蛋白質(zhì)固定膜及制作方法、固定蛋白質(zhì)的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種蛋白質(zhì)固定膜及其制作方法以及固定蛋白質(zhì)的方法，所述蛋白質(zhì)固定膜，用于非生物材料與蛋白質(zhì)的連接，包括固定在所述非生物材料表面的金膜以及巰基自組裝分子膜，所述巰基自組裝分子膜固定在所述金膜的表面。該蛋白質(zhì)固定膜具有較高的活性以及固定效率高，蛋白質(zhì)的固定數(shù)量為50～100/匹克。此外，巰基自組裝分子膜致密度高，可以長時間的保持，保持時間在1年以上。
【專利說明】蛋白質(zhì)固定膜及制作方法、固定蛋白質(zhì)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物傳感器領(lǐng)域，具體涉及一種用于在磁電阻生物傳感器上固定蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)固定膜、該蛋白質(zhì)固定膜的制作方法以及在生物傳感器上固定蛋白質(zhì)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著科技的不斷進(jìn)步，在醫(yī)學(xué)、環(huán)境保護(hù)以及軍事等領(lǐng)域需要對生物分子進(jìn)行探測，如，在臨床醫(yī)學(xué)上用于疾病的診斷，在農(nóng)業(yè)上用于農(nóng)產(chǎn)品病源微生物檢測，在微生物領(lǐng)域用于生物毒劑的快速檢測等等。目前對生物分子的探測常采用酶電極法、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)等。
[0003]酶電極法是采用氧電極作為換能器，以葡萄糖氧化酶為活性材料，這種檢測方法容易受溶解氧含量的變化、高溫、電壓波動等的影響，因此檢測的穩(wěn)定性不高；而且，所采用的酶電極的尺寸較大，通常在IOcm以上，因此，這種檢測方法無法向微型化發(fā)展。
[0004]酶聯(lián)免疫吸附法是采用酶標(biāo)板作為固定抗體的材料，以雙抗體夾心法抓獲抗原物質(zhì)，并以酶標(biāo)儀檢測吸光度作為檢測結(jié)果。雖然這種方法所需的抗體數(shù)量較少，檢測的穩(wěn)定性以及靈敏度有所提高，但這種方法依賴于龐大、精密的光學(xué)系統(tǒng)，因此限制了其應(yīng)用范圍。
[0005]為此，研究人員開發(fā)了生物傳感器來檢測生物分子，磁標(biāo)記磁電阻(MR)生物傳感器即是一種較為先進(jìn)的生物傳感器，其具有靈敏度高、特異性好等優(yōu)點(diǎn)，而且可以向微型化發(fā)展，因此磁標(biāo)記磁電阻生 物傳感器具有廣泛地應(yīng)用前景。
[0006]磁標(biāo)記磁電阻生物傳感器是通過納米磁球來標(biāo)記抗原分子，通過磁電阻傳感器來探測磁球產(chǎn)生的磁場，從而探測抗原分子的一種新技術(shù)。具體地，請參閱圖1，磁標(biāo)記磁電阻生物傳感器包括磁電阻陣列1、蛋白質(zhì)固定膜(生物接口層)2、一抗3、抗原分子4、二抗5以及磁珠6，其中，磁電阻陣列I的表面制作有鉻層和金膜(圖中未示出)，蛋白質(zhì)固定膜2固定在磁電阻陣列I的表面，一抗3固定在蛋白質(zhì)固定膜2上；二抗5和磁珠6結(jié)合在一起形成免疫磁珠；抗原分子4位于一抗3和免疫磁珠之間，并連接一抗3和免疫磁珠,一抗
3、抗原分子4以及免疫磁珠結(jié)合在一起,形成夾心結(jié)構(gòu)；磁珠6產(chǎn)生的磁場可以改變磁電阻陣列的電阻，從而可以探測到抗原分子的存在。
[0007]盡管研究人員提出了上述結(jié)構(gòu)的磁標(biāo)記磁電阻生物傳感器，但是，由于此項(xiàng)技術(shù)的研究處于起步階段，因此目前所采用的蛋白質(zhì)固定膜的活性較低，固定效率低，即每個蛋白質(zhì)固定膜分子可固定的蛋白質(zhì)較少，而且保持時間短，一般僅為I~3個月。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述缺陷，本發(fā)明提供一種蛋白質(zhì)固定膜及其制作方法，其活性較高、固定效率高，而且保持時間長。
