專利名稱：抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合IgY及其在治療口臭和牙齦中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合IgY及其在治療口臭和牙齦中的應用，抗體制備方法以及抗體制劑的配制和使用范圍。
背景技術：
目前沒有有效的治療口臭的合適方法，盡管口臭與牙齦、牙周疾病密切相關，但最常見的治療口臭的方法是使用抗菌素類藥物先治療牙齦、牙周疾病，再間接的治療口臭，但使用抗菌素類藥物治療口臭有很多弊端。
我國牙齦、牙周疾病發(fā)病率占人口的70％以上，其中以成年人牙齦炎、牙周炎為多。牙齦炎、牙周炎患者牙齦紅腫、發(fā)黑、進食及刷牙易出血、口臭及口腔異味、牙周袋形成、牙齦萎縮、牙槽骨破壞、牙齒松動脫落，若不及時治療可導致牙齒脫落喪失，此外牙齦炎、牙周炎還是其它全身感染性疾病的病灶和細菌來源。牙齦炎、牙周炎的可疑病因菌有十余種之多，但主要的可疑病因菌包括具核梭桿菌、牙齦卟啉菌、伴放線菌放線桿菌、棲牙密螺旋體、變形鏈球菌群、牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌等。近年來從牙齦炎、牙周炎病灶中分離出牙齦二氧化碳噬纖維菌的患者數(shù)不斷增多。
牙齦炎、牙周炎沒有理想的治療藥物，基本都是抗菌素類藥物，如甲硝唑、替其硝唑，以及表面活性劑，如氯己定等，它們的療效不佳且有一定的副作用，如長期使用易導致白色念珠菌感染，甚至出現(xiàn)周圍神經(jīng)炎等，同時也易導致耐藥菌株的產(chǎn)生。因此急需尋找新的方法和手段預防和治療口臭、口腔異味、牙齦炎及牙周炎。
從主要的可疑病因菌包括具核梭桿菌、牙齦卟啉菌、伴放線菌放線桿菌、棲牙密螺旋體、變形鏈球菌群、牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌中尋找引起口臭的主要因素是抑制口臭的關鍵。
有大量文獻報道表明臨床上使用特異性IgY抗體預防齲齒和治療嬰幼兒輪狀病毒性腹瀉，預防膽囊纖維化患者綠膿桿菌感染，減輕幽門螺桿菌引起的胃痛，這些治療效果都已經(jīng)得到了確切的證明。
我們認為在生物學領域，學術界對特異性IgY還存在一定的誤解。一種典型的誤解是認為某種IgY必然能抑制某種疾病，例如認為不需要做實驗就能推定抗具核梭桿菌IgY能特異性抑制具核梭桿菌、抗牙齦卟啉菌IgY能特異性抑制牙齦卟啉菌、抗伴放線菌放線桿菌IgY能特異性抑制伴放線菌放線桿菌都是不科學的。上述抑制作用必須通過實驗數(shù)據(jù)才能證明效果。
在我們研究的許多種類的IgY中發(fā)現(xiàn)，有的種類的抗原免疫的IgY的實驗數(shù)據(jù)沒有或沒有明顯的抑制趨勢，簡單的說，不是所有的IgY都有明顯的治療作用。例如目前沒有實驗數(shù)據(jù)可以證明愛滋病毒免疫的IgY能治療愛滋病。
由于牙齦炎、牙周炎的可疑病因菌有十余種之多，但主要的可疑病因菌包括具核梭桿菌、牙齦卟啉菌、伴放線菌放線桿菌、棲牙密螺旋體、變形鏈球菌群、牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌等。在探索制備對應的IgY用于治療牙齦、牙周疾病的同時，我們推測具核梭桿菌、牙齦卟啉菌、伴放線菌放線桿菌、棲牙密螺旋體、變形鏈球菌群、牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌都有可能引起口臭；但我們事先無法預測在這當中的哪些菌是引起口臭的主要因素，哪些菌是引起口臭的次要因素。
我們認為必須有合適的抗口臭的臨床試驗來確定哪些菌是引起口臭的主要因素。從而指導制備抗口臭的藥物或抗口臭的功能性食品。
目前的現(xiàn)有技術沒有相關的提示指導技術人員發(fā)現(xiàn)抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合IgY是解決治療口臭的關鍵。
技術人員無法預先在不做抗口臭的實驗的前提下，預先得知牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌是引起口臭的主要因素。
技術人員無法預先在不做抗牙齦的實驗的前提下，預先得知抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合IgY比單獨的抗牙齦二氧化碳噬纖維菌IgY、單獨的抗中間普氏菌IgY的效果更好。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種抗中間普氏菌特異性IgY、抗牙齦二氧化碳噬纖維菌、抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合IgY及其在治療口臭和牙齦中的應用，抗體制備方法以及抗體制劑的配制和使用范圍。
本發(fā)明涉及的中間普氏菌的國際標準名為Prevotella intermedia。
本發(fā)明涉及的牙齦二氧化碳噬纖維菌的國際標準名為Capnocytophaga gingivalis。
本發(fā)明的目的還提供一種制備抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY的方法和一種抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物和純品，以及由這種抗二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌混合IgY抗體提取物和純品配制的制劑，并用這種制劑預防和治療由牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌，以及與其有共同抗原決定簇的厭氧菌引起的口臭、口腔異味，及牙齦炎等。
本發(fā)明的目的是通過下列技術方案來實現(xiàn)抗中間普氏菌特異性IgY在制備預防和治療口臭的制劑中的應用。
抗牙齦二氧化碳噬纖維菌特異性IgY在制備預防和治療口臭的制劑中的應用。
抗中間普氏菌特異性IgY在制備預防和治療牙齦的制劑中的應用。
抗牙齦二氧化碳噬纖維菌特異性IgY在制備預防和治療牙齦的制劑中的應用。
抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY，其中取抗牙齦二氧化碳噬纖維菌菌體特異性IgY30～60份，抗中間普氏菌菌體特異性IgY40～70份混合而成。
抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY在制備預防和治療口臭的制劑中的應用。
抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY的制備方法，其中A細菌種類牙齦二氧化碳噬纖維菌和中間普氏菌；細菌的來源和培養(yǎng)牙齦二氧化碳噬纖維菌和中間普氏菌，來自牙周病患者口腔牙周袋炎癥部位分離的牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌，以及標準的牙齦二氧化碳噬纖維菌ATCC 33624和中間普氏菌ATCC 25261菌株，經(jīng)BHI-S培養(yǎng)基分離培養(yǎng)和擴增培養(yǎng)的牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌，并經(jīng)鑒定確認為牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌；B免疫原制備取牙齦二氧化碳噬纖維菌菌體的碎片30～60份，中間普氏菌菌體的碎片40～70份混合成菌液；將等體積的菌液與等體積的福氏完全佐劑混合，使用高速攪拌器攪拌乳化，最終制成油包水福氏完全佐劑牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌混合免疫原。
或者將等體積的菌液與等體積的福氏不完全佐劑混合，使用高速攪拌器攪拌乳化，最終制成油包水福氏不完全佐劑牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌混合免疫原；每毫升福氏完全佐劑混合免疫原和福氏不完全佐劑混合免疫原中均含有細菌20億-60億；C免疫使用注射器將福氏完全佐劑混合免疫原皮下和肌肉注射給產(chǎn)蛋母雞，每只產(chǎn)蛋母雞注射1.5ml-2.0ml免疫原，然后每隔一周使用福氏不完全佐劑混合免疫原1.5ml-2.0ml皮下和肌肉注射給產(chǎn)蛋母雞，加強免疫二次后；此后每隔八周再使用福氏不完全佐劑混合免疫原1ml皮下和肌肉注射給產(chǎn)蛋母雞加強免疫四次，前后共免疫七次。
D抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物的制備收集免疫第一次免疫后第30天的免疫母雞雞蛋，使用70％的酒精進行雞蛋表面消毒，打開蛋殼取蛋黃，去除蛋黃膜取蛋黃液，將蛋黃液與蒸餾水按體積比1∶7-9的比例加蒸餾水，充分攪拌，并使用1N HCl調(diào)節(jié)酸堿度至pH5.0-5.2，然后放置4℃ 12小時。
然后將蛋黃稀釋液高速離心10000rpm，30分鐘，取上清，將蛋黃稀釋液上清置于截留分子量為100KD的中空纖維超濾器中超濾濃縮5-10倍，然后加入0.02％-2.0％的氯己定充分攪拌，并使用1N NaOH調(diào)節(jié)酸堿度至pH7.0-7.5，放置4℃ 12小時，此后高速離心10000rpm，15分鐘，取上清，除去脂質(zhì)物質(zhì)，將上清經(jīng)0.45μ-0.22μ的消毒微孔濾膜過濾除菌，即得抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物。
本發(fā)明的技術方案還可以展開如下
一種特異性抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合IgY抗體提取物，其特征在于該IgY抗體提取物是由以下方法和步驟制取(1)細菌來源及培養(yǎng)細菌的來源和培養(yǎng)來自牙周病患者口腔牙周袋炎癥部位分離的牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌，以及標準的牙齦二氧化碳噬纖維菌(ATCC 33624)和中間普氏菌(ATCC25261)等菌株，經(jīng)BHI-S培養(yǎng)基分離培養(yǎng)和擴增培養(yǎng)的牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌，并經(jīng)鑒定確認為牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌；(2)免疫原制備取牙齦二氧化碳噬纖維菌菌體碎片30～60份，中間普氏菌菌體碎片40～70份混合成菌液；將等體積的菌液與等體積的福氏完全佐劑混合，使用高速攪拌器攪拌乳化，最終制成油包水福氏完全佐劑牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌混合免疫原。
將等體積的菌液與等體積的福氏不完全佐劑混合，使用高速攪拌器攪拌乳化，最終制成油包水福氏不完全佐劑牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌混合免疫原。
每毫升福氏完全佐劑混合免疫原和福氏不完全佐劑混合免疫原中均含有細菌20億-60億；(3)免疫使用注射器將福氏完全佐劑混合免疫原皮下和肌肉注射給產(chǎn)蛋母雞，每只產(chǎn)蛋母雞注射1.5ml-2.0ml免疫原，然后每隔一周使用福氏不完全佐劑混合免疫原1.5ml-2.0ml皮下和肌肉注射給產(chǎn)蛋母雞，加強免疫二次后；此后每隔八周再使用福氏不完全佐劑混合免疫原1ml皮下和肌肉注射給產(chǎn)蛋母雞加強免疫四次，前后共免疫七次。
(4)抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物的制備收集免疫第一次免疫后第30天的免疫母雞雞蛋，使用70％的酒精進行雞蛋表面消毒，打開蛋殼取蛋黃，去除蛋黃膜取蛋黃液，將蛋黃液與蒸餾水按體積比1∶7-9的比例加蒸餾水，充分攪拌，并使用1N HCl調(diào)節(jié)酸堿度至pH5.0-5.2，然后放置4℃ 12小時。
