專利名稱：脂肪烷基五肽綴合物及其制備方法和在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類綴合物，尤其涉及脂肪烷基鏈通過羰基、甲氨基及甲氧基與YIGSK 肽的羧端或氨端綴合而得的靶向陽離子藥質(zhì)體，本發(fā)明還涉及該綴合物的制備方法以及該 綴合物作為抗血栓劑、藥物載體或藥物靶向制劑材料的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
在未來的5年到10年基因治療會有可能把基因傳送至細(xì)胞的理想載體。從生物 制劑的立場看，基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)就是藥物釋放系統(tǒng)(DDS)。有多種化學(xué)合成的小分子構(gòu)建的基 因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)受到關(guān)注，其中陽離子脂質(zhì)構(gòu)成的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)是關(guān)注熱點(diǎn)。陽離子脂質(zhì)在藥 學(xué)領(lǐng)域遍用于構(gòu)建脂質(zhì)體運(yùn)載小分子(包括多肽)藥物。與在DDS中一樣，在基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系 統(tǒng)中陽離子脂質(zhì)體有明顯好處，例如可通過電荷吸附與DNA形成復(fù)合物并有效避免被細(xì)胞 內(nèi)溶酶體降解、可將DNA高效導(dǎo)入細(xì)胞、對DNA的尺寸沒有限制、操作簡便等。陽離子脂質(zhì) 的基本構(gòu)造包括高級脂肪鏈構(gòu)成的疏水臂和親水的陽離子頭。
陽離子脂質(zhì)的基本構(gòu)造
細(xì)胞黏附在細(xì)胞黏附性疾病(癌轉(zhuǎn)移、血栓形成、化學(xué)致炎和骨質(zhì)疏松)的發(fā)展過 程中起關(guān)鍵作用，來源于層粘連蛋白Bl鏈的五肽YIGSK是一類典型的黏附多肽，它并不像 RGD那樣與細(xì)胞受體的整合素家族有關(guān)，而是與67kDa層粘連結(jié)合蛋白有關(guān)(LBP)。當(dāng)它被 移植到玻璃上時(shí)，發(fā)現(xiàn)促進(jìn)黏附和大量細(xì)胞遷移，包括血管內(nèi)皮細(xì)胞，成纖維細(xì)胞和平滑肌 細(xì)胞。YIGSK五肽的這種作用賦予了含YIGSK序列的化合物一種重要性質(zhì)，即可向血栓、癌 和骨質(zhì)疏松的患病部位富集。在這樣一個(gè)前提下，把YIGSK肽與高級脂肪鏈綴合便可以獲 得靶向藥質(zhì)體
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的之一是將YIGSK肽與高級脂肪鏈綴合以獲得具有抗血栓活性并具有 靶向性的一類綴合物；本發(fā)明目的之二是提供一種制備上述綴合物的方法；本發(fā)明目的之三是將上述綴合物應(yīng)用于抗血栓劑、藥物載體或藥物靶向制劑材 料；本發(fā)明上述目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的一類脂肪烷基五肽綴合物，該綴合物的通式為Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys-X，Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys-Y, Z-Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys，其中 \ 為 CH3(CH2)nCH2OH, Y 為 CH3(CH2) nCH2NH2, Z 為 CH3(CH2)nCO2H ；其中 η = 6，8，10，12，14 或 16。一種制備上述脂肪烷基五肽綴合物的方法，包括以下步驟(1)合成 Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys ；(2)將 CH3 (CH2) nC02H、CH3 (CH2) nCH20H 或 CH3 (CH2) nCH2NH2 分別與保護(hù)基保護(hù)的 Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys的羧端或氨端綴合，脫去保護(hù)基，即得；其中η = 6，8，10，12，14或 16。本發(fā)明結(jié)合了下述認(rèn)識或依據(jù)完成了上述技術(shù)方案把基因傳送至細(xì)胞的理想載 體(基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng))是基因治療的關(guān)鍵任務(wù)之一；從生物制劑的立場看基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)與藥 物釋放系統(tǒng)(DDS)具有等同性；雖然有多種化學(xué)合成的小分子構(gòu)建的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)都受到 關(guān)注但是陽離子脂質(zhì)體構(gòu)成的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)應(yīng)格外給予關(guān)注；陽離子脂質(zhì)體可通過電荷吸 附與DNA形成復(fù)合物并有效避免被細(xì)胞內(nèi)溶酶體降解；陽離子脂質(zhì)體可將DNA高效導(dǎo)入細(xì) 胞、陽離子脂質(zhì)體對DNA的尺寸沒有限制；含Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys序列的化合物可以向血 栓、炎癥、癌轉(zhuǎn)移和骨質(zhì)疏松的患病部位富集。本發(fā)明人基于上述認(rèn)識，把脂肪烷基鏈通過羰基、甲氨基或甲氧基與 Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys五肽的羧端或氨端綴合，使制得的分子獲得四種性能，即依賴于脂肪 烷基鏈的疏水性、依賴于YIGSK肽的氨基側(cè)鏈基和α-氨基質(zhì)子化形成的陽離子性質(zhì)和親 水性和依賴于Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys五肽對67kDa層粘連結(jié)合蛋白受體特異親和作用獲得 的靶向性。這樣一來，把Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys肽與脂肪烷基鏈綴合制得的分子便成為靶 向陽離子藥質(zhì)體。本發(fā)明的又一目的是提供一種含有本發(fā)明上述通式化合物的藥用組合物，該藥用 組合物由治療上有效劑量的本發(fā)明綴合物與藥學(xué)上可接受的賦型劑或者輔加劑組成；即 將有效量的本發(fā)明綴合物與藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑配合后，按本領(lǐng)域常規(guī)的制劑方 法將其制備成任意一種適宜的藥物組合物。通常該組合物適合于口服給藥和注射給藥，也 適合其他的給藥方法。該組合物可以是片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、錠劑、栓劑，或口服液等 液體制劑形式。根據(jù)不同的給藥方法，本發(fā)明藥物組合物可以含有0. 1% -99%重量，優(yōu)選 10-60%重量的本發(fā)明綴合物。在大鼠血栓形成模型上的評價(jià)表明，本發(fā)明綴合物具有優(yōu)秀的抗血栓活性，可作 為抗血栓劑應(yīng)用；在水相和生物相它們可自組裝成為納米顆粒，可作為制備微乳和脂質(zhì)體 的制劑材料。


圖1本發(fā)明綴合物的合成路線圖。圖2激光粒度分析儀測定的本發(fā)明化合物在水相組裝的納米球的穩(wěn)定性。
具體實(shí)施例方式為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實(shí)施例。這些實(shí)施例完全是例證性的，它 們僅用來對本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對本發(fā)明的限制。實(shí)施例 1 制備 CH3 (CH2) 6C0YIGSK
