專利名稱：一種刺果紫玉盤素a的制備方法
一種刺果紫玉盤素A的制備方法技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于中藥提取分離技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種從刺果紫玉盤根中分離制備刺果紫玉盤素A的方法。
背景技術(shù)：
刺果紫玉盤素A，無(wú)色片狀結(jié)晶，mp. 96 98°C，來(lái)源于番荔枝科植物刺果紫玉盤 Uvaria calami strata Hance的根。刺果紫玉盤分布在越南以及中國(guó)大陸的廣西、廣東等地,多生長(zhǎng)于山地林中以及山谷水溝旁灌木叢中。
刺果紫玉盤根主要有效成分為乙酰精寧類化合物，以刺果紫玉盤素A含量最高。 刺果紫玉盤素A具有細(xì)胞毒活性，有顯著的選擇性細(xì)胞毒活性，對(duì)KB、A2780和HCT-8三種人型癌細(xì)胞株呈顯著的細(xì)胞毒活性，IC5tl(UgAiL)相應(yīng)為2. 0、1. 4和0.37。目前，番荔枝科植物次生代謝物番蒸枝乙酰精寧類(annonanceous acetogenins,AAGs)化合物被視為新的抗腫瘤藥物的潛在資源，AAGs能抑制人卵巢瘤IA9細(xì)胞復(fù)制、誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，是強(qiáng)效的復(fù)合物I抑制劑，抗腫瘤藥物的候選藥物。
目前，尚未見(jiàn)高含量刺果紫玉盤素A的制備方法相關(guān)專利報(bào)道。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種刺果紫玉盤素A的制備方法。
本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的(1)取刺果紫玉盤根，經(jīng)粉碎處理，加5-12倍60-90%乙醇溶液在20-45°C的溫度下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取30-100min，過(guò)濾，得到提取液；(2)提取液通過(guò)截留分子量為1000-3000的超濾膜超濾和截留分子量為100-500的納濾膜濃縮，操作壓力為0. 5-2. 8MPa，膜濃縮液減壓濃縮干燥，得粗提物；(3)采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的刺果紫玉盤素A，其兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，泵入下相做流動(dòng)相，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，收集刺果紫玉盤素A組分；(4)將刺果紫玉盤素A組分進(jìn)行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重結(jié)晶，過(guò)濾、洗滌干燥即得刺果紫玉盤素A。
所述步驟(I)中超聲頻率為35-60KHZ。
所述步驟(3)中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統(tǒng)的體積比為 5-7:2-4:4-7:1-3。
本方法積極效果是(1)本方法采用連續(xù)逆流超聲提取，實(shí)現(xiàn)了超聲提取和連續(xù)逆流提取同時(shí)進(jìn)行，提取效果好，同時(shí)實(shí)現(xiàn)連續(xù)作業(yè)；(2)本方法采用膜分離技術(shù)，能有效去除多種雜質(zhì)，且不會(huì)破壞有效成分的生物活性， 而且與連續(xù)逆流超聲提取相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)提取濃縮連續(xù)作業(yè)；(3)本方法采用高速逆流色譜法，收率高、制備量大、制備周期短，解決了柱層析效率低而且污染嚴(yán)重的技術(shù)缺陷；(4)本方法工藝步驟操作較簡(jiǎn)單，易操作，所得產(chǎn)品純度高。
下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例I :取刺果紫玉盤根，經(jīng)粉碎處理，稱取1kg，加5倍90%乙醇溶液在45°C的溫度下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取30min，超聲頻率為60KHz，過(guò)濾，得到提取液，提取液通過(guò)截留分子量為 3000的超濾膜超濾和截留分子量為500的納濾膜濃縮，操作壓力為0. 8MPa，膜濃縮液減壓濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的刺果紫玉盤素A，以體積比 5:4:6:1石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，泵入下相做流動(dòng)相，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)， 收集刺果紫玉盤素A組分，進(jìn)行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重結(jié)晶，過(guò)濾、洗滌干燥即得刺果紫玉盤素A，含量96. 5%。
實(shí)施例2:取刺果紫玉盤根，經(jīng)粉碎處理，稱取1kg，加12倍60%乙醇溶液在20°C的溫度下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取lOOmin，超聲頻率為35KHz，過(guò)濾，得到提取液，提取液通過(guò)截留分子量為 1000的超濾膜超濾和截留分子量為500的納濾膜濃縮，操作壓力為I. 8MPa，膜濃縮液減壓濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的刺果紫玉盤素A，以體積比 7:3: 7:2石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，泵入下相做流動(dòng)相，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)， 收集刺果紫玉盤素A組分，進(jìn)行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重結(jié)晶，過(guò)濾、洗滌干燥即得刺果紫玉盤素A，含量97. 4%。