然后將蛋黃稀釋液高速離心10000rpm，30分鐘，取上清，將蛋黃稀釋液上清置于截留分子量為100KD的中空纖維超濾器中超濾濃縮5-10倍，然后加入0.02％-2.0％的氯己定充分攪拌，并使用1N NaOH調(diào)節(jié)酸堿度至pH7.0-7.5，放置4℃ 12小時，此后高速離心10000rpm，15分鐘，取上清，除去脂質(zhì)物質(zhì)，將上清經(jīng)0.45μ-0.22μ的消毒微孔濾膜過濾除菌，即得抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物；抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY純品的制備方法還包括如下步驟將除去脂質(zhì)物質(zhì)后的抗牙齦二氧化碳噬纖維菌、抗中間普氏菌混合IgY抗體提取物使用1N NaOH調(diào)節(jié)酸堿度至pH5.5-5.7，加硫酸胺至55％的飽和度，充分攪拌，室溫靜置4-12小時，然后高速離心10000rpm 10分鐘，取沉淀，將沉淀使用蒸餾水稀釋到原體積量，再加硫酸胺至33％的飽和度，充分攪拌，室溫靜置4-12小時，然后高速離心10000rpm 10分鐘，取沉淀，用蒸餾水溶解沉淀后裝入透析袋，用蒸餾水透析除鹽，即得抗牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌、混合IgY抗體純品；所述的免疫原制備中的牙齦二氧化碳噬纖維菌是指牙齦二氧化碳噬纖維菌的菌體及牙齦二氧化碳噬纖維菌的菌體碎片，所述的中間普氏菌是指中間普氏菌的菌體及中間普氏菌的菌體碎片；所述的免疫原制備中的細菌混合比例是牙齦二氧化碳噬纖維菌菌體碎片10～70份，中間普氏菌菌體碎片30～90份；細菌與菌體碎片的比例是細菌40～80份，菌體碎片20～60份；細菌數(shù)量是從每毫升5億至每毫升100億；所述的免疫中的產(chǎn)蛋母雞包括普通環(huán)境下飼養(yǎng)、清潔環(huán)境下飼養(yǎng)、以及SPF環(huán)境下飼養(yǎng)的各種不同雞種的產(chǎn)蛋母雞；所述的一種特異性抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY還包括如下步驟加入藥學上可接受的附加劑制成含有一種特異性抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY的噴霧劑、滴注劑、含片和牙膏。
按本發(fā)明的方法制取的抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物的純度，經(jīng)非還原性SDS-PAGE測定，IgY抗體的純度達到30％以上(≥30％)；而經(jīng)過發(fā)明的方法提取的抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY純化品的純度，經(jīng)非還原性SDS-PAGE測定，IgY抗體的純度達到82％以上(≥82％)；按本發(fā)明的方法制取的抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物的生物學效價，經(jīng)ELISA(酶聯(lián)免疫吸附實驗)方法測定，特異性抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY結合牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌混合抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY的效價大于或等于1∶4000，即效價≥1∶4000/mg蛋白，或者稱提取物里每毫克蛋白中特異性抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY的比活為≥1∶4000；而按本發(fā)明的方法提取的抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY純品的生物學效價，經(jīng)ELISA(酶聯(lián)免疫吸附實驗)方法測定，特異性抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY結合牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌混合抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY的效價大于或等于1∶16000，即效價≥1∶16000/mg蛋白，或者稱純品每毫克蛋白中特異性抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY的比活為≥1∶16000；按本發(fā)明的方法制取的抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY配制的口腔噴霧劑、滴注劑、含片、牙膏等局部施于口腔、牙齦、牙周袋等處，與靶細菌表面抗原結合抑制了細菌的生長，排斥了細菌在炎癥部位的存在，促進分葉核細胞和巨噬細胞等吞噬細胞對細菌的吞噬和清除。同時也無全身用藥的局限性和副作用，又有局部用藥起效快、用藥量少、療效好、不吸收、不破壞口腔、牙齦、牙周組織正常菌群的生態(tài)環(huán)境、不導致局部菌群失調(diào)等效果，還無毒副作用，更無抗菌素局部使用易產(chǎn)生耐藥性等問題。IgY抗體不激活補體系統(tǒng)，不與類風濕因子產(chǎn)生非特異性結合，不固定金黃色葡萄球菌A蛋白，不與蛋白G，以及人類細胞Fc受體結合，因而不易發(fā)生變態(tài)反應?？怪虚g普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物不產(chǎn)生急性毒性反應和慢性毒性反應，屬于實際無毒級；抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物三致試驗陰性，屬于無致畸、致癌、致突變的安全制品。
具體實施例方式下面結合實施例詳細描述本發(fā)明的實現(xiàn)方案。