[0009]另外，本發(fā)明還提供一種固定蛋白質(zhì)的方法，該方法可以在非生物材料表面固定更多的蛋白質(zhì)，而且蛋白質(zhì)的活性高。[0010]本發(fā)明提供的一種蛋白質(zhì)固定膜，用于非生物材料與蛋白質(zhì)的連接，包括固定在所述非生物材料表面的金膜，還包括巰基自組裝分子膜，所述巰基自組裝分子膜固定在所述金膜的表面。
[0011]優(yōu)選地，所述巰基自組裝分子膜為碳鏈長度均為2~20的兩種有機(jī)分子的混合膜，所述兩種有機(jī)分子分別為一端含有巰基，另一端含有羧基的官能團(tuán)，以及一端含有巰基，另一端含有羥基的官能團(tuán)，所述巰基與所述金膜連接，所述羧基和所述羥基露出。
[0012]優(yōu)選地，所述金膜的厚度為10~80nm。
[0013]優(yōu)選地，在所述金膜與所述非生物材料之間還包括鉻層，所述鉻層的厚度為5~20nmo
[0014]本發(fā)明還提供一種蛋白質(zhì)固定膜的制作方法，包括以下步驟:
[0015]提供表面制作有金膜的基底；
[0016]清洗所述表面制作有金膜的基底的表面；
[0017]將所述表面制作有金膜的基底放入巰基化合物溶液中以使所述巰基化合物固定在所述金膜表面，從而在所述金膜的表面形成巰基自組裝分子膜。
[0018]優(yōu)選地，所述巰基化合物溶液為包含兩種巰基化合物的酒精溶液，所述兩種巰基化合物的碳鏈長度為2~20，其中，一種所述巰基化合物溶液包含有巰基和羧基；另一種所述巰基化合物溶液包含有巰基和羥基。
[0019]優(yōu)選地，在所述巰基化合物溶液中所述兩種巰基化合物的濃度均為0.1~10豪摩爾/升，所述兩種巰基化合物的比例為1:1。
[0020]優(yōu)選地，所述兩種巰基化合物為巰基乙酸和巰基乙醇，或巰基11酸和巰基11醇，或疏基16酸和疏基11醇。
[0021]優(yōu)選地，所述巰基化合物溶液的溫度為40~100°C，所述表面制作有金膜的基底在所述巰基化合物溶液中放置I~5小時。
[0022]優(yōu)選地，在所述金膜的表面形成巰基自組裝分子膜后，還包括清洗所述表面制作有金膜的基底，具體包括以下步驟:
[0023]將所述基底放入酒精溶液清洗3~6min ；
[0024]在含有10~30 (體積分?jǐn)?shù))％乙酸的酒精溶液中清洗3~6min ；
[0025]再次利用酒精溶液清洗3~6min。
[0026]另外，本發(fā)明還提供一種固定蛋白質(zhì)的方法，用于在非生物材料制作的基底表面固定蛋白質(zhì)，包括以下步驟:
[0027]在所述基底表面制作金膜；
[0028]在所述金膜的表面制作本發(fā)明所提供的所述蛋白質(zhì)固定膜；
[0029]借助所述蛋白質(zhì)固定膜將蛋白質(zhì)固定在所述金膜的表面。
[0030]優(yōu)選地，借助所述蛋白質(zhì)固定膜將蛋白質(zhì)固定在所述金膜的表面，包括以下步驟:
[0031]通過含有活化劑的乙磺酸溶液使固定在所述基底表面的所述蛋白質(zhì)固定膜活化；
[0032]用磷酸鹽溶液洗滌所述基底3次以上；
[0033]將所述基底放入蛋白質(zhì)溶液中，使所述蛋白質(zhì)固定膜與所述蛋白質(zhì)溶液中的蛋白質(zhì)發(fā)生共價反應(yīng)，從而將所述蛋白質(zhì)固定在所述基底表面。
[0034]優(yōu)選地,所述蛋白質(zhì)溶液的濃度為0.01~lmg/ml,所述蛋白質(zhì)溶液的溫度為4~40°C，反應(yīng)時間為0.5~2小時。
[0035]優(yōu)選地，所述含有活化劑的乙磺酸溶液的濃度為0.5~10mg/ml，所述活化過程是在室溫下避光反應(yīng)10分鐘~I小時。
[0036]優(yōu)選地，所述活化劑為3-乙基碳化二亞胺。
[0037]優(yōu)選地，借助所述蛋白質(zhì)固定膜將蛋白質(zhì)固定在所述金膜的表面后，還包括:將固定蛋白質(zhì)的所述基底在4~40°C的封閉液中放置10分鐘~I小時，所述封閉液為含5(體積分?jǐn)?shù))％牛血清白蛋白的0.01~0.2摩爾/升的鹽酸鹽緩沖液，PH = 7.0~7.6。
