專利名稱：：新的二環(huán)類激素敏感性脂酶抑制劑的制作方法苯并三唑在眾多領域中已被熟知，例如用于光化學(US4,255,510，柯達)或作為增食欲素(orexin)拮抗劑(WO02/090355，SKB)。而且，制備苯并三唑的合成法已由Katritzky等人于J.Org.Chem.1997，62，4155-4158中述及。另外已知用作為脂酶抑制劑的氨基甲酸酯，如例如ShamkantPatkar等人于PaulWoolley，SteffenB.Petterson(ed)，Lipase(1994)207-227或WO03/051842紅所述。令人驚訝的是，已顯示本發(fā)明的苯并三唑可顯示有關HSL即激素敏感性脂酶的活性。本發(fā)明涉及式I的苯并三唑其中R1至R8為H；其中基團R2或R3之一可代表Br、Cl、CH3、CN、NH2、NO2、CF3、OCH3、苯氧基、苯甲?；H(OH)-苯基、S-環(huán)己基、CO-OCH3；或者該系列的兩個取代基為R1＝Cl且R3＝CF3，或者R2＝F且R3＝Cl；n為整數(shù)0、1或2；且取代基R6或R7之一可代表R6為CH3；R7為CH3、C2H5、CH(CH3)2、C(CH3)3、CF3、Br、Cl、芐基或CO-OC2H5；或者R6和R7均為CH3；或者該環(huán)可包含一個雙鍵以替代R6和R7；或者R5和R6或者R6和R7可與攜帶它們的碳原子一起代表稠合苯環(huán)，或者如果n＝0，可代表環(huán)己二基(cyclohexanediyl)；其中在R6/R7為閉合環(huán)的情況下，該取代基可任選被NH2或NO2單取代或被OCH3單取代或雙取代；且R7和R8一起為環(huán)戊基、二氮雜或＝CH2；其中R1至R5和R8＝H、n＝1且R6/R7為稠合苯以及R1、R3-R8＝H、R2＝CH3且n＝1的化合物除外。本發(fā)明涉及式I化合物的外消旋物、外消旋混合物和純對映體形式，以及其非對映體及其混合物形式。烷基可以是直鏈或支鏈的。鹵素為氟、氯或溴、特別是氟或氯。優(yōu)選式I的苯并三唑，其中R1至R8為H；其中基團R2或R3之一可代表R2為Br、Cl、CN、NO2、CF3、OCH3、苯氧基、苯甲?；?、CH(OH)-苯基、S-環(huán)己基、CO-OCH3；R3為CH3、CN、Br、Cl、NH2、NO2、苯甲?；Ｌ貏e優(yōu)選式I的苯并三唑，其中R1至R8為H；其中基團R2或R3之一可代表R2為Br、Cl、NO2、OCH3、苯氧基、CO-OCH3；R3為NH2；或者該系列的兩個取代基為R2＝F且R3＝Cl；n為整數(shù)1或2；且取代基R5或R6之一可代表R6為CH3；R7為CH3、CF3或Br；或者該環(huán)可包含一個雙鍵以替代R6和R7，或者R6和R7可與攜帶它們的碳原子一起代表稠合苯環(huán)，該稠合苯環(huán)可任選被NH2單取代或被OCH3單取代或雙取代；且R7和R8一起為環(huán)戊基，或者n為整數(shù)0；且R6和R7可與攜帶它們的碳原子一起代表稠合苯環(huán)或環(huán)己二基；或者式I的苯并三唑，其中R1至R8為H；其中基團R2或R3之一可代表R2為Br、CN、CF3、OCH3、苯氧基、苯甲?；H(OH)-苯基、S-環(huán)己基；R3為CN、Br、Cl、NO2、苯甲?；?；或者該系列的兩個取代基為R1＝Cl且R3＝CF3；n為整數(shù)1；且取代基R6和R7之一可代表R6為CH3；R7為CH3、C2H5、CH(CH3)2、C(CH3)3、芐基或CO-OC2H5；或者R6和R7均為CH3；或者該環(huán)可包含一個雙鍵以替代R6和R7，或者R5和R6或R6和R7可與攜帶它們的碳原子一起代表稠合苯環(huán)；其中R1至R5和R8＝H、n＝1且R6/7＝稠合苯的化合物除外。非常特別優(yōu)選以下結構的苯并三唑或以下結構的苯并三唑還非常特別優(yōu)選以下結構的苯并三唑以及以下結構的苯并三唑由于可藥用鹽在水中的溶解度大于初始或基礎化合物，因此特別適于醫(yī)學應用。這些鹽必需具備可藥用陰離子或陽離子。本發(fā)明化合物的適宜的可藥用酸加成鹽是無機酸的鹽，所述無機酸例如鹽酸、氫溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸，以及有機酸的鹽，所述有機酸例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、檸檬酸、乙磺酸、富馬酸、葡萄糖酸、乙醇酸、羥乙磺酸、乳酸、乳糖酸、馬來酸、蘋果酸、甲磺酸、琥珀酸、對苯甲磺酸和酒石酸。適宜的可藥用堿鹽為銨鹽、堿金屬鹽(如鈉鹽和鉀鹽)、堿土金屬鹽(如鎂鹽和鈣鹽)、氨丁三醇(2-氨基-2-羥甲基-1，3-丙二醇)、二乙醇胺、賴氨酸或乙二胺的鹽。與不可藥用陰離子所成鹽、例如三氟乙酸鹽同樣屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)，可作為制備或純化可藥用鹽的有用中間體和/或用于非治療應用，例如體外應用。此處所用的術語“生理學官能衍生物”指的是本發(fā)明式I化合物的任何生理上耐受的衍生物、例如酯，其施用于哺乳動物如人時，能夠(直接或間接)形成式I化合物或其活性代謝物。生理學官能衍生物還包括本發(fā)明化合物的前體藥物，例如H.Okada等人于Chem.Pharm.Bull.1994，42，57-61中所述。