抗-人epo受體的抗體及使用方法
【專利摘要】本文報(bào)道了一種抗體，所述抗體特異性結(jié)合人EPO受體，其中所述抗體結(jié)合EPO受體片段LPGPGGSVDIV(SEQ?ID?NO：01)，但是所述抗體不特異性結(jié)合分子量為約66kD的可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
【專利說明】抗-人EPO受體的抗體及使用方法
發(fā)明領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及抗-人EPO受體的抗體及其使用方法。
[0002]背景
[0003]人紅細(xì)胞生成素(erythropoietin,ΕΡ0)是166個(gè)氨基酸的糖蛋白，其參與紅系祖細(xì)胞的增殖和分化。這些細(xì)胞反應(yīng)由人EPO受體(EPO receptor,EP0R)介導(dǎo)，人EPO受體是508個(gè)氨基酸的糖蛋白。EPO受體是長(zhǎng)度為508個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)(Swiss Prot P19235)，其包含單個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域并且已被歸類為I類細(xì)胞因子受體生長(zhǎng)激素亞家族的成員。EPO受體描述于例如，ffinkelmann, J.C.等，Blood (血液)76 (1990) 24-30,和 Jones, S.S.等，Blood (血液)76 (1990) 31—35)。
[0004]從例如以下文獻(xiàn)中針對(duì)EPO受體的抗體是已知的:D’ Andrea, A.D.，Blood(血液)82 (1993) 46-52 ；Elliott, S.，Bloodl07 (2006) 1892—1895 ；Kirkeby, A.，J.Neurosc1.Methodsl64 (2007) 50-58 ；Miura, 0.，Arch.Biochem.306 (1993) 200-208 ；Mayeux, P.等，J.Biol.Chem.266 (1991) 23380-23385 ；ffestphal.G.等，Clin.Exp.Med.2 (2002) 45—52 ；Elliott, S.等，J.1mmunol.Meth.352(2010) 126—139，以及 EP1146056、EP1327681、EP0773962、EP0776370、US2002 / 0031806、US2003 / 0215444、US2004 / 0058393、US2004 / 0071694、US2004 / 0175379、US2005 / 0227289、US2005 / 0244409、US2006 /0018902、US6, 153，190、US6, 998，124、US7, 053，184、US7, 081，523、W01995 / 005469、W01996 / 003438、W02000 / 061637、W02004 / 035603、W02005 / 100403 和 W02010 /022924。然而，由于已知抗體對(duì)EPO受體缺少特異性，調(diào)查EPO受體在組織樣品中表達(dá)和定位的研究產(chǎn)生有分歧的和通常人為的結(jié)果(見，Jelkmann, W.等，Crit.Rev.0ne.Hematol.67(2008)39-61 ；Elliott, S.等，Bloodl07 (2006) 1892—1895 Jelkmann,ff.和 Laugsch，Μ.，J.Clin.0ncol.25(2007) 1627—1628 ;Kirkeby，A.等，J.Neurosc1.Methodsl64(2007)50—58 ；Laugsch, M.等，Int.J.Ca`ncerl22 (2008) 1005—1011)，或據(jù)報(bào)道，研究采用具有可疑特異性的抗體，并且觀察的意義是有爭(zhēng)議的(Elliott，S.，見上文)。
[0005]概述
[0006]已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，本文所述的抗體特異性結(jié)合人EPO受體，并且不與存在于內(nèi)皮細(xì)胞上/內(nèi)的類似大小的蛋白質(zhì)交叉反應(yīng)，從而允許產(chǎn)生明確的檢測(cè)結(jié)果。
[0007]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是體外檢測(cè)人EPO受體的方法，所述方法包括以下步驟:通過將樣品與特異性結(jié)合人EPO受體片段LPGPGGSVDIV(SEQ ID NO:01)的EPO受體的抗體溫育，體外確定所述樣品中人EPO受體的存在，由此體外檢測(cè)人EPO受體，其中所述特異性結(jié)合EPO受體片段LPGPGGSVDIV(SEQ ID NO:01)的EPO受體的抗體不特異性結(jié)合具有約58kD至約70kD分子量的可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
[0008]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法的特征在于所述抗體不特異性結(jié)合具有約66kD分子量的可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
[0009]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法的特征在于所述抗體以KT3M或更高的親和力結(jié)合所述可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。[0010]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法的特征在于所述抗體是多克隆抗體或單克隆抗體。
[0011]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法的特征在于所述抗體是人抗體、人源化抗體或嵌合抗體。
[0012]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法的特征在于所述抗體是結(jié)合人EPO受體的抗體片段。
[0013]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是特異性結(jié)合人EPO受體的抗體，其特征在于所述抗體結(jié)合人EPO受體片段LPGPGGSVDIV(SEQ ID NO:01)并且不特異性結(jié)合具有約58kD至約70kD分子量的可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
[0014]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體的特征在于其不特異性結(jié)合具有約66kD分子量的可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
[0015]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體的特征在于其以IO-3M或更高的親和力結(jié)合所述可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
[0016]在一個(gè)實(shí)施方案中,所述抗體的特征在于其是多克隆抗體或單克隆抗體。
[0017]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體的特征在于其是人抗體、人源化抗體或嵌合抗體。
