專利名稱：用于合成2－[的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及糖衍生物的氟化方法，具體來說，本發(fā)明涉及氟化葡萄糖的生產(chǎn)。該方法尤其可用于制造放射性同位素氟化的糖衍生物，以用于諸如正電子發(fā)射斷層攝影(PET)的過程。
背景技術(shù)：
在用于PET的[18F]-標(biāo)記示蹤劑化合物的制造方法中，最重要的因素之一是總的合成非校正收率。這不僅受該方法總化學(xué)收率的控制，還受到合成時(shí)間的控制，由于[18F]的半衰期相對(duì)較短，為109.7分鐘，合成時(shí)間是十分重要的。
典型地，通過[18O]-水靶底的回旋加速輻射得到水溶液形式的[18F]-氟離子。普遍的作法是進(jìn)行多個(gè)步驟，以便將[18F]-氟化物轉(zhuǎn)化成反應(yīng)性親核試劑，使其適合用于親核放射性同位素標(biāo)記反應(yīng)。如非放射性活性氟化一樣，這些步驟包括從[18F]-氟化物離子中消除水以及提供合適的抗衡離子(Handbook of Radiopharmaceuticals 2003Welch & Redvanly eds.Ch.6pp 195-227)。然后使用無水溶劑進(jìn)行親核放射性同位素氟化反應(yīng)(Aigbirhio等人，1995 J.Fluor.Chem.70pp 279-87)。從氟化物離子中除去水稱之為產(chǎn)生“裸”氟化物離子。據(jù)信大量水的存在導(dǎo)致氟化物離子發(fā)生溶劑化，這屏蔽著氟化物不受保護(hù)糖前體上的親核進(jìn)攻。因此，本領(lǐng)域中將除水視作增加氟化物反應(yīng)性及避免存在水造成羥基化副產(chǎn)物的必要步驟(Moughamir等人，1998 Tett.Letts.39pp 7305-6)。
US 6,17 2,207涉及一種合成[18F]-標(biāo)記化合物如[18F]-氟脫氧葡萄糖([18F]-FDG)的方法，該專利教導(dǎo)氟化試劑必須通過向水溶液中加入乙腈，然后通過共沸蒸發(fā)至干，制成完全無水。
合成[18F]-FDG最常用的方法是Hamacher等人，J.Nucl.Med.27235-238(1986)中的方法，其中1，3，4，6-四-O-乙?；?2-O-三氟甲磺?；?β-D-吡喃甘露糖與[18F]氟化物的反應(yīng)在無水溶劑中進(jìn)行。
目前用于制造[18F]-標(biāo)記糖衍生物的方法造成了某些問題；其中之一是除去所有來自氟化物離子的殘余水合溶劑十分耗時(shí)，因此影響著總的非校正合成收率。另外，如果必須除去所有殘余水，則在任何自動(dòng)合成儀上合成上和機(jī)械上的復(fù)雜性均會(huì)增加。例如，合成可能需要更多的干燥循環(huán)，而合成儀上可能需要更有效的加熱器來進(jìn)行合成。
而且，很難保證放射性同位素氟化反應(yīng)始終是可重復(fù)的。這是因?yàn)槿軇┲谐Ｓ猩倭康臍堄嗨?例如高達(dá)1000ppm)，而總的非校正合成收率根據(jù)標(biāo)記反應(yīng)過程中存在殘余水的量大幅變化。結(jié)果已經(jīng)證明，可以保持水含量在1500ppm+/-200ppm，偏差為15％。在750ppm下這種水絕對(duì)偏差將會(huì)使百分比偏差加倍。
本發(fā)明已經(jīng)作出出乎意料的發(fā)現(xiàn)，即并不必要在無水條件下進(jìn)行糖衍生物的氟化。事實(shí)上，如果反應(yīng)混合物中水的量得到認(rèn)真控制，則該過程的放射性同位素化學(xué)純度(因而和總收率)實(shí)際上得以提高。
這相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)中強(qiáng)調(diào)必須在無水條件下進(jìn)行反應(yīng)是尤其出人意料的。
因此，在本發(fā)明的第一個(gè)方面提供一種制備氟化糖衍生物的方法，該方法包括使非氟化糖衍生物與氟化物反應(yīng)，其特征在于所述反應(yīng)在含有其量大于1000ppm且小于50,000ppm的水的溶劑中進(jìn)行。