該類前體藥物可在體內(nèi)代謝為本發(fā)明的化合物。這些前體藥物本身可具有或不具有活性。本發(fā)明的化合物也可以以各種多晶型形式存在，例如無定型和晶體多晶型形式。本發(fā)明化合物的所有多晶型形式均屬于本發(fā)明的范圍并且構成本發(fā)明的另一方面。下文中所有對“式I化合物”的指示均指如上所述的式I化合物以及它們的鹽、溶劑合物以及如此處所述的生理學官能衍生物。式(I)化合物也可以與其他活性成分組合施用。獲得所期望生物效應所需的式I化合物的量依賴于多種因素，例如所選擇的特定化合物、預定用途、施用方式以及患者的臨床病癥。日劑量通常為每天每公斤體重0.3mg至100mg(通常3mg至50mg)，例如3-10mg/kg/天。靜脈內(nèi)劑量可以是例如0.3mg/kg至1.0mg/kg，該劑量可適宜地以每分鐘每公斤10ng至100ng的輸液施用。用于這些目的的適宜的輸注溶液每毫升可含有例如0.1ng至10mg、通常1ng至10mg。單劑量可含有例如1mg至10g活性成分。因此，注射用安瓿可含有例如1mg至100mg活性成分，可口服施用的單劑量制劑例如膠囊或片劑可含有例如1.0mg至1000mg、通常10mg至600mg活性成分。治療上述病癥時，可以使用式I化合物本身，但它們優(yōu)選為含有可藥用載體的藥物組合物形式。載體當然在與組合物的其他成分相容方面必須是可接受的并且對患者健康無害。載體可以是固體、液體或者兩者兼具，且優(yōu)選與化合物配制為單一劑量，例如片劑，其可含有以重量計0.05％至95％的活性成分。其他藥物活性物質(zhì)同樣可以存在，包括其他式I化合物。本發(fā)明的藥物組合物可通過某種已知的制藥方法制備，這些方法基本上包括將所述成分與藥理學可接受的載體和/或賦形劑混合。本發(fā)明的藥物組合物適于口服、直腸、局部、經(jīng)口(例如舌下)以及胃腸外(例如皮下、肌肉內(nèi)、皮內(nèi)或者靜脈內(nèi))施用，但是最適宜的施用方式在每種個別情況下取決于待治療病癥的性質(zhì)和嚴重程度以及每種情況下所使用的式I化合物的性質(zhì)。包衣制劑和包衣緩釋制劑也屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)。優(yōu)選耐酸和耐胃液的制劑。適宜的耐胃液的包衣包括醋酸纖維素鄰苯二甲酸醋、聚醋酸乙烯鄰苯二甲酸酯、羥丙甲基纖維素鄰苯二甲酸酯和甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯的陰離子聚合物。用于口服施用的適宜的藥物組合物可以是獨立單位的形式，例如膠囊、糯米紙囊劑(wafer)、口含片(suckabletablet)或者片劑，其中的每一種都含有限定量的式I化合物；粉末劑或顆粒劑；水或非水液體中的溶液或混懸液；或水包油或油包水型乳劑。前面已經(jīng)述及，這些組合物可通過任何適合的制藥方法制備，這些方法包括使活性成分和載體(可由一種或多種附加成分組成)接觸的步驟。組合物通常通過均一或均勻混合活性成分和/或細碎的固體載體、然后在必要時將產(chǎn)物成型而制備。因此，例如，片劑可通過將化合物的粉末或顆粒酌情與一種或多種附加成分壓制或模壓而制備。壓制片劑可通過將自由流動形式的例如粉末或顆粒形式的化合物酌情與粘合劑、助流劑、惰性稀釋劑和/或一種(多種)表面活性劑/分散劑混合、在適宜的機器中壓片而制備。模壓片(moldedtablet)可通過將粉末形式且用惰性液體稀釋劑潤濕的化合物在適宜的機器中模壓而制備。適合經(jīng)口(舌下)施用的藥物組合物包括口含片和錠劑，口含片含有式I化合物以及矯味劑，通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠，錠劑在惰性基質(zhì)如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠中包含所述化合物。適合胃腸外施用的藥物組合物優(yōu)選包括式I化合物的無菌水制劑，其優(yōu)選與預計受體的血液等張。這些制劑優(yōu)選經(jīng)靜脈內(nèi)施用，但也可以通過皮下、肌肉內(nèi)或皮內(nèi)注射進行施用。這些制劑可優(yōu)選通過將化合物與水混合、使所得溶液無菌并與血液等張而制備。本發(fā)明的注射用組合物通常含有以重量計0.1％至5％的活性化合物。適合直腸施用的藥物組合物優(yōu)選為單劑量栓劑形式。它們可通過將式I化合物與一種或多種常規(guī)固體載體、例如可可脂混合并將所得混合物成型而制備。適合局部施用于皮膚的藥物組合物優(yōu)選為軟膏劑、霜劑、洗劑、糊劑、噴霧劑、氣霧劑或油劑形式?？捎玫妮d體有凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、醇類以及兩種或多種上述物質(zhì)的組合。活性成分通常以組合物重量的0.1％至15％、例如0.5％至2％的濃度存在。經(jīng)皮施用也是可能的。適合于經(jīng)皮使用的藥物組合物可以是單一硬膏劑的形式，其適合于長期與患者的表皮緊密接觸。這種硬膏劑適宜地含有活性成分于酌情緩沖的水溶液中、溶解和/或分散于膠粘劑中或分散于聚合物中。