[0038]本發(fā)明具有下述有益效果:
[0039]本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)固定膜為包含巰基自組裝分子膜的金膜，巰基自組裝分子膜具有較高的活性，更易與蛋白質(zhì)連接，而且?guī)€基自組裝分子膜的固定效率高，蛋白質(zhì)的固定數(shù)量為50~100/匹克。 此外，巰基自組裝分子膜致密度高，可以長時間的保持，可在4°C的溫度下保持時間在I年以上。
[0040]另外，本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)固定膜的制作方法是通過巰基化合物溶液而使金與巰基連接，從而在金層表面形成致密的巰基自組裝分子膜。通過該方法制作的巰基自組裝分子膜具有較高的活性，更易與蛋白質(zhì)連接，而且?guī)€基自組裝分子膜的固定效率高，蛋白質(zhì)的固定數(shù)量為50~100/匹克。此外，巰基自組裝分子膜致密度高，可以長時間的保持，保持時間在I年以上。
[0041]此外，本發(fā)明提供的固定蛋白質(zhì)的方法是通過本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)固定膜使蛋白質(zhì)固定在非生物材料表面，因此非生物材料表面的蛋白質(zhì)數(shù)量較多，而且蛋白質(zhì)的活性高。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0042]圖1為磁標(biāo)記磁電阻生物傳感器的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0043]圖2為本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)固定膜的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0044]圖3為本發(fā)明提供的在生物傳感器上制作蛋白質(zhì)固定膜的方法的流程圖；以及
[0045]圖4為本發(fā)明提供的固定蛋白質(zhì)的方法的流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0046]為使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合附圖對本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)固定膜及其制作方法以及固定蛋白質(zhì)的方法進(jìn)行詳細(xì)描述。
[0047]本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)固定膜是用于在非生物材料表面固定蛋白質(zhì)的固定膜，非生物材料既可以是非金屬材料，如硅片，也可以是金屬材料。
[0048]本實(shí)施例蛋白質(zhì)固定膜是用于在包含有磁電阻陣列的傳感器基底制作蛋白質(zhì)固定膜。如圖2所示，該蛋白質(zhì)固定膜包括固定在傳感器基底表面的金膜以及巰基自組裝分子膜，巰基自組裝分子膜固定在金膜的表面。
[0049]所述巰基自組裝分子膜為碳鏈長度均為2~20的兩種有機(jī)分子的混合膜，其中，一種有機(jī)分子的一端含有巰基(-SH),另一端含有羧基(-COOH)的官能團(tuán)；另一種有機(jī)分子的一端含有巰基(-SH)，另一端含有羥基(-0H)的官能團(tuán)。所述巰基與金膜連接，從而形成表面致密的巰基自組裝分子膜。羧基和羥基露出，而且羧基可以與蛋白質(zhì)分子中的氨基發(fā)生共價反應(yīng)；羥基可以增強(qiáng)巰基自組裝分子膜的致密度。
[0050]在所述金膜與所述傳感器基底之間還設(shè)有鉻層，所述鉻層的厚度為5~20nm，優(yōu)選8~15nm ;金膜的厚度為10~80nm,優(yōu)選20~70nm,更優(yōu)選25~60nm。
