專利名稱：制備型橫向電場的體積排阻電色譜分離生物大分子的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種在交變電場作用下利用體積排阻電色譜分離蛋白質(zhì)等生物大分子的色譜分離方法，屬于生物產(chǎn)品加工與分離技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
在生化分析蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子的各類方法中，電泳被認(rèn)為是一種具有最高分辨能力的分析方法。然而，電泳也是一種放大效果最差的技術(shù)。到目前為止，由微克級分析提高到克級制備還無法實現(xiàn)。色譜被認(rèn)為是一種僅次于電泳分離能力的技術(shù)，同時它還是一種放大效果很好的方法。其中，體積排阻色譜由于其溫和的操作特性，產(chǎn)品收率可接近100％；分離機(jī)理簡單，操作參數(shù)少；介質(zhì)相對價廉，且容易規(guī)模放大等優(yōu)點(diǎn)而常用于蛋白質(zhì)等生物大分子的分離純化中。因此，人們自然會想到將電泳和液相色譜相結(jié)合的復(fù)合分離技術(shù)，這樣的結(jié)合既可以保留色譜優(yōu)越的放大效果又可以引入電泳的精細(xì)分離能力。這樣的電色譜也被人們寄予很大的希望，被認(rèn)為是一種很有潛力的制備型分離技術(shù)。體積排阻電色譜就是其中最主要的一種形式。
但在制備型電色譜的放大過程中，必須解決由于外電場的引入而帶來的一些問題。其中最重要的是要解決焦耳熱和電解氣問題。大多數(shù)蛋白質(zhì)在40℃左右就會快速變性，電色譜中焦耳熱的產(chǎn)生和柱截面積及電壓的平方成正比。在電色譜放大時，一方面，提高柱高需要增大柱兩端的電壓來維持柱內(nèi)合適的電場強(qiáng)度；另一方面，增大柱直徑將導(dǎo)致柱截面積的增大，從而使柱內(nèi)產(chǎn)生的焦耳熱大大增加。當(dāng)柱內(nèi)熱量的產(chǎn)生超過其散熱能力時將會引起柱內(nèi)溫度的升高而導(dǎo)致蛋白質(zhì)的熱損失。同時，產(chǎn)生的電解產(chǎn)物會污染洗脫液及產(chǎn)品。因此，有效移除焦耳熱和電解氣便成為設(shè)計制備型電色譜的一個關(guān)鍵因素。
已有技術(shù)中的制備型體積排阻電色譜都屬于軸向電場電色譜，即電場應(yīng)用在色譜柱的軸向，緩沖液同時用做電極液。例如，1997年，Cole和Cabezas在《Journal of ChromatographyA》第760卷中報道了一種在柱塞內(nèi)修整出一個隔離的電極室來引入外電場，并用截留分子量為6000～8000的滲析膜來隔離流動相和電極室(K.D.Cole and H.-Jr.Cabezas.JChromatogr A，1997，760，259-263)。這種設(shè)計使色譜柱的凝膠部分與電極室分離開來，電解產(chǎn)物不會進(jìn)入凝膠，這是它的一大優(yōu)點(diǎn)。2000年，Keim和Ladisch在《Biotechnology andBioengineering》第70卷中報道了他們設(shè)計的一種新型端塞結(jié)構(gòu)的體積排阻電色譜柱，在端塞內(nèi)引入電極，并采用徑向進(jìn)、出料的方式來避免緩沖液通過端塞。同時，利用截留分子量為500的超濾膜來隔離色譜柱的凝膠部分和端塞(C.Keim and M.Ladisch.BiotechnolBioeng，2000，70，72-81)。這種結(jié)構(gòu)的設(shè)計優(yōu)點(diǎn)是簡化了柱塞處的復(fù)雜結(jié)構(gòu)設(shè)計，在柱的軸向引入外電場。