專利名稱：從植物提取物中分離加蘭他敏的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物有效藥用成分的提取方法，尤其是從含石蒜科生物堿的植物提取物中，將加蘭他敏與其它眾多生物堿分離的方法。
背景技術(shù)：
加蘭他敏(galanthamine)是1950年代前蘇聯(lián)學(xué)者發(fā)現(xiàn)的一種菲啶類生物堿，為可逆性乙酰膽堿酯酶抑制劑，原用于小兒麻痹后遺癥及重癥肌無力、術(shù)后腸肌麻痹、尿潴留以及作為箭毒的解毒劑，近年來用于治療早老性癡呆，并有望成為治療老年性癡呆的首選藥物。
加蘭他敏化學(xué)名為，11-甲基-3-甲氧基-4α，5，9，10，11，12-六氫-6H-苯并呋喃[3α，3，2-ef][2]苯并氮雜卓-6-醇，結(jié)構(gòu)式如下圖。
藥用加蘭他敏是從天然植物中提取的。這些植物分布在石蒜屬、雪花水仙屬、文殊蘭屬、水仙屬、網(wǎng)球花屬、水鬼蕉屬等領(lǐng)域。其中以石蒜屬植物具有代表性?，F(xiàn)有技術(shù)從植物提取物中分離加蘭他敏的方法主要是有機(jī)溶劑萃取法。利用親脂性生物堿溶于親脂性有機(jī)溶劑，而其鹽溶于水的性質(zhì)，以及總生物堿中各種單體生物堿之間堿性的差異，在不同的pH條件下進(jìn)行分離。
另有以酸性白土吸附加蘭他敏的報導(dǎo)。其方法是以酸性白土吸附石蒜科植物提取物中的總生物堿，再以堿堿化，乙醇回流解吸，進(jìn)而利用生物堿的溶解性和堿性的差異實(shí)現(xiàn)加蘭他敏的分離。
專利號CN96192578.7“分離加蘭他敏的方法”，是以石蒜科植物水仙或文殊蘭的球莖為生物材料，經(jīng)粉碎與碳酸鈉粉末混合，采用特定沸點(diǎn)汽油進(jìn)行浸漬，除去溶劑。分段調(diào)節(jié)提取物pH4、pH9，以乙醚萃取得加蘭他敏，使用異丙醇重結(jié)晶，得高純度的加蘭他敏。
上述提取、分離加蘭他敏的技術(shù)存在有機(jī)溶劑消耗大、萃取時容易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象、影響分離提取效果、操作工時長等缺點(diǎn)和不足。
隨著離子交換樹脂應(yīng)用領(lǐng)域的不斷擴(kuò)展，許多生物堿的分離也采用離子交換的方法。但上述專利文獻(xiàn)和非專利文獻(xiàn)均未見到有關(guān)與本發(fā)明權(quán)利要求相同的以離子交換樹脂吸附、洗脫加蘭他敏的方法的記載。

發(fā)明內(nèi)容含石蒜科生物堿植物提取物中含有石蒜堿、加蘭他敏、力可拉敏等數(shù)十種生物堿。本發(fā)明提供一種通過離子交換色譜分離加蘭他敏的方法，具有收率高、純度好、省工時、省材料的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明的任務(wù)是按以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
含石蒜科生物堿植物提取物經(jīng)過預(yù)處理，根據(jù)所用樹脂的選擇性，將樣品處理為酸性、中性或堿性，以陽離子交換樹脂進(jìn)行吸附、洗脫，跟蹤檢測洗脫流份，濃縮富集加蘭他敏段流份，得加蘭他敏游離堿粗品，再以有機(jī)溶劑重結(jié)晶，得純度為99％左右的加蘭他敏游離堿結(jié)晶。同時，該過程還可得到其他副產(chǎn)物——純度很高的力可拉敏(lycoramine)和石蒜堿(lycorine)等生物堿。
所述陽離子交換樹脂的母體是苯乙烯二乙烯苯、酚醛樹脂、交聯(lián)聚苯乙烯、葡聚糖中之一種。陽離子交換樹脂的功能基是磺酸基、甲基磺酸基、磷酸基、羧基和酚基中之一種所形成的強(qiáng)酸、中強(qiáng)酸、弱酸陽離子交換樹脂。優(yōu)選的陽離子交換樹脂是STREAMLINE SP樹脂。