本發(fā)明的方法相比現(xiàn)有技術(shù)方法具有很大的優(yōu)勢(shì)。首先，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在存在這些可控量的水的情況下反應(yīng)的收率并無降低，而是實(shí)際上得以升高。
第二，由于反應(yīng)混合物含有其量大于1000ppm的水，更容易保證反應(yīng)混合物中所存在水的量一致(例如通過有意地用水使標(biāo)記溶劑不純)，這意味著反應(yīng)條件始終可重復(fù)。
第三，可以消除現(xiàn)有技術(shù)方法中所用的一些干燥步驟，這將會(huì)從試劑成本和合成儀的制造成本這兩個(gè)方面降低該方法的總成本。預(yù)計(jì)更為簡(jiǎn)單的方法將會(huì)對(duì)方法的總體可靠性產(chǎn)生積極影響。
在本說明書中，術(shù)語“非氟化糖衍生物”是指其中的OH基團(tuán)中的一個(gè)被離去基團(tuán)取代的多糖、寡糖、二糖或單糖，其任選地與固體載體結(jié)合，例如WO-A-03/002157中所教導(dǎo)。本發(fā)明的方法特別適合對(duì)單糖如葡萄糖、果糖、核糖、阿拉伯糖、甘露糖或半乳糖進(jìn)行氟化。
在“保護(hù)的非氟化糖衍生物”中，糖的其它OH基團(tuán)由適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基保護(hù)。
術(shù)語“氟化糖衍生物”是指其中的OH基團(tuán)中的一個(gè)被氟取代的多糖、寡糖、二糖或單糖，例如葡萄糖、果糖、核糖、阿拉伯糖、甘露糖或半乳糖。
在“保護(hù)的氟化糖衍生物”中，糖的其它OH基團(tuán)由適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基保護(hù)。
本發(fā)明所用的保護(hù)糖衍生物用的適當(dāng)保護(hù)基是本領(lǐng)域公知的，例如，John Wiley & Sons Inc.出版、Theodora W.Greene和Peter G.M.Wuts的“Protecting Groups in Organic Synthesis”中對(duì)此進(jìn)行了描述。所選的具體保護(hù)基將取決于氟化產(chǎn)物的預(yù)定用途，但是，例如，羥基可以通過轉(zhuǎn)化成烷基酯或芳香酯加以保護(hù)，例如，通過與烷酰氯如乙酰氯反應(yīng)進(jìn)行?；蛘撸榛梢赞D(zhuǎn)化成醚，如烷基醚或芐基醚。
優(yōu)選地，起始原料和反應(yīng)產(chǎn)物均為保護(hù)的糖衍生物。
適當(dāng)?shù)碾x去基團(tuán)是本領(lǐng)域公知的，包括甲苯磺酸酯和甲磺酸酯。但是，特別優(yōu)選離去基團(tuán)為三氟甲磺酸酯(triflate)基團(tuán)。
氟化反應(yīng)通常是親核取代反應(yīng)，離去基團(tuán)被氟取代可以使糖的立體化學(xué)通過SN2機(jī)理轉(zhuǎn)變。因此，起始的非氟化糖衍生物將常常是不同于產(chǎn)物的糖的衍生物。
優(yōu)選的產(chǎn)物是保護(hù)的氟化葡萄糖衍生物，其可以由相應(yīng)的甘露糖衍生物如四乙酰基甘露糖衍生物制備。
該反應(yīng)特別適合由1，3，4，6-四-O-乙?；?2-三氟甲磺?；?β-D-吡喃甘露糖(四乙?；事短侨谆撬狨?制備2-氟-1，3，4，6-四-O-乙?；?D-葡萄糖(四乙酰基氟葡萄糖或pFDG)。
適當(dāng)?shù)娜軇┌ǚ琴|(zhì)子有機(jī)溶劑，如乙腈、二甲基甲酰胺、二甲亞砜、四氫呋喃、二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷、環(huán)丁砜或N-甲基吡咯烷酮、或其任意混合物。但是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)乙腈尤其適合用作反應(yīng)溶劑。
盡管在溶劑中含有至少1000ppm且小于50,000ppm的水得到的反應(yīng)收率有所提高，當(dāng)含水量為約1000至15,000ppm時(shí)已實(shí)現(xiàn)更好的改善。使用含水量為約2000至7000ppm、合適地為2500至5000ppm的溶劑實(shí)現(xiàn)的結(jié)果最好。在一個(gè)實(shí)施方式中，優(yōu)選的含水量為3000ppm至6000ppm。