這類軸向電場電色譜技術(shù)的共同缺點(diǎn)是(1)軸向電場電色譜的兩個電極間的距離長，應(yīng)用電壓高，導(dǎo)致柱內(nèi)焦耳熱效應(yīng)嚴(yán)重，冷卻負(fù)荷大。(2)操作過程中，正負(fù)離子的持續(xù)定向遷移，會造成電極處異性電荷的升高，這將導(dǎo)致柱內(nèi)電場強(qiáng)度的降低。(3)操作過程中會有大量的蛋白質(zhì)吸附在異性電極的隔離膜上，造成產(chǎn)品損失。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種利用制備型橫向電場體積排阻電色譜分離蛋白質(zhì)混合物的方法，它是將橫向電場與體積排阻色譜分離相結(jié)合，利用待分離組分的電泳遷移速率、分子擴(kuò)散系數(shù)和分子尺寸等差異進(jìn)行分離，具有分離不同類型的蛋白質(zhì)混合物的能力，如分離被凝膠排除的蛋白質(zhì)大分子的組合和可部分滲入凝膠但分子量接近的蛋白質(zhì)組合或者提高蛋白質(zhì)混合物的分離度和上樣量。
本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案加以實現(xiàn)的。一種利用制備型橫向電場的體積排阻電色譜分離生物大分子的方法，所述的制備型橫向電場電色譜分離設(shè)備，其中橫向電場是指電場方向與液體流動方向垂直，電色譜包括凝膠室和兩側(cè)的電極室構(gòu)成，凝膠室是兩側(cè)有對稱的槽溝、槽溝內(nèi)平臺上有密封凹槽和中間為長方形中空的有機(jī)玻璃體；槽溝內(nèi)設(shè)置具有截留分子量大于1000道爾頓的、可自由通過導(dǎo)電離子的膜板；在凝膠室外兩側(cè)各有一個電極室；電極室內(nèi)壁固定惰性鉑電極；電極室與凝膠室中充有包括乙酸鹽、磷酸鹽、碳酸氫鹽或三羥甲基氨基甲烷-鹽酸溶液；采用該設(shè)備分離生物大分子的方法，其特征在于，包括以下過程配制含有0-100mmol/L氯化鈉的1.0-20mmol/L乙酸鹽、磷酸鹽、碳酸氫鹽或三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液為流動相和電極液，流動相使用前經(jīng)0.45μm超濾膜和超聲處理；生物大分子溶于流動相中制備成濃度為0.1-100mg/ml的溶液；凝膠室和兩側(cè)的電極室用流動相平衡后，將Sephadex G-75或Spharose FF凝膠按重力填充的方法填充到電色譜柱的凝膠室；流動相流速為10-200cm/h，溫度為2-25℃；在凝膠室兩側(cè)施加電極電壓為1-600伏、電流交變周期為2-200秒的等周期交變電場，電極液流速為20-400cm/h，溫度為4-25℃；待系統(tǒng)穩(wěn)定后，待分離樣品以脈沖方式進(jìn)樣，色譜柱流出液經(jīng)檢測器檢測。
上述的優(yōu)化條件配制含有5-50mmol/L氯化鈉的2.0-15mmol/L乙酸鹽、磷酸鹽、碳酸氫鹽或三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液為流動相和電極液；生物大分子溶于流動相中制備成濃度為0.5-50mg/ml的溶液；凝膠室和兩側(cè)的電極室用流動相平衡后，將SephadexG-75或Spharose FF凝膠按重力填充的方法填充到電色譜柱的凝膠室；流動相流速為20-70cm/h，溫度為4-15℃；在凝膠室兩側(cè)施加電極電壓為5-300伏、電流交變周期為4-120秒的等周期交變電場，電極液流速為40-300cm/h，溫度為5-15℃。