本發(fā)明基本工藝方法如下1.含石蒜科生物堿植物提取物的預(yù)處理預(yù)處理的目的是有利于植物提取物樣品的吸附或交換。根據(jù)所采用的色譜技術(shù)采用不同的預(yù)處理方法。其中包括，用酸或堿調(diào)節(jié)上樣溶液的pH值；通過過濾或離心的方法除去溶液中的固體顆粒；以及將樣品經(jīng)過初步分離后再進(jìn)行色譜分離等方法。用于調(diào)節(jié)pH值的酸無特定限制，優(yōu)選的是鹽酸或硫酸，濃度為0.1％-10％；用于調(diào)節(jié)pH值的堿也無特定限制，優(yōu)選的是氫氧化鈉或氨水，濃度為1％-20％2.樣品的交換或吸附離子交換樹脂進(jìn)行轉(zhuǎn)型，以任何方式放置于交換柱內(nèi)，將樣品與離子交換樹脂進(jìn)行吸附或交換。吸附或交換可采用動態(tài)法，也可采用靜態(tài)法，而優(yōu)選的是動態(tài)法。
3.洗滌以高于平衡緩沖溶液離子強(qiáng)度而低于洗脫溶液離子強(qiáng)度的洗滌溶液洗滌陽離子交換樹脂，從陽離子交換樹脂上洗脫下未被結(jié)合物。洗滌溶液體積為柱體積的2-3倍，流速為2-3ml/min。
4.有效成分的洗脫將吸附或交換上去的有效成分物質(zhì)釋放，重新轉(zhuǎn)人洗脫溶液?？刂葡疵撊芤后w積，流速2-3ml/min。洗脫方式可采用動態(tài)洗脫或靜態(tài)洗脫，但優(yōu)選的是動態(tài)洗脫方式。洗脫可采用梯度洗脫或非梯度洗脫。
洗脫溶液可以是比平衡溶液的離子強(qiáng)度大的鹽溶液，以及為增強(qiáng)離子洗脫效果而采取的有機(jī)溶劑作為增強(qiáng)劑。優(yōu)選的鹽是氯化鈉，濃度為0.1mol/L-10mol/L，優(yōu)選的增強(qiáng)劑是乙醇，濃度為10％-20％；洗脫溶液也可以是比平衡溶液pH值大的緩沖溶液；洗脫溶液還可以是堿和有機(jī)溶劑的混合溶液，優(yōu)選的堿是氨，濃度為1％-20％，優(yōu)選的有機(jī)溶劑是乙醇，濃度為10％-95％。
5.洗脫流份的跟蹤檢測與收集在洗脫流份時，應(yīng)進(jìn)行有效物質(zhì)加蘭他敏的跟蹤檢測。檢測方法可以應(yīng)用薄層層析(TLC)法，也可以應(yīng)用其他適于檢測加蘭他敏的方法。根據(jù)檢測結(jié)果，收集、合并與加蘭他敏相同Rf值的流份。
6.流份中加蘭他敏的濃縮富集濃縮富集洗脫流份中的加蘭他敏可以采用萃取和/或蒸餾濃縮的方法。
通常經(jīng)過濃縮富集，即可得到加蘭他敏游離堿的粗品。
7.重結(jié)晶可以使用任何常用的有機(jī)溶劑對加蘭他敏游離堿粗品進(jìn)行重結(jié)晶，優(yōu)選的溶劑是丙酮。經(jīng)過數(shù)次重結(jié)晶，得到純品加蘭他敏游離堿結(jié)晶。其純度在99％左右(HPLC)。
根據(jù)本發(fā)明的方法，可從植物材料中有效地獲得加蘭他敏，是一種適合于工業(yè)化生產(chǎn)的從含石蒜科生物堿的植物提取物中分離加蘭他敏的制備方法。具有收率高、純度好、工藝操作簡單、節(jié)省工時、原材料消耗少等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施方式
下列實(shí)施例用于詳細(xì)說明本發(fā)明，但不限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1石蒜科植物提取物10kg，加1％鹽酸溶液溶解、調(diào)節(jié)并保持溶液酸性。過濾除去溶液中不溶顆粒物，通過平衡好的STREAMLINE SP陽離子交換樹脂(2L)進(jìn)行交換，樹脂用水沖洗至中性，以1mol/L的氯化鈉溶液進(jìn)行梯度洗脫，以TLC法跟蹤檢測，收集與加蘭他敏有相同Rf值的流份，以飽和碳酸鈉溶液堿化至pH9.2，乙酸乙酯萃取5次(500ml×2，250ml×3)，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾至干，得到加蘭他敏游離堿粗品10.2g，以丙酮重結(jié)晶，得含量為99％左右的加蘭他敏游離堿結(jié)晶8.0g。