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1)制備 Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl將0.34g(l. 15mmol)Boc-Ser(Bzl)溶解在 6ml 無水 THF 中，O °C 下加入 0. 155g(l. 14mmol)N-羥基苯并三唑(HOBt)和 0. 26g(l. 20mmol) 二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)。 攪拌10分鐘后加入0. 37g(l. OOmmoDLys(Z)-OBzl的無水THF溶液。反應(yīng)混合物用N-甲基 嗎啉(NMM)調(diào)節(jié)pH8-9，0°C攪拌24小時(shí)停止反應(yīng)。過濾除去沉淀出的二環(huán)己基脲(D⑶)。 濾液減壓濃縮，殘留物溶于乙酸乙酯，得到的溶液依次用飽和NaHCOyK溶液、5% KHSO4水溶 液和飽和NaCl水溶液洗。乙酸乙酯層用無水NaSO4干燥。濾除NaSO4,濾液減壓濃縮除去 乙酸乙酯。殘留物用柱層析分離(CHCl3 CH3OH,80 1)，得到0. 59g(91 % )目標(biāo)化合物。 ESI-MS(m/z)648[M+H]+。2)制備 Ser (Bzl) -Lys (Z) -OBzl將0. 52g(l. OOmmol)Boc-Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl 溶解在 50ml 4N 氯化氫-乙酸乙 酯溶液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC檢測原料點(diǎn)消失，減壓抽去乙酸乙酯，反復(fù)加少量乙醚進(jìn)行 減壓抽氣以除去產(chǎn)品中的酸氣。最后加少量乙醚將產(chǎn)品研磨成固體粉末，直接用于下一步 反應(yīng)。ESI-MS (m/z) 548 [M+H]+。3)制備 Boc-Ile-Gly-OBzl用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 0. 3g(1. 29mmol)Boc-Ile 和 0. 194g(l. 17mmol)Tos. Gly-OBzl 為原料，得到 0. 32g(73 % )目標(biāo)化合物。ESI-MS(m/ z)378[M+H]+。4)制備 Ile-GlyOBzl用制備Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl 的方法，以 0. 37g(l. Ommol)Boc-Ile-Gly-OMe 為原 料，得到目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 278 [M+H] +。5)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-OBzl用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 0. 428g(l. 52mmol)Boc-Tyr 和 0. 38g(l. 36mmol)HCl · Ile-Gly-OBzl 為原料，得到 0. 64g(86% )目標(biāo)化合物。ESI-MS(m/ z)542[M+H]+。6)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly將0.31g Boc-Tyr-Ile-Gly-OBzl溶解在20ml 甲醇中，0°C下加入2N NaOH水溶液， 調(diào)節(jié)PH值11，攪拌2hr，TLC檢測反應(yīng)結(jié)束。加飽和KHS04調(diào)節(jié)pH值到6 7，濾除析出的 鹽，濾液減壓蒸餾除去全部甲醇，殘留水溶液繼續(xù)用KHSO4調(diào)節(jié)pH值到2，用乙酸乙酯萃取 三次，乙酸乙酯層合并，用飽和NaCl萃洗三次，無水NaSO4干燥，過濾，濾液減壓濃縮除去乙 酸乙酯，得到 0. 23g(89% )目標(biāo)化合物。ESI-MS(m/z)451 [M-H]+。7)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl) -Lys (Z) -OBzl用制備Boc-Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl 的方法，以 0. 49g(l. lmmol)Boc-Tyr-Ile-Gly 和 0. 55g(l. OOmmoDHCl · Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 為原料，得到 0. 88g(89. 8% )目標(biāo)化合 物。ESI-MS (m/z) 981 [M+H]+。8)制備 Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl用制備Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 0. 49g Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl) -Ly s (Z) -OBzl 為原料得到目標(biāo)物 ESI-MS (m/z) 881 [M+H] +。9)制備 CH3 (CH2)6CO-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl
用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 0. 21g(l. 5mmol) CH3 (CH2)8_C02H 和 0. 88g(l. OmmDHCI · Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl) -Lys (Z) -OBzl 為原料獲得 0. 85g(85% )目標(biāo) 物。ESI-MS(m/z) 1008[M+H]+。10)制備 CH3 (CH2) 6C0-Tyr-IIe-Gly-Ser-Lys [CH3 (CH2) 6C0YIGSK]將250mg CH3(CH2)6C0-Tyr-IIe-Gly-Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl 溶于 4ml 三氟醋酸 中，加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，冰浴下攪拌1小時(shí)，減壓抽氣5分鐘，一次性加 入IOOml乙醚，析出的粉末用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到150mg(87% )目標(biāo)化合物。 ESI-MS (m/z) 693 [M+H]+。[a]D25 = -6 . 23 (c = 1. 01 甲醇)，Mp :154.5 155. 0°C。實(shí)施例2 制備 CH3 (CH2) 8C0YIGSK1)制備 CH3 (CH2)8CO-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl用制備Boc-Ser (Bzl) -Lys (Z) -OBzl 的方法，以 0. 24g(l. 4mmol) CH3 (CH2)8_C02H 禾口 0. 89g(l. OmmDHCl ‘Tyr-IIe-Gly-Ser (Bzl) -Lys (Z) -OBzl 為原料獲得 0. 92g (88. 46% )目 標(biāo)物。ESI-MS(m/z) 1032[M+H]+02)制備 CH3(CH2)8C0-Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys-0Bzl [CH3(CH2)8C0YIGSK]將250mg CH3 (CH2)8C0-Tyr-IIe-Gly-Ser (Bzl) -Lys (Z) -OBzl 溶于 4ml 三氟醋酸 中，加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，冰浴下攪拌1小時(shí)，減壓抽氣5分鐘，一次性加 入IOOml乙醚，析出的粉末用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到110mg(78% )目標(biāo)化合物。 ESI-MS (m/z) 721 [Μ+Η]+。[α ]D25 = -12. 3 (c = 1. 01 甲醇)，Mp :198.0 199.0°C。