專利名稱：一種黃芪甲苷的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用豆科植物黃芪提取、分離、制備具有生物活性的黃芪甲苷的方法，屬于中藥提取加工領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
黃芪甲苷主要存在于豆科黃芪屬植物中，具有調(diào)節(jié)免疫功能，抑制炎癥、抗氧化、 強心、改善血液流變學、降血壓、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛和調(diào)節(jié)代謝等活性。黃芪甲苷在黃芪藥材中含量很低(0. 1_1%。)。用常規(guī)的植物化學方法提取分離 黃芪甲苷成本很高。現(xiàn)有的制備黃芪甲苷的文獻(CN1283462A，JP57165400, JP62012791, JP62012792)方法均為用硅膠柱層析多次分離，以氯仿、甲醇等有毒有機溶劑洗脫分離， 要求較高的生產(chǎn)設(shè)施和人員防護條件，由于試劑、生產(chǎn)設(shè)施、人員防護要求使產(chǎn)品成本高， 轉(zhuǎn)移率低、對環(huán)境會產(chǎn)生不利影響。申請?zhí)?00410007963. 1的專利使用提取、濃縮、堿 處理、有機溶劑萃取反復分離等方法純化精制黃芪甲苷；申請?zhí)?00410013950. 4的專利 黃芪藥材水提醇沉，上清液經(jīng)濃縮后，濃縮液經(jīng)丁醇萃取，獲得黃芪甲苷提取物；申請?zhí)?200610012687.6的專利通過提取濃縮、醇沉、堿水解、濾取水解的產(chǎn)生沉淀得黃芪甲苷粗 品；申請?zhí)?00510020977. 0的專利黃芪提取、大孔樹脂富集、堿水解轉(zhuǎn)化、溶劑萃取和純 化精制等步驟，最后得到黃芪甲苷產(chǎn)品；申請?zhí)?00710043678. 8的專利水提取黃芪、堿處 理、大孔吸附樹脂吸附、水洗、稀醇液洗、較高濃度醇液洗脫黃芪甲苷、濃縮及結(jié)晶步驟。上 述提取制備黃芪甲苷的方法，雖然沒有用多次硅膠柱層析，沒有用氯仿、甲醇等有毒有機溶 劑分離，但收率極低，產(chǎn)品的純度不穩(wěn)定，有時得到的主要成分不是目標化合物，而是無機
Τττ . ο本發(fā)明提供了更加便捷、更加經(jīng)濟、更加環(huán)保、提取率更高的用黃芪提取制備黃芪 甲苷的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了用黃芪提取制備黃芪甲苷的新方法，本方法適用工業(yè)化生產(chǎn)。 黃芪是指豆科黃芪屬植物，包括蒙古黃芪Astragalus membranaceus (Fisch. ) Bge. var. mongholicus (bge. ) hsiao.、膜莢黃苗(A. membranaceus (Fisch. ) Bge.)、金翼黃苗 (A. chrysopterus Bge.)、梭果黃苗(A. ernestii Comb.)、多花黃苗(A. floridus Benth.)、 塘谷耳黃芪(A. tongolensis Ulbr.)、扁蓮黃芪(A. complanatus R.Br·)。本發(fā)明技術(shù)路線有三條，但均存在制備成黃芪總皂苷溶液，酸化結(jié)晶分離得到黃 芪甲苷的技術(shù)特征。方法一1、提取，黃芪用水、或水與甲醇、乙醇、丙酮等溶劑組成的二種及多種混合溶劑提 取，提取液濃縮并且不含有機溶劑(如無有機溶劑時也可以直接上柱)，加水至合適的體 積，去除沉淀(如有沉淀)。