實施例1抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY，其中取牙齦二氧化碳噬纖維菌菌體特異性IgY30～60份，中間普氏菌菌體特異性IgY40～70份混合而成。
抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY在制備預防和治療口臭和牙齦的制劑中的應用。
抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY的制備方法，其中A細菌種類牙齦二氧化碳噬纖維菌和中間普氏菌；細菌的來源和培養(yǎng)牙齦二氧化碳噬纖維菌和中間普氏菌，來自牙周病患者口腔牙周袋炎癥部位分離的牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌，以及標準的牙齦二氧化碳噬纖維菌ATCC 33624和中間普氏菌ATCC 25261菌株，經(jīng)BHI-S培養(yǎng)基分離培養(yǎng)和擴增培養(yǎng)的牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌，并經(jīng)鑒定確認為牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌；B免疫原制備取牙齦二氧化碳噬纖維菌菌體的碎片30～60份，中間普氏菌菌體的碎片40～70份混合成菌液；將等體積的菌液與等體積的福氏完全佐劑混合，使用高速攪拌器攪拌乳化，最終制成油包水福氏完全佐劑牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌混合免疫原。
或者將等體積的菌液與等體積的福氏不完全佐劑混合，使用高速攪拌器攪拌乳化，最終制成油包水福氏不完全佐劑牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌混合免疫原；每毫升福氏完全佐劑混合免疫原和福氏不完全佐劑混合免疫原中均含有細菌20億-60億；C免疫使用注射器將福氏完全佐劑混合免疫原皮下和肌肉注射給產(chǎn)蛋母雞，每只產(chǎn)蛋母雞注射1.5ml-2.0ml免疫原，然后每隔一周使用福氏不完全佐劑混合免疫原1.5ml-2.0ml皮下和肌肉注射給產(chǎn)蛋母雞，加強免疫二次后；此后每隔八周再使用福氏不完全佐劑混合免疫原1ml皮下和肌肉注射給產(chǎn)蛋母雞加強免疫四次，前后共免疫七次。
D抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物的制備收集免疫第一次免疫后第30天的免疫母雞雞蛋，使用70％的酒精進行雞蛋表面消毒，打開蛋殼取蛋黃，去除蛋黃膜取蛋黃液，將蛋黃液與蒸餾水按體積比1∶7-9的比例加蒸餾水，充分攪拌，并使用1N HCl調(diào)節(jié)酸堿度至pH5.0-5.2，然后放置4℃ 12小時。
然后將蛋黃稀釋液高速離心10000rpm，30分鐘，取上清，將蛋黃稀釋液上清置于截留分子量為100KD的中空纖維超濾器中超濾濃縮5-10倍，然后加入0.02％-2.0％的氯己定充分攪拌，并使用1N NaOH調(diào)節(jié)酸堿度至pH7.0-7.5，放置4℃ 12小時，此后高速離心10000rpm，15分鐘，取上清，除去脂質(zhì)物質(zhì)，將上清經(jīng)0.45μ-0.22μ的消毒微孔濾膜過濾除菌，即得抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物。
實施例2單獨取牙齦二氧化碳噬纖維菌菌體的碎片作為菌液；單獨制備抗牙齦二氧化碳噬纖維菌特異性IgY提取物。其余制備參照實施例1。
實施例3單獨取中間普氏菌菌體的碎片作為菌液；單獨制備抗中間普氏菌特異性IgY提取物。其余制備參照實施例1。
實施例4取實施例2、3所得的抗中間普氏菌特異性IgY提取物，抗牙齦二氧化碳噬纖維菌特異性IgY提取物。按抗牙齦二氧化碳噬纖維菌菌體特異性IgY30份，抗中間普氏菌菌體特異性IgY70份混合而成。
其余制備參照實施例1。
實施例5取實施例2、3所得的抗中間普氏菌特異性IgY提取物，抗牙齦二氧化碳噬纖維菌特異性IgY提取物。按抗牙齦二氧化碳噬纖維菌菌體特異性IgY40份，抗中間普氏菌菌體特異性IgY60份混合而成。
實施例6取實施例2、3所得的抗中間普氏菌特異性IgY提取物，抗牙齦二氧化碳噬纖維菌特異性IgY提取物。按抗牙齦二氧化碳噬纖維菌菌體特異性IgY35份，抗中間普氏菌菌體特異性IgY65份混合而成。
實施例7制備500克抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物生產(chǎn)工藝流程
(1)細菌培養(yǎng)標準的牙齦二氧化碳噬纖維菌(ATCC 33624)和中間普氏菌(ATCC 25261)等菌株經(jīng)BHI-S培養(yǎng)基分離培養(yǎng)和擴增培養(yǎng)的牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌，并經(jīng)鑒定確認為牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌，并收集細菌；(2)免疫原制備將上述菌體經(jīng)石炭酸滅活處理。另外，用超聲波粉碎機將細菌菌體超聲粉碎30分鐘，使細菌菌體粉碎裂解成細小的和/或分子的碎片。
牙齦二氧化碳噬纖維菌菌體、中間普氏菌菌體、以及牙齦二氧化碳噬纖維菌體碎片、中間普氏菌菌體碎片50∶50數(shù)量份混合，其中細菌菌體與菌體碎片的比例為細菌菌體60份，菌體碎片40份。