實(shí)施例3 制備 CH3 (CH2) 10COYIGSK1)制備 CH3 (CH2)ltlCO-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl用與制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 相同的方法，以 0. 28g (1. 4mmol) CH3(CH2)8-CO2H 和 0. 89g(l. Omml)Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl 為原料獲得 0. 89g(89. 0% )目標(biāo)物。ESI-MS(m/z) 1063[M+H]+ D2)制備 CH3(CH2) 10CO-Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys-OBzl [CH3 (CH2) 10COYIGSK]將250mg CH3 (CH2) 10CO-Tyr-IIe-Gly-Ser (Bzl) -Lys (Z) -OBzl 溶于 4ml 三氟醋酸 中，加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，冰浴攪拌1小時(shí)，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml 乙醚，析出的粉末用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到120mg(68% )目標(biāo)化合物。ESI_MS(m/ ζ) 749 [Μ+Η]+0 [α ]D25 = -12. 6 (c = 1. 01 甲醇)，Mp :184·2 185. 1°C。實(shí)施例4 制備 CH3 (CH2) 12C0YIGSK1)制備 CH3 (CH2)12CO-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl用制備Boc-Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl 的方法，以 0. 27g(l. 2mmol) CH3(CH2) 12_C02H和 0. 89g(l. Omml) Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl) -Lys (Z) -OBzl 為原料獲得 0. 89g(80. 90% )目標(biāo)物。 ESI-MS(m/z)1091[M+H]+。2)制備 CH3 (CH2) 12CO-Tyr-IIe-Gly-Ser-Lys [CH3 (CH2) 12COYIGSK]將250mg CH3 (CH2) 12CO-Tyr-I Ie-Gly-Ser (Bzl) -Lys (Z) -OBzl 溶于 4ml 三氟醋 酸中，加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，冰浴下攪拌1小時(shí)，減壓抽氣5分鐘，一次性加 入IOOml乙醚，析出的粉末用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到150mg(84% )目標(biāo)化合物。 ESI-MS (m/z) 777 [M+H]+。[a]D25 = -18. 7 (c = 1. 02 甲醇)，Mp :190.5 191. 0°C。實(shí)施例5 制備 CH3 (CH2) 14C0YIGSK
6
1)制備 CH3 (CH2)14CO-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl用制備Boc-Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl 的方法，以 0. 27g(l. 05mmol)CH3(CH2) 14_C02H 和 0. 89g(l. Omml)Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl 為原料獲得 0. 91g(81 % )目標(biāo)物。 ESI-MS(m/z)1119[M+H]+。2)制備 CH3 (CH2) 14C0-Tyr-IIe-Gly-Ser-Lys [CH3 (CH2) 14C0YIGSK]將 200mgCH3 (CH2 )14C0-Tyr-IIe-Gly-Ser (Bzl) -Lys (Z) -OBzl溶于4ml三氟醋酸中，加入Iml三氟甲磺酸和 Iml苯甲醚，冰浴下攪拌1小時(shí)，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml乙醚，析出的粉末用 Sephadex G 10 進(jìn)行提純，得到 120mg(84% )目標(biāo)化合物。ESI-MS(m/z)805[M+H] +。[a]D25 =-17. 7 (c = 1. 03 甲醇)，Mp 168. 5 169. 0°C。實(shí)施例 6 制備 CH3 (CH2) 16C0YIGSK1)制備 CH3 (CH2)16CO-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl用制備Boc-Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl 的方法，以 0. 29g(l. 05mmol)CH3(CH2) 16_C02H 和 0. 89g(l. Omml)Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl 為原料獲得 0. 95g(83% )目標(biāo)物。 ESI-MS(m/z)1147[M+H]+。2)制備 CH3 (CH2) 16C0-Tyr-IIe-Gly-Ser-Lys [CH3 (CH2) CO16YIGSK]將200mg CH3 (CH2) 16C0-Tyr-IIe-Gly-Ser (Bzl) -Lys (Z) -OBzl 溶于 4ml 三氟醋酸 中，加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，冰浴攪拌1小時(shí)，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml 乙醚，析出的粉末用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到110mg(76% )目標(biāo)化合物。ESI_MS(m/ ζ)833[M+H]+0 [a ]D25 = -11. 9(c = 1. 03 甲醇)，Mp :198· 1 199. 0°Co實(shí)施例7 制備 HGSKN (CH2) 7CH31)制備 Boc-Lys (Z) -NH- (CH2) 7CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 2g (5. Ommol) Boc-Lys (Z)和 1. 05ml (6. Ommol) CH3(CH2)7NH2 為原料獲得 2. 2g(85. 27% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 492 [M+H]+。2)制備 Lys (Z) -NH- (CH2) 7CH3用制備Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 2g(4. Ommol) Boc-Lys (Z) -NH- (CH2) 7CH3 為原料獲得 2. 0g(91% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 392 [M+H]+。5)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)-OBzl用制備Boc-Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl 的方法，以 2. 49g(5. 5mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly 和 1. 69g(5. 2mmol) Ser (Bzl)-OBzl 為原料，得到 3. 70g(88 % )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/ ζ) 719[M+H]+。6)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)用制備Boc-Tyr-Ile-Gly 的方法，以 3. 70g Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl) -OBzl 為 原料獲得 2. 