活性成分的適宜濃度是約1％至35％、優(yōu)選約3％至15％。具體地，活性成分還可以通過電遷移或離子電滲釋放，如例如PharmaceuticalResearch2(6)318(1986)所述。適合用于組合產(chǎn)品的其他活性成分有在RoteListe2001第12章中提到的所有抗糖尿病藥物。它們可以與本發(fā)明的式I化合物組合，特別用于協(xié)同提高療效?；钚猿煞纸M合的施用可通過向患者分別施用各活性成分或以其中多種活性成分存在于一種藥物制劑中的組合產(chǎn)品形式進行。下列大多數(shù)活性成分均公開于USAN的USPDictionary和InternationalDrugNames，US藥典，Rockvile2001?？固悄虿∷幬锇ㄒ葝u素和胰島素衍生物，例如Lantus(參見www.lantus.com)或HMR1964，速效胰島素(參見US6,221,633)，GLP-1衍生物、例如公開于NovoNordiskA/S的WO98/08871中的那些，以及口服有效的降血糖活性成分?？诜行У慕笛腔钚猿煞謨?yōu)選包括磺酰脲類、雙胍類、格列奈類(meglitimides)、噁二唑烷二酮類、噻唑烷二酮類、葡糖苷酶抑制劑、胰高血糖素拮抗劑、GLP-1激動劑、鉀通道開放劑如公開于NovoNordiskA/S的WO97/26265和WO99/03861中的那些、胰島素敏化劑、涉及刺激葡糖異生和/或糖原分解的肝酶抑制劑、葡萄糖攝取調(diào)節(jié)劑、改變脂質(zhì)代謝的化合物如抗高血脂活性成分以及抗脂血癥活性成分、減少食物攝取的化合物、PPAR和PXR激動劑以及作用于β細胞的ATP-依賴型鉀通道的活性成分。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與HMGCoA還原酶抑制劑組合施用，例如辛伐他汀、氟伐他汀、普伐他汀、洛伐他汀、托伐他汀、西伐他汀、羅素伐他汀(rosuvastatin)。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與膽固醇吸收抑制劑組合施用，例如依替米貝(ezetimibe)、tiqueside、帕馬苷(pamaqueside)。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與PPARγ激動劑組合施用，例如羅格列酮、吡格列酮、JTT-501、GI262570。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與PPARα激動劑組合施用，例如GW9578、GW7647。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與混合型PPARα/γ激動劑組合施用，例如GW1536、AVE8042、AVE8134、AVE0847或者如WO00/64888、WO00/64876、WO03/020269所述。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與貝特類藥物(fibrate)組合施用，例如非諾貝特、氯貝丁酯、苯札貝特。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與MTP抑制劑組合施用，例如implitapide、BMS-201038、R-103757。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與膽汁酸吸收抑制劑(參見例如US6,245,744或US6,221,897)例如HMR1741組合施用。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與CETP抑制劑例如JTT-705組合施用。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與聚合型膽汁酸吸附劑組合施用，例如消膽胺、colesevelam。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與LDL受體誘導劑(參見US6,342,512)組合施用，例如HMR1171、HMR1586。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與ACAT抑制劑例如阿伐麥布(avasimibe)組合施用。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與抗氧化劑例如OPC-14117組合施用。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與脂蛋白脂肪酶抑制劑例如NO-1886組合施用。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與ATP-檸檬酸裂合酶抑制劑例如SB-204990組合施用。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與鯊烯合成酶抑制劑例如BMS-188494組合施用。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與脂蛋白(a)拮抗劑例如CI-1027或煙酸組合施用。