實(shí)施例2石蒜科植物提取物10kg，加1％鹽酸溶液溶解、調(diào)節(jié)并保持溶液酸性。過濾除去溶液中不溶顆粒物，通過轉(zhuǎn)型好的Amberlite CG-120陽離子交換樹脂(10L)進(jìn)行交換，樹脂用水沖洗至中性，以5％氨水/乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，以TLC法跟蹤檢測，收集與加蘭他敏有相同Rf值的流份，蒸餾回收乙醇。調(diào)節(jié)溶液至pH9.2，氯仿萃取5次(500ml×2，250ml×3)，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾至干，得到加蘭他敏游離堿粗品13.1g，以丙酮重結(jié)晶，得含量為99％左右的加蘭他敏游離堿結(jié)晶8.5g。
實(shí)施例3石蒜科植物提取物10kg，加1％鹽酸溶液溶解、調(diào)節(jié)并保持溶液酸性。過濾除去溶液中不溶顆粒物，通過轉(zhuǎn)型好的STREAMLINE SP陽離子交換樹脂(2L)進(jìn)行交換，樹脂用水沖洗至中性，分別以0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/L氯化鈉/20％乙醇溶液進(jìn)行洗脫，以TLC法跟蹤檢測，收集與加蘭他敏有相同Rf值的流份，以飽和碳酸鈉溶液堿化至pH9.2，乙酸乙酯萃取5次(500ml×2，250ml×3)，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾至干，得到加蘭他敏游離堿粗品10.5g，以丙酮重結(jié)晶，得含量為99％左右的加蘭他敏游離堿結(jié)晶8.1g。
實(shí)施例4石蒜科植物提取物10kg，加1％氫氧化鈉溶液溶解、調(diào)節(jié)并保持溶液堿性。過濾除去溶液中不溶顆粒物，通過轉(zhuǎn)型好的Amberlite IRC-50陽離子交換樹脂(10L)進(jìn)行交換，樹脂用水沖洗至中性，分別以0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/L的氯化鈉溶液進(jìn)行分段洗脫，以TLC法跟蹤檢測，收集與加蘭他敏有相同Rf值的流份，調(diào)節(jié)溶液至pH9.2，乙酸乙酯萃取5次(500ml×2，250ml×3)，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾至干，得到加蘭他敏游離堿粗品10.7g，以丙酮重結(jié)晶，得含量為99％左右的加蘭他敏游離堿結(jié)晶8.2g。
實(shí)施例5石蒜科植物提取物10kg，加1％氫氧化鈉溶液溶解、調(diào)節(jié)并保持溶液堿性。過濾除去溶液中不溶顆粒物，通過轉(zhuǎn)型好的Amberlite IRC-76陽離子交換樹脂(10L)進(jìn)行交換，樹脂用pH3.0的緩沖溶液沖洗，分別以pH3.0的0.1mol/L、0.4mol/L、0.8mol/L的氯化鈉溶液進(jìn)行分段洗脫，以TLC法跟蹤檢測，收集與加蘭他敏有相同Rf值的流份，以飽和碳酸鈉溶液堿化至pH9.2，乙酸乙酯萃取5次(500ml×2，250ml×3)，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾至干，得到加蘭他敏游離堿粗品9.7g，以丙酮重結(jié)晶，得含量為99％左右的加蘭他敏游離堿結(jié)晶7.3g。
以上實(shí)施例1～5所用石蒜科植物提取物，均可使用按“從天然植物中提取石蒜科生物堿的工藝”專利申請方法獲得的產(chǎn)物。該工藝方法系本申請人的另件發(fā)明，中國專利申請?zhí)枮?3153992.0。
權(quán)利要求
1.一種從含石蒜科生物堿植物提取物中分離加蘭他敏的方法，其特征在于，對經(jīng)過預(yù)處理的植物提取物，使用陽離子交換樹脂進(jìn)行吸附、洗脫，跟蹤檢測洗脫流份，濃縮富集加蘭他敏段流份，得加蘭他敏游離堿粗品，再以有機(jī)溶劑重結(jié)晶，得純品加蘭他敏游離堿結(jié)晶。