95g(91% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 628 [M+H]+。7)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)-Lys(Z)-NH-(CH2)7CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 2. 49g(3. 96mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)和 1. 48g (3. 77mmol) Lys (Z)-NH-(CH2) 7CH3 為原料，得到 3. 10g(83. 7% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 1003 [M+H]+ D8)制備 Tyr-IIe-Gly-Ser-Lys-NH-(ch2)7ch3 [YigSKNH(CH2)7CH3]將230mg Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Lys (Z)-NH-(CH2) 7CH3 溶于 4ml 三氟醋酸
7中，加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，冰浴攪拌1小時(shí)，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml 乙醚，析出的粉末用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到130mg(84% )目標(biāo)化合物。ESI_MS(m/ ζ)678[Μ+Η]+。[α ]D25 = -15. 5 (c = 1. 05 甲醇)，Mp :167.0 168. 0°Co實(shí)施例8 制備 YIGSKNH (CH2) 9CH31)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-OBzl用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 2. 075g(4. 6mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly 和 0. 966g(4. 18mmol) Ser-OBzl 為原料，得到 2. 80g(90% )目標(biāo)化合物。 ESI-MS (m/z)628[M+H]+。2)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser用制備Boc-Tyr-Ile-Gly 的方法，以 2. 80g Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl) -OBzl 為 原料獲得 2. IOg(88% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 538 [M+H]+。3)制備 Boc-Lys (Z) -NH- (CH2) 9CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 2g (5. 4mmol) Boc-Lys (Z)和 0. 86g(5. 67mmol) CH3 (CH2)9NH2 為原料獲得 2. 5g (93% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 520 [M+H]+。4)制備 Lys (Z) -NH- (CH2) 9CH3用制備Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 2g(3. 8mmol) Boc-Lys (Z) -NH- (CH2) 9CH3 為原料獲得 1. 5g(94% )目標(biāo)物。ESI-MS(m/z)420[M+H]+。5)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)-Lys(Z)-NH-(CH2)9CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 2. 49g (4. 6mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser 和 1. 48g(4. 4mmol) Lys (Z) -NH- (CH2) 9CH3 為原料，得到 2. 70g(82% ) 目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 940 [M+H] +。6)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys-NH-(CH2)9CH3先將0.72g Boc-Tyr-IIe-Gly-Ser-Lys (Z)-NH-(CH2)9CH3 溶于 20ml 甲醇，再加入 140mg Pd/C(20%),減壓排出反應(yīng)瓶中的空氣，通入氫氣置換，反復(fù)置換5次后，通氫氣室 溫?cái)嚢枞?，TLC(展開劑CHC13 MeOH = 10 l+3d冰醋酸)顯示化合物大部分消失， 停止反應(yīng)，濾除Pd/C，濾液減壓濃縮除去溶劑，得0.41g(76% )標(biāo)題化合物，為無色固體。 ESI-MS(rn/z)807[M+H]+o7)制備 Tyr-IIe-Gly-Ser-Lys-NH-(CH2)9CH3 [YIGSKNH(CH2)9CH3]將410mg Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys (Z) -NH- (CH2) 9CH3 溶于 4ml 三氟醋酸中，冰浴 攪拌0. 5小時(shí)，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml乙醚，得到330mg(92% )目標(biāo)化合物。 ESI-MS (m/z) 707 [M+H]+。[a]D25 = -11. 36 (c = 1. 01 甲醇)，Mp :122.0 123. 0°C。實(shí)施例9 制備 YIGSKNH (CH2) nCH31)制備 Boc-Lys (Z) -NH- (CH2) nCH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 1. 5g(4. Ommol) Boc-Lys (Z)和 0. 80g(4. 40mmol) CH3(CH2)11NH2 為原料獲得 2. 17g(92% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 548 [M+H]+。2)制備 Lys (Z) -NH- (CH2) nCH3用制備Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl 的方法，以 2g(3. 6謹(jǐn)ol) Boc-Lys (Z)-NH-(CH2) nCH3 為原料獲得 1.40g(86% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 448 [M+H]+。2)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)-Lys(Z)-NH-(CH2)11CH3
8
用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 2. 49g(3. 96mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)禾Π 1. 69g (3. 8mmol) Lys (Z)-NH-(CH2) nCH3 為原料，得到 3. IOg (78.08 % )目標(biāo)化合物。3)制備 Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys-NH-(CH2)11CH3[yigsknh(ch2)11ch3]將230mg Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Lys (Z)-NH-(CH2) nCH3 溶于 4ml 三氟醋酸 中，加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，冰浴攪拌1小時(shí)，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml 乙醚，析出的粉末用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到140mg(88% )目標(biāo)化合物。ESI_MS(m/ ζ)734[Μ+Η]+。[α ]D25 = -12 . 00 (c = 1. 01 甲醇)，Mp :169.0 170. 0°Co實(shí)施例10 制備 HGSKNH (CH2) 13CH31)制備 Boc-Lys (Z) -NH- (CH2) 13CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 1. 5g(4. Ommol) Boc-Lys (Z)和