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與脂酶抑制劑例如奧利斯他組合施用。在本發(fā)明的一項實施方案中，式I化合物與胰島素組合施用。在一項實施方案中，式I化合物與磺酰脲類藥物組合施用，例如甲苯磺丁脲、格列本脲、格列吡嗪或格列美脲。在一項實施方案中，式I化合物與雙胍類藥物例如二甲雙胍組合施用。在另一項實施方案中，式I化合物與格列奈類藥物例如瑞格列奈組合施用。在一項實施方案中，式I化合物與噻唑烷二酮類藥物組合施用，例如曲格列酮、環(huán)格列酮、吡格列酮、羅格列酮或在Dr.Reddy’s研究基金會的WO97/41097中公開的化合物，尤其是5-[[4-(3，4-二氫-3-甲基-4-氧代-2-喹唑啉基甲氧基)苯基]甲基1-2，4-噻唑烷二酮。在一項實施方案中，式I化合物與α-葡糖苷酶抑制劑組合施用，例如米格列醇或阿卡波糖。在一項實施方案中，式I化合物與作用于β細胞的ATP-依賴型鉀通道的活性成分組合施用，例如甲苯磺丁脲、格列本脲、格列吡嗪、格列美脲或瑞格列奈。在一項實施方案中，式I化合物與超過一種的上述化合物組合施用，例如與磺酰脲和二甲雙胍、與磺酰脲和阿卡波糖、與瑞格列奈和二甲雙胍、與胰島素和磺酰脲、與胰島素和二甲雙胍、與胰島素和曲格列酮、與胰島素和洛伐他汀等組合。在另一項實施方案中，式I化合物與以下藥物組合施用CART調(diào)節(jié)劑(參見“可卡因-苯丙胺-調(diào)節(jié)的轉錄影響小鼠的能量代謝、焦慮及胃排空”，Asakawa，A等人，M.HormoneandMetabolicResearch(2001)，33(9)，554-558)；NPY拮抗劑，例如萘-1-磺酸{4-[(4-氨基喹唑啉-2-基氨基)甲基1-環(huán)己基甲基}酰胺鹽酸鹽(CGP71683A)；MC4激動劑(例如1-氨基-1，2，3，4-四氫萘-2-甲酸[2-(3a-芐基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氫吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(4-氯苯基)-2-氧代乙基1-酰胺(WO01/91752))；增食欲素拮抗劑(例如1-(2-甲基苯并噁唑-6-基)-3-[1，5]萘啶-4-基脲鹽酸鹽(SB-334867-A))；H3激動劑(3-環(huán)己基-1-(4，4-二甲基-1，4，6，7-四氫咪唑并[4，5-c]吡啶-5-基丙-1-酮草酸鹽(WO00-63208))；TNF激動劑；CRF拮抗劑(例如[2-甲基-9-(2，4，6-三甲基苯基)-9H-1，3，9-三氮雜芴-4-基]二丙基胺(WO00/66585))；CRFBP拮抗劑(例如urocortin)；urocortin激動劑；β3激動劑(例如1-(4-氯-3-甲磺?；谆?苯基)-2-[2-(2，3-二甲基-1H-吲哚-6-基氧基)乙基氨基]乙醇鹽酸鹽(WO01/83451))；MSH(促黑激素)激動劑；CCK-A激動劑(例如{2-[4-(4-氯-2，5-二甲氧基苯基)-5-(2-環(huán)己基乙基)噻唑-2-基氨甲?；?-5，7-二甲基吲哚-1-基}乙酸三氟乙酸鹽(WO99/15525))；5-羥色胺再攝取抑制劑(例如右旋芬氟拉明)；混合型5-羥色胺能和去甲腎上腺素能化合物(例如WO00/71549)；5HT激動劑，例如1-(3-乙基苯并呋喃-7-基)-哌嗪草酸鹽(WO01/09111)；鈴蟾肽激動劑；galanin拮抗劑；生長激素(例如人生長激素)；釋放生長激素的化合物(6-芐氧基-1-(2-二異丙基氨基乙基氨基甲?；?-3，4-二氫-1H-異喹啉-2-甲酸-3-叔丁酯(WO01/85695))；TRH激動劑(參見例如EP0462884)；解偶聯(lián)蛋白2或3調(diào)節(jié)劑；瘦素(leptin)激動劑(參見例如Lee，DanielW；Leinung，MatthewC.；Rozhavskaya-Arena，Marina；Grasso，Patricia.“瘦素激動劑作為治療肥胖的潛在手段”，DrugsoftheFuture(2001)，26(9)，873-881)；DA激動劑(溴隱亭、Doprexin)；脂酶/淀粉酶抑制劑(參見WO00/40569)；PPAR調(diào)節(jié)劑(例如WO00/78315)；RXR調(diào)節(jié)劑或TR-β激動劑。在本發(fā)明的一項實施方案中，其他活性成分是瘦素，參見例如“瘦素的治療應用前景”，Salvador，Javier；Gomez-Ambrosi，Javier；Fruhbeck，Gema，ExpertOpiniononPharmacotherapy(2001)，2(10)，1615-1622。在一項實施方案中，其他活性成分是右旋苯丙胺或苯丙胺。在一項實施方案中，其他活性成分是芬氟拉明或右旋芬氟拉明。在另一項實施方案中，其他活性成分是西布茶明。在一項實施方案中，其他活性成分是奧利斯他。在一項實施方案中，其他活性成分是嗎吲哚或苯丁胺。在另一項實施方案中，式I化合物與填充劑、優(yōu)選不溶性填充劑組合施用(參見例如carob/Caromax(zunftHJ等人，“Carob漿制劑用于治療高膽固醇血癥”，ADVANCESINTHERAPY(2001年9月-10月)，18(5)，230-6.)