2、上樣，上述提取水溶液，通過常規(guī)處理后的大孔樹脂柱，常規(guī)水洗脫至近無色， 并且糖試驗反應(yīng)陰性。其中，大孔樹脂為非極性或者弱極性大孔樹脂，包括苯乙烯樹脂，乙 烯基苯乙烯樹脂，甲基苯乙烯樹脂，丙烯晴樹脂。例如DlOl型，AB-8型，HPD100型，D140型， DA型，樹脂用量為藥材重量的0. 1-5. 0倍。3、堿洗酚酸物質(zhì)，樹脂柱用堿水洗脫至無色；堿水是氫氧化鈉、氫氧化鉀的水溶液，濃度為 0. 02mol-l. Omol/Lo4、酸洗無機鹽，堿洗后的樹脂柱用水洗脫至中性，再用酸水洗脫，繼續(xù)用水洗脫至 中性；酸水是磷酸、鹽酸、硫酸、醋酸或者甲酸的水溶液，濃度為0. 02mol-l. Omol/L，酸的用 量為0. 2-1. ON/kg藥材。5、洗脫和濃縮，用大極性有機溶劑或者其含水的混合溶劑洗脫，收集洗脫液，洗脫 液濃縮至小體積并且不含有機溶劑。大極性有機溶劑是甲醇、乙醇或者丙酮。6、水解，洗脫液濃縮后加堿堿化，加熱水解；堿為氫氧化鈉或者氫氧化鉀，水解堿 濃度為0. 1-1. 0N/L，水解溫度40-100°C，得到黃芪總皂苷溶液。7、結(jié)晶，黃芪總皂苷溶液滴加酸酸化，放置析晶。酸性液體是磷酸、鹽酸、硫酸、 丙酸、醋酸、甲酸或者是它們的水溶液，優(yōu)選醋酸、甲酸，酸化的PH值為6-1，優(yōu)選PH值 2· 5 4· 5 ο8、重結(jié)晶，濾取上述結(jié)晶，用甲醇或者稀乙醇、稀甲醇進行重結(jié)晶，得黃芪甲苷精 品，含量98%以上。上述步驟中堿洗與酸洗順序可以互相調(diào)換，同時，堿洗酚酸物質(zhì)、酸洗無機鹽和水 解步驟可以省略，步驟7酸水結(jié)晶是關(guān)鍵步驟。方法二1、提取與濃縮，黃芪用水、或水與甲醇、乙醇、丙酮等溶劑組成的二種及多種混合 溶劑提取，提取液濃縮至小體積，藥材/提取液約為1/1-3/1 (w/v)，放置后去除沉淀。2、堿水解，上述澄清水溶液加入堿水后，加熱回流水解1-3小時。3、萃取，水解液中和后用丁醇、乙酸乙酯萃取，分取有機層，濃縮至干.。得到黃芪總皂苷，用水溶解得到黃芪總皂苷溶液。4、結(jié)晶，黃芪總皂苷溶液滴加酸性液體使其PH值為5-1，放置析晶，酸性液體是磷 酸、鹽酸、硫酸、丙酸、醋酸、甲酸或者是它們的水溶液。5、重結(jié)晶，濾取上述結(jié)晶，用甲醇或者稀乙醇、稀甲醇進行重結(jié)晶，得黃芪甲苷精 品，含量98%以上。上述步驟中，步驟4酸水結(jié)晶是關(guān)鍵步驟。方法三1、堿水提取，黃芪用堿水提取，去除沉淀(如有沉淀)。堿水是氫氧化鈉、氫氧化鉀的水溶液，濃度為0. Olmol-1. Omol/L。2、上樣，上述提取水溶液，通過常規(guī)處理后的大孔樹脂柱，常規(guī)水洗脫至近無色， 并且糖試驗反應(yīng)陰性。大孔樹脂為非極性或者弱極性大孔樹脂，包括苯乙烯樹脂，乙烯基苯乙烯樹脂，甲 基苯乙烯樹脂，丙烯晴樹脂。例如DlOl型，AB-8型，HPD100型，D140型，DA型，樹脂用量為 藥材重量的0. 1-5. 0倍。
3、酸洗無機鹽，堿洗后的樹脂柱用水洗脫至中性，再用酸水洗脫，繼續(xù)用水洗脫至 中性。酸水是磷酸、鹽酸、硫酸、醋酸或者甲酸的水溶液，濃度為0. Olmol-1. Omol/L，酸的用 量為0. 2-1. ON/kg藥材。4、洗脫和濃縮，用大極性有機溶劑或者其含水的混合溶劑洗脫，收集洗脫液，洗脫 液濃縮至小體積并且不含有機溶劑，得到黃芪總皂苷溶液。大極性有機溶劑是甲醇、乙醇或 者丙酮。5、結(jié)晶，黃芪總皂苷溶液滴加酸性液體使其PH值為6-1，放置析晶。酸性液體是磷 酸、鹽酸、硫酸、丙酸、醋酸、甲酸或者是它們的水溶液。