0.92g(4. 4mmol) CH3 (CH2)13NH2 為原料獲得 2. 20g(97% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 576 [M+H] +。2)制備 Lys (Z) -NH- (CH2) 13CH3用制備Ser (Bzl)-Lys (Z) -OBzl 的方法，以 2. 2g (3. 8mmol) Boc-Lys(Z)-NH-(CH2)13CH3 為原料獲得 1.7g(94% )目標(biāo)物。ESI-MS(m/z)476[M+H]+。3)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)-Lys(Z)-NH-(CH2)13CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 2. 49g(3. 96mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)禾Π 1. 80g (3. 8mmol) Lys (Z)-NH-(CH2) 13CH3 為原料，得到 3. 50g(86% )目標(biāo)化合物。esi-ms (m/z) 1086 [m+h]+ d4)制備 Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys-NH-(CH2)13CH3[yigsknh(ch2)13ch3]將230mg Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl) -Lys (Z) -NH- (CH2) 13CH3 溶于 4ml 三氟醋 酸中，加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，冰浴攪拌1小時(shí)，減壓抽氣5分鐘，一次性加入 IOOml乙醚，析出的體粉末使用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到140mg(89% )目標(biāo)化合物。 ESI-MS (m/z) 763 [M+H]+。[a]D25 = -10 . 56 (c = 1. 02 甲醇)，Mp :167.0 168. 0°C。實(shí)施例11 制備 YIGSKNH (CH2) 15CH31)制備 Boc-Lys (Z) -NH- (CH2) 15CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 1. 5g(4. Ommol) Boc-Lys (Z)和
1.14g(4. 80mmol) CH3 (CH2)15NH2 為原料獲得 2. 20g(93% )目標(biāo)物。ESI_MS(m/z)604[M+H]+。2)制備 Lys (Z) -NH- (CH2) 15CH3用制備Ser (Bzl)-Lys (Z) -OBzl 的方法，以 2. 2g (3. 6mmol) Boc-Lys(Z)-NH-(CH2)715CH3 為原料獲得 1.6g(87% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 504[M+H] +。3)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)-Lys(Z)-NH-(CH2)15CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 2. 49g(3. 96mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)和 1. 91g (3. 8mmol) Lys (Z) _NH_ (CH2) 15CH3 為原料，得到 3. 60g(86% )目標(biāo)化合物。esi-ms (m/z) 1114[m+h] + 04)制備 Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys-NH-(CH2)15CH3[YIGSKNH(CH2)15CH3]將240mg Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Lys (Z) _NH_ (CH2) 15CH3 溶于 4ml 三氟醋酸 中，加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，冰浴攪拌1小時(shí)，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml 乙醚，析出的粉末用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到140mg(82% )目標(biāo)化合物。ESI_MS(m/ζ)791[Μ+Η]+。[α ]D25 = -19. 16 (c = 1. 02 甲醇)，Mp :191·0 192. 0°Co
實(shí)施例 12 制備 YIGSKNH (CH2) 17CH31)制備 Boc-Lys (Z) -NH- (CH2) 17CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 1. 5g(4. Ommol) Boc-Lys (Z)和 1. 28g(4. 8mmol) CH3 (CH2)17NH2 為原料獲得 2. 28g(92% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 632 [M+H] +。2)制備 Lys (Z) -NH- (CH2) 17CH3用制備Ser (Bzl)-Lys (Z) -OBzl 的方法，以 2. 2g (3. 5mmol) Boc-Lys(Z)-NH-(CH2)17CH3 為原料獲得 1. 6g(87% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 532 [M+H]+。3)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys(Z)-NH-(CH2)17CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 1. 69g(3. 14mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser 和 1. 60g(3. Ommol) Lys (Z) -NH- (CH2) 17CH3 為原料，得到 2. 5g(79% ) 目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 1052 [M+H]+ 04)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys-NH-(CH2) 17CH3[BocYIGSKNH(CH2) 17CH3]用制備BocyigSKNH(CH2)9CH3 的方法，以 2g(l. 9mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys ( Ζ)-NH-(CH2)17CH3 為原料獲得 1. 50g(86% )目標(biāo)物。ESI-MS(m/z)919[M+H] +。5)制備 Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys-NH-(CH2) 17CH3[YIGSKN(CH2) 17CH3]將720mg Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys (Z)-NH-(CH2) 9CH3 溶于 7ml 三氟醋酸中，冰浴 攪拌0. 5小時(shí)，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml乙醚，得到610mg(95% )目標(biāo)化合物。 