下面對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明本發(fā)明的關(guān)鍵技術(shù)有八點(diǎn)一是色譜中橫向交變電場的引入，采用了一種三腔室的矩形色譜柱，中間裝填料的凝膠室和兩側(cè)的電極室，凝膠室和電極室之間由平面膜板來隔離，電極室內(nèi)設(shè)置電極，電極和外電源相連，凝膠室內(nèi)便產(chǎn)生了橫向電場。關(guān)鍵技術(shù)之二是膜板為具有一定分子截留能力的親水性膜板，其主要作用是阻止生物大分子進(jìn)入兩側(cè)的電極室而導(dǎo)電離子可自由通過，膜板的厚度和其內(nèi)部的焦耳熱有關(guān)，膜板越薄焦耳熱越小，但膜板也需要有一定厚度(或需一定厚度的支撐板)來滿足流動相的液壓和本身機(jī)械強(qiáng)度的要求。關(guān)鍵技術(shù)之三是等周期交變電場的應(yīng)用，用等周期來解決生物大分子在隔離膜板處的堆積，同時也解決了軸向電場電色譜中由于電場的持續(xù)應(yīng)用而引起的諸多問題；周期的大小又是影響蛋白質(zhì)的橫向電泳遷移距離和傳質(zhì)速率的重要因素。關(guān)鍵技術(shù)之四是緩沖液為常規(guī)的色譜緩沖液，緩沖液的離子強(qiáng)度為0.5-100mmol/L；過小的離子強(qiáng)度將導(dǎo)致蛋白質(zhì)和色譜填料的靜電吸附嚴(yán)重，過大的離子強(qiáng)度將導(dǎo)致蛋白質(zhì)電泳遷移速率的銳減。關(guān)鍵技術(shù)之五是為了保證操作過程中色譜柱內(nèi)緩沖液的電導(dǎo)率和pH的穩(wěn)定，電極液與緩沖液組成相同。關(guān)鍵技術(shù)之六是緩沖液和電極液的溫度必須具有一定減緩凝膠室及電極室內(nèi)焦耳熱效應(yīng)的能力。關(guān)鍵技術(shù)之七是緩沖液和電極液流速的選擇除應(yīng)滿足分離效率和填料承載能力的要求外，還要滿足消除凝膠室及電極室內(nèi)焦耳熱的要求。關(guān)鍵技術(shù)之八是電壓的選擇，電壓的大小直接影響蛋白質(zhì)的橫向電泳遷移距離、傳質(zhì)速率和凝膠室及電極室內(nèi)焦耳熱效應(yīng)。
本發(fā)明的橫向電場體積排阻電色譜分離方法同現(xiàn)有的軸向電場體積排阻電色譜分離方法相比，其明顯的優(yōu)點(diǎn)是(1)由于采用膜板隔離的三腔室色譜柱結(jié)構(gòu)，電極產(chǎn)生的電解氣被完全限制在電極室，并可穩(wěn)定地被循環(huán)的電極液帶走，而色譜柱中產(chǎn)生的焦耳熱可被軸向壓力驅(qū)動的、冷卻的流動相帶走；(2)柱側(cè)向的距離遠(yuǎn)小于其軸向距離，施加較小的電壓就可以在得到較高的柱內(nèi)電場強(qiáng)度，從而避免使用高壓電源，降低了能耗；同時，低電壓的使用也會帶來柱內(nèi)低焦耳熱效應(yīng)及柱內(nèi)電場穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)；(3)三腔室的矩形色譜柱的分割結(jié)構(gòu)使樣品上樣、洗脫等步驟在電場下可持續(xù)進(jìn)行。因此，該技術(shù)在蛋白質(zhì)等生物大分子的分離純化過程中具有廣闊的應(yīng)用前景。


圖1給出了本發(fā)明涉及的電色譜柱整體結(jié)構(gòu)示意2給出了交變電場的應(yīng)用方位以及荷電溶質(zhì)的遷移示意圖。
圖3給出了牛血清白蛋白(BSA)和免疫球蛋白G(IgG)的分配系數(shù)在橫向電場電色譜中隨電場強(qiáng)度的變化趨勢。圖中mT為蛋白質(zhì)的分配系數(shù)由下式來計算，mT=Ve-V0Vt-V0]]>式中Ve為樣品蛋白質(zhì)的洗脫體積；Vt為色譜柱的總體積；V0為色譜柱的空隙體積。緩沖液是3.9mmol/L三羥甲基氨基甲烷-47mmol/L甘氨酸(pH8.2)，流速為20cm/h。
圖4給出了肌紅蛋白(Myo)和溶菌酶(Lys)的分配系數(shù)在橫向電場電色譜中隨電場強(qiáng)度的變化趨勢。緩沖液為4.0mmol/L乙酸鹽緩沖液(pH4.9)流速為60cm/h。