[0018]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體的特征在于其是結(jié)合人EPO受體的抗體片段。
[0019]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是特異性結(jié)合人EPO受體并且可以用于如本文中所報(bào)道的方法的抗體。
·[0020]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是特異性結(jié)合人EPO受體的抗體，其用于如本文中所報(bào)道的方法。
[0021]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體的特征在于所述抗體結(jié)合EPO受體片段LPGPGGSVDIV(SEQ ID NO:01)并且不特異性結(jié)合具有約58kD至約70kD分子量的可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
[0022]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體的特征在于其不特異性結(jié)合具有約66kD分子量的可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
[0023]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體的特征在于其以KT3M或更高的親和力結(jié)合所述可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
[0024]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體的特征在于其是多克隆抗體或單克隆抗體。
[0025]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體的特征在于其是人抗體、人源化抗體或嵌合抗體。
[0026]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體的特征在于其是結(jié)合人EPO受體的抗體片段。
[0027]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是特異性結(jié)合人EPO受體的抗體在檢測(cè)人EPO受體中的用途，其特征在于所述抗體結(jié)合EPO受體片段LPGPGGSVDIV(SEQ ID NO:01)并且不特異性結(jié)合具有約58kD至約70kD分子量的可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
[0028]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述用途的特征在于所述抗體不特異性結(jié)合具有約66kD分子量的可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
[0029]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述用途的特征在于所述抗體以KT3M或更高的親和力結(jié)合所述可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
[0030]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述用途的特征在于所述抗體是多克隆抗體或單克隆抗體。[0031 ] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述用途的特征在于所述抗體是人抗體、人源化抗體或嵌合抗體。[0032]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述用途的特征在于所述抗體是結(jié)合人EPO受體的抗體片段。
[0033]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是用于預(yù)測(cè)或確定患者對(duì)用于增加紅細(xì)胞數(shù)目的藥物的反應(yīng)性的方法，所述方法包括
[0034]-通過將患者的樣品與如本文中所報(bào)道的EPO受體的抗體體外溫育并且體外確定所述抗體與所述樣品的結(jié)合來體外確定人EPO受體在所述患者的癌細(xì)胞上的存在，
[0035]由此，人EPO受體在患者癌細(xì)胞上的存在指示患者對(duì)用于增加紅細(xì)胞數(shù)目的藥物的反應(yīng)性。
[0036]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法的特征在于所述抗體不特異性結(jié)合具有約58kD至約70kD分子量(在一個(gè)實(shí)施方案中，約66kD)的、可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
[0037]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法的特征在于所述抗體以KT3M或更高的親和力結(jié)合所述可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
[0038]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法的特征在于所述抗體是多克隆抗體或單克隆抗體。
[0039]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法的特征在于所述抗體是人抗體、人源化抗體或嵌合抗體。
[0040]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法的特征在于所述抗體是結(jié)合人EPO受體的抗體片段。
[0041]本文中報(bào)道了這樣的抗體，其特異性結(jié)合具有氨基酸序列LPGPGGSVDIV(SEQ IDNO:01)的人EPO受體片段并且不結(jié)合人內(nèi)皮細(xì)胞。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，這樣的抗體可以通過以下方式獲得:用具有氨基酸序列LDKWLLPRNPPSED`LPGPGGSVDIV(SEQ ID NO:02)的EPO受體片段免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，并且之后將獲自實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抗體交叉吸附(即，選擇)到具有氨基酸序列LPGPGGSVDIV(SEQ ID NO:01)的 EPO 受體片段。
[0042]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是用于制備特異性結(jié)合人EPO受體的抗體的方法，所述方法包括以下步驟:
[0043]-用包含EPO 受體片段 LDKWLLPRNPPSEDLPGPGGSVDIV (SEQ ID NO:02)的多肽免疫動(dòng)物，和
[0044]-選擇結(jié)合EPO受體片段LPGPGGSVDIV(SEQID NO:01)的抗體并且由此制備特異性結(jié)合人EPO受體的抗體。
[0045]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述選擇是通過將獲自所述免疫的動(dòng)物的抗體交叉吸附到固定的SEQ ID NO:01的EPO受體片段。