ESI-MS (m/z) 819 [Μ+Η]+。[α ]D25 = -8 . 50 (c = 1. 02 甲醇)，Mp :158.0 159. 0°C。實(shí)施例13 制備 YIGSKO (CH2) 7CH31)制備 Boc-Lys (Z) _0 (CH2) 7CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 3. Og (7. 9mmol) Boc-Lys (Z)和 1. 60ml (10. 3mmol) CH3 (CH2)7 為原料獲得 3. 5g(92% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 493 [M+H] +。2)制備 Lys (Z) _0 (CH2) 7CH3用制備Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 2g(4. Ommol)Boc-Lys (Z) -0-(CH2) 7CH3 為原料獲得 1. 4g(88. 05% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 393 [M+H]+。3)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)-Lys(Z)-O(CH2)7CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 2. 49g(3. 96mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)禾Π 1. 48g(3. 77mmol) Lys (Z)-O-(CH2)7CH3 為原料，得到 3. 10g(84% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 1003 [M+H]+ D4)制備 Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys-O (CH2)7CH3 [YiGSKO(CH2)7CH3]將230mg Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl) -Lys (Z) -0 (CH2) 7CH3 溶于 4ml 三氟醋酸中， 加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，冰浴攪拌1小時(shí)，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml乙 醚，析出的粉末使用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到140mg(90% )目標(biāo)化合物。ESI-MS(m/ ζ)679[Μ+Η]+。[α ]D25 = -12 . 00 (c = 1. 01 甲醇)，Mp :110·7·0 11L2°C。實(shí)施例 14 制備 HGSKO (CH2) 9CH31)制備 Boc-Lys (Z) _0_ (CH2) 9CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 2. Og (5. 2mmol) Boc-Lys (Z)和 1. Oml (5. 2mmol) CH3 (CH2)9 為原料獲得 2. 5g(92% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 521 [M+H] +。
10
2)制備 Lys (Z) _0 (CH2) 9CH3用制備Ser (Bzl) -Lys (Z) -OBzl 的方法，以 2g (3. 8mmol) Boc-Lys (Z) _0 (CH2) 9CH3 為 原料獲得 1.43g(89% )目標(biāo)物。ESI-MS(m/z)421 [M+H]+。3)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)-Lys(Z)-O(CH2)9CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 2. 49g(3. 96mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)和 1. 51g(3. 60mmol) Lys (Z)-O(CH2)9CH3 為原料，得到 3. 50g(95% )目標(biāo)化合物。ESI-MS(m/z) 1031 [M+H] +。4)制備 Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys-O (CH2)9CH3 [YiGSKO(CH2)9CH3]將230mg Boc-Tyr-IIe-Gly-Ser (Bzl) -Lys (Z) -0 (CH2) 9CH3 溶于 4ml 三氟醋酸中， 加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，冰浴攪拌1小時(shí)，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml 乙醚，析出的粉末用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到140mg(89% )目標(biāo)化合物。ESI_MS(m/ ζ) 707 [Μ+Η]+。[α ]D25 = -8 . 53 (c = 1. 01 甲醇)，Mp 102. O 103. O0C0實(shí)施例15 制備 HGSKO (CH2) nCH3
1)制備 Boc-Lys (Z) _0 (CH2) nCH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 2. Og (5. 2mmol) Boc-Lys (Z)和 1. 08g(5. 7mmol)CH3(CH2)n0H 為原料獲得 2. 5g(91% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 549 [M+H]+。2)制備 Lys (Z) _0 (CH2) nCH3用制備Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 1. 8g (3. 16mmol) Boc-Lys(Z)-O(CH2)11CH3 為原料獲得 1. 20g(81% )目標(biāo)物。ESI-MS(m/z)449[M+H]+。3)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)-Lys(Z)-O(CH2)11CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 1.2g(1.9mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)禾Π 0. 78g(l. 7mmol) Lys (Z)-NH-(CH2)11CH3 為原料，得到 1. 90g(89% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 1059 [M+H]+ D4)制備 Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys-O(CH2)11CH3[YiGSKO(CH2)11CH3]將230mg Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Lys (Z) _0(CH2) nCH3 溶于 4ml 三氟醋酸中， 加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，冰浴攪拌1小時(shí)，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml 乙醚，析出的粉末用S印hadex GlO進(jìn)行提純，得到135mg(85% )目標(biāo)化合物。ESI_MS(m/ ζ) 735 [Μ+Η]+。[α ]D25 = -6 . 80 (c = 1. 01 甲醇)，Mp 129. O 130. O0C0實(shí)施例16 制備 HGSKO (CH2) 13CH31)制備 Boc-Lys (Z) _0 (CH2) 13CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 2. Og (5. 2mmol) Boc-Lys (Z)和 1. 24g(5. 