。Caromax是一種含有carob的產(chǎn)品，由Nutrinova，NutritionSpecialties&FoodIngredientsGmbH，IndustrieparkHchst，65926Frankfurt/Main出品))。與Caromax組合可以采用一種制劑或通過分別施用式I化合物和Caromax進行。在這方面，Caromax還可以以食品形式例如焙烘品或穆茲利(mueslibar)施用。應該理解，本發(fā)明化合物與上述一種或多種化合物以及任選一種或多種其他藥理學活性物質(zhì)的每一種適宜的組合均應視為落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。本發(fā)明的式I的苯并三唑通過本身已知的方法制備，例如通過用氨基甲酰氯3酰化取代或未取代的苯并三唑2(方法A)，或者在兩個步驟中、通過使苯并三唑與光氣反應并進一步使所得苯并三唑碳酰氯與胺或苯胺反應(方法B)。由于這些反應通常會釋放酸，因此建議加入堿如嘧啶、三乙胺、氫氧化鈉溶液或堿金屬碳酸鹽，以增加反應速度。該反應可在寬溫度范圍內(nèi)進行。通常已證明在0℃至所用溶劑的沸點溫度下操作是有利的。所使用溶劑的實例有二氯甲烷、THF、DMF、甲苯、乙酸乙酯、正庚烷、二氧雜環(huán)己烷、乙醚。本發(fā)明的式I化合物對于激素敏感性脂酶HSL即脂肪細胞中的一種變構酶具有令人驚訝的抑制作用，該酶受胰島素抑制并且負責脂肪細胞中脂肪的分解，從而用于將脂肪組分轉移至血流中。因此本發(fā)明化合物對該酶的抑制作用相當于胰島素樣作用，最終導致血中游離脂肪酸以及血糖的降低。因而它們可用于代謝紊亂，例如非胰島素依賴型糖尿病、糖尿病綜合征、X綜合征以及直接胰腺損傷。抑制β細胞中的HSL應導致胰島素釋放的直接恢復(M.Winzell等人，Diabetes，Vol52，2003年8月，2057-2065)。因此根據(jù)本發(fā)明的式I化合物還可用于胰島素釋放。在以下酶試驗系統(tǒng)中對本發(fā)明式I化合物的作用進行了試驗底物制備NAG(NBD單?；视?底物制備將6mg磷脂酰膽堿與6mg磷脂酰肌醇分別溶于1ml氯仿中。將10mgNAG溶于1ml氯仿中。將兩份磷脂酰肌醇溶液(例如83.5μl)和一份磷脂酰膽堿溶液(例如41.5μl)以及100μlNAG溶液吸移至塑性閃爍容器中(試驗終濃度為0.0375mg磷脂/ml；0.05mg/NAG/ml)。通入N2流將氯仿(總體積為225μl)完全除去。經(jīng)干燥的底物可于4℃保存不超過三天。為制備具有NAG夾層的磷脂泡囊/膠束(于試驗當天)，將經(jīng)干燥的底物置于20ml試驗緩沖液(25mMTris/HCl，pH7.4；150mMNaCl)中，然后用超聲波探針(BransonSonifierII型，standardmicrotip)進行兩次超聲處理第一次處理，設置為2，2×1分鐘，各次之間于冰上1分鐘；第二次處理，設置為4，2×1分鐘，各次之間于冰上1分鐘。在該操作中，由于NAG嵌入脂囊/膠囊中的磷脂分子之間，底物溶液的顏色從黃色(最大消光481nm)變?yōu)榧t色(最大消光550nm)。在用作底物前(接下來的兩小時內(nèi))，將該溶液在冰上繼續(xù)培養(yǎng)15分鐘。間接NAG試驗法該試驗在1.5mlEppendorf容器或96-孔板中于30℃進行60分鐘。為檢出HSL抑制劑，于含有16.6％DMSO的試驗緩沖液(25mMTris/HCl，pH7.4；150mMNaCl)中引入10μl供試物質(zhì)。加入180μl底物溶液(20μg/ml磷脂酰膽堿、10μg/ml磷脂酰肌醇、50μg/mlNAG于試驗緩沖液中)。在30℃預培養(yǎng)15分鐘后，吸移20μl以試驗緩沖液稀釋1至4倍的酶溶液，并立即于比色光度計(0.5ml比色杯)或者微量滴定板讀數(shù)器中于480nm測定消光值。在30℃培養(yǎng)60分鐘后，再次測定消光值。以480nm處消光值的增加作為酶活性的量度。在標準條件下，20μg部分純化的HSL導致的變化為0.4，等于4000arb.單位的消光值。直接NAG試驗法作為測量底物溶液消光值改變的替代選擇，通過相分離/薄層色譜考察HSL反應的產(chǎn)物。為此，向2mlEppendorf容器中的培養(yǎng)混合物(總體積200μl，參見間接NAG試驗法)中加入1.3ml甲醇/氯仿/庚烷(10∶9∶7)，然后加入0.4ml0.1MNaOH。劇烈混合(10秒)后，通過離心引發(fā)相分離(800×g，20分鐘，室溫)。從上層水相取出等體積(例如0.4ml)溶液，在光度計中測定481nm處的消光值。對于薄層色譜法，將水相干燥(SpeedVac)，然后置于50μl四氫呋喃中。將5μl樣品點于硅膠Si-60板(Merck)上。用78ml二乙醚/22ml石油醚/1ml冰醋酸作為流動相進行薄層色譜法。所釋放的發(fā)熒光的NBD脂肪酸的量通過磷光顯影(Phosphorimaging)(MolecularDynamics，Storm840和ImageQuantSoftware)測定，激發(fā)波長為460nm，發(fā)射波長為540-560nm。