[0046]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法的特征在于所述抗體不特異性結(jié)合具有約58kD至約70kD分子量(在一個(gè)實(shí)施方案中，約66kD)的、可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
[0047]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法的特征在于所述抗體以KT3M或更高的親和力結(jié)合所述可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
[0048]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法的特征在于所述抗體是多克隆抗體或單克隆抗體。
[0049]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法的特征在于所述抗體是人抗體、人源化抗體或嵌合抗體。
[0050]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法的特征在于所述抗體是結(jié)合人EPO受體的抗體片段。[0051]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是特異性結(jié)合人EPO受體的抗體，其中所述抗體結(jié)合EPO 受體片段 LPGPGGSVDIV(SEQ ID NO:01)。
[0052]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體對(duì)所述人EPO受體的親和力為10_7M以下。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體對(duì)所述人EPO受體的親和力為10-8Μ以下。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體對(duì)所述人EPO受體的親和力為5χ10_9Μ以下。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體對(duì)所述人EPO受體的親和力為2χ10_9Μ以下。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體對(duì)所述人EPO受體的親和力為約1.8χ10_9Μ。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體對(duì)所述人EPO受體的親和力為至少δχΙΟ,Μ。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體對(duì)所述人EPO受體的親和力為至少約6.βχΙΟ,Μ。
[0053]在所有方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體是多克隆抗體或單克隆抗體。
[0054]在所有方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體是小鼠抗體，或大鼠抗體，或兔抗體，或倉(cāng)鼠抗體，或綿羊抗體，或山羊抗體，或雞抗體，或猴抗體，或豬抗體，或人抗體，或人源化抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體是人抗體、人源化抗體或嵌合抗體。
[0055]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體是特異性結(jié)合人EPO受體的抗體片段。
[0056]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是分離的核酸，其編碼如本文中所報(bào)道的抗體。
[0057]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是宿主細(xì)胞，其包含編碼如本文中所報(bào)道的抗體的核酸。
[0058]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是制備如本文中所報(bào)道的抗體的方法，所述方法包括培養(yǎng)如本文中所報(bào)道的宿主細(xì)胞從而制備所述抗體。
[0059]在一個(gè)實(shí)施方案中 ，所述方法包括以下步驟:從所述宿主細(xì)胞或培養(yǎng)基回收抗體。
[0060]在一個(gè)實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞是原核細(xì)胞或真核細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是CHO細(xì)胞，或HEK細(xì)胞，或BHK細(xì)胞，或Sp2 / O細(xì)胞，或NSO細(xì)胞。
[0061]在一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞是大腸桿菌(E.coli)細(xì)胞或芽孢桿菌(Bacillus)細(xì)胞。
[0062]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是用于制備特異性結(jié)合人EPO受體的抗體的方法，所述方法包括以下步驟:
[0063]-用包含EPO 受體片段 LDKWLLPRNPPSEDLPGPGGSVDIV (SEQ ID NO:02)的多肽免疫動(dòng)物，和
[0064]-選擇結(jié)合EPO受體片段LPGPGGSVDIV(SEQID NO:1)的抗體，和
[0065]由此生產(chǎn)特異性結(jié)合人EPO受體的抗體。
[0066]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括以下額外步驟中的一個(gè)或多個(gè):
[0067]-培養(yǎng)包含編碼已被選擇的抗體的核酸的細(xì)胞，和/或
[0068]-從細(xì)胞或培養(yǎng)基回收抗體。
[0069]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是包含如本文中所報(bào)道的抗體和可檢測(cè)的標(biāo)記或細(xì)胞毒性劑的免疫綴合物。
[0070]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是包含如本文中所報(bào)道的抗體和任選地藥用載體的藥物制劑。
[0071]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是包含與可檢測(cè)的標(biāo)記綴合的如本文中所報(bào)道的抗體的診斷制劑。
[0072]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是如本文中所報(bào)道的抗體，其用作藥物。
[0073]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是如本文中所報(bào)道的抗體，其用于治療貧血。[0074]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是如本文中所報(bào)道的抗體，其用于改變患者中的紅細(xì)胞數(shù)目。
[0075]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是如本文中所報(bào)道的抗體在制備藥物中的用途。
[0076]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物用于治療貧血。