[0051]本實(shí)施例提供的蛋白質(zhì)固定膜為包含巰基自組裝分子膜的金膜，巰基自組裝分子膜具有較高的活性，更易與蛋白質(zhì)連接，而且?guī)€基自組裝分子膜的固定效率高，蛋白質(zhì)的固定數(shù)量為50~100/匹克。此外，巰基自組裝分子膜致密度高，可以長時間的保持，可在4°C的溫度下保持時間在I年以上。另外，包含巰基自組裝分子膜的金膜不影響制作在其表面的蛋白質(zhì)活性，從而可以保證蛋白質(zhì)與其它蛋白質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。
[0052]圖3為本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)固定膜的制作方法。本實(shí)施例蛋白質(zhì)固定膜是固定在生物傳感器的表面，該生物傳感器包括傳感器基底，在傳感器基底內(nèi)設(shè)有磁電阻陣列。請參閱圖3，蛋白質(zhì)固定膜的制作方法包括以下步驟:
[0053]步驟slO，提供表面制作有金膜的生物傳感器。
[0054]本步驟是提供生物傳感器，在生物傳感器的表面設(shè)有鉻層，鉻層的厚度為5~20nm,優(yōu)選8~15nm ;在鉻層的表面設(shè)有金膜，金膜的厚度為10~80nm,優(yōu)選20~70nm,更優(yōu)選25~60nm。本實(shí)施例所采用的生物傳感器的表面積為0.01~IOmm2,這里所指的表面積為需要制作蛋白質(zhì)固定膜的表面積。
[0055]步驟s20，清洗所述表面制作有金膜的傳感器。
[0056]本步驟是利用去離子水清洗傳感器的表面，以將金膜表面以及傳感器其它表面的灰塵、油污等污染物去除。
[0057]步驟s30，將所述表面制作有金膜的傳感器放入巰基化合物溶液中以使所述巰基化合物固定在所述金膜表面，從而在所述金膜的表面形成巰基自組裝分子膜。
[0058]所述巰基化合物溶液為包含兩種巰基化合物的酒精溶液，兩種巰基化合物的濃度均為0.1~10豪摩爾/升，兩種巰基化合物的比例為1:1。巰基化合物溶液的溫度為40~100°C，所述表面制作有金膜的基底在所述巰基化合物溶液中放置I~5小時。從而使巰基與金膜連接，從而形成表面致密的巰基自組裝分子膜。羧基和羥基露出，而且羧基可以與蛋白質(zhì)分子中的氨基發(fā)生共價反應(yīng)；羥基可以增強(qiáng)巰基自組裝分子膜的致密度。
[0059]本實(shí)施例兩種巰基化合物的碳鏈長度均為2~20，而且，一種所述巰基化合物溶液包含有疏基和竣基；另一種所述疏基化合物溶液包含有疏基和羥基。兩種疏基化合物可以為疏基乙酸和疏基乙醇，或疏基11酸和疏基11醇，或疏基16酸和疏基11醇。
[0060]步驟s40，清洗制作有巰基自組裝分子膜的傳感器。
[0061]將所述基底放入酒精溶液清洗3~6min ;在含有10~30 (體積分?jǐn)?shù))%乙酸的酒精溶液中清洗3~6min ;再次利用酒精溶液清洗3~6min。
[0062]本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)固定膜的制作方法是通過巰基化合物溶液而使金與巰基連接，從而在金層表面形成致密的巰基自組裝分子膜。通過該方法制作的巰基自組裝分子膜具有較高的活性，更易與蛋白質(zhì)連接，而且?guī)€基自組裝分子膜的固定效率高，蛋白質(zhì)的固定數(shù)量為50~100/匹克。此外，巰基自組裝分子膜致密度高，可以長時間的保持，保持時間在I年以上。
[0063]本實(shí)施例還提供一種固定蛋白質(zhì)的方法，如圖4所示，包括以下步驟:[0064]步驟SlOO，在所述傳感器表面制作金膜。
[0065]在傳感器表面的金膜可以采用濺射或其它現(xiàn)有的技術(shù)制作。
[0066]步驟S200，在所述金膜的表面制作蛋白質(zhì)固定膜。
[0067]蛋白質(zhì)固定膜采用本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)固定膜的結(jié)構(gòu)及組成，以及制作蛋白質(zhì)固定膜的方法與本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)固定膜的制作方法相同，因此，這里不再贅述。