7mmol)CH3(CH2)130H 為原料獲得 2. 6g(86% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 577 [M+H]+。2)制備 Lys (Z) _0 (CH2) 13CH3用制備Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 1. 9g(3. 29mmol) Boc-Lys(Z)-O(CH2)13CH3 為原料獲得 1. 27g(81% )目標(biāo)物。ESI-MS(m/z)477[M+H]+。3)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)-Lys(Z)-O(CH2)13CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 1. 3g (2. Ommol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)-OH 和 0. 89g (1. 8mmol) Lys (Z)-NH-(CH2) 13CH3 為原料，得到 1. 90g(94% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 1087 [M+H]+ D
11
4)制備 Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys-O(CH2)13CH3[YiGSKO(CH2)13CH3]將230mg Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Lys (Z) _0(CH2) 13CH3 溶于 4ml 三氟醋酸中， 加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，冰浴攪拌1小時(shí)，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml 乙醚，析出的粉末用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到145mg(90% )目標(biāo)化合物。ESI_MS(m/ z)763[M+H]+。[a]D25 = -10 . 70 (c = 1. 02 甲醇)，Mp 131.0 132. 0°C。實(shí)施例17 制備 HGSKO (CH2) 15CH31)制備 Boc-Lys (Z) _0 (CH2) 15CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 2. Og (5. 2mmol) Boc-Lys (Z)和
1.39g(5. 7mmol)CH3(CH2)150H 為原料獲得 2. 8g(88% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 605 [M+H]+。
2)制備 Lys (Z) _0 (CH2) 15CH3用制備Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl 的方法，以 1. 7g(2. 8mmol) Boc-Lys (Z) -0 (CH2) 15CH3 為原料獲得 1. 31g(92. 90% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 505 [M+H]+。3)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)-Lys(Z)-O(CH2)15CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 1. 3g (2. Ommol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)禾Π 1. 15g (2. 2mmol) Lys (Z)-O(CH2)15CH3 為原料，得到
2.lg(91% )目標(biāo)化合物。ESI-MS(m/z) 1115[M+H] + 04)制備 Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys-O(CH2)15CH3[YiGSKO(CH2)15CH3]將230mg Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Lys (Z) _0 (CH2) 15CH3 溶于 4ml 三氟醋酸中， 加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，冰浴攪拌1小時(shí)，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml 乙醚，析出的粉末用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到149mg(91 % )目標(biāo)化合物。ESI_MS(m/ ζ) 791 [Μ+Η]+。[α ]D25 = -10 . 50 (c = 1. 02 甲醇)，Mp :92· 0 93. 0°C。實(shí)施例18 制備 HGSKO (CH2) 17CH31)制備 Boc-Lys (Z) _0 (CH2) 17CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 2. Og (5. 2mmol) Boc-Lys (Z)和
1.56g(5. 7mmol)CH3(CH2)170H 為原料獲得 2. 9g(88% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 633 [M+H]+。2)制備 Lys (Z) _0 (CH2) 17CH3用制備Ser (Bzl)-Lys (Z)-OBzl 的方法，以 2. Og (3. 2mmol) Boc-Lys (Z) -0 (CH2) 17CH3 為原料獲得 1. 48g(88% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 533 [M+H]+。3)制備 Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)-Lys(Z)-O(CH2)17CH3用制備Boc-Ser(Bzl)-Lys(Z)-OBzl 的方法，以 1. 3g (2. Ommol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)禾Π 1. 60g (2. 2mmol) Lys (Z)-O(CH2)15CH3 為原料，得到
2.02g(86% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 1143 [M+H] +。4)制備 Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys-O(CH2) 17CH3[YIGSK0 (CH2) 17CH3]將230mg Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Lys (Z) _0(CH2) 17CH3 溶于 4ml 三氟醋酸中， 加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，冰浴攪拌1小時(shí)，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml 乙醚，析出的粉末用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到151mg(92% )目標(biāo)化合物。ESI_MS(m/ ζ) 819 [Μ+Η]+。[α ]D25 = -12. 13 (c = 1. 02 甲醇)，Mp :99· O 100. 0°Co試驗(yàn)例1本發(fā)明化合物靜脈給藥的抗血栓試驗(yàn)1)大鼠手術(shù)與器械