[0077]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物用于改變患者中的紅細(xì)胞數(shù)目。
[0078]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是治療患有貧血的個(gè)體的方法，所述方法包括向所述個(gè)體施用有效量的如本文中所報(bào)道的抗體用以改變/增加個(gè)體中的紅細(xì)胞數(shù)目。
[0079]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是改變個(gè)體中的紅細(xì)胞數(shù)目的方法，所述方法包括向所述個(gè)體施用有效量的如本文中所報(bào)道的抗體以改變個(gè)體中的紅細(xì)胞數(shù)目。
[0080]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是診斷試劑盒，其包含如本文中所報(bào)道的抗體。
[0081]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是用于制備包含如本文中所報(bào)道的抗體的診斷試劑盒的方法。
[0082]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是如本文中所報(bào)道的抗體在確定或分析人組織樣品中的人EPO受體中的用途。
[0083]在所有方面的一個(gè)實(shí)施方案中，樣品是人組織或人細(xì)胞的溶解產(chǎn)物。
[0084]在所有方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述樣品是組織的切片，或新鮮組織的切片，或冷凍的組織，或冷凍的組織的 切片，或福爾馬林固定的石蠟包埋的組織，或福爾馬林固定的石蠟包埋的組織的切片。
[0085]在所有方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述分析通過免疫化學(xué)，免疫熒光法，或免疫組織化學(xué)進(jìn)行。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述分析通過蛋白質(zhì)印跡或FACS或使用NIRF或PET的體內(nèi)成像進(jìn)行。
[0086]在所有方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述確定是通過將組織樣品與如本文中所報(bào)道的抗體溫育并檢測(cè)所述抗體與所述組織樣品的結(jié)合。
[0087]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是用于預(yù)測(cè)或確定患者對(duì)用于增加紅細(xì)胞數(shù)目的藥物的反應(yīng)性的方法，所述方法包括
[0088]-體外確定人EPO受體在患者癌細(xì)胞上的存在，和
[0089]-將人EPO受體在患者癌細(xì)胞上的存在與患者對(duì)用于增加紅細(xì)胞數(shù)目的藥物的反應(yīng)性相關(guān)聯(lián)。
[0090]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是用于確定用于治療癌癥患者的用于增加紅細(xì)胞數(shù)目的藥物的劑量的方法，所述方法包括:
[0091]-體外確定人EPO受體在患者癌細(xì)胞上的存在，和
[0092]-當(dāng)確定存在人EPO受體時(shí)，決定不施用或施用較低劑量的增加紅細(xì)胞數(shù)目的藥物，和
[0093]-當(dāng)確定不存在人EPO受體時(shí)，決定施用一定劑量的增加紅細(xì)胞數(shù)目的藥物。
[0094]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是用于預(yù)測(cè)或確定患者對(duì)用于增加紅細(xì)胞數(shù)目的藥物的反應(yīng)性的方法，所述方法包括
[0095]-體外確定人EPO受體在患者癌細(xì)胞上的密度，
[0096]-將人EPO受體在患者癌細(xì)胞上的密度與患者對(duì)用于增加紅細(xì)胞數(shù)目的藥物的反應(yīng)性相關(guān)聯(lián)。[0097]如本文中所報(bào)道的一個(gè)方面是用于確定用于治療癌癥患者的用于增加紅細(xì)胞數(shù)目的藥物的劑量，所述方法包括:
[0098]-體外確定人EPO受體在患者癌細(xì)胞上的存在，和
[0099]-在人EPO受體存在的情況下，決定不施用或施用較低劑量的增加紅細(xì)胞數(shù)目的藥物，和
[0100]-在不存在人EPO受體的情況下，決定施用正常劑量的增加紅細(xì)胞數(shù)目的藥物。
[0101]在所有方面的一個(gè)實(shí)施方案中，確定人EPO受體在癌細(xì)胞上的存在或確定人EPO受體在癌細(xì)胞上的密度是通過將患者的組織樣品與如本文中所報(bào)道的EPO受體的抗體體外溫育并且在體外確定所述抗體與所述樣品的結(jié)合。
[0102]在一個(gè)實(shí)施方案中，增加紅細(xì)胞數(shù)目的藥物是紅細(xì)胞生成素。
[0103]附圖簡(jiǎn)述
[0104]圖1對(duì)來自wt-HELA、HELA-EP0R和UT-7細(xì)胞的溶解產(chǎn)物的蛋白質(zhì)印跡分析。
[0105]圖2對(duì)wt-HELA和HELA-EP0R細(xì)胞的免疫細(xì)胞化學(xué)分析:Α:ΕΡ0受體-GFP融合蛋白:示例的如本文中所報(bào)道的抗體。
[0106]圖3對(duì)wt-HELA和HELA-EP0R細(xì)胞的免疫組織化學(xué)分析:A:野生型HELA細(xì)胞；B:EP0R-HELA。
[0107]圖4對(duì)來自UT-7、HUVEC(人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞)和HMVEC細(xì)胞(人微血管內(nèi)皮細(xì)胞)的溶解產(chǎn)物的蛋白質(zhì)印跡分析。
[0108]序列簡(jiǎn)述
[0109]SEQ ID NO:01人EPO受體的片段，其具有氨基酸序列LPGPGGSVDIV。
[0110]SEQ ID NO:02人EPO受體的片段，其具有氨基酸序列LDKWLLPRNPPSEDLPGPGGSVDIV。
[0111]SEQ ID NO:03人EPO受體前體的氨基酸序列。
[0112]發(fā)明實(shí)施方案詳述
[0113]1.定義
[0114]用于本文目的的“接納體人構(gòu)架”是包含獲自人免疫球蛋白構(gòu)架或如下所定義的人共有構(gòu)架的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)構(gòu)架或重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)構(gòu)架的氨基酸序列的構(gòu)架?！矮@自”人免疫球蛋白構(gòu)架或人共有構(gòu)架的接納體人構(gòu)架可以包含其相同的氨基酸序列，或其可以包含氨基酸序列的變化。在一些實(shí)施方案中，氨基酸變化的數(shù)目為10以下，9以下，8以下，7以下，6以下，5以下，4以下，3以下，或2以下。在一些實(shí)施方案中，VL接納體人構(gòu)架的序列與VL人免疫球蛋白構(gòu)架序列或人共有構(gòu)架序列相同。