將400ml的菌液與400ml的福氏完全佐劑混合，使用高速攪拌器攪拌乳化，制成油包水福氏完全佐劑免疫原。福氏不完全佐劑免疫原的制備將400ml的菌液與400ml的福氏不完全佐劑混合，使用高速攪拌器攪拌乳化，制成油包水福氏不完全佐劑免疫原。每毫升免疫原中含有細菌25億；(3)免疫產(chǎn)蛋母雞使用注射器將福氏完全佐劑混合免疫原皮下和肌肉注射給28周的產(chǎn)蛋母雞，每只注射2.0ml免疫原，然后隔一周使用福氏不完全佐劑免疫原2.0ml皮下和肌肉注射給產(chǎn)蛋母雞，加強免疫二次后，此后每隔八周再使用福氏不完全佐劑免疫原1ml皮下和肌肉注射給產(chǎn)蛋母雞加強免疫共四次，前后共免疫七次，免疫母雞總數(shù)為300只；(4)抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物的制備收集免疫第一次免疫后第50～70天的免疫母雞雞蛋，使用70％的酒精進行雞蛋表面消毒，打開蛋殼取蛋黃，去除蛋黃膜取蛋黃液，將蛋黃液與蒸餾水按體積比1∶9的比例加蒸餾水，充分攪拌，并使用1N HCl調(diào)節(jié)酸堿度至pH5.0，然后放置4℃ 12小時；然后將蛋黃稀釋液高速離心10000rpm，30分鐘，取上清，將上清置于截留分子量100KD的中空纖維超濾器中超濾濃縮10倍，然后加入1.0％的氯已定充分攪拌，并使用1N NaOH調(diào)節(jié)酸堿度至pH7.0，并放置4℃ 12小時。此后高速離心10000rpm，15分鐘，取上清，除去脂質(zhì)物質(zhì)，將上清經(jīng)0.45μ-0.22μ的消毒微孔濾膜過濾除菌，即得抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物?？怪虚g普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物經(jīng)ELISA(酶聯(lián)免疫吸附實驗)方法測定，提取物中每毫克蛋白中的特異性IgY抗體的效價為1∶4000/mg蛋白，或者稱提取物中每毫克蛋白中的特異性IgY抗體的比活為1∶4000。在IgY抗體提取物中，IgY抗體的純度經(jīng)非還原性SDS-PAGE測定為33.5％。
實施例8制備500克抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY純品生產(chǎn)工藝流程
(1)細菌培養(yǎng)標準的牙齦二氧化碳噬纖維菌(ATCC 33624)和中間普氏菌(ATCC 25261)等菌株經(jīng)BHI-S培養(yǎng)基分離培養(yǎng)和擴增培養(yǎng)的牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌，并經(jīng)鑒定確認為牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌，并收集細菌；(2)免疫原制備將上述菌體經(jīng)石炭酸滅活處理。另外，用超聲波粉碎機將細菌菌體超聲粉碎30分鐘，使細菌菌體粉碎裂解成細小的和/或分子的碎片。
牙齦二氧化碳噬纖維菌菌體、中間普氏菌菌體、以及牙齦二氧化碳噬纖維菌體碎片、中間普氏菌菌體碎片60∶40數(shù)量份混合，其中細菌菌體與菌體碎片的比例為細菌菌體50份，菌體碎片50份。
將300ml的菌液與300ml的福氏完全佐劑混合，使用高速攪拌器攪拌乳化，制成油包水福氏完全佐劑免疫原。福氏不完全佐劑免疫原的制備將300ml的菌液與300ml的福氏不完全佐劑混合，使用高速攪拌器攪拌乳化，制成油包水福氏不完全佐劑免疫原。每毫升免疫原中含有細菌50億；(3)免疫產(chǎn)蛋母雞使用注射器將福氏完全佐劑混合免疫原皮下和肌肉注射給26周的產(chǎn)蛋母雞，每只注射1.5ml免疫原，然后隔一周使用福氏不完全佐劑免疫原1.5ml皮下和肌肉注射給產(chǎn)蛋母雞，加強免疫二次后，此后每隔八周再使用福氏不完全佐劑免疫原1ml皮下和肌肉注射給產(chǎn)蛋母雞加強免疫共四次，前后共免疫七次，免疫母雞總數(shù)為300只；(4)抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY純品的制備收集免疫第一次免疫后第60～80天的免疫母雞雞蛋，使用70％的酒精進行雞蛋表面消毒，打開蛋殼取蛋黃，去除蛋黃膜取蛋黃液，將蛋黃液與蒸餾水按體積比1∶9的比例加蒸餾水，充分攪拌，并使用1N HCl調(diào)節(jié)酸堿度至pH5.05，然后放置4℃ 12小時。
然后將蛋黃稀釋液高速離心10000rpm，30分鐘，取上清，將上清置于截留分子量100KD的中空纖維超濾器中超濾濃縮10倍，然后加入2.0％的氯己定充分攪拌，并使用1N NaOH調(diào)節(jié)酸堿度至pH7.03，并放置4℃ 12小時。此后高速離心10000rpm，15分鐘，取上清，除去脂質(zhì)物質(zhì)，即得抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物。
將除去脂質(zhì)物質(zhì)后的抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物加硫酸胺至55％的飽和度，充分攪拌，室溫靜置4小時，然后高速離心10000rpm 10分鐘，取沉淀，將沉淀使用蒸餾水稀釋到原體積量，再加硫酸胺至33％的飽和度，充分攪拌，室溫靜置4小時，然后高速離心10000rpm 10分鐘，取沉淀，用蒸餾水稀釋溶解后裝入透析袋，用蒸餾水透析除鹽，即得抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY純品?？怪虚g普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY純品經(jīng)ELISA方法測定，抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY純品中每毫克蛋白中的特異性IgY抗體的效價為1∶16000/mg蛋白，或者稱抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY純品中，每毫克蛋白中的特異性IgY抗體的比活性為1∶16000。在IgY抗體純品中，IgY抗體的純度經(jīng)非還原性SDS-PAGE測定為93.6％。
實施例9抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY的口腔噴霧劑抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物 0.20％甘露醇 5.0％氯已定 0.001％蒸餾水 補充至100％共100ml。