[0068]步驟S300，借助所述蛋白質(zhì)固定膜將蛋白質(zhì)固定在所述金膜的表面。本實(shí)施例蛋白質(zhì)可以是肌紅蛋白質(zhì)或其它種類的蛋白質(zhì)。
[0069]步驟s301，通過含有活化劑的乙磺酸(MES)溶液使固定在所述傳感器表面的所述蛋白質(zhì)固定膜活化。
[0070]所述含有活化劑的乙磺酸溶液的濃度為0.5~10mg/ml,優(yōu)選0.6~8mg/ml,所述活化過程是在室溫下避光反應(yīng)10分鐘~I小時，優(yōu)選20~50分鐘。
[0071]本實(shí)施例活化劑可以是3-乙基碳化二亞胺，也可以是其它能夠使蛋白質(zhì)固定膜活化的物質(zhì)。
[0072]步驟s302，用磷酸鹽(PBS)溶液洗滌所述傳感器3次以上，如洗滌3~5次。
[0073]步驟S303，將所述傳感器放入蛋白質(zhì)溶液中，使所述蛋白質(zhì)固定膜與所述蛋白質(zhì)溶液中的蛋白質(zhì)發(fā)生共價反應(yīng)，即羧基與肌紅蛋白中的氨基發(fā)生反應(yīng)，從而將所述蛋白質(zhì)固定在所述傳感器的表面。
[0074]所述蛋白質(zhì)溶液的濃度為0.01~lmg/ml,優(yōu)選0.1~0.8mg/ml,所述蛋白質(zhì)溶液的溫度為4~40°C，反應(yīng)時間`為0.5~2小時，優(yōu)選反應(yīng)0.8~1.5小時。
[0075]步驟s400，將固定蛋白質(zhì)的所述傳感器在4~40°C的封閉液中放置10分鐘~I小時，所述封閉液為含5 (體積分?jǐn)?shù))%牛血清白蛋白的0.01~0.2M鹽酸鹽緩沖液，PH =
7.0 ~7.6。
[0076]步驟s500，用洗滌液清洗傳感器6次以上。
[0077]所述洗滌液包括鹽酸鹽緩沖液、NaCl緩沖液以及有機(jī)分子(Tween-20)，其中，鹽酸鹽緩沖液為0.01~0.2M(摩爾/升)，PH = 7.0~7.6，NaCl緩沖液為0.15M，有機(jī)分子的0.01~0.5(質(zhì)量分?jǐn)?shù))％。
[0078]本發(fā)明提供的固定蛋白質(zhì)的方法是通過本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)固定膜使蛋白質(zhì)固定在非生物材料表面，因此非生物材料表面的蛋白質(zhì)數(shù)量較多，而且蛋白質(zhì)的活性高。
[0079]可以理解的是，以上實(shí)施方式僅僅是為了說明本發(fā)明的原理而采用的示例性實(shí)施方式，然而本發(fā)明并不局限于此。對于本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員而言，在不脫離本發(fā)明的精神和實(shí)質(zhì)的情況下，可以做出各種變型和改進(jìn)，這些變型和改進(jìn)也視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種蛋白質(zhì)固定膜，用于非生物材料與蛋白質(zhì)的連接，包括固定在所述非生物材料表面的金膜，其特征在于，還包括巰基自組裝分子膜，所述巰基自組裝分子膜固定在所述金膜的表面。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)固定膜，其特征在于，所述巰基自組裝分子膜為碳鏈長度均為2~20的兩種有機(jī)分子的混合膜，所述兩種有機(jī)分子分別為一端含有巰基，另一端含有羧基的官能團(tuán)，以及一端含有巰基，另一端含有羥基的官能團(tuán)，所述巰基與所述金膜連接，所述羧基和所述羥基露出。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)固定膜，其特征在于，所述金膜的厚度為10~80nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)固定膜，其特征在于，在所述金膜與所述非生物材料之間還包括鉻層，所述鉻層的厚度為5~20nm。