2.如權(quán)利要求1所述的分離加蘭他敏的方法，其特征在于，對植物提取物進(jìn)行預(yù)處理的方法是，用酸或堿調(diào)節(jié)上樣溶液的pH值。
3.如權(quán)利要求2所述的分離加蘭他敏的方法，其特征在于，用作預(yù)處理的酸是鹽酸或硫酸，濃度為0.1％-10％；用作預(yù)處理的的堿是氫氧化鈉或氨水，濃度為1％-20％。
4.如權(quán)利要求1所述的分離加蘭他敏的方法，其特征在于，所述陽離子交換樹脂的母體是苯乙烯二乙烯苯、酚醛樹脂、交聯(lián)聚苯乙烯、葡聚糖中之一種。
5.如權(quán)利要求1所述的分離加蘭他敏的方法，其特征在于，所述陽離子交換樹脂的功能基是磺酸基、甲基磺酸基、磷酸基、羧基和酚基中之一種所形成的強(qiáng)酸、中強(qiáng)酸、弱酸陽離子交換樹脂。
6.如權(quán)利要求1所述的分離加蘭他敏的方法，其特征在于，所述陽離子交換樹脂是STREAMLINE SP樹脂。
7.如權(quán)利要求1至6任一權(quán)利要求所述的分離加蘭他敏的方法，其特征在于，所述的離子交換方法，包括依次進(jìn)行的下列步驟①用平衡緩沖溶液吸附、交換；②用洗滌緩沖溶液洗滌陽離子交換樹脂；③用洗脫緩沖溶液洗脫陽離子交換樹脂。
8.如權(quán)利要求1所述的分離加蘭他敏的方法，其特征在于，在洗脫流份時應(yīng)用薄層層析(TLC)法進(jìn)行加蘭他敏的跟蹤檢測。
9.如權(quán)利要求1所述的分離加蘭他敏的方法，其特征在于，采用萃取和/或蒸餾濃縮的方法濃縮富集洗脫流份中的加蘭他敏。
10.如權(quán)利要求1所述的分離加蘭他敏的方法，其特征在于，用于加蘭他敏游離堿粗品重結(jié)晶的溶劑是丙酮。
11.如權(quán)利要求1所述的分離加蘭他敏的方法，其特征在于，樣品的交換或吸附采用動態(tài)法。
12.如權(quán)利要求7所述的分離加蘭他敏的方法，其特征在于，樣品的交換或吸附采用動態(tài)法。
13.如權(quán)利要求1所述的分離加蘭他敏的方法，其特征在于，洗脫溶液是下述三種溶液之一種①比平衡溶液的離子強(qiáng)度大的鹽溶液與10％-20％乙醇的混合溶液；②比平衡溶液pH值大的緩沖溶液；③堿和有機(jī)溶劑的混合溶液。
14.如權(quán)利要求7所述的分離加蘭他敏的方法，其特征在于，洗脫溶液是下述三種溶液之一種①比平衡溶液的離子強(qiáng)度大的鹽溶液與10％-20％乙醇的混合溶液；②比平衡溶液pH值大的緩沖溶液；③堿和有機(jī)溶劑的混合溶液。
15.如權(quán)利要求13或14所述的分離加蘭他敏的方法，其特征在于，用于配制洗脫溶液的鹽溶液為0.1mol/L-10mol/L氯化鈉溶液。
16.如權(quán)利要求13或14所述的分離加蘭他敏的方法，其特征在于，用于配制洗脫溶液的堿是1％-20％氨水。
17.如權(quán)利要求13或14所述的分離加蘭他敏的方法，其特征在于，用于配制洗脫溶液的有機(jī)溶劑是10％-95％乙醇。
18.如權(quán)利要求1或8所述的分離加蘭他敏的方法，其特征在于，所述的洗脫方式為梯度洗脫或非梯度洗脫。
全文摘要
本發(fā)明涉及植物提取物中有效成分的分離方法，特別是從含石蒜科生物堿的植物提取物中分離加蘭他敏的方法。其工藝是，將含石蒜科生物堿的植物提取物經(jīng)過預(yù)處理，經(jīng)陽離子交換樹脂吸附、洗脫，跟蹤檢測洗脫流份，濃縮富集加蘭他敏段流份，得加蘭他敏游離堿粗品，再以有機(jī)溶劑重結(jié)晶，得純度為99％左右的加蘭他敏游離堿結(jié)晶。
文檔編號C07D491/00GK1611502SQ20031010227
公開日2005年5月4日 申請日期2003年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月30日
發(fā)明者傅和亮, 王寧, 何宣揚(yáng), 王曉巖, 匡衛(wèi)文 申請人:廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司