如本文所用，術(shù)語“ppm”在描述指定溶劑含水量時(shí)是指μg水/克。
通過對(duì)溶劑進(jìn)行干燥直至達(dá)到所需含水量，或者向干燥溶劑中加入適量水，可以實(shí)現(xiàn)溶劑中的精確含水水平。氟化物可以在水溶液中生成，在這種情況下，通過反復(fù)加入溶劑然后蒸發(fā)溶劑/水混合物，或者用所需的有機(jī)溶劑稀釋水相氯化物，可以得到具有所需含水量的氟化物溶液。通過使用清除劑樹脂，例如官能化聚苯乙烯樹脂，如環(huán)氧樹脂、異氰酸甲酯或酸酐官能化樹脂，以從氟化物溶液中除水，還可以減少溶劑的含水量。適合的樹脂是市售的，例如獲自Novabiochem。通過使用合適的催化劑如4-二甲基氨基吡啶(4-DMAP)，可以提高清除劑樹脂的性能。
在該實(shí)施方式中，可以通過將清除劑樹脂與氟化物溶液在容器中混合，然后通過過濾分離出清除劑樹脂，從而進(jìn)行干燥步驟。另外可選地，尤其適合地，在自動(dòng)合成儀中使用清除劑樹脂時(shí)，可以將清除劑樹脂包含在容器中，使溶液通過該容器經(jīng)過。可以使氟化物溶液以連續(xù)流動(dòng)的方式通過清除劑樹脂，例如，流速為0.1ml/min至100ml/min，或者以批次形式通過清除劑樹脂，使得清除劑樹脂上有充分的保留時(shí)間以使干燥進(jìn)行。
這種清除劑樹脂的應(yīng)用是新穎的，因此，根據(jù)本發(fā)明的進(jìn)一個(gè)方面，提供了降低放射性同位素氟化物、特別是[18F]氟化物溶液含水量的方法，該方法包括使所述溶液與清除劑樹脂接觸。合適地，該溶液包括在非質(zhì)子有機(jī)溶劑如乙腈、二甲基甲酰胺、二甲亞砜、四氫呋喃、二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷、環(huán)丁砜和N-甲基吡咯烷酮中的氟化物，更合適地，所述溶劑為乙腈。
反應(yīng)可以在溶液相中進(jìn)行，或者另外可選地，可以將非氟化糖衍生物結(jié)合在固體載體上，以形成式(I)的樹脂-連接子-媒介物(RLV)固體載體-連接子-X-保護(hù)的非氟化糖衍生物(I)其中固體載體是任意載體；保護(hù)的非氟化糖衍生物如上文所定義；X是促進(jìn)保護(hù)非氟化糖衍生物上特定位點(diǎn)處親核取代的基團(tuán)，如-SO2O-；連接子是起作用將反應(yīng)位點(diǎn)與固體載體結(jié)構(gòu)充分隔開以使反應(yīng)性最佳的適當(dāng)有機(jī)基團(tuán)；例如，0至4各芳基基團(tuán)(如苯基)和/或C1-C6烷基或鹵代烷基(特別是氟代烷基)鏈，和任選1至4個(gè)其它官能團(tuán)如?；蚧酋０坊鶊F(tuán)。
WO-A-03/002157中詳細(xì)討論了RLV系統(tǒng)，并給出了適當(dāng)連接子的細(xì)節(jié)。
使式(I)的RLV與氟化物溶液接觸，致使糖從固體載體上置換，產(chǎn)生保護(hù)的氟化糖衍生物。
WO-A-03/002157中還討論了適當(dāng)?shù)墓腆w載體，包括聚合物，例如聚苯乙烯(其可以是嵌段接枝的，例如用聚乙二醇嵌段接枝)、聚丙烯酰胺或聚丙烯，或者涂覆有這種聚合物的玻璃或硅。另外可選地，樹脂可以根據(jù)如WO-A-03/002157中所詳述的使用。固體載體的形式可以是小的離散顆粒，例如小珠或針(pin)，或者是夾筒(cartridge)內(nèi)表面上或微裝配容器上的涂層。在固體載體上進(jìn)行本發(fā)明的方式使得能夠在無需任何額外分離步驟的情況下得到純的產(chǎn)物。這一點(diǎn)在氟化為放射性同位素氟化時(shí)是尤其有利的，因?yàn)樵撨^程中節(jié)約的任何時(shí)間均會(huì)使得非校正放射性同位素化學(xué)收率更高。
反應(yīng)通常在5℃至180℃的溫度下進(jìn)行，特別是在75℃至125℃。
本發(fā)明的方法可以作為自動(dòng)合成的一部分進(jìn)行。這種情況(取決于)反應(yīng)是否在溶液中發(fā)生，或者非氟化糖是否結(jié)合在固相上。