[0115]“親和力”是指分子(例如抗體)的單一結(jié)合位點(diǎn)與其結(jié)合配偶體(例如抗原)之間全部非共價(jià)相互作用總和的強(qiáng)度。除非另有說明，在用于本文時(shí)，“結(jié)合親和力”指反映結(jié)合對(duì)的成員(例如抗體與抗原)之間1:1相互作用的內(nèi)在結(jié)合親和力。分子X對(duì)其配偶體Y的親和力通常可用解離常數(shù)(也作Kd或KD或平衡常數(shù))來表述。親和力可通過本領(lǐng)域知道的常用方法(包括本文中所描述的那些)來測(cè)量。當(dāng)確定多克隆抗體的親和力時(shí)，親和力也被稱為“表觀親和力”。 用于測(cè)量結(jié)合親和力的具體說明性和示例性實(shí)施方案描述于以下。
[0116]術(shù)語(yǔ)“抗-人EPO受體的抗體”和“結(jié)合人EPO受體的抗體”是指能夠以足夠的親和力結(jié)合SEQ ID NO:03的人EPO受體，從而使得所述抗體用作靶向人EPO受體的診斷和/或治療劑。在一些實(shí)施方案中，結(jié)合人EPO受體的抗體具有≤1OnM, ≤1nM, ≤ 0.1nM,≤0.01nM，或≤0.001nM(例如，KT8M以下，例如，KT8M至10_13M，例如，KT9M至10-13M)的解離常數(shù)(Kd)。在一些實(shí)施方案中，抗-人EPO受體的抗體結(jié)合在來自不同物種的人EPO受體中保守的人EPO受體的表位。
[0117]術(shù)語(yǔ)"抗體"在本文中以最廣義使用，并且包括不同抗體結(jié)構(gòu)，包括但不限于單克隆抗體，多克隆抗體，多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)，和抗體片段，只要它們顯示所需的抗原結(jié)合活性。
[0118]"抗體片段"是指不同于完整抗體的分子，其包含完整抗體的部分，所述部分結(jié)合完整抗體結(jié)合的抗原?？贵w片段的實(shí)例包括但不限于Fv，F(xiàn)ab，F(xiàn)ab'，F(xiàn)ab’_SH，F(xiàn)(ab' )2 ；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv);和由抗體片段形成的多特異性抗體。
[0119]術(shù)語(yǔ)“嵌合”抗體是指這樣的抗體，其中一部分重鏈和/或輕鏈來源于特定來源或物種，而剩余的重鏈和/或輕鏈來源于不同來源或物種。
[0120]抗體的“類別”是指其重鏈具有的恒定結(jié)構(gòu)域或恒定區(qū)的類型。有五個(gè)主要類別的抗體:IgA，IgD，IgE，IgG和IgM，并且這些中的一些可以進(jìn)一步被劃分為亞類(同種型)，例如，IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1和IgA2。對(duì)應(yīng)于不同類別的免疫球蛋白的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域分別被稱為α，δ，ε，Y和μ。
[0121]術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞毒性劑”用在本發(fā)明中指抑制或防止細(xì)胞功能和/或引起細(xì)胞死亡或破壞的物質(zhì)。細(xì)胞毒性劑包括但不限于:放射性同位素(例如，At211，I131，I125，Y90, Re186，Re188，Sm153, Bi212, P32，Pb212和Lu的放射性同位素)；化療劑或藥物(例如，甲氨蝶呤(methotrexate),阿霉素(adriamicin),長(zhǎng)春花生物喊(vinca alkaloids)(長(zhǎng)春新堿(vincristine)，長(zhǎng)春堿(vinblastine),依托泊苷(etoposide)),多柔比星(doxorubicin),美法侖(melphalan),絲裂霉素(mitomycin) C,苯丁酸氮芥(chlorambucil),柔紅霉素(daunorubicin)或其它嵌入劑)；生長(zhǎng)抑制劑；酶及其片段如核酸水解酶；抗生素；毒素如小分子毒素或細(xì)菌、真菌、植物或動(dòng)物起源的酶促活性毒素，包括其片段和/或變體；和下面公開的各種抗腫瘤或抗癌劑。
[0122]“效應(yīng)子功能”指那些可歸于抗體Fe區(qū)且隨抗體同種型而變化的生物學(xué)活性?？贵w效應(yīng)子功能的實(shí)例包括=Clq結(jié)合和補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC) ；Fc受體結(jié)合；抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC);吞噬作用；細(xì)胞表面受體(例如B細(xì)胞受體)下調(diào)jPB細(xì)胞活化。
[0123]試劑例如藥物制劑的"有效量"是指在需要的劑量和時(shí)間階段有效獲得所需的治療或預(yù)防結(jié)果的量。
[0124]術(shù)語(yǔ)“Fe區(qū)”在本文中用于定義免疫球蛋白重鏈的C端區(qū)域，所述區(qū)域包含至少一部分的恒定區(qū)。該術(shù)語(yǔ)包括天然序列Fe區(qū)和可變Fe區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，人IgG重鏈Fe區(qū)從Cys226或Pro230延伸至重鏈的羰基端。然而，F(xiàn)e區(qū)的C端賴氨酸(Lys447)可以存在或者可以不存在。除非另外說明，F(xiàn)e區(qū)或恒定區(qū)中的氨基酸殘基的編號(hào)是根據(jù)EU編號(hào)系統(tǒng)，其也被稱為 EU 索引，如在 Kabat, E.A.等，Sequences ofProteins of ImmunologicalInterest (免疫學(xué)感興趣的蛋白質(zhì)的序列)，第5版，Public Health Service, NationalInstitutes ofHealth, Bethesda, MD(1991), NIH Publication91—3242 中所述。[0125]"構(gòu)架"或"FR"是指除高變區(qū)(HVR)殘基之外的可變結(jié)構(gòu)域殘基?？勺兘Y(jié)構(gòu)域的FR通常由四個(gè)FR結(jié)構(gòu)域組成:FR1，F(xiàn)R2，F(xiàn)R3和FR4。因此，HVR和FR序列通常出現(xiàn)在VH(或 VL)的以下序列中:FR1—Hl(Ll)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
[0126]術(shù)語(yǔ)“全長(zhǎng)抗體”、“完整的抗體”和“完整抗體”在本文被可交換地用于指結(jié)構(gòu)與天然抗體結(jié)構(gòu)基本相似或具有包含如本文所定義的Fe區(qū)的重鏈的抗體。
[0127]術(shù)語(yǔ)"宿主細(xì)胞"、"宿主細(xì)胞系"和"宿主細(xì)胞培養(yǎng)物"被可交換地使用并且是指其中引入外源核酸的細(xì)胞，包括這種細(xì)胞的后代。宿主細(xì)胞包括"轉(zhuǎn)化體"和"轉(zhuǎn)化的細(xì)胞"，其包括初級(jí)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞和來源于其的后代，而不考慮傳代的數(shù)目。后代在核酸含量上可能與親本細(xì)胞不完全相同，而是可以包含突變。本文中包括與在最初轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中篩選或選擇的具有相同功能或生物學(xué)活性的突變體后代。
[0128]“人抗體”指具有這樣的氨基酸序列的抗體，所述氨基酸序列對(duì)應(yīng)于這樣抗體的氨基酸序列，所述抗體由人或人細(xì)胞生成或來源于非人來源，其利用人抗體庫(kù)或其它人抗體編碼序列。人抗體的這種定義明確排除包含非人抗原結(jié)合殘基的人源化抗體。