6、重結(jié)晶，濾取上述結(jié)晶，用甲醇或者稀乙醇、稀甲醇進行重結(jié)晶，得黃芪甲苷精 品，含量98%以上。上述步驟中酸洗無機鹽也可以省略，步驟5酸水結(jié)晶是關(guān)鍵步驟。上述三種方法，其中共有的技術(shù)特征是結(jié)晶方法，均為用酸水進行結(jié)晶，酸水為磷 酸、鹽酸、硫酸、丙酸、醋酸、甲酸的水溶液，優(yōu)選醋酸、甲酸；酸化的PH值為6-1，優(yōu)選PH值 2· 5 4· 5 ο黃芪甲苷的含量測定方法可以參照中國藥典(2005年版)所述方法進行。
具體實施例方式用以下的實施例對本發(fā)明作具體說明，但本發(fā)明并不限于下列實施例包含的內(nèi)容。[實施例一]取蒙古黃芪的干燥根500g，用70%的甲醇4000ml回流提取1小時，濾 取提取液，藥渣二次加70%的甲醇4000ml回流提取1小時，濾取提取液，藥渣三次加70% 的甲醇4000ml回流提取1小時，濾取提取液，合并三次提取液，濃縮至1000ml，并且無乙醇 味，加水1000ml，去除沉淀，上已常規(guī)處理好的DlOl型大孔樹脂(2. 5kg，DlOl型大孔樹脂為 苯乙烯型)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至糖試驗反應(yīng)陰性，上述樹脂柱用0. 氫氧化鈉 水洗脫酚酸物質(zhì)至無色，水洗脫至中性，再用0. 鹽酸水2500ml洗脫無機鹽，水洗脫至中 性。用70%乙醇水洗脫，收集洗脫液；濃縮至小體積并且不含乙醇，加IN氫氧化鈉溶液至 PH值大于13，加熱100°C水解1小時；水解液放置冷卻，滴加冰醋酸至PH值約為4，搖勻，放 置析晶，濾取結(jié)晶，用甲醇進行重結(jié)晶，既得黃芪甲苷精品0. 25g，含量98%以上。[實施例二]取膜莢黃芪的干燥根1kg，用50%的甲醇8000ml回流提取1小時，濾 取提取液，藥渣二次加50%的甲醇8000ml回流提取1小時，濾取提取液，藥渣三次加50% 的甲醇8000ml回流提取1小時，濾取提取液，合并三次提取液，濃縮至1000ml，并且無甲醇 味，加水1000ml，去除沉淀，上已常規(guī)處理好的D2型大孔樹脂(400g，D2型大孔樹脂為乙基 苯乙烯型)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至糖試驗反應(yīng)陰性，樹脂柱用0.5%氫氧化鉀水洗 脫酚酸物質(zhì)至無色，水洗脫至中性，再用0. 5%硫酸水IOOOml洗脫無機鹽，水洗脫至中性； 用50%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至IOOml并且不含乙醇；加氫氧化鉀至PH值大于13，力口 熱80°C水解2小時；放冷，滴加稀鹽酸酸化PH為1左右，搖勻放置析晶，濾取結(jié)晶，用25% 乙醇進行重結(jié)晶，既得黃芪甲苷精品0. 48g，含量98%以上。[實施例三]金翼黃芪的干燥根2kg，用30%的甲醇16升回流提取1小時，濾取 提取液，藥渣二次加30%的甲醇16升回流提取1小時，濾取提取液，藥渣三次加30%的甲醇16升ml回流提取1小時，濾取提取液，合并三次提取液，濃縮至1000ml，并且無甲醇味， 加水1000ml，去除沉淀，上已常規(guī)處理好的DM2型大孔樹脂(200g，DM2型大孔樹脂為2-甲 基苯乙烯型)分離柱，用水洗去雜質(zhì)，至糖試驗反應(yīng)陰性，樹脂柱用4%氫氧化鈉水洗脫酚 酸物質(zhì)至無色，水洗脫至中性，再用磷酸水5000ml洗脫無機鹽，水洗脫至中性，用甲醇 洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘渣用水500ml，加氫氧化鈉4g溶解，加熱100°C水解1小 時；放冷，滴加甲酸酸化，放置析晶，濾取結(jié)晶，用20%甲醇進行重結(jié)晶，既得黃芪甲苷精品 0. 