與非氟化糖衍生物反應(yīng)的氟化物可以是離子化合物，可以與任何適當(dāng)?shù)目购怆x子一起提供。但是，抗衡離子應(yīng)當(dāng)充分溶于反應(yīng)溶劑中對(duì)于保持氟化物的溶解性來說十分重要。因此，適當(dāng)?shù)目购怆x子包括大但是軟的金屬離子，例如銣或銫，或者另外可選地，非金屬離子，例如四烷基銨和四烷基鏻。鉀離子也可以用作抗衡離子，在這種情況下，為了提高氟化物的反應(yīng)性，可以加入相轉(zhuǎn)移催化劑，例如4，7，13，16，21，2 4-六氧代-1，10-二氮雜雙環(huán)-[8，8，8]-二十六烷(以商標(biāo)KryptofixTM2.2.2市售)，以使鉀鹽溶解在有機(jī)溶劑中。
本發(fā)明的方法還適用于制造放射性同位素氟化衍生物，特別是[18F]-標(biāo)記的衍生物，因此，氟化物可以包括[18F]-氟離子。
如上文簡(jiǎn)述，[18F]-氟離子可以通過輻射[18O]-水靶底而制備，這可以是本發(fā)明方法的起始步驟。
本發(fā)明的方法具體地可用來制造放射性同位素氟化糖衍生物如[18F]-pFDG，它可以脫保護(hù)形成化合物如公知的PET示蹤劑[18F]-FDG。脫保護(hù)可以是該方法中額外的步驟。產(chǎn)物氟化糖中的保護(hù)基是酯時(shí)，如乙酰基衍生物，可以通過酸水解或堿水解進(jìn)行脫保護(hù)。
其它額外的步驟包括從溶液中除去過量的[18F]-氟化物和除去有機(jī)溶劑。過量的[18F]-氟化物可以通過任何標(biāo)準(zhǔn)方法除去，例如通過離子交換色譜或固相吸收劑。合適的離子交換樹脂包括BIO-RAD AG1-X8TM和Waters QMATM，合適的固相吸收劑包括氧化鋁。
有機(jī)溶劑可以通過在升高的溫度下真空蒸發(fā)，或者通過向溶液上方通入惰性氣體流如氮?dú)饣驓鍤舛ァ?br> 這些步驟的最終產(chǎn)物[18F]-示蹤劑化合物可以配制用于給予患者，例如以水溶液的形式，其可以通過將[18F]-標(biāo)記的示蹤劑溶解在可含有高達(dá)10％適當(dāng)有機(jī)溶劑如乙醇的無菌等滲鹽水中，或者另外可選地，溶解在適當(dāng)緩沖溶液如磷酸鹽緩沖液中而制備?？梢允褂闷渌砑觿缃档洼椛浞纸獾目箟难?。
如所述，可以通過本發(fā)明方法制備的具體優(yōu)選的化合物是[18F]-pFDG，因此，在本發(fā)明的第二個(gè)方面，提供一種制備[18F]-pFDG的方法，該方法包括使四乙?；事短侨谆撬狨ヅc[18F]-氟化物反應(yīng)，其特征在于氟化物溶解在含有其量大于1000ppm且小于50,000ppm的水的有機(jī)溶劑中。在本發(fā)明該方面的一個(gè)實(shí)施方式中，使四乙?；事短侨谆撬狨?1當(dāng)量)與[18F]-氟化物在KryptofixTM2.2.2(0.9-1.1摩爾當(dāng)量，合適地為0.98-0.99摩爾當(dāng)量)、碳酸鉀(0.4-0.6摩爾當(dāng)量，合適地為0.50-0.60摩爾當(dāng)量)的存在下，在含有其量大于1000ppm且小于50,000ppm的水的乙腈中反應(yīng)。
本發(fā)明的優(yōu)選特征如上文第一個(gè)方面中所詳述。具體地，該方法包括通過輻射[18O]-水靶底生成[18F]-氟化物的起始步驟，以及通過酸水解或堿水解將[18F]-pFDG轉(zhuǎn)化成[18F]-FDG的額外步驟。


現(xiàn)在參考實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的描述，其中圖1中的曲線顯示了[18F]-pFDG產(chǎn)物的放射性同位素化學(xué)純度與溶劑含水量之間的相互關(guān)系。
圖2中的圖顯示了在用樹脂-連接子-媒介物進(jìn)行標(biāo)記的過程中[18F]-pFDG和pGlucose形成之間的相互關(guān)系。