圖5給出了牛血清白蛋白(BSA)和肌紅蛋白(Myo)的分配系數(shù)在橫向電場電色譜中隨電場強(qiáng)度的變化趨勢。緩沖液為4.0mmol/L乙酸鹽緩沖液(pH4.9)流速為60cm/h。
圖6給出了本發(fā)明工作流程示意圖。
具體實施例方式
下面的實例將對本發(fā)明予以進(jìn)一步的說明。
下面結(jié)合附圖，詳細(xì)介紹本方法中電場的應(yīng)用和樣品組分的分離原理。
圖2中給出了交變電場的應(yīng)用方位和荷電溶質(zhì)的遷移情況。所圖所示，由于電力線與壓力流線相垂直，在壓力流的垂直方向上，存在隨電場周期變化的電泳對流傳遞，故溶質(zhì)將以Z型軌跡在柱內(nèi)移向柱出口。這也是橫向電場體積排阻電色譜與軸向電場體積排阻電色譜的主要差別。
圖3-5給出了三對蛋白質(zhì)的分配系數(shù)在橫向電場電色譜中隨緩沖液pH和電場強(qiáng)度的變化情況，以便根據(jù)蛋白質(zhì)分配系數(shù)的變化情況選擇合適的分離條件。所選擇的幾對蛋白質(zhì)具有廣泛的代表性(1)完全被凝膠排除的蛋白質(zhì)組合(BSA/IgG)；(2)可部分滲入凝膠但分子量接近的蛋白質(zhì)組合(Myo/Lys)；(3)完全被凝膠排除和可部分滲入凝膠的蛋白質(zhì)組合(BSA/Myo)。由圖可知，同一緩沖液中，電場強(qiáng)度對不同蛋白質(zhì)分配系數(shù)的影響不同；同一蛋白質(zhì)在不同緩沖液中，其分配系數(shù)受電場強(qiáng)度的影響也不同。例如，在pH8.2時，BSA的分配系數(shù)隨電場強(qiáng)度的增大而急劇增大，但I(xiàn)gG增大則比較緩慢(圖3)；在pH4.9時，Lys的分配系數(shù)隨電場強(qiáng)度增大的程度遠(yuǎn)大于Myo的(圖4)。在圖5中，由于緩沖液的pH(pH4.9)與BSA的等電點(diǎn)相同，其分配系數(shù)幾乎不受電場強(qiáng)度的影響；而緩沖液的pH遠(yuǎn)離Myo的等電點(diǎn)，其分配系數(shù)隨電場強(qiáng)度的增大而急劇增大。圖3-5的結(jié)果很好地解釋了緩沖液pH和蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的差異對橫向電場體積排阻電色譜中蛋白質(zhì)保留行為的影響。因此，可以根據(jù)蛋白質(zhì)保留行為的差異來選擇合適的實驗條件，如緩沖液pH、電場強(qiáng)度等來提高不同蛋白質(zhì)間保留行為的差異，從而提高分離能力。這一結(jié)論適合不同類型的蛋白質(zhì)混合物，如被凝膠排除的蛋白質(zhì)大分子的組合(IgG、BSA，圖3)；可部分滲入凝膠但分子量接近的蛋白質(zhì)組合(Myo、Lys，圖4)；被凝膠排除的蛋白質(zhì)大分子和凝膠滲透的小分子蛋白質(zhì)的組合(BSA、Myo圖5)。由此可見，橫向電場體積排阻電色譜可分離完全被凝膠排除的蛋白質(zhì)組合和尺寸相近的蛋白質(zhì)組合，從而使其對生物大分子的分離能力顯著提高。
實施例1分離牛血清白蛋白和免疫球蛋白G混合物電色譜凝膠室的尺寸為(長×寬×深)20.0×0.5×1.2cm，電極室的尺寸為20.1×0.8×0.8cm。流動相緩沖液為含有5.0mmol/L氯化鈉的3.9mmol/L Tris-47mmol/L Gly緩沖液(pH8.2)?？倽舛葹?.0mg/mL的蛋白質(zhì)混合物是由等體積、濃度均為1.0mg/ml的牛血清白蛋白和免疫球蛋白樣品液混合而成。所有的緩沖液均經(jīng)0.45μm的微孔膜過濾和15min超聲脫氣處理。凝膠室和兩側(cè)的電極室用緩沖液平衡10分鐘后，將Sephadex G-75凝膠按重力填充的方法填充到電色譜柱的凝膠室。然后，用流動相緩沖液平衡凝膠室中介質(zhì)，直到UV吸收值(280nm)達(dá)到基線并穩(wěn)定在基線附近。緩沖液流速為0.2ml/min。在凝膠室兩側(cè)施加電極電壓為90伏、電流交變周期為40秒的等周期交變電場，電極液流速為1.6mL/min。待系統(tǒng)穩(wěn)定后，用脈沖方式進(jìn)樣，樣品體積為0.2ml。實驗過程中，電極液由冷卻器冷卻在6℃，流動相則由冰水混合物冷卻。實驗結(jié)果牛血清白蛋白和免疫球蛋白G得到了基線分離；而不加電場條件下，這兩種組分出峰時間重疊。