54g，含量98%以上。[實施例四]梭果黃芪的干燥根500g，用60%的丙酮2000ml回流提取1小時，濾 取提取液，藥渣二次加60%的丙酮2000ml回流提取1小時，濾取提取液，藥渣三次加60% 的丙酮2000ml回流提取1小時，濾取提取液，合并三次提取液，濃縮至1000ml，并且無丙 酮味，加水1000ml，去除沉淀，上已常規(guī)處理好的MD型大孔樹脂(1.5kg，MD型大孔樹脂為 α -甲基苯乙烯型)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至糖試驗反應(yīng)陰性，樹脂用2. 5%氫氧化鉀 水洗脫酚酸物質(zhì)至無色，水洗脫至中性，再用0. 5%乙酸水IOOOml洗脫無機鹽，水洗脫至中 性，用80%甲醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至IOOml并且不含甲醇，加氫氧化鉀Ig溶解，100°C 水解0. 5小時，放冷，滴加甲酸酸化PH為3，搖勻放置析晶，濾取結(jié)晶，用甲醇進行重結(jié)晶，既 得黃芪甲苷精品0. 15g，含量98%以上。[實施例五]取多花黃芪的干燥根1kg，用45%的丙酮5000ml回流提取1小時，濾 取提取液，藥渣二次加45%的丙酮5000ml回流提取1小時，濾取提取液，藥渣三次加45% 的丙酮5000ml回流提取1小時，濾取提取液，合并三次提取液，濃縮至200ml，并且無丙酮 味，去除沉淀，加入0. 5克氫氧化鈉溶解后，90°C水解1小時，用醋酸中和，正丁醇萃取，分取 有機層，濃縮至干.，用水溶解，滴加丙酸使其PH值為4. 5，搖勻放置析晶，濾取結(jié)晶，用甲醇 重結(jié)晶，既得黃芪甲苷精品0. 28g，含量98%以上。[實施例六]塘谷耳黃芪的干燥根500g，用30%的甲醇3000ml回流提取1小時，濾 取提取液，藥渣二次加30%的甲醇2500ml回流提取1小時，濾取提取液，藥渣三次加30% 的甲醇2500ml回流提取1小時，濾取提取液，合并三次提取液，濃縮至200ml，并且無甲醇 味，去除沉淀，加入氫氧化鈉1克溶解后，100°C水解2小時，水解液中和后乙酸乙酯萃取，分 取有機層，濃縮至干，用水溶解，滴加甲酸PH值為2，搖勻放置析晶，濾取結(jié)晶，用20%乙醇 重結(jié)晶，既得黃芪甲苷精品0. 18g，含量98%以上。[實施例七]取扁莖黃芪的干燥根500g，用1.0%氫氧化鈉水溶液4000ml加熱提 取1小時，濾取提取液，藥渣二次加1. 0%氫氧化鈉水溶液4000ml加熱提取1小時，濾取提 取液，藥渣三次加1. 0%氫氧化鈉水溶液4000ml加熱提取1小時，濾取提取液，合并三次提 取液，去除沉淀，上已常規(guī)處理好的AB-8型大孔樹脂(1. 5kg，AB-8型大孔樹脂為苯乙烯型) 分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至糖試驗反應(yīng)陰性，用醋酸水1500ml洗脫無機鹽，水洗脫 至中性，用60%乙醇水洗脫，收集洗脫液，濃縮至IOOml并且不含乙醇，滴加丙酸使其PH值 為5，搖勻放置析晶，濾取上述結(jié)晶，用甲醇重結(jié)晶，既得黃芪甲苷精品0. 14g，含量98%以 上。