圖3中的曲線顯示了自動(dòng)合成過程中[18F]-pFDG產(chǎn)物的放射性同位素化學(xué)純度與溶劑含水量之間的相互關(guān)系。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1-不同含水量對(duì)糖18F-標(biāo)記的影響在本實(shí)施例中，使用3種用18F-標(biāo)記糖的不同方法，評(píng)價(jià)了不同反應(yīng)混合物含水量的影響。
a)樹脂-連接子媒介物(RLV)標(biāo)記將18F-引入Tracerlab MXTM，并使用制造2-[18F]氟-2-脫氧葡萄糖所用的標(biāo)準(zhǔn)干燥方法進(jìn)行干燥。使用KryptofixTM2.2.2/碳酸鉀使氟化物溶解于乙腈。干燥過程結(jié)束時(shí)，在氟化物溶解于乙腈之后，取乙腈中干燥18F-的樣品進(jìn)行含水量分析，在KarlFisher滴定計(jì)上進(jìn)行測(cè)量。如果需要，引入額外添加的水，使含水量高于干燥過程得到的正常水平。
將1ml HiTrap夾筒裝有約370mg固相結(jié)合的保護(hù)甘露糖前體，取代度為0.003mmol/g。夾筒一端通過環(huán)與注射器驅(qū)動(dòng)器相連。夾筒另一端然后與裝有分子篩排氣孔、充滿N2的容器相連。使用熱氣槍將夾筒加熱至外夾筒溫度為80℃。
然后通過系統(tǒng)注入6×0.5ml干燥乙腈，洗出任何雜質(zhì)和(由于如干燥不完全造成的樹脂上天然存在的)水，然后棄去乙腈。將含有干燥18F-溶液(450μl)的自動(dòng)取樣器容器裝在儀器上相應(yīng)位置處。然后注射器驅(qū)動(dòng)器將干燥氟化物以180μl/mi n的流速向后向前推動(dòng)5個(gè)循環(huán)。干燥的氟化物與固相甘露糖前體反應(yīng)，產(chǎn)生保護(hù)的[18F]-2-脫氧葡萄糖衍生物(其隨后脫保護(hù)形成2-[18F]-2-脫氧葡萄糖)。
然后從自動(dòng)取樣器容器中取出5μl樣品進(jìn)行薄層色譜(TLC)分析，在硅膠60 F254板上點(diǎn)樣，然后以比例接近(made up to)90/10的乙腈/水溶劑爬板。放射性同位素化學(xué)純度在Perkin Elmer InstantImager上確定。
b)四乙?；谆撬狨?biāo)記制備32mg K2CO3溶解于600μl HPLC級(jí)H2O中的溶液，和150mgKryptofixTM2.2.2溶解于2.5ml乙腈中的溶液。將其0.6ml與約40MBq18F-/富18O的水加入到玻璃碳反應(yīng)器中。加熱器控制器設(shè)置在95℃，反應(yīng)容器加熱共計(jì)35分鐘，以對(duì)氟化物進(jìn)行干燥。水和乙腈在氮?dú)饬髦姓舭l(fā)。
每隔2分鐘向干燥過程中注入1ml乙腈，共計(jì)3次，第一次加入在20分鐘，將水從氟化物中共沸除去。35分鐘后關(guān)閉加熱器，通過反應(yīng)容器外部的壓縮空氣流將反應(yīng)容器冷卻至約45℃。
然后將在2.0ml CH3CN中的25mg甘露糖三氟甲磺酸酯加入到干燥的氟化物中，之后混合。加熱器控制器設(shè)置在85℃。達(dá)到設(shè)定溫度后2分鐘，獲取TLC分析的樣品。關(guān)閉加熱器，通過壓縮空氣流將反應(yīng)容器冷卻至約45℃。
將TLC分析樣品在硅膠條上點(diǎn)樣，然后以比例接近95/5的乙腈/水溶劑爬板。放射性同位素化學(xué)純度在Perkin Elmer Instant Imager上確定。然后拿下反應(yīng)容器的頂部，取50μl樣品在Karl Fisher滴定計(jì)上進(jìn)行含水量分析。
c)自動(dòng)標(biāo)記標(biāo)記在原型自動(dòng)合成平臺(tái)上進(jìn)行，該自動(dòng)合成平臺(tái)包括25個(gè)三通閥，具有機(jī)載加熱的反應(yīng)容器和可拆卸聚丙烯盒。盒的流體通道還使得人們可以進(jìn)行中間體或最終產(chǎn)物的SPE純化。
氟化物最初捕獲于QMA夾筒，并用20mg KryptofixTM2.2.2、4.1mg K2CO3、320μL CH3CN、80μL H2O的溶液洗脫。然后將其在氮?dú)饬髦性?05℃/120℃下加熱約6分鐘，并再次溶解在1.5ml在乙腈中的約20mg/ml的四乙?；事短侨谆撬狨?。
