較快，牡蠣肉質(zhì)乳白、細嫩、營養(yǎng)豐富，除含有豐富的蛋白質(zhì)、維生素和糖類等營養(yǎng)成分外，還含有人體必需的十多種氨基酸、礦物質(zhì)營養(yǎng)成分等?，F(xiàn)研究還證明，牡蠣中含有豐富的糖原，是人體內(nèi)細胞進行代謝能源，可改善心臟及血液循環(huán)功能，并能增進肝臟的功能，具有保肝作用。糖原可直接為機體吸收利用，從而減輕胰腺負擔(dān)，對糖尿病的防治十分有利。牡蠣提取物有抗菌作用，對脊髓灰質(zhì)炎病毒和流感病毒有抑制作用，其水溶性成分尚可提高動物機體免疫力等等。牡蠣中含有豐富的生物活性物質(zhì)，具有顯著的醫(yī)療保健功效。
[0003]從牡蠣中提取活性物質(zhì)的研究早有報道，并且具有顯著醫(yī)療保健作用的牡蠣保健食品已經(jīng)有大量銷售。如深圳海王集團在牡蠣相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)研究中，已經(jīng)取得了顯著的經(jīng)濟效益和社會效益，為了進一步推進該項目的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展，正在努力研發(fā)高效的牡蠣保健食品和藥品。專利文獻“一種牡蠣活性肽的制備方法”，是以太平洋牡蠣為原料，采用酶法水解-納濾脫鹽濃縮工藝制備牡蠣活性肽的方法，屬于食品生物【技術(shù)領(lǐng)域】，并未涉及到醫(yī)藥領(lǐng)域。近年來，歐洲、日本、美國等發(fā)達國家對牡蠣中生物活性物質(zhì)的研究日益增多，但是真正從牡蠣中找到具有顯著生物活性的物質(zhì)，并作為藥品進行開發(fā)的并未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】
:`[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種來源于海洋產(chǎn)品牡蠣中的具有生物活性的多肽蛋白類物質(zhì)的制備方法。通過本發(fā)明的制備方法得到的牡蠣活性多肽純度較高，而且該活性肽是天然提取的物質(zhì)，未經(jīng)過任何化學(xué)修飾，提取過程中對其生物活性進行了有效的保護，可以作為藥品成分加以開發(fā)利用。
[0005]為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
[0006]將牡蠣剝殼、清洗、勻漿、加入蒸餾水得到牡蠣漿液在10°C以下低溫提??；再絮凝、離心去渣，取上清液，將上清液凍干后，用葡聚糖凝膠(S印hacryl) S-100HR柱分離(PH值為7.4的NH4HCO3緩沖液洗脫)，分別收集各峰后取有生物活性的峰再進行離子交換柱層析，收集有活性的各峰，凍干后，用凝膠柱脫鹽，得到牡蠣天然活性多肽純品，是未經(jīng)任何化學(xué)修飾的天然提取的活性物質(zhì)；或?qū)⒛迪牆{液酶解、滅酶、離心去渣、凍干得到粗提物，粗提物用葡聚糖凝膠Sephadex G25進行凝膠柱層析，分別收集各峰后取有生物活性的峰再進行離子交換柱層析進行分離純化，收集有活性的各峰，凍干后，用凝膠柱脫鹽，得到牡蠣天然活性多肽純品，是天然提取的活性物質(zhì)，屬于分子量較小的寡肽。[0007]本發(fā)明由于在提取過程對其提取成份的生物活性進行了有效的保護，使所得天然活性物質(zhì)經(jīng)體外抗腫瘤實驗表明本發(fā)明提取的天然活性多肽具有抗腫瘤活性，有可能成為一種新型的抗腫瘤藥物。
【具體實施方式】:
[0008]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的描述。
[0009]實施例1:
[0010]將牡蠣剝殼，取牡蠣肉，用4°C水清洗后，勻漿，按照1:1的重量比例加入蒸餾水低溫(4°C)提取2小時后，絮凝，離心去渣，取上清液，將上清液凍干后，用S^hacryl S-100HR柱分離(0.03mol/lNH4HC03緩沖液洗脫)，分別收集各峰后，取有生物活性的峰再用陰離子瓊脂糖凝膠DEAE-Sepharose - FF離子交換柱層析(PH8.5Tris_HCl緩沖液,0~0.3mol/INaCl梯度洗脫)，收集有活性的各峰，凍干后，用葡聚糖凝膠Sephadex G15凝膠柱脫鹽，得到牡蠣天然活性多肽純品。
[0011]實施例2:
[0012]將牡蠣剝殼、清洗、勻漿、按照I ;1的重量比例加入蒸餾水，并按照底物2%重量比加入胰蛋白酶，45°C酶解4小時、滅酶、離心去渣、凍干得到酶解粗提物，粗提物用葡聚糖凝膠Sephadex G25進行凝膠柱層析,收集各峰，再用陰離子瓊脂糖凝膠DEAE-Sepharose - FF離子交換柱層析進行分離純化(PH8.5Tris-HCl緩沖液，O~0.3mol/lNaCl梯度洗脫)，收集有活性的各峰，凍干后，用Sephadex G15凝膠柱脫鹽，得到牡蠣天然活性多肽純品。該活性肽是天然提取的物質(zhì)，屬于分`子量較小的寡肽，提取過程對其生物活性進行了有效的保護。
【權(quán)利要求】
1.一種從海洋產(chǎn)品中分離純化提取活性肽的方法，其特征在于按照以下步驟制備:將牡蠣剝殼、清洗、勻漿、加入蒸餾水得到牡蠣漿液在10°c以下低溫提??；再絮凝、離心去渣，取上清液，將上清液凍干后，經(jīng)柱分離，NH4HCOd^沖液洗脫或?qū)⒛迪牆{液酶解、滅酶、離心去渣、凍干得到粗提物，粗提物進行凝膠柱層析；分別收集各峰后取有生物活性的峰再進行離子交換柱層析，收集有活性的各峰，凍干后，用凝膠柱脫鹽，得到牡蠣天然活性多肽純品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從海洋產(chǎn)品中分離純化提取活性肽的方法，其特征在于將牡蠣剝殼，取牡蠣肉，用4°C水清洗后，勻漿，按照1:1的重量比例加入蒸餾水在4°C下提取2小時。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從海洋產(chǎn)品中分離純化提取活性肽的方法，其特征在于牡蠣勻漿上清液經(jīng)柱分離，PH值為7.4的NH4HCO3緩沖液洗脫或酶解粗提物凝膠柱層析收集各峰后，取有生物活性的峰再用離子交換柱層析，用PH8.5Tris-HCl緩沖液，O~0.3mol/INaCl梯度洗脫，收集有活 性的各峰，凍干后，凝膠柱脫鹽。
【文檔編號】C07K1/14GK103805663SQ201310618049
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2013年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月27日
【發(fā)明者】于洪洲, 張文良 申請人:于洪洲