SD大鼠(雄性，220 230g)按UOOmg-kg—1劑量腹腔注射烏拉坦溶液進(jìn)行麻醉。 麻醉大鼠仰臥位固定，分離右頸總動脈，于近心端夾動脈夾，近心端和遠(yuǎn)心端分別穿入手術(shù) 線，將遠(yuǎn)心端的手術(shù)線于皮毛用止血鉗夾緊，準(zhǔn)備在遠(yuǎn)心端插管。2)插管插管為硅烷化過的聚乙烯膠管，分三段，中段為聚乙烯膠管，長60. Omm,內(nèi)徑 3. 5mm ；兩端為相同的聚乙烯管，管長100. Omm,內(nèi)徑1. Omm，外徑2. Omm該管的一端拉成尖管 (用于插入大鼠頸動脈或靜脈)，外徑為1. Omm0將編好號的干凈青霉素小瓶中分別裝入6cm 長的黑色手術(shù)線，稱重；然后取出絲線，按照編號放入準(zhǔn)備好的插管的中段較粗的插管中。打開大鼠右側(cè)動脈夾，用注射器通過尖管端將管中注滿肝素生理鹽水溶液 (50IU · kg—1)，然后將插管的動脈端插入大鼠右側(cè)頸總動脈，將計(jì)算量的肝素緩緩注入大鼠 體內(nèi)。3)給藥藥品生理鹽水(3ml/kg)、阿斯匹林(劑量為30mg/kg)的生理鹽水溶液、本發(fā)明 的化合物(劑量為lOmol/kg)的生理鹽水溶液。夾閉大鼠右側(cè)頸動脈夾，拔下插管靜脈端的注射器，將吸有計(jì)算量的藥品水溶的 藥液注射器插入插管的靜脈端，打開大鼠右側(cè)頸動脈夾，將藥品緩緩?fù)迫氪笫篌w內(nèi)。夾閉 右側(cè)頸動脈夾，將茶館的靜脈端插入分離好的大鼠左側(cè)頸靜脈，打開動脈夾，使血液開始循 環(huán)。并同時(shí)開始計(jì)時(shí)。此過程中插管中央的粗管中的絲線上會因?yàn)檠貉h(huán)而產(chǎn)生血栓。4)血栓稱重計(jì)時(shí)開始15分鐘后，剪斷動靜脈插管，停止循環(huán)，用眼科鑷小心取出絲線，在濾紙 上輕輕蘸掉血滴，放入事先稱重好的青霉素小瓶中，精確稱重并記錄。計(jì)算出血栓的濕重。 每個(gè)藥品重復(fù)12次給藥。統(tǒng)計(jì)各組的血栓濕重(文士SD),并做t檢驗(yàn)。5)結(jié)果經(jīng)靜脈給藥，本發(fā)明的化合物都具有很好的抗血栓活性。結(jié)果見表1。表1本發(fā)明化合物經(jīng)靜脈給藥的抗血栓活性 η = 12 ；a.與生理鹽水相比，P < 0. 01. b與生理鹽水相比，P < 0. 05.試驗(yàn)例2本發(fā)明化合物YIGSKNH(CH2) 15CH3 口服給藥的量效關(guān)系1)大鼠手術(shù)與器械SD 大鼠(雄性，220 230g)按 IOnmol · kg-1, Inmol · kg-1 和 0. Inmol · kg-1 劑量 口服YIGSKNC16，30min后按UOOmg-kg—1劑量腹腔注射烏拉坦溶液進(jìn)行麻醉。麻醉大鼠仰 臥位固定，分離右頸總動脈，于近心端夾動脈夾，近心端和遠(yuǎn)心端分別穿入手術(shù)線，將遠(yuǎn)心 端的手術(shù)線于皮毛用止血鉗夾緊，準(zhǔn)備在遠(yuǎn)心端插管。2)插管插管為硅烷化過的聚乙烯膠管，分三段，中段為聚乙烯膠管，長60. Omm,內(nèi)徑 3. 5mm ；兩端為相同的聚乙烯管，管長100. Omm,內(nèi)徑1. Omm，外徑2. Omm該管的一端拉成尖管 (用于插入大鼠頸動脈或靜脈)，外徑為1.0mm。將編好號的干凈青霉素小瓶中分別裝入6cm 長的黑色手術(shù)線，稱重；然后取出絲線，按照編號放入準(zhǔn)備好的插管的中段較粗的插管中。打開大鼠右側(cè)動脈夾，用注射器通過尖管端將管中注滿肝素生理鹽水溶液 (50IU · kg—1)，然后將插管的動脈端插入大鼠右側(cè)頸總動脈，將計(jì)算量的肝素緩緩注入大鼠
14體內(nèi)。3)給藥溶液藥品將YiGSKNH(CH2) 15CH3 按 IOnmol · kg-1, Inmol · kg-1 和 0. Inmol · kg-1 劑量配 置生理鹽水溶液，供口服給藥。4)血栓稱重計(jì)時(shí)開始15分鐘后，剪斷動靜脈插管，停止循環(huán)，用眼科鑷小心取出絲線，在濾紙 上輕輕蘸掉血滴，放入事先稱重好的青霉素小瓶中，精確稱重并記錄。計(jì)算出血栓的濕重。 每個(gè)藥品重復(fù)11次給藥。統(tǒng)計(jì)各組的血栓濕重(X 士SD)，并做t檢驗(yàn)。5)結(jié)果經(jīng)口 服給藥，在 IOnmol · kg—1，Inmol · kg—1 和 0. Inmol · kg—1 劑量下， YIGSKNH (CH2) 15CH3劑量依賴地發(fā)揮抗血栓作用。結(jié)果見表2。表2. 口服給予YIGSKNH(CH2)15CH3的量效關(guān)系 a)與 lmol/kg 組比 ρ < 0. 05 ；b)與 0. lnmol/kg 組比 ρ < 0. 05試驗(yàn)例3本發(fā)明化合物在水相中組裝成為納米球試驗(yàn)1)本發(fā)明實(shí)施例所制備的9種化合物按照mg/ml的濃度配置成為水溶液，在激光 散射粒度儀(型號)上連續(xù)測定8天，觀察粒徑及粒徑變化，結(jié)果見表3。得到的數(shù)據(jù)表明， 這9種化合物在水相中可以自組裝成為穩(wěn)定的納米球，因而是優(yōu)秀的微乳和脂質(zhì)體藥物的 制備材料，并考察了 YIGSKO(CH2)17CH3分別包水溶性的阿霉素和脂溶性的紫杉醇的粒徑穩(wěn)定性。表3本發(fā)明的部分陽離子藥質(zhì)體(IO-5M)在水中自組裝成為穩(wěn)定的納米球的粒徑
化合物第1 天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8Yigsko(CH2)7CH31218982154121978571Yigsko(CH2)13CH3128131142284178142121102Yigsko(CH2)17CH3786613732710497458486510YigsknH(CH2)7CH3268220225356210245356256yigSKNH(ch2)13ch3316335297267297334430363YigsknH(CH2)17CH3366519466745401531689589CH3(CH2)6COYIGSK356489410356410231346419CH3(CH2)12COYIGSK528449479589612542510654CH3(CH2)I6COYIGSK785874889760845987810789Yigsko(CH2)17CH3 阿霉素230200256312289451356258YIGSKO(CH2)nCH3 紫杉醇52863830232641138628938權(quán)利要求
脂肪烷基五肽綴合物，該綴合物的通式為Tyr Ile Gly Ser Lys X，Tyr Ile Gly Ser Lys Y或Z Tyr Ile Gly Ser Lys；其中X為CH3(CH2)nCH2OH，Y為CH3(CH2)nCH2NH2，Z為CH3(CH2)nCO2H；n＝6，8，10，12，14或16。
2.一種制備權(quán)利要求1所述脂肪烷基五肽綴合物的方法，包括以下步驟(1)合成Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys ；(2)將CH3 (CH2) nC02H、CH3(CH2)nCH2OH 或 CH3(CH2)nCH2NH2 分另Ij 與保護(hù)基保護(hù)的 Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys的羧端或氨端綴合，脫去保護(hù)基，即得；其中η = 6，8，10，12，14或 16。
3.—種藥物組合物，其特征在于由治療或預(yù)防上有效量的權(quán)利要求1所述的脂肪烷 基五肽綴合物和藥學(xué)上可接受的載體或輔料所組成。
4.權(quán)利要求1所述的脂肪烷基五肽綴合物在制備抗血栓藥物中的用途。
5.權(quán)利要求1所述的脂肪烷基五肽綴合物在作為制備微乳或脂質(zhì)體藥物載體中的用途。全文摘要
本發(fā)明公開了脂肪烷基五肽綴合物及其制備方法和在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用。本發(fā)明綴合物的通式為Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys-X，Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys-Y或Z-Tyr-Ile-Gly-Ser-Lys；其中X為CH3(CH2)nCH2OH，Y為CH3(CH2)nCH2NH2，Z為CH3(CH2)nCO2H；n＝6，8，10，12，14或16。本發(fā)明綴合物除具有優(yōu)秀的抗血栓活性外，還具有優(yōu)秀自組裝性能，可作為制備微乳、脂質(zhì)體等藥物載體的制劑材料。
文檔編號C07K1/06GK101899091SQ20091008507
公開日2010年12月1日 申請日期2009年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月31日
發(fā)明者彭師奇, 趙明, 高建玲 申請人:首都醫(yī)科大學(xué)