標(biāo)記反應(yīng)在105或125℃的標(biāo)記溫度下進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間為90或270秒。標(biāo)記之后通過TLC對(duì)2[18F]-2-脫氧葡萄糖進(jìn)行分析。TLC板為硅膠60 F254，采用95％乙腈、5％水作為展開溶劑。放射性同位素化學(xué)純度在Perkin Elmer Instant Imager上確定。
實(shí)施例1中三個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示于圖1，從其中可以看出，當(dāng)反應(yīng)混合物含水量低于1000ppm時(shí)產(chǎn)物的放射性同位素化學(xué)純度相對(duì)較低，但是當(dāng)含水量為1000至5000ppm時(shí)放射性同位素化學(xué)純度則大大提高。曲線顯示，溶劑中的最佳含水量為約2000至7000ppm。
實(shí)施例2-標(biāo)記過程中[18F]-pFDG和pGlucose形成之間的相互關(guān)系RLV的18-氟化物標(biāo)記在KryptofixTM2.2.2、碳酸鉀和不同量水的存在下在乙腈中進(jìn)行。標(biāo)記之后，對(duì)生成的混合物進(jìn)行反相HPLC，運(yùn)行梯度為10分鐘內(nèi)以1ml/min從90％溶劑A10％溶劑B(溶劑A＝0.1％三氟乙酸的水溶液；溶劑B＝0.1％三氟乙酸的乙腈溶液)至5％A、95％B，使用Phenomenex Luna 5μm C18柱(4.6mm×150mm)。測(cè)定折合成3分鐘保留時(shí)間時(shí)的保護(hù)葡萄糖和6.6分鐘時(shí)的保護(hù)FDG(主要由于存在[19F]-FDG，其與[18F]-FDG成比例)的峰積分并相互關(guān)聯(lián)。
通常，據(jù)信反應(yīng)混合物中存在大量水因三氟甲磺酸酯基團(tuán)處的親核取代而導(dǎo)致形成大量保護(hù)的葡萄糖(而不是[18F]-pFDG)。因此，預(yù)計(jì)將產(chǎn)物混合物中[18F]-pFDG的濃度針對(duì)保護(hù)葡萄糖衍生物的濃度作圖，斜率為負(fù)，含水量高則產(chǎn)生高水平的保護(hù)葡萄糖和低水平的[18F]-pFDG。
但是，從對(duì)連接于樹脂的四乙?；事短侨谆撬狨サ臉?biāo)記研究可確認(rèn)，HPLC上兩個(gè)峰之間存在良好的正關(guān)聯(lián)(見圖2)。這表明存在有高濃度的水，這抑制了兩種產(chǎn)物的形成。
實(shí)施例3-自動(dòng)合成1，3，4，6-四-O-乙?；?2-氟-β-D-吡喃甘露糖標(biāo)記過程開始時(shí)對(duì)放射性同位素活性反應(yīng)溶液進(jìn)行取樣有很多問題。因此，在標(biāo)記反應(yīng)結(jié)束時(shí)與RCP(通過ITLC測(cè)量)一起進(jìn)行含水量的測(cè)定。然后如下文所述通過把水扣除計(jì)算在內(nèi)，計(jì)算標(biāo)記過程開始時(shí)的含水量。
放射性同位素標(biāo)記實(shí)驗(yàn)在自動(dòng)合成儀上進(jìn)行1，3，4，6-四-O-乙?；?2-氟-β-D-吡喃甘露糖的合成，該自動(dòng)合成儀設(shè)計(jì)成附有一次性使用的可拆卸盒。該盒包括25個(gè)閥式可拆卸盒，其包括含有各種試劑的小瓶連同注射器和用于固相萃取夾筒的空間。
合成順序進(jìn)行如下將在2ml水中的50MBq 18-氟化物捕獲于Waters Access Plus QMA夾筒(其形式為碳酸鹽)，然后用乙腈/水中kryptofix和碳酸鹽的溶液(kryptofix 222-20.3mg、碳酸鉀-4.3mg、乙腈-320μl、水-80μL)洗脫至加熱的反應(yīng)器中。然后將其在干燥氮?dú)饬髦型ㄟ^加熱干燥，然后將界定含水量的甘露糖三氟甲磺酸酯的乙腈溶液加入到反應(yīng)器中。