[實施例八]取蒙古黃芪的干燥根500g，用50%的乙醇4000ml回流提取1小時，濾 取提取液，藥渣二次加50%的乙醇4000ml回流提取1小時，濾取提取液，藥渣三次加50% 的乙醇4000ml回流提取1小時，濾取提取液，合并三次提取液，濃縮至100ml，并且無乙醇味，去除沉淀，加入氫氧化鈉1克溶解后，60°c水解3小時，水解液中和后用異丁醇萃取，分 取有機層，濃縮至干，殘渣用水溶解，滴加鹽酸使其PH值為1. 5，搖勻放置析晶，濾取上述結(jié) 晶，用15%乙醇重結(jié)晶，既得黃芪甲苷精品0. 26g，含量98%以上。[實施例九]取蒙古黃芪的干燥根500g，用0.氫氧化鈉水溶液4000ml煎煮1. 5 小時，濾取提取液，藥渣二次加0. 氫氧化鈉水溶液3000ml煎煮1小時，濾取提取液，藥 渣三次加0. 1 %氫氧化鈉水溶液4000ml煎煮0. 5小時，濾取提取液，合并三次提取液，去除 沉淀(如有沉淀)，上已常規(guī)處理好的DlOl型大孔樹脂(0. lkg,DlOl型大孔樹脂為苯乙烯 型)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至糖試驗反應(yīng)陰性，再用醋酸水600ml洗脫無機鹽，水 洗脫至中性，用40%乙醇水洗脫，收集洗脫液，濃縮至100ml，滴加醋酸使其PH值為4. 2，搖 勻放置析晶，濾取上述結(jié)晶，用30%乙醇重結(jié)晶，既得黃芪甲苷精品0. 45g，含量98%以上[實施例十]取膜莢黃芪的干燥根1kg，用0.4%氫氧化鈉水溶液6000ml煎煮1. 5 小時，濾取提取液，藥渣二次加0. 4%氫氧化鈉水4000ml煎煮1小時，濾取提取液，藥渣三次 加0. 4%氫氧化鈉水4000ml煎煮1小時，濾取提取液，三次提取液合并，去除沉淀(如有沉 淀)，上已常規(guī)處理好的DlOl型大孔樹脂(0. lkg, DlOl型大孔樹脂為苯乙烯型)分離柱， 用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，糖試驗反應(yīng)陰性，再用2%醋酸水600ml洗脫無機鹽，水洗脫至中性，用 50%丙酮水洗脫，收集洗脫液，濃縮至200ml并且不含丙酮，滴加甲酸使其PH值為2. 0，搖勻 放置析晶，濾取上述結(jié)晶，用甲醇進行重結(jié)晶，既得黃芪甲苷精品0. 43g，含量98%以上[實施例十一]取蒙古黃芪的干燥根2kg，用水12升煎煮1小時，濾取提取液，藥 渣二次加水8升煎煮1小時，濾取提取液，藥渣三次加水8升煎煮1小時，濾取提取液，合 并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，上已常規(guī)處理好的DlOl型大孔樹脂(3kg，DlOl型 大孔樹脂為苯乙烯型)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，糖試驗反應(yīng)陰性，樹脂用4%氫氧化鈉 水洗脫酚酸物質(zhì)至無色，水洗脫至中性，再用0. 5%甲酸水1600ml洗脫無機鹽，水洗脫至中 性，用70%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至300ml并且不含乙醇，加堿氫氧化鈉3g溶解，加熱 100°C水解1小時，放冷，滴加醋酸酸化，搖勻放置析晶，濾取上述結(jié)晶，用甲醇進行重結(jié)晶， 既得黃芪甲苷精品1.25g，含量98%以上。[實施例十二]取膜莢黃芪的干燥根10kg，用水60升煎煮30小時，濾取提取液， 藥渣二次加水50升煎煮1小時，濾取提取液，藥渣三次加水50升煎煮1小時，濾取提取液， 合并三次提取液，去除沉淀，上已常規(guī)處理好的DA型大孔樹脂(1kg，DA型為丙烯晴樹脂) 分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，糖試驗反應(yīng)陰性，樹脂柱用0. 04%氫氧化鈉水洗脫酚酸物質(zhì)至 無色，水洗脫至中性，再用2%乙酸水2500ml洗脫無機鹽，水洗脫至中性，用40%丙酮水洗 脫，收集洗脫液，濃縮至500ml并且不含丙酮，加2克溶解，100°C水解1小時，放冷，滴加甲 酸酸化，搖勻放置析晶，濾取上述結(jié)晶，用甲醇進行重結(jié)晶，既得黃芪甲苷精品6. 58g，含量 98%以上。