[0129]“人共有構(gòu)架”是指這樣的構(gòu)架，即在選擇人免疫球蛋白VL或VH構(gòu)架序列中，其代表最常出現(xiàn)的氨基酸殘基。一般而言，對(duì)人免疫球蛋白VL或VH序列的選擇是從可變結(jié)構(gòu)域序列的亞型中選擇。一般而言，該序列的亞型是如Kabat，E.A.等，Sequencesof Proteins of Immunological Interest (免疫學(xué)感興趣的蛋白質(zhì)的序列)，第五版，Bethesda MD(1991), NIH Publication91— 3242，卷 I一3 中的亞型。在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)于VL，該亞型是如Kabat等(見上文)中的亞型κ I。在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)于VH，該亞型是如Kabat等(見上文)中的亞型III。
[0130]“人源化”抗體是指包含來自非人HVR的氨基酸殘基和來自人FR的氨基酸殘基的嵌合抗體。在一些實(shí)施方案中，人源化抗體將包含基本上所有的至少一個(gè)、通常兩個(gè)可變結(jié)構(gòu)域，其中所有或基本上所有的HVR(例如，CDR)對(duì)應(yīng)于非人抗體的那些，并且所有或基本上所有的FR對(duì)應(yīng)于人抗體的那些。人源化抗體任選可以包含至少一部分的來源于人抗體的抗體恒定區(qū)?？贵w(例如非人抗體)的“人源化形式”是指已經(jīng)進(jìn)行了人源化的抗體。
[0131]術(shù)語(yǔ)“高變區(qū)”或“HVR”是指抗體可變結(jié)構(gòu)域的每個(gè)區(qū)域，其序列高可變和/或形成結(jié)構(gòu)上限定的環(huán)(“高變環(huán)”)。通常，天然四鏈抗體包含六個(gè)HVR;三個(gè)在VH(HI，H2，H3)中，三個(gè)在VL(L1，L2，L3)中。HVR通常包含來自高變環(huán)和/或“互補(bǔ)決定區(qū)”(CDR)的氨基酸殘基，后者具有最聞序列可變性和/或涉及抗原識(shí)別。不例性聞變環(huán)發(fā)生在氣基酸殘基26-32 (LI)，50—52 (L2) ,91—96 (L3)，26-32 (Hl)，53—55 (H2)，和 96 —101 (H3)。(Chothia,C.和 Lesk，A.M.,J.Mol.Biol.196 (1987) 901—917)。示例性 CDR(CDR_L1，CDR-L2，CDR-L3，CDR-Hl, CDR-H2，和 CDR-H3)發(fā)生在氨基酸殘基 LI 的 24-34，L2 的 50-56，L3 的 89-97，Hl的 31—35B，H2 的 50-65，和 H3 的 95—102。(Kabat, E.A.等，Sequences of Proteinsof Immunological Interest (免疫學(xué)感興趣的蛋白質(zhì)的序列)，第5版，Public HealthService, National Institutes of Health, Bethesda, MD(1991), NIH Publication91—3242)。除了 VH中的⑶Rl，⑶R通常包含形成高變環(huán)的氨基酸殘基。⑶R還包含“特異性決定殘基”或“SDR”，其是與抗原接觸的殘基。SDR包含在被稱為縮短的(abbreviated)-OTR或 a-CDR 的 CDR 區(qū)域中。示例性 a-CDR(a_CDR-Ll， a_CDR_L2， a_CDR_L3， a-CDR-Hl，a-CDR-H2，和 a_CDR-H3)發(fā)生在氨基酸殘基 LI 的 31 — 34，L2 的 50-55，L3 的 89-96，Hl 的31—35B, H2 的 50—58，和 H3 的 95—102。(見 Almagro，J.C.和 Fransson，J.，F(xiàn)ront.Biosc1.13 (2008) 1619—1633)。除非另外說明，可變結(jié)構(gòu)域中的HVR殘基和其他殘基(例如，F(xiàn)R殘基)在本文中根據(jù)Kabat等(見上文)編號(hào)。
[0132]“免疫綴合物”是與一個(gè)或多個(gè)異源分子(包括但不限于細(xì)胞毒性劑)綴合的抗體。
[0133]“個(gè)體”或“受試者”是哺乳動(dòng)物。哺乳動(dòng)物包括但不限于，家養(yǎng)動(dòng)物(例如，牛，羊，貓，狗和馬)，靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如，人和非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物如猴)，兔，以及嚙齒類動(dòng)物(例如，小鼠和大鼠)。在一些實(shí)施方案中，個(gè)體或受試者是人。
[0134]"分離的"抗體是這樣的抗體，其已經(jīng)與其天然環(huán)境的組分分離。在一些實(shí)施方案中，將抗體純化至超過95%或99%純度，如通過例如電泳(例如，SDS-PAGE，等電聚焦(IEF)，毛細(xì)管電泳)或?qū)游?例如，離子交換或反相HPLC)確定的。為了回顧用于評(píng)估抗體純度的方法，參見，例如，F(xiàn)latman, S.等，J.Chromatogr.B848 (2007) 79-87。
[0135]"分離的"核酸是指這樣的核酸分子，其已經(jīng)與其天然環(huán)境的組分分離。分離的核酸包括包含在通常包含該核酸分子的細(xì)胞中的核酸分子，但是該核酸分子存在于染色體外或在不同于其天然染色體位置的染色體位置處。
[0136]“分離的編碼抗-人EPO受體的抗體的核酸”是指一個(gè)或多個(gè)核酸分子，其編碼抗體重和輕鏈(或其片段)，包括在單一載體或分開的載體中的這樣的核酸分子，以及存在于宿主細(xì)胞中的一個(gè)或多個(gè)位置處的這樣的核酸分子。
[0137]術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”在用于本文時(shí)指從一群基本上同質(zhì)的抗體中獲得的抗體，即除了可能的變體抗體(該變體抗體例如含有天然存在的突變或在產(chǎn)生單克隆抗體制劑的過程中出現(xiàn)，此類變體通常少量存在)外，構(gòu)成群體的個(gè)體抗體是相同的和/或結(jié)合相同的表位。相比于通常包括針對(duì)不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制劑，單克隆抗體制劑中的每個(gè)單克隆抗體針對(duì)抗原上的單一`決定簇。因此，修飾語(yǔ)“單克隆”表明抗體從基本上同質(zhì)的抗體群獲得的特征，不應(yīng)解釋為要求通過任何特定方法來生產(chǎn)抗體。例如，將根據(jù)本發(fā)明使用的單克隆抗體可通過多種技術(shù)來生成，包括但不限于雜交瘤法，重組DNA法，噬菌體展示法，和利用包含所有或部分的人免疫球蛋白基因座的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的方法，這樣的方法和用于制備單克隆抗體的其他示例性方法描述于本文中。