然后使反應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行80秒，外部加熱器溫度為125℃，然后抽取0.6ml并作為廢液棄去(從線上除去殘余的水)，剩余物轉(zhuǎn)移至產(chǎn)物小瓶中。通過Karl Fisher滴定計(jì)使用50μl溶液測(cè)定產(chǎn)物小瓶的含水量，通過即時(shí)薄層色譜(ITLC)測(cè)定RCP。TLC在硅膠TLC板上進(jìn)行，用95％乙腈、5％水洗脫，然后使用ITLC測(cè)量18-氟化物和1，3，4，6-四-O-乙?；?2-氟-β-D-吡喃甘露糖(在所有情況下均為單獨(dú)的兩種組分)的相對(duì)比例。
水扣除測(cè)量進(jìn)行三次冷運(yùn)行(cold run)，其中在標(biāo)記之前和標(biāo)記之后都取一定體積的反應(yīng)器液體，以觀察通過與甘露糖三氟甲磺酸酯的反應(yīng)減少了多少水。這使得可以將水扣除計(jì)算在測(cè)得的含水量內(nèi)。
進(jìn)行與放射性同位素標(biāo)記實(shí)驗(yàn)類似的合成順序，其中使2ml水通過Waters Access PlusQMA夾筒(其形式為碳酸鹽)，然后用乙腈/水中kryptofix和碳酸鹽的溶液(kryptofix 222-20.3mg、碳酸鉀-4.3mg、乙腈-320μl、水-80μL)洗脫至加熱的反應(yīng)器中。然后將其在干燥氮?dú)饬髦型ㄟ^加熱干燥，然后將一定含水量的甘露糖三氟甲磺酸酯的乙腈溶液加入到反應(yīng)器中。
一經(jīng)將甘露糖三氟甲磺酸酯加入到反應(yīng)器中，抽取0.6ml，并注射到產(chǎn)物小瓶中。然后使標(biāo)記反應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行80秒，外部加熱器溫度為125℃，然后抽取剩余溶液，并轉(zhuǎn)移至單獨(dú)的產(chǎn)物小瓶中。使用KarlFisher滴定計(jì)用50μl溶液測(cè)量每個(gè)小瓶的含水量。
含水量運(yùn)行的結(jié)果顯示于表1，其顯示了乙腈溶液中所存在水的水平。
表1標(biāo)記前標(biāo)記后/ppm /ppm786 8022603 25278433 7860在中低水平的水含量下通過與甘露糖三氟甲磺酸酯反應(yīng)并沒有明顯的水扣除。但是，在更高的水平下水含量會(huì)有7％的下降。
放射性同位素標(biāo)記結(jié)果測(cè)量每次放射性同位素標(biāo)記反應(yīng)的含水量，然后通過以甘露糖三氟甲磺酸酯將水扣除計(jì)算在內(nèi)進(jìn)行調(diào)節(jié)，得到標(biāo)記前的含水量。各個(gè)含水量下得到的RCP在表2中給出，并且顯示于圖3。
表2

這些結(jié)果支持了優(yōu)選的含水量為3000至6000ppm。忽略73.6％RCP的干擾結(jié)果，即使在反應(yīng)條件非常濕潤時(shí)，反應(yīng)傾向于逼進(jìn)約85％PCP。
權(quán)利要求
1.一種制備氟化糖衍生物的方法，所述方法包括使非氟化糖衍生物與氟化物反應(yīng)，其特征在于所述反應(yīng)在含有其量大于1000ppm且小于50,000ppm的水的溶劑中進(jìn)行。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述氟化和非氟化的糖衍生物是單糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述氟化和非氟化的糖衍生物均是保護(hù)的。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述氟化和非氟化的糖衍生物用乙?；鶊F(tuán)保護(hù)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的制備保護(hù)氟化糖衍生物的方法，其中所述的非氟化糖衍生物是保護(hù)的甘露糖衍生物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的由1，3，4，6-四-O-乙酰基-2-三氟甲磺?；?β-D-吡喃甘露糖(四乙酰基甘露糖三氟甲磺酸酯)制備2-氟-1，3，4，6-四-O-乙?；?D-葡萄糖(四乙?；咸烟腔騪FDG)的方法。