酶的制備部分純化HSL的制備根據(jù)已發(fā)表的膠原酶處理方法(例如S.Nilsson等人，Anal.Biochem.158，1986，399-407；G.Fredrikson等人，J.Biol.Chem.256，1981，6311-6320；H.Tornquist等人，J.Biol.Chem.251，1976，813-819)，從未處理過的雄性大鼠(Wistar，220-250g)的附睪脂肪組織中獲取離體大鼠脂肪細胞。將得自10只大鼠的脂肪細胞浮選清洗三次，每次使用50ml均化緩沖液(25mlTris/HCl，pH7.4，0.25M蔗糖，1mMEDTA，1mMDTT，10μg/ml亮抑酶肽，10μg/ml抗蛋白酶，20μg/ml抑胃酶肽)，最后置于10ml均化緩沖液中。將脂肪細胞在Teflon-in-glass均化儀(Braun-Melsungen)中均化，條件為15℃，1500rpm，10沖程。將均漿離心(SorvallSM24管，5000rpm，10分鐘，4℃)。將頂部脂肪層與沉淀之間的下層清液除去并重復離心。將由此所得的下清液再次離心(SorvallSM24管，20000rpm，45分鐘，4℃)。除去下清液，加入1g肝素-瓊脂糖(Pharmacia-Biotech，CL-6B，用25mMTris/HCL，pH7.4，150mMNaCl清洗5次)。在4℃培養(yǎng)60分鐘后(每間隔15分鐘充分振蕩)，將混合物離心(SorvallSM24管，3000rpm，10分鐘，4℃)。通過加入冰醋酸將上清液調(diào)至pH5.2，在4℃培養(yǎng)30分鐘。離心收集沉淀(SorvallSS34，12000rpm，10分鐘，4℃)并懸浮于2.5ml20mMTris/HCl，pH7.0，1mMEDTA，65mMNaCl，13％蔗糖，1mMDTT，10μg/ml亮抑酶肽/抑胃酶肽/抗蛋白酶。將懸液在4℃相對于25mMTris/HCl，pH7.4，50％甘油，1mMDTT，10μg/ml亮抑酶肽/抑胃酶肽/抗蛋白酶透析過夜，然后加載于hydroxiapatite柱(每ml懸液0.1g，用10mM磷酸鉀pH7.0、30％甘油、1mMDTT平衡)。將柱子用4倍體積的平衡緩沖液以20-30ml/h的流速清洗。于4℃下，用含0.5M磷酸鉀的一體積平衡緩沖液洗脫HSL，然后透析(見上)并使用超濾儀(AmiconDiafloPM10Filter)濃縮5-10倍。半純化HSL可于-70℃保存4-6周。測定為制備底物，將25-50μCi[3H]三油酰甘油(于甲苯中)、6.8μmol未標記的三油酰甘油和0.6mg磷脂(磷脂酰膽堿/磷脂酰肌醇3∶1w/v)混合、經(jīng)N2干燥、然后通過超聲處理(Branson250，microtip，設置1-2，2×1min，間隔1min)溶于2ml0.1MKPi(pH7.0)中。加入1mlKpi并重新超聲處理(于冰上4×30秒，間隔30秒)后，加入1ml20％BSA(于Kpi中)(三油酰甘油的終濃度為1.7mM)。反應時，將100μl底物溶液吸移至100μlHSL溶液中(HSL如上制備，稀釋于20mMKPi，pH7.0，1mMEDTA，1mMDTT，0.02％BSA，20μg/ml抑胃酶肽，20μg/ml亮抑酶肽)，并在37℃培養(yǎng)30分鐘。加入3.25ml甲醇/氯仿/庚烷(10∶9∶7)和1.05ml0.1MK2CO3、0.1M硼酸(pH10.5)，然后充分混合，最后離心(800×g，20分鐘)。在相分離后，除去一當量的上層相(1ml)，通過液閃測量測定放射活性。評價物質(zhì)的測試通常在四份獨立的混合物中進行。通過與未經(jīng)抑制的對照反應比較，測定供試物質(zhì)對HSL酶活性的抑制作用。從包含至少10種濃度的供試物質(zhì)的抑制曲線計算IC50。使用GRAPHIT，Elsevier-BIOSOFT軟件包進行數(shù)據(jù)處理。在該試驗中，實施例1-55的化合物顯示抑制作用，IC50在0.04-5μM范圍內(nèi)。實施例根據(jù)隨后所述的方法制備以下實施例。方法A向2mmol1H-苯并三唑于吡啶(5ml)和二氯甲烷(10ml)中的溶液中加入相應的氨基甲酰氯(1mmol)于二氯甲烷(10ml)中的溶液中。將反應混合物在RT下攪拌16小時，然后與EtOAc(15ml)混合，并通過硅膠過濾，然后濃縮濾液。將產(chǎn)物通過制備型HPLC純化并凍干。方法B實施例a)苯并三唑-1-碳酰氯溶液的制備在冰冷卻下，將苯并三唑(6g，50.4mmol)于THF(100ml)中的溶液滴加至光氣溶液(20％于甲苯中；90ml；182mmol)中。移走冰浴，然后在RT下進一步將溶液攪拌2小時。將溶劑蒸餾出來，并將殘余物置于THF中，使總體積至25ml。b)苯并三唑碳酰氯反應生成相應的苯并三唑-1-甲酰胺和酰苯胺在每種情況下，將10胺或苯胺(2mmol)引入THF(1ml)中，加入吡啶(0.2ml)。將混合物與苯并三唑-1-碳酰氯溶液(1ml，～2mmol)一起保溫，并在RT下攪拌16小時。然后將混合物用乙酸乙酯(5ml)稀釋并通過硅膠過濾，將濾液真空蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物通過快速色譜法純化。