將60m1蒸餾水加入燒杯中，再依次加入上述成分，最后將蒸餾水補充至100ml，經(jīng)0.22μ的消毒微孔濾膜過濾除菌，無菌灌裝入消毒的噴霧劑的罐中。
其余分別重復實施例5、6、7。
實施例10抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY的滴注劑抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物 0.30％甘露醇 5.0％氯已定 0.002％蒸餾水 補充至100％共100ml。
將60ml蒸餾水加入燒杯中，再依次加入上述成分，最后將蒸餾水補充至100ml，經(jīng)0.22μ的消毒微孔濾膜過濾除菌，無菌灌裝入消毒的滴鼻劑的瓶中。
其余分別重復實施例4、5、6。
實施例11抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY的含片抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物 1.0％羧甲基纖維素 0.15％硬脂酸鎂 0.10％山梨醇 補充至100％共100g。
將上述含片藥物低溫制粒，然后壓成不同形狀的口含片，每片0.5g。
其余分別重復實施例4、5、6。
實施例12
抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY純品的噴霧劑及滴注劑抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY純品 0.1％甘露醇 5.0％氯己定 0.002％蒸餾水 補充至100％共100ml。
將60ml蒸餾水加入燒杯中，再依次加入上述成分，最后將蒸餾水補充至100ml，經(jīng)0.22μ的消毒微孔濾膜過濾除菌，無菌灌裝入消毒的噴霧劑和滴注劑的罐中。
其余分別重復實施例4、5、6。
實施例13抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY純品的含片抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY純品 0.15％羧甲基纖維素 0.15％硬脂酸鎂 0.10％山梨醇 補充至100％共100g。
將上述含片藥物低溫制粒，然后壓成不同形狀的口含片，每片0.5g。
其余分別重復實施例4、5、6。
實驗例1牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌等兩種細菌組合的免疫原按本發(fā)明的方法免疫產(chǎn)蛋母雞，取第一次免疫后30-40天的免疫母雞的雞蛋，并按本發(fā)明的方法制備出抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY的提取物，應用ELISA方法測定抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY結合不同抗原的生物學效價(見表1)表1 牙齦二氧化碳噬纖維菌、抗中間普氏菌混合IgY抗體提取物的效價

根據(jù)上述實驗結果可以清楚地看到(1).牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌兩種菌菌體+菌體碎片免疫原免疫產(chǎn)蛋母雞，可以產(chǎn)生分別抗兩種細菌的特異性IgY抗體；(2).產(chǎn)生的對各種細菌的特異性IgY抗體的效價并不隨免疫產(chǎn)蛋母雞時每種細菌使用的劑量而變化，即并不是免疫劑量大的細菌產(chǎn)生的IgY抗體的效價也高，這是與抗原的免疫原性相關；(3).牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌混合IgY抗體與牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌的混合抗原都能起反應，其效價有疊加作用；(4).由上述實驗可見，一種抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY可以治療由上述細菌引起的口臭、口腔異味、以及牙齦炎等；(5).同時也可以用一種抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY治療由上述細菌中的任何一種細菌引起的口臭、口腔異味、以及牙齦炎等；(6).由此還可以擴大到由與上述細菌有共同抗原決定簇的細菌引起的口臭、口腔異味、以及牙齦炎等，都可以使用本發(fā)明的抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY治療。
實驗例2牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌混合免疫原按本發(fā)明的方法免疫產(chǎn)蛋母雞，取第一次免疫后80-100天的免疫母雞的雞蛋，并按本發(fā)明的方法制備出抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY的純品，應用ELISA方法測定抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY結合不同抗原的生物學效價(見表2)表2 抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY純品的效價