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述溶劑選自乙腈、二甲基甲酰胺、二甲亞砜、四氫呋喃、二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷、環(huán)丁砜、和N-甲基吡咯烷酮。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述溶劑是乙腈。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述溶劑的含水量為約1000至15,000ppm。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述溶劑的含水量為約2000至7000ppm。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述溶劑的含水量為約3000ppm至6000ppm。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-11中任意一項(xiàng)所述的方法，所述方法在溶液相中進(jìn)行。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-12中任意一項(xiàng)所述的方法，所述方法是自動(dòng)的。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-13中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述氟化物是抗衡離子為鉀的離子氟化物，并且將相轉(zhuǎn)移催化劑如4，7，13，16，21，24-六氧代-1，10-二氮雜雙環(huán)-[8，8，8]-二十六烷加入到所述氟化物中。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-14中任意一項(xiàng)所述的制備放射性同位素氟化糖衍生物的方法。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述放射性同位素標(biāo)記的糖衍生物是[18F]-標(biāo)記的糖衍生物。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-16中任意一項(xiàng)所述的制備[18F]-pFDG的方法，所述方法包括使四乙?；事短侨谆撬狨ヅc[18F]-氟化物反應(yīng)。
18.根據(jù)權(quán)利要求1-17中任意一項(xiàng)所述的方法，其進(jìn)一步包括任意順序的以下一個(gè)和多個(gè)額外步驟i.從溶液中除去過量的氟化物；ii.對(duì)保護(hù)的氟化糖衍生物進(jìn)行脫保護(hù)，得到脫保護(hù)的氟化糖衍生物；iii.除去有機(jī)溶劑；和iv.將脫保護(hù)氟化糖衍生物配制在水溶液中。
19.一種降低放射性同位素氟化物、特別是[18F]氟化物溶液含水量的方法，所述方法包括使所述溶液與清除劑樹脂接觸。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述溶液在選自乙腈、二甲基甲酰胺、二甲亞砜、四氫呋喃、二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷、環(huán)丁砜和N-甲基吡咯烷酮的非質(zhì)子溶劑中包括氟化物。
21.根據(jù)權(quán)利要求19和20所述的方法，其中所述溶液在乙腈中包括氟化物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種改善的對(duì)糖氟化物進(jìn)行氟化的方法，其中在溶劑中存在有可控量的水。
文檔編號(hào)C07H1/00GK101061130SQ200580039489
公開日2007年10月24日 申請(qǐng)日期2005年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月19日
發(fā)明者N·J·奧斯博恩, J·格里格, R·P·佩蒂特, A·威爾遜, N·A·鮑威爾 申請(qǐng)人:通用電氣健康護(hù)理有限公司