實施例2分離肌紅蛋白和溶菌酶混合物電色譜凝膠室的尺寸為(長×寬×深)20.0×0.5×1.2cm，電極室的尺寸為20.1×0.8×0.8cm。流動相緩沖液為8.0mmol/L乙酸鹽緩沖液(pH4.9)?？倽舛葹?.0mg/mL的蛋白質(zhì)混合物由混合相同體積的上述單蛋白質(zhì)樣品溶液來配制。所有的緩沖液均經(jīng)0.45μm的微孔膜過濾和15min超聲脫氣處理。凝膠室和兩側(cè)的電極室用緩沖液平衡10分鐘后，將Sephadex G-75凝膠按重力填充的方法填充到電色譜柱的凝膠室。然后，用流動相緩沖液平衡凝膠室中介質(zhì)，直到UV吸收值(280nm)達(dá)到基線并穩(wěn)定在基線附近。緩沖液流速為0.2ml/min。在凝膠室兩側(cè)施加電極電壓為70伏、電流交變周期為40秒的等周期交變電場，電極液流速為1.6mL/min。待系統(tǒng)穩(wěn)定后，用脈沖方式進(jìn)樣，樣品體積為0.2ml。實驗過程中，電極液由冷卻器冷卻在6℃，流動相則由冰水混合物冷卻。實驗結(jié)果肌紅蛋白和溶菌酶得到了基線分離；而不加電場條件下，這兩種組分出峰時間接近而僅出現(xiàn)一個色譜峰。
實施例3分離牛血清白蛋白和肌紅蛋白混合物電色譜凝膠室的尺寸為(長×寬×深)20.0×0.5×1.2cm，電極室的尺寸為20.1×0.8×0.8cm。流動相緩沖液為8.0mmol/L乙酸鹽緩沖液(pH4.9)?？倽舛葹?.0mg/mL的蛋白質(zhì)混合物由混合相同體積的上述單蛋白質(zhì)樣品溶液來配制。所有的緩沖液均經(jīng)0.45μm的微孔膜過濾和15min超聲脫氣處理。凝膠室和兩側(cè)的電極室用緩沖液平衡10分鐘后，將Sephadex G-75凝膠按重力填充的方法填充到電色譜柱的凝膠室。然后，用流動相緩沖液平衡凝膠室中介質(zhì)，直到UV吸收值(280nm)達(dá)到基線并穩(wěn)定在基線附近。緩沖液流速為0.2ml/min。在凝膠室兩側(cè)施加電極電壓為90伏、電流交變周期為40秒的等周期交變電場，電極液流速為1.6mL/min。待系統(tǒng)穩(wěn)定后，用脈沖方式進(jìn)樣，樣品體積為1.0ml。實驗過程中，電極液由冷卻器冷卻在6℃，流動相則由冰水混合物冷卻。實驗結(jié)果牛血清白蛋白和肌紅蛋白得到了基線分離；而不加電場條件下，這兩種組分出峰時間接近而僅出現(xiàn)一個色譜峰。
實施例4分離牛血清白蛋白、肌紅蛋白和溶菌酶混合物電色譜凝膠室的尺寸為(長×寬×深)20.0×0.5×1.2cm，電極室的尺寸為20.1×0.8×0.8cm。流動相緩沖液為8.0mmol/L乙酸鹽緩沖液(pH4.9)。總濃度為1.0mg/mL的蛋白質(zhì)混合物由混合相同體積的上述單蛋白質(zhì)樣品溶液來配制。所有的緩沖液均經(jīng)0.45μm的微孔膜過濾和15min超聲脫氣處理。凝膠室和兩側(cè)的電極室用緩沖液平衡10分鐘后，將Sephadex G-75凝膠按重力填充的方法填充到電色譜柱的凝膠室。然后，用流動相緩沖液平衡凝膠室中介質(zhì)，直到UV吸收值(280nm)達(dá)到基線并穩(wěn)定在基線附近。緩沖液流速為0.2ml/min。在凝膠室兩側(cè)施加電極電壓為90伏、電流交變周期為40秒的等周期交變電場，電極液流速為1.6mL/min。待系統(tǒng)穩(wěn)定后，用脈沖方式進(jìn)樣，樣品體積為0.2ml。實驗過程中，電極液由冷卻器冷卻在6℃，流動相則由冰水混合物冷卻。實驗結(jié)果牛血清白蛋白、肌紅蛋白和溶菌酶得到了基線分離；而不加電場條件下，這三種組分不能分離，其中肌紅蛋白和溶菌酶由于出峰時間接近而僅出現(xiàn)一個色譜峰。