[0138]"天然抗體"是指天然存在的具有變化的結(jié)構(gòu)的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗體是約150,000道爾頓的異源四聚體糖蛋白，其由兩個(gè)相同的輕鏈和兩個(gè)相同的重鏈組成，所述鏈通過二硫鍵結(jié)合。從N末端至C末端，每個(gè)重鏈具有可變區(qū)(VH)，其也被稱為可變重結(jié)構(gòu)域或重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其后是三個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域(CH1，CH2和CH3)。類似地，從N末端到C末端，每個(gè)輕鏈具有可變區(qū)(VL)，其也被稱為可變輕結(jié)構(gòu)域或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其后是恒定輕(CL)結(jié)構(gòu)域。基于其恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列，抗體的輕鏈可以被分配給被稱為kappa (K)和lambda ( λ )的兩個(gè)類型中的一個(gè)。
[0139]術(shù)語(yǔ)“可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞”在全細(xì)胞的情況中表示多聚甲醛固定的過程，而在組織切片的情況中表示去石蠟過程之后，在檸檬酸緩沖液中在97°C進(jìn)行45min的表位回收。
[0140]術(shù)語(yǔ)“包裝說明書”用于指通常包括在治療產(chǎn)品的商品包裝中的使用說明，其包含關(guān)于適應(yīng)征、用法、劑量、給藥、組合療法、禁忌癥的信息和/或關(guān)于使用這樣的治療產(chǎn)品的
敬生
目口 ο[0141]相對(duì)于參比多肽序列的“百分比)氨基酸序列同一性”定義為在將所述序列進(jìn)行比對(duì)(并在必要時(shí)導(dǎo)入空位)以獲取最大百分比序列同一性，且不將任何保守取代視為序列同一性的部分之后，候選序列中的氨基酸殘基與參比多肽序列中的氨基酸殘基相同的百分?jǐn)?shù)?？墒褂帽绢I(lǐng)域各種方法進(jìn)行序列比對(duì)以便測(cè)定百分比氨基酸序列同一性，例如，使用公眾可得到的計(jì)算機(jī)軟件如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)軟件。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以決定測(cè)量比對(duì)的適宜參數(shù)，包括對(duì)所比較的序列全長(zhǎng)獲得最大比對(duì)所需的任何算法。然而，為此目的，％氨基酸序列同一性值使用序列比較計(jì)算機(jī)程序ALIGN-2產(chǎn)生。ALIGN-2序列比較計(jì)算機(jī)程序的作者是Genentech，lnc，并且源代碼已經(jīng)隨用戶文檔提交至美國(guó)版權(quán)局(Washington D.C.，20559)，其美國(guó)版權(quán)注冊(cè)登記號(hào)為TXU510087。公眾可通過Genentech, Inc.(South San Francisco, California)得到 ALIGN-2 程序，或者可以從源代碼編譯。ALIGN-2程序應(yīng)當(dāng)為在UNIX操作系統(tǒng)、包括數(shù)字UNIXV4.0D上使用而進(jìn)行編譯。ALIGN-2程序設(shè)定了所有序列比對(duì)參數(shù)并且不變。
[0142]在ALIGN-2應(yīng)用于氨基酸序列比較的情況中，給定氨基酸序列A相對(duì)于(to)、與(with)、或針對(duì)(against)給定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一'丨生(或者這樣說:給定氨基酸序列A具有或含有相對(duì)于、與或針對(duì)給定氨基酸序列B的某一 ％氨基酸序列同一性)如下計(jì)算:
[0143]100乘以X /Y比值
[0144]其中X是用序列比對(duì)程序ALIGN-2在該程序的A和B比對(duì)中評(píng)分為相同匹配的氨基酸殘基數(shù)，且其中Y是B中的氨基酸殘基總數(shù)?？梢岳斫?，當(dāng)氨基酸序列A與氨基酸序列B的長(zhǎng)度不相等時(shí)，A相對(duì)于B的％氨基酸序列同一性將不等于B相對(duì)于A的％氨基酸序列同一性。除非另外具體說明，在本文用的所有％氨基酸序列同一性的值都是用ALIGN-2計(jì)算機(jī)程序如前段所描述的那樣得到的。
[0145]術(shù)語(yǔ)“藥物制劑”指這樣的制劑，其以允許包含在其中的活性成分的生物學(xué)活性有效的形式存在，并且不包含對(duì)施 用所述制劑的受試者具有不可接受的毒性的另外的成分。
[0146]“藥用載體”是指藥物制劑中不同于活性成分的成分，其對(duì)受試者是無毒的。藥用載體包括但不限于緩沖劑、賦形劑、穩(wěn)定劑或防腐劑。
[0147]除非另外說明，術(shù)語(yǔ)“ΕΡ0受體”是指來自任何脊椎動(dòng)物來源(包括哺乳動(dòng)物如靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如人)和嚙齒類動(dòng)物(例如，小鼠和大鼠))的任何天然EPO受體。該術(shù)語(yǔ)包括“全長(zhǎng)”未加工的人EPO受體以及由細(xì)胞內(nèi)加工產(chǎn)生的任何形式的人EPO受體。該術(shù)語(yǔ)還包括人EPO受體的天然存在的變體，例如，剪接變體或等位變體。示例性人EPO受體的氨基酸序列顯示在SEQ ID NO:03中。
[0148]術(shù)語(yǔ)“治療(treatment)”(及其語(yǔ)法變化如“治療(treat) ”或“treating”)指在嘗試改變待治療的個(gè)體的天然進(jìn)程中的臨床干預(yù)，并且可以為了預(yù)防或在臨床病理學(xué)的進(jìn)程中進(jìn)行。治療的理想效果包括但不限于防止疾病發(fā)生或復(fù)發(fā)，緩和癥狀，消除疾病的任何直接或間接病理學(xué)后果，預(yù)防轉(zhuǎn)移，減少疾病進(jìn)展速率，改善或減輕疾病狀態(tài)，和癥狀緩解或改善的預(yù)后。在一些實(shí)施方案中，將本發(fā)明的抗體用于延緩疾病的發(fā)生或減緩疾病的進(jìn)展。
[0149]術(shù)語(yǔ)“可變區(qū)”或“可變結(jié)構(gòu)域”是指參與抗體與抗原結(jié)合的抗體重或輕鏈的結(jié)構(gòu)域。天然抗體的重鏈和輕鏈(VH和VL，分別地)的可變結(jié)構(gòu)域通常具有相似的結(jié)構(gòu)，其中每個(gè)結(jié)構(gòu)域包含四個(gè)保守的構(gòu)架區(qū)(FR)和三個(gè)高變區(qū)(HVR)。(參見，例如，Kindt,T.J.等，Kuby Immunology,第 6 版，W.H.Freeman and C0., N.Y.(2007)91 頁(yè))。單個(gè)VH或VL結(jié)構(gòu)域可以足以給予抗原結(jié)合特異性。此外，可以使用來自與特定抗原結(jié)合的抗體的VH或VL結(jié)構(gòu)域來分離結(jié)合所述抗原的抗體，以分別篩選互補(bǔ)VL或VH結(jié)構(gòu)域的文庫(kù)。參見，例如，Portolano, S.等，J.1mmunol.150 (1993) 880-887 ；Clackson, T.等，Nature352(1991)624-628。
[0150]術(shù)語(yǔ)"載體"是指能夠增殖與其相連的另一個(gè)核酸的核酸分子。該術(shù)語(yǔ)包括作為自我復(fù)制核酸結(jié)構(gòu)的載體以及結(jié)合到已經(jīng)引入其的宿主細(xì)胞的基因組中的載體。一些載體能夠指導(dǎo)與其可操作相連的核酸的表達(dá)。這樣的載體在本文中被稱為"表達(dá)載體"。
[0151]I1.組合物和方法