權(quán)利要求
一種用于制備黃芪甲苷的方法，其特征是黃芪總皂苷溶液加酸酸化的條件下結(jié)晶分離黃芪甲苷。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中酸化用的酸是鹽酸、硫酸、丙酸、醋酸、甲酸或者是 它們的水溶液，優(yōu)選醋酸、甲酸。
3.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中黃芪總皂苷溶液加酸酸化的PH值為1-6，優(yōu)選PH 值 2. 5-4. 5。
4.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中黃芪總皂苷溶液制備方法如下①、提取，取黃芪飲片或者黃芪段，用溶劑提取，提取液制成澄清水溶液；②上樣，上述澄清水溶液，通過大孔樹脂柱，常規(guī)水洗脫至糖反應(yīng)試驗陰性；③堿洗酚酸物質(zhì)，已上樣樹脂柱用堿水洗脫至無色；④酸洗無機鹽，堿洗后的樹脂柱用水洗脫至中性，再用酸水洗脫，繼續(xù)用水洗脫至中性；⑤洗脫和濃縮，用甲醇、乙醇、或者其含水的混合溶劑洗脫，收集洗脫液，洗脫液濃縮至 小體積并且不含有機溶劑；⑥水解，洗脫液濃縮液堿化，加熱水解，得到黃芪總皂苷溶液。
5.按照權(quán)利要求4所述的方法，其②中大孔樹脂為非極性或者弱極性大孔樹脂，包括 苯乙烯樹脂，乙烯基苯乙烯樹脂，甲基苯乙烯樹脂，丙烯晴樹脂。
6.按照權(quán)利要求4所述的方法，其③中堿水是氫氧化鈉、或氫氧化鉀的水溶液，濃度為 0. 02mol-l. Omol/L0
7.按照權(quán)利要求4所述的方法，其④中酸水是磷酸、鹽酸、硫酸、醋酸或者甲酸的水溶 液，濃度為0. 02mol-l. Omol/L，酸的用量為0. 2-1. ON/kg藥材。
8.按照權(quán)利要求4所述的方法，其⑥中堿化用堿是氫氧化鈉或者氫氧化鉀，水解堿濃 度為 0. 1-1. 0N/L，水解溫度 40-1000C ο
9.按照權(quán)利要求4所述的方法，其中黃芪是蒙古黃芪、膜莢黃芪、金翼黃芪、梭果黃芪、 多花黃芪、塘谷耳黃芪或者扁莖黃芪。
10.按照權(quán)利要求5所述的方法，其中大孔樹脂為DlOl型大孔樹脂，AB-8型大孔樹 月旨，HPD100型大孔樹脂，D140型大孔樹脂或者DA型大孔樹脂，樹脂用量為黃芪藥材重量的 0. 1-5. 0 倍。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種黃芪甲苷的工業(yè)制備方法，該方法是將黃芪總皂苷提取物在酸水中結(jié)晶分離黃芪甲苷，具體工藝如下提取，大孔樹脂柱分離，酸堿除雜，堿水解提高含量，酸水結(jié)晶，重結(jié)晶等步驟，最終獲得含量98％以上黃芪甲苷單體。本工藝具有環(huán)保、經(jīng)濟、提取率高等特點。
文檔編號C07J53/00GK101812109SQ20091007850
公開日2010年8月25日 申請日期2009年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月25日
發(fā)明者羅河生 申請人:羅河生