權(quán)利要求
1.一種利用制備型橫向電場的體積排阻電色譜分離生物大分子的方法，所采用的制備型橫向電場電色譜分離設(shè)備，所述的橫向電場是指電場方向與液體流動方向垂直，電色譜包括凝膠室和兩側(cè)的電極室構(gòu)成，凝膠室是兩側(cè)有對稱的槽溝、槽溝內(nèi)平臺上有密封凹槽和中間為長方形中空的有機(jī)玻璃體；槽溝內(nèi)設(shè)置具有截留分子量大于1000道爾頓的、可自由通過導(dǎo)電離子的膜板；在凝膠室外兩側(cè)各有一個電極室；電極室內(nèi)壁固定惰性鉑電極；電極室與凝膠室中充有包括乙酸鹽、磷酸鹽、碳酸氫鹽或三羥甲基氨基甲烷-鹽酸溶液；采用該設(shè)備分離生物大分子的方法，其特征在于，包括以下過程配制含有0-100mmol/L氯化鈉的1.0-20mmol/L乙酸鹽、磷酸鹽、碳酸氫鹽或三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液為流動相和電極液，流動相使用前經(jīng)0.45μm超濾膜和超聲處理；生物大分子溶于流動相中制備成濃度為0.1-100mg/ml的溶液；凝膠室和兩側(cè)的電極室用流動相平衡后，將Sephadex G-75或Spharose FF凝膠按重力填充的方法填充到電色譜柱的凝膠室；流動相流速為10-200cm/h，溫度為2-25℃；在凝膠室兩側(cè)施加電極電壓為1-600伏、電流交變周期為2-200秒的等周期交變電場，電極液流速為20-400cm/h，溫度為4-25℃；待系統(tǒng)穩(wěn)定后，待分離的樣品以脈沖方式進(jìn)樣，色譜柱流出液經(jīng)檢測器檢測。
2.按照權(quán)利要求1所述的分離方法，其特征在于流動相和電極液為含有5-50mmol/L氯化鈉的濃度為2.0-15mmol/L緩沖液；生物大分子溶于流動相中制備成濃度為0.5-50mg/ml的溶液；流動相流速為20-70cm/h，溫度為4-15℃；在凝膠室兩側(cè)施加電極電壓為5-300伏、電流交變周期為4-120秒的等周期交變電場，電極液流速為40-300cm/h，溫度為5-15℃。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種在交變電場作用下利用體積排阻電色譜分離蛋白質(zhì)等生物大分子的色譜分離方法。所述的制備型電色譜分離設(shè)備包括凝膠室和兩側(cè)的電極室構(gòu)成，采用該設(shè)備分離生物大分子的方法，其特征在于配制乙酸鹽、磷酸鹽、碳酸氫鹽或三羥甲基氨基甲烷－鹽酸緩沖液為流動相；流動相平衡后的凝膠室中用重力填充方法填充凝膠；流動相流速為10－200cm/h，溫度為2－25℃；在凝膠室兩側(cè)施加電極電壓為1－600伏、電流交變周期為2－200秒的等周期交變電場，電極液流速為20－400cm/h，溫度為4－25℃；樣品以用脈沖方式進(jìn)樣。本發(fā)明的方法具有分離能力強(qiáng)、處理量大和適用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，在蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的分離與純化中具有廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號C07K1/00GK1736537SQ20051001469
公開日2006年2月22日 申請日期2005年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月2日
發(fā)明者孫彥, 譚國民, 史清洪, 董曉燕, 白姝 申請人:天津大學(xué)