[0152]在一方面中，本發(fā)明部分基于這樣的發(fā)現(xiàn)，即特異性結(jié)合人EPO受體(尤其是SEQID NO:01的人EPO受體片段)的抗體，不顯示與人上皮或內(nèi)皮細(xì)胞交叉反應(yīng)或交叉結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，提供結(jié)合人EPO受體的抗體。本發(fā)明的抗體可以例如用于診斷或治療貧血或癌癥。本發(fā)明的抗體也可以用于在施用增加紅細(xì)胞數(shù)目的藥物之前(尤其是在施用紅細(xì)胞生成素之前)給患者分層(stratification)。
[0153]A.示例的抗-人EPO受體的抗體
[0154]在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供結(jié)合人EPO受體的分離的抗體。在一些實(shí)施方案中，抗-人EPO受體的抗體結(jié)合人EPO受體片段LPGPGGSVDIV(EpoR(361—371) ；SEQ ID NO:01)。
[0155]
【權(quán)利要求】
1.體外檢測(cè)人EPO受體的方法，所述方法包括以下步驟: 通過將樣品與特異性結(jié)合人EPO受體片段LPGPGGSVDIV(SEQ ID NO:01)的EPO受體的抗體溫育，體外確定所述樣品中人EPO受體的存在，由此體外檢測(cè)人EPO受體， 其中所述特異性結(jié)合EPO受體片段LPGPGGSVDIV(SEQ ID NO:01)的EPO受體的抗體不特異性結(jié)合具有約66kD分子量的可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
2.特異性結(jié)合人EPO受體的抗體，其特征在于所述抗體結(jié)合人EPO受體片段LPGPGGSVDIV(SEQ ID NO:01)并且不特異性結(jié)合具有約66kD分子量的可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
3.能夠用于根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法的特異性結(jié)合人EPO受體的抗體。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗體，其特征在于所述抗體結(jié)合EPO受體片段LPGPGGSVDIV(SEQ ID NO:01)并且不特異性結(jié)合具有約66kD分子量的可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
5.特異性結(jié)合人EPO受體的抗體在檢測(cè)人EPO受體中的用途，其特征在于所述抗體結(jié)合EPO受體片段LPGPGGSVDIV(SEQ ID NO:01)并且不特異性結(jié)合具有約66kD分子量的可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
6.預(yù)測(cè)或確定患者對(duì)增加紅細(xì)胞數(shù)目的藥物的反應(yīng)性的方法，所述方法包括: -通過將所述患者的樣品與權(quán)利要求2至4所述的EPO受體的抗體體外溫育和體外確定權(quán)利要求2至4所述的抗體與所述樣品的結(jié)合，體外確定人EPO受體在所述患者的癌細(xì)胞上的存在，和 -將人EPO受體在所述患者的·癌細(xì)胞上的存在與所述患者對(duì)增加紅細(xì)胞數(shù)目的藥物的反應(yīng)性相關(guān)聯(lián)。
7.用于制備特異性結(jié)合人EPO受體的抗體的方法，所述方法包括以下步驟: -用包含EPO受體片段LDKWLLPRNPPSEDLPGPGGSVDIV(SEQ ID NO:02)的多肽免疫動(dòng)物，和 -選擇特異性結(jié)合EPO受體片段LPGPGGSVDIV(SEQ ID NO:01)的抗體并且由此制備特異性結(jié)合人EPO受體的抗體。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或6或7所述的方法，根據(jù)權(quán)利要求2至4中任一項(xiàng)所述的抗體，或根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于所述抗體不特異性結(jié)合具有約58kD至約70kD分子量的可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或6至8中任一項(xiàng)所述的方法，根據(jù)權(quán)利要求2至4或8中任一項(xiàng)所述的抗體，或根據(jù)權(quán)利要求5或8的用途，其特征在于所述抗體以IO-3M或更高的親和力結(jié)合可獲自人內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或6至9中任一項(xiàng)所述的方法，根據(jù)權(quán)利要求2至4、8或9中任一項(xiàng)所述的抗體，或根據(jù)權(quán)利要求5或8或9所述的用途，其中所述抗體是多克隆抗體或單克隆抗體。
11.根據(jù)權(quán)利要求1或6至10中任一項(xiàng)所述的方法，根據(jù)權(quán)利要求2至4或8至10中任一項(xiàng)所述的抗體，或根據(jù)權(quán)利要求5或8至10中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述抗體是人抗體、人源化抗體或嵌合抗體。
12.根據(jù)權(quán)利要求1或6至11中任一項(xiàng)所述的方法，根據(jù)權(quán)利要求2至4或8至11中任一項(xiàng)所述的抗體，或根據(jù)權(quán)利要求5或8至11中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述抗體是結(jié)合人EPO受體的抗體片段。
13.藥物制劑，其包含權(quán)利要求2至4中任一項(xiàng)所述的抗體和藥用載體。
14.分離的核酸，其編碼根據(jù)權(quán)利要求2至4中任一項(xiàng)所述的抗體。
15.宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求14所述的核酸。
16.診斷試劑盒，其包含根據(jù)權(quán)利要求2至4中任一項(xiàng)所述的抗體。
17.根據(jù)權(quán)利要求2至4中任一項(xiàng)所述的抗體在分析人組織或細(xì)胞樣品中的EPO受體中的用途。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的用途，其特征在于所述樣品是人組織或細(xì)胞的溶解產(chǎn)物，或人組織的切片，或新鮮人組織的切片，或冷凍的人組織，或冷凍的人組織的切片，或福爾馬林固定的石蠟包埋的人組織，或福爾馬林固定的石蠟包埋的人組織的切片。
19.根據(jù)權(quán)利要求17或18中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述分析通過免疫化學(xué)，免疫熒光或免疫組織化學(xué)進(jìn)行。
20.根據(jù)權(quán) 利要求17至18中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述分析通過蛋白質(zhì)印跡進(jìn)行。
【文檔編號(hào)】C07K16/28GK103596984SQ201280029140
【公開日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2012年6月14日 優(yōu)先權(quán)日:2011年6月15日
【發(fā)明者】米夏埃多·雅爾施, 奧拉夫·蒙迪戈?duì)? 申請(qǐng)人:霍夫曼-拉羅奇有限公司