實(shí)施例3:取刺果紫玉盤根，經(jīng)粉碎處理，稱取2kg，加10倍70%乙醇溶液在35°C的溫度下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取60min，超聲頻率為40KHz，過(guò)濾，得到提取液，提取液通過(guò)截留分子量為 1000的超濾膜超濾和截留分子量為200的納濾膜濃縮，操作壓力為2. 8MPa，膜濃縮液減壓濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的刺果紫玉盤素A，以體積比 6:4:7:3石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，泵入下相做流動(dòng)相，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)， 收集刺果紫玉盤素A組分，進(jìn)行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重結(jié)晶，過(guò)濾、洗滌干燥即得刺果紫玉盤素A，含量96. 2%。
實(shí)施例4:取刺果紫玉盤根，經(jīng)粉碎處理，稱取5kg，加8倍70%乙醇溶液在40°C的溫度下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取60min，超聲頻率為50KHz，過(guò)濾，得到提取液，提取液通過(guò)截留分子量為 3000的超濾膜超濾和截留分子量為300的納濾膜濃縮，操作壓力為0. 5MPa，膜濃縮液減壓濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的刺果紫玉盤素A，以體積比5:2:4:1石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，泵入下相做流動(dòng)相，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)， 收集刺果紫玉盤素A組分，進(jìn)行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重結(jié)晶，過(guò)濾、洗滌干燥即得刺果紫玉盤素A，含量98. 6%。
實(shí)施例5:取刺果紫玉盤根，經(jīng)粉碎處理，稱取10kg，加12倍90%乙醇溶液在45°C的溫度下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取40min，超聲頻率為50KHz，過(guò)濾，得到提取液，提取液通過(guò)截留分子量為 1000的超濾膜超濾和截留分子量為100的納濾膜濃縮，操作壓力為2. 8MPa，膜濃縮液減壓濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的刺果紫玉盤素A，以體積比 7:2:7:3石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，泵入下相做流動(dòng)相，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)， 收集刺果紫玉盤素A組分，進(jìn)行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重結(jié)晶，過(guò)濾、洗滌干燥即得刺果紫玉盤素A，含量98. 9%。
權(quán)利要求
1.I、一種刺果紫玉盤素A的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)取刺果紫玉盤根，經(jīng)粉碎處理，加5-12倍60-90%乙醇溶液在20-45°C的溫度下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取30-100min，過(guò)濾，得到提取液；(2)提取液通過(guò)截留分子量為1000-3000的超濾膜超濾和截留分子量為100-500的納濾膜濃縮，操作壓力為0. 5-2. 8MPa，膜濃縮液減壓濃縮干燥，得粗提物；(3)采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的刺果紫玉盤素A，其兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，泵入下相做流動(dòng)相，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，收集刺果紫玉盤素A組分；(4)將刺果紫玉盤素A組分進(jìn)行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重結(jié)晶，過(guò)濾、洗滌干燥即得刺果紫玉盤素A。
2.2、根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種刺果紫玉盤素A的制備方法，其特征在于所述步驟(I)中超聲頻率為35-60KHz。
3.3、根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種刺果紫玉盤素A的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統(tǒng)的體積比為5-7:2-4:4-7:1-3。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種操作簡(jiǎn)單、污染少的刺果紫玉盤素A的制備方法，工藝步驟為(1)取刺果紫玉盤根，經(jīng)粉碎處理，用醇類溶液進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取，過(guò)濾得到提取液；(2)提取液通過(guò)膜分離系統(tǒng)，濃縮干燥得粗提物；(3)采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的刺果紫玉盤素A，其兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，收集刺果紫玉盤素A組分；(4)將刺果紫玉盤素A組分進(jìn)行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重結(jié)晶。本發(fā)明制備刺果紫玉盤素A，產(chǎn)品純度高，易于實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化放大。
文檔編號(hào)C07D307/58GK102532069SQ20111042903
公開(kāi)日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2011年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月20日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶 申請(qǐng)人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司