5.一種蛋白質(zhì)固定膜的制作方法，其特征在于，包括以下步驟: 提供表面制作有金膜的基底； 清洗所述表面制作有金膜的基底的表面； 將所述表面制作有金膜的基底放入巰基化合物溶液中以使所述巰基化合物固定在所述金膜表面，從而在所述金膜的表面形成巰基自組裝分子膜。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述巰基化合物溶液為包含兩種巰基化合物的酒精溶液，所述兩種巰基化合物的碳鏈長度為2~20，其中，一種所述巰基化合物溶液包含有疏基和竣基；另一種所述疏基化合物溶液包含有疏基和羥基。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所`述的方法，其特征在于，在所述巰基化合物溶液中所述兩種巰基化合物的濃度均為0.1~10豪摩爾/升，所述兩種巰基化合物的比例為1:1。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述兩種巰基化合物為巰基乙酸和巰基乙醇，或巰基11酸和巰基11醇，或巰基16酸和巰基11醇。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述巰基化合物溶液的溫度為40~100°c，所述表面制作有金膜的基底在所述巰基化合物溶液中放置I~5小時。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，在所述金膜的表面形成巰基自組裝分子膜后，還包括清洗所述表面制作有金膜的基底，具體包括以下步驟: 將所述基底放入酒精溶液清洗3~6min ； 在含有10~30 (體積分?jǐn)?shù))％乙酸的酒精溶液中清洗3~6min ； 再次利用酒精溶液清洗3~6min。
11.一種固定蛋白質(zhì)的方法，用于在非生物材料制作的基底表面固定蛋白質(zhì)，其特征在于，包括以下步驟: 在所述基底表面制作金膜； 在所述金膜的表面制作權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述蛋白質(zhì)固定膜； 借助所述蛋白質(zhì)固定膜將蛋白質(zhì)固定在所述金膜的表面。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述固定蛋白質(zhì)的方法，其特征在于，借助所述蛋白質(zhì)固定膜將蛋白質(zhì)固定在所述金膜的表面，包括以下步驟: 通過含有活化劑的乙磺酸溶液使固定在所述基底表面的所述蛋白質(zhì)固定膜活化； 用磷酸鹽溶液洗滌所述基底3次以上； 將所述基底放入蛋白質(zhì)溶液中，使所述蛋白質(zhì)固定膜與所述蛋白質(zhì)溶液中的蛋白質(zhì)發(fā)生共價反應(yīng)，從而將所述蛋白質(zhì)固定在所述基底表面。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述固定蛋白質(zhì)的方法，其特征在于，所述蛋白質(zhì)溶液的濃度為0.01~lmg/ml，所述蛋白質(zhì)溶液的溫度為4~40°C，反應(yīng)時間為0.5~2小時。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述固定蛋白質(zhì)的方法，其特征在于，所述含有活化劑的乙磺酸溶液的濃度為0.5~10mg/ml，所述活化過程是在室溫下避光反應(yīng)10分鐘~I小時。
15.根據(jù)權(quán)利要求12所述固定蛋白質(zhì)的方法，其特征在于，所述活化劑為3-乙基碳化二亞胺。
16.根據(jù)權(quán)利要求12所述固定蛋白質(zhì)的方法，其特征在于，借助所述蛋白質(zhì)固定膜將蛋白質(zhì)固定在所述金膜的表面后，還包括: 將固定蛋白質(zhì)的所述基底在4~40°C的封閉液中放置10分鐘~I小時，所述封閉液為含5 (體積分?jǐn)?shù))％牛血清白蛋白的0.01~0.2摩爾/升的鹽酸鹽緩沖液，PH = 7.0~7.6。
【文檔編號】C07K17/14GK103524622SQ201210232307
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2012年7月6日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月6日
【發(fā)明者】曲炳郡, 謝立, 雷博 申請人:曲炳郡