實施例13-(4-甲基哌啶-1-羰基)-3H-苯并三唑-5-甲酸甲酯M+H+303.14實施例2(8-氮雜-螺[4.5]癸-8-基)-苯并三唑-1-甲酮M+H+285.16實施例3苯并三唑-1-基-(6，7-二甲氧基-3，4-二氫-1H-異喹啉2-基)-甲酮M+H+339.13實施例4(5-苯氧基苯并三唑-1-基)-(4-三氟甲基哌啶-1-基)甲酮M+H+391.13實施例5(6-氯-5-氟苯并三唑-1-基)-(4-甲基哌啶-1-基)甲酮M+H+297.74實施例6苯并三唑-1-基-(4-溴哌啶-1-基)甲酮M+H+310.3實施例7苯并三唑-1-基-(4-三氟甲基哌啶-1-基)甲酮M+H+299.18實施例8苯并三唑-1-基-(1，3-二氫異吲哚-2-基)甲酮M+H+265.0實施例91-(3，6-二氫-2H-吡啶-1-羰基)-1H-苯并三唑-5-甲酸甲酯M+H+287.04實施例10(3，6-二氫-2H-吡啶-1-基)-(5-硝基苯并三唑-1-基)甲酮M+H+296.21實施例11(3，4-二氫-1H-異喹啉-2-基)-(5-硝基苯并三唑-1-基)甲酮M+H+324.10實施例12(5-溴苯并三唑-1-基)-(3，6-二氫-2H-吡啶-1-基)甲酮M+H+306.98實施例13(5-溴苯并三唑-1-基)-(3-三氟甲基哌啶-1-基)甲酮M+H+377.30實施例14(5-溴苯并三唑-1-基)-(3，4-二氫-1H-異喹啉-2-基)甲酮M+H+357.04實施例15苯并三唑-1-基-(八氫異吲哚-2-基)甲酮M+H+271.15實施例16(7-氨基-3，4-二氫-1H-異喹啉-2-基)苯并三唑-1-基甲酮M+H+294.0實施例17(3，4-二氫-1H-異喹啉-2-基)-(5-甲氧基苯并三唑-1-基)甲酮M+H+309.04實施例18(5-甲氧基苯并三唑-1-基)-(3-甲基哌啶-1-基)甲酮M+H+275.5實施例19(6-氨基苯并三唑-1-基)-(4-甲基哌啶-1-基)甲酮M+H+260.1實施例20(5-氯苯并三唑-1-基)-(4-甲基哌啶-1-基)甲酮M+H+279.6實施例21苯并三唑-1-基-(1，2，6-三氮雜-螺[2.5]辛-1-烯-6-基)甲酮M+H+279.19實施例22苯并三唑-1-基-(4-乙基哌啶-1-基)甲酮M+H+259.04實施例23(4-甲基哌啶-1-基)-(6-硝基苯并三唑-1-基)甲酮M+H+290.4實施例241-(苯并三唑-1-羰基)哌啶-4-甲酸乙酯M+H+303.13實施例25苯并三唑-1-基-(4-甲基哌啶-1-基)甲酮M+H+245.0實施例263-(4-甲基哌啶-1-羰基)-3H-苯并三唑-5-腈M+H+270.12實施例27苯并三唑-1-基-(3，4-二氫-1H-異喹啉-1-基)甲酮M+H+279.11實施例28苯并三唑-1-基-(3，4-二氫-2H-喹啉-1-基)甲酮M+H+279.2實施例29(6-甲基苯并三唑-1-基)-吡咯烷-1-基甲酮M+H+231.11實施例30苯并三唑-1-基-(3-甲基哌啶-1-基)甲酮M+H+245.13實施例31苯并三唑-1-基-(3，4-二甲基哌啶-1-基)甲酮M+H+259.14實施例32[1-(4-甲基哌啶-1-羰基)-1H-苯并三唑-5-基]苯基甲酮M+H+349.15實施例33(4-甲基哌啶-1-基)-(5-三氟甲基苯并三唑-1-基)甲酮M+H+313.5實施例34(6-溴苯并三唑-1-基)-(4-甲基哌啶-1-基)甲酮M+H+324.0實施例35苯并三唑-1-基-(4-叔-丁基哌啶-1-基)甲酮M+H+287.17實施例36[5-(羥基苯基甲基)苯并三唑-1-基]-(4-甲基哌啶-1-基)-甲酮M+H+350.17實施例37(4-甲基哌啶-1-基)-(5-苯氧基苯并三唑-1-基)甲酮M+H+337.3實施例38(5-環(huán)己基硫基苯并三唑-1-基)-(4-甲基哌啶-1-基)甲酮M+H+359.17實施例39苯并三唑-1-基-(4-異丙基哌啶-1-基)甲酮M+H+273.3實施例40(6-氯苯并三唑-1-基)-(4-甲基哌啶-1-基)甲酮M+H+279.5實施例41苯并三唑-1-基-(6-甲氧基-3，4-二氫-1H-異喹啉-2-基)甲酮M+H+309.3實施例42苯并三唑-1-基-(4-芐基哌啶-1-基)甲酮M+H+321.1實施例43(5-溴苯并三唑-1-基)-(3-甲基哌啶-1-基)甲酮M+H+325.31實施例441-(3，4-二氫-1H-異喹啉2-羰基)-1H-苯并三唑-5-腈M+H+270.12實施例45(4-氯-6-三氟甲基苯并三唑-1-基)-(3，4-二氫-1H-異喹啉-2-基)甲酮M+H+381.06實施例461-(3，4-二氫-2H-喹啉-1-羰基)-1H-苯并三唑-5-腈M+H+304.11實施例47(4-氯-6-三氟甲基苯并三唑-1-基)-(3，6-二氫-2H-吡啶-1-基)-甲酮M+H+331.04實施例48苯并三唑-1-基-(7-甲氧基-3，4-二氫-1H-異喹啉-2-基)甲酮M+H+309.1實施例49(5-甲氧基苯并三唑-1-基)-(4-甲基哌啶-1-基)甲酮M+H+275.3實施例50(3，4-二氫-1H-異喹啉-2-基)-(6-硝基苯并三唑-1-基)甲酮M+H+324.3實施例51(6-苯甲?；讲⑷?1-基)-(4-甲基哌啶-1-基)甲酮M+H+349.15實施例52苯并三唑-1-基-(7-硝基-3，4-二氫-1H-異喹啉-2-基)甲酮M+H+324.1實施例53氮雜環(huán)庚烷-1-基苯并三唑-1-基甲酮M+H+245.3實施例54苯并三唑-1-基-(4-氯哌啶-1-基)甲酮M+H+265.7實施例55苯并三唑-1-基-(3，6-二氫-2H-吡啶-1-基)甲酮M+H+229.