根據(jù)上述實驗結果可以清楚地看到(1).按本發(fā)明的方法制備出抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY的純品要比實驗例1中的按本發(fā)明的方法制備出抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY的提取物的特異性結合牙齦二氧化碳噬纖維菌和中間普氏菌混合抗原，以及牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌等細菌各自抗原的生物學效價都要高，基本是按比例增加；(2).牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌混合免疫原免疫產(chǎn)蛋母雞，可以產(chǎn)生分別抗兩種細菌的特異性IgY抗體；(3).產(chǎn)生的對各種細菌的特異性IgY抗體的效價并不隨免疫產(chǎn)蛋母雞時每種細菌使用的劑量而變化，即并不是免疫劑量大的細菌產(chǎn)生IgY抗體的效價也高，這是與抗原的免疫原性相關；(4).抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY與牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌等兩種菌的混合抗原都能起反應，而且總的特異性IgY抗體的效價也增加了，其效價有疊加作用；(5).由上述實驗可見，一種抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY可以治療由上述細菌引起的口臭、口腔異味、以及牙齦炎等；(6).同時也可以用一種抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY治療由上述細菌中的任何一種細菌引起的口臭、口腔異味、以及牙齦炎等；(7).由此還可以擴大到由與上述細菌有共同抗原決定簇的細菌引起的口臭、口腔異味、以及牙齦炎等，都可以使用本發(fā)明的抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY預防和治療。
實驗例3按本發(fā)明的方法制備出的牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌的菌體及牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌的菌體+菌體碎片等兩種免疫原免疫產(chǎn)蛋母雞，并分別制備出抗牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌菌體混合IgY抗體提取物和抗牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌菌體+菌體碎片混合IgY抗體提取物，應用ELISA方法測定它們抗牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌混合抗原的結合生物學效價，結果見表4表4 不同免疫原誘導的母雞特異性混合IgY抗體結合不同抗原的生物學效價

根據(jù)上述實驗結果可以清楚地看到在相同的免疫條件下，按本發(fā)明的方法制備出牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌菌體和抗牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌菌體+菌體碎片等兩種不同免疫原免疫產(chǎn)蛋雞，并制備出第一次免疫后80-100天免疫母雞的雞蛋的抗牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌菌體混合IgY抗體提取物和抗牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌菌體+菌體碎片混合IgY抗體提取物等兩種IgY抗體。這兩種IgY抗體分別與牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌混合抗原反應，結果這兩種IgY抗體生物學結合效價有一定的差異，其中抗牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌菌體+菌體碎片混合IgY抗體的生物學結合效價更高。這些結果說明牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌菌體+菌體碎片免疫原的免疫效果比單純牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌菌體免疫原的免疫效果要更好。
實驗例4生物學效價為1∶32000/mg，蛋白純度為93.1％的特異性抗中間普氏菌(P.i，ATCC 25261)IgY抗體分別與牙齦二氧化碳噬纖維菌(Cg，ATCC 33624)、伴放線放線桿菌(Aa，ATCC 29523)、具核梭桿菌(Fn，ATCC 10953)、牙齦卟啉菌(Pg，ATCC 33277)發(fā)生免疫交叉反應，結果見表10表10 抗中間普氏菌IgY抗體與其它口腔厭氧菌交叉反應生物學效價


根據(jù)上述實驗結果可以清楚地看到按本發(fā)明的方法免疫產(chǎn)蛋母雞后，并按本發(fā)明的方法制備出第一次免疫后30-40天免疫母雞的雞蛋的抗中間普氏菌IgY抗體的純品，其能夠與牙齦二氧化碳噬纖維菌，以及其它口腔厭氧菌發(fā)生免疫交叉反應。這明確地證明這些口腔厭氧菌之間有著共同的抗原決定簇，相同的抗原決定簇越多，交叉反應就越強。因此，抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY制劑可以預防和治療由上述具有共同抗原決定簇的細菌引起的口臭、口腔異味、以及牙齦炎等。
實驗例5抗口臭的臨床試驗一、一般原則1.首次進行的抗口臭產(chǎn)品的功效驗證或含有新型活性成分的抗口臭產(chǎn)品的功效驗證應被一個以上的獨立臨床試驗證實。
2.產(chǎn)品含有已通過臨床驗證的抗口臭的成分時，可通過證明此產(chǎn)品與臨床已驗證的產(chǎn)品的等效性來證實它的有效性。試驗組和對照組(陽性對照)的產(chǎn)品應含有相同濃度的同一活性成分。另外，對照組也應包括空白對照或安慰劑。如果產(chǎn)品為一種機械清除的工具，對照組應為自然狀態(tài)的日常刷牙清潔。
3.含有可能影響抗口臭活性的賦形劑(非活性成分)時，產(chǎn)品的功效應通過臨床試驗驗證。
4.申請者需要提供材料證明配方中活性成分的生物活性和穩(wěn)定性。
二、研究設計一般應采用盲法、分層、二單位平行試驗或交叉試驗方法。
三、試驗期限應按受檢產(chǎn)品的功效強度來確定。可為數(shù)小時至數(shù)周。
四、研究對象受試者為符合納入及排除標準的患有口源性口臭的男性和女性。
一般每組完成試驗全過程的人群數(shù)量應大于等于12人。