權利要求1.式I的苯并三唑，其中R1至R8為H，其中基團R2或R3之一可代表Br、Cl、CH3、CN、NH2、NO2、CF3、OCH3、苯氧基、苯甲?；?、CH(OH)-苯基、S-環(huán)己基、CO-OCH3；或者該系列的兩個取代基為R1＝Cl且R3＝CF3或者R2＝F且R3＝Cl；n為整數(shù)0、1或2；且取代基R6或R7之一可代表R6為CH3；R7為CH3、C2H5、CH(CH3)2、C(CH3)3、CF3、Br、Cl、芐基或者CO-OC2H5；或者R6和R7均為CH3；或者該環(huán)可包含一個雙鍵以替代R6和R7；或者R5和R6或者R6和R7可與攜帶它們的碳原子一起代表稠合苯環(huán)，或者如果n＝0，可代表環(huán)己二基；其中在R6/R7為閉合環(huán)的情況下，該取代基可任選被NH2或NO2單取代或被OCH3單取代或雙取代；且R7和R8一起為環(huán)戊基、二氮雜或＝CH2；其中R1至R5和R8＝H、n＝1且R6/R7＝稠合苯以及R1、R3-R8＝H、R2＝CH3且n＝1的化合物除外。2.如權利要求1所述的式I的苯并三唑，其中R1至R8為H，其中基團R2或R3之一可代表R2為Br、Cl、CN、NO2、CF3、OCH3、苯氧基、苯甲?；H(OH)-苯基、S-環(huán)己基、CO-OCH3；R3為CH3、CN、Br、Cl、NH2、NO2、苯甲?；?。3.權利要求1或2所述的式I的苯并三唑，其中R1至R8為H；其中基團R2或R3之一可代表R2為Br、Cl、NO2、OCH3、苯氧基、CO-OCH3；R3為NH2；或者該系列的兩個取代基為R2＝F且R3＝Cl；n為整數(shù)1或2；且取代基R5或R6之一可代表R6為CH3；R7為CH3、CF3或Br；或者該環(huán)可包含一個雙鍵以替代R6和R7，或者R6和R7可與攜帶它們的碳原子一起代表稠合苯環(huán)，該稠合苯環(huán)可任選被NH2單取代或被OCH3單取代或雙取代；且R7和R8一起為環(huán)戊基，或者n為整數(shù)0；且R6和R7可與攜帶它們的碳原子一起代表稠合苯環(huán)或環(huán)己二基。4.權利要求1至2所述的式I的苯并三唑，其中R1至R8為H；其中基團R2或R3之一可代表R2為Br、CN、CF3、OCH3、苯氧基、苯甲?；H(OH)-苯基、S-環(huán)己基；R3為CN、Br、Cl、NO2、苯甲酰基；或者該系列的兩個取代基為R1＝Cl且R3＝CF3；n為整數(shù)1；且取代基R6和R7之一可代表R6為CH3；R7為CH3、C2H5、CH(CH3)2、C(CH3)3、芐基或CO-OC2H5；或者R6和R7均為CH3；或者該環(huán)可包含一個雙鍵以替代R6和R7，或者R5和R6或R6和R7可與攜帶它們的碳原子一起代表稠合苯環(huán)；其中R1至R5和R8＝H、n＝1且R6/R7＝稠合苯的化合物除外。5.下列結構的苯并三唑6.以下結構的苯并三唑，7.權利要求6所述的以下結構的苯并三唑，8.權利要求7所述的以下結構的苯并三唑，9.制備權利要求1至8所述的式I化合物的方法，其包括a)用氨甲酰氯3?；讲⑷?，或者b)首先使苯并三唑2與光氣反應，然后使所得苯并三唑碳酰氯5與胺或苯胺反應，得到式I化合物，其中取代基具有上述含義。10.用作藥物的式I的苯并三唑，其中R1至R8為H；其中基團R2或R3之一可代表Br、Cl、CH3、CN、NH2、NO2、CF3、OCH3、苯氧基、苯甲?；?、CH(OH)-苯基、S-環(huán)己基、CO-OCH3；或者該系列的兩個取代基為R1＝Cl且R3＝CF3或者R2＝F且R3＝Cl；n為整數(shù)0、1或2；且取代基R6和R7之一可代表R6為CH3；R7為CH3、C2H5、CH(CH3)2、C(CH3)3、CF3、Br、Cl、芐基或CO-OC2H5；或者R6和R7均為CH3；或者該環(huán)可包含一個雙鍵以替代R6和R7；或者R5和R6或者R6和R7可與攜帶它們的碳原子一起代表稠合苯環(huán)，或者如果n＝0，可代表環(huán)己二基；其中在R6/R7為閉合環(huán)的情況下，該取代基可任選被NH2或NO2單取代或被OCH3單取代或雙取代；且R7和R8一起為環(huán)戊基、二氮雜或＝CH2。11.權利要求10所述的式I的苯并三唑，其用于對激素敏感性脂酶HSL具有抑制作用的藥物中。12.權利要求10所述的式I的苯并三唑，其用于治療非胰島素依賴型糖尿病、糖尿病綜合征或X綜合征的藥物中。13.用于治療非胰島素依賴型糖尿病或糖尿病綜合癥、包含至少一種權利要求10所述的式I的苯并三唑的藥物。全文摘要本發(fā)明涉及通式(I)的苯并三唑，其中R1－R8具有以上所述含義。本發(fā)明還涉及式(I)的苯并三唑的制備方法。所述化合物對激素敏感性脂酶具有抑制作用。文檔編號C07D403/06GK1688555SQ03824142公開日2005年10月26日申請日期2003年9月27日優(yōu)先權日2002年10月12日發(fā)明者S·佩特里,K-H·巴林豪斯,N·特納格爾斯,G·米勒,H·霍耶爾申請人:安萬特醫(yī)藥德國有限公司