五、檢查指標或采用指數(shù)可同時采用以下兩種評價方法1.感官評價(即嗅覺評分)由訓練有素的評估人員利用有效記分指標評價受試者的口氣。試驗前對評估者進行校正實驗。
檢查者與受檢者距離約為10厘米，兩者之間放置一屏蔽隔板。受檢者用口向外呼氣，檢查者通過主觀感受，分別評分，可采用0-5的等級，評分標準如下0察覺不到氣味；1勉強可以察覺到氣味，若有若無；2輕微但可明確察覺；3中等臭味；4重度臭味；5極強的不能忍受的惡臭。取檢查者評分的均值作為結果。
2.儀器測量采用評估主要致臭因素的有效分析儀器測量(如口氣測量儀Halimeter)口氣測量儀利用電化學的原理，將口腔氣體中揮發(fā)性硫化物的濃度以數(shù)值的形式表現(xiàn)出來，可作為衡量患者口氣水平的指標。使用前先用環(huán)境空氣調(diào)零，囑受試者閉口三分鐘后測量，測量時受試者用鼻呼吸，口微張，將集氣管口放在舌背中后三分之一交界處上方0.5cm處，讀取顯示屏上的數(shù)值。每次檢查重復三次，結果取平均值。
六、效果評價按醫(yī)學統(tǒng)計方法，對試驗組和對照組分別統(tǒng)計試驗前、后口氣值均數(shù)的變化和儀器讀數(shù)均值變化情況；并比較兩組之間各時間段、各指標的變化。
表11 抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY抑制口臭的實驗效果使用方法取(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)的溶液1毫升，噴霧于口臭級別為四級(重度臭味)病人的口腔中，含漱三分鐘，每天三次，療程一個月后，評價治療效果。
病人人數(shù)72人，隨機分為六組，每組12人。

(1)組取牙齦二氧化碳噬纖維菌菌體特異性IgY35份，中間普氏菌菌體特異性IgY65份混合，加十萬份蒸餾水而成。
(2)組取牙齦二氧化碳噬纖維菌菌體特異性IgY100份，加十萬份蒸餾水而成。
(3)組取中間普氏菌菌體特異性IgY100份，加十萬份蒸餾水而成。
(4)組取Treponemas denticola棲牙密螺旋體特異性IgY100份，加十萬份蒸餾水而成。
(5)組取Mutans streptococci變形鏈球菌群特異性IgY100份，加十萬份蒸餾水而成。
(6)組蒸餾水。
權利要求
1.抗中間普氏菌特異性IgY在制備預防和治療口臭和牙齦的制劑中的應用。
2.抗牙齦二氧化碳噬纖維菌特異性IgY在制備預防和治療口臭和牙齦的制劑中的應用。
3.抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY，其特征在于取抗牙齦二氧化碳噬纖維菌菌體特異性IgY30～60份，抗中間普氏菌菌體特異性IgY40～70份混合而成。
4.權利要求1所述的抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY在制備預防和治療口臭和牙齦的制劑中的應用。
5.根據(jù)權利要求4所述的抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY的制備方法，其特征在于A細菌種類牙齦二氧化碳噬纖維菌和中間普氏菌；B免疫原制備取牙齦二氧化碳噬纖維菌菌體的碎片30～60份，中間普氏菌菌體的碎片40～70份混合成菌液；將等體積的菌液與等體積的福氏完全佐劑混合，使用高速攪拌器攪拌乳化，最終制成油包水福氏完全佐劑牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌混合免疫原?；蛘邔⒌润w積的菌液與等體積的福氏不完全佐劑混合，使用高速攪拌器攪拌乳化，最終制成油包水福氏不完全佐劑牙齦二氧化碳噬纖維菌、中間普氏菌混合免疫原；C免疫使用注射器將福氏完全佐劑混合免疫原皮下和肌肉注射給產(chǎn)蛋母雞，每只產(chǎn)蛋母雞注射1.5ml-2.0ml免疫原，然后每隔一周使用福氏不完全佐劑混合免疫原1.5ml-2.0ml皮下和肌肉注射給產(chǎn)蛋母雞，加強免疫二次后；此后每隔八周再使用福氏不完全佐劑混合免疫原1ml皮下和肌肉注射給產(chǎn)蛋母雞加強免疫四次，前后共免疫七次。D抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物的制備收集免疫第一次免疫后第30天的免疫母雞雞蛋，使用70％的酒精進行雞蛋表面消毒，打開蛋殼取蛋黃，去除蛋黃膜取蛋黃液，將蛋黃液與蒸餾水按體積比1∶7-9的比例加蒸餾水，充分攪拌，并使用1N HCl調(diào)節(jié)酸堿度至pH5.0-5.2，然后放置4℃ 12小時。然后將蛋黃稀釋液高速離心10000rpm，30分鐘，取上清，將蛋黃稀釋液上清置于截留分子量為100KD的中空纖維超濾器中超濾濃縮5-10倍，然后加入0.02％-2.0％的氯己定充分攪拌，并使用1N NaOH調(diào)節(jié)酸堿度至pH7.0-7.5，放置4℃ 12小時，此后高速離心10000rpm，15分鐘，取上清，除去脂質(zhì)物質(zhì)，將上清經(jīng)0.45μ-0.22μ的消毒微孔濾膜過濾除菌，即得抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合特異性IgY提取物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗中間普氏菌和牙齦二氧化碳噬纖維菌混合IgY及其在治療口臭和牙齦中的應用，抗體制備方法以及抗體制劑的配制和使用范圍。本發(fā)明是使用兩種細菌的菌體和菌體碎片，制備成免疫原免疫母雞，并應用本發(fā)明的方法從雞蛋黃中提取、除脂和純化IgY抗體，其得率高。使用本發(fā)明的IgY抗體配制的制品，如噴霧劑、滴注劑、含片、牙膏等，可以用于預防和治療口臭、口腔異味、以及多種牙齦病。使用本發(fā)明的IgY抗體配制的制品效果長久，長期使用安全、無不良反應。
文檔編號C07K16/12GK101028515SQ20061012549
公開日2007年9月5日 申請日期2006年12月15日 優(yōu)先權日2006年12月15日
發(fā)明者唐寧, 胡國柱, 張進, 聶榮慶, 李昕昕, 李躍洪 申請人:胡國柱, 唐寧, 李躍洪