專利名稱：甘氨雙唑鈉的合成工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種甘氨雙唑鈉的合成工藝。
背景技術(shù)：
癌是世界上發(fā)病和死亡率較高的疾病，嚴(yán)重威脅人類的生命。腫瘤治療目前仍以手術(shù)及放、化療為主。近年來腫瘤放療的患者與日俱增，然而腫瘤放療效果不夠理想，即使用最大可能的照射劑量或改變照射方法，有時(shí)仍達(dá)不到根治目的。
放射增敏劑自50年代后期開始研究以來，目前已研究了多種類型的化合物。其中研究較多的是親電子化合物。英國(guó)Adams從親電子理論和構(gòu)效關(guān)系分析，合成了一系列硝基咪唑類化合物，從中篩選出的咪嗦硝唑(MISO)，是當(dāng)今國(guó)際上公認(rèn)較好的放射增敏劑，已經(jīng)進(jìn)行臨床研究。但因其神經(jīng)毒性大，臨床使用受到限制。甲硝唑是一種抗阿米巴、滴蟲病及抗厭氧菌藥物，也屬硝基咪唑類化合物，七十年代被開發(fā)為放射增敏劑。該化合物與咪嗦硝唑一樣對(duì)乏氧細(xì)胞有特異的放射增敏作用，但因服用需要?jiǎng)┝看蟛拍墚a(chǎn)生增敏效果，增敏效價(jià)較低，不如咪嗦硝唑，同時(shí)也易引起嚴(yán)重神經(jīng)毒副反應(yīng)，已放棄不用。近年來正在試驗(yàn)將甲硝唑改為腫瘤局部注藥合并放療。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)硝基咪唑環(huán)是產(chǎn)生乏氧細(xì)胞放射增敏作用的必要結(jié)構(gòu)，而其毒性主要取決于其在體內(nèi)的分布，尤以腦內(nèi)含量高易引起神經(jīng)毒性等特點(diǎn)。
經(jīng)摸索篩選后，于1984年成功地將甲硝唑與氨三乙酸合成甲硝唑氨酸，現(xiàn)名甘氨雙唑。為改善其溶解度，又將甘氨雙唑制成鈉鹽甘氨雙唑鈉。
甘氨雙唑鈉經(jīng)過物理化學(xué)水平(ESR、E′7及E1/2)、分子水平(DNA斷鏈重接)、離體細(xì)胞集落形成、荷瘤(四種腫瘤)整體水平的實(shí)驗(yàn)研究及藥理、毒理試驗(yàn)結(jié)果，均證明它是一種低毒有效的乏氧細(xì)胞放射增敏劑。
甘氨雙唑鈉的現(xiàn)有制備方法為以氨三乙酸為原料，在吡啶中與乙酸酐反應(yīng)，所得產(chǎn)物不予分離，直接與甲硝唑反應(yīng)，制得甘氨雙唑(酸)，然后再在乙醇中與碳酸氫鈉成鹽即得。該方法已申請(qǐng)中國(guó)專利，ZL89102182.5 該工藝有以下不足之處(1)吡啶毒性較大，易揮發(fā)，氣味難聞，且反應(yīng)后的母液處理、回收困難；(2)使用吡啶單耗較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于克服上述不足之處，設(shè)計(jì)一種新的合成工藝，降低成本，減輕勞動(dòng)強(qiáng)度。
本發(fā)明提供了一種甘氨雙唑鈉的合成工藝，該工藝包括下列步驟 (1)甘氨雙唑的制備-酯化反應(yīng)A、于100升反應(yīng)釜中加入氨三乙酸6.0～8.0公斤(I，31.4～41.8mol)、DMF 30公斤和乙酸酐12～20公斤(118～196mol)，于50～80℃保溫?cái)嚢璺磻?yīng)2～6小時(shí)；B、加入甲硝唑14.0～22.0公斤(81.8～128mol)于反應(yīng)釜中，于40～80℃繼續(xù)保溫?cái)嚢璺磻?yīng)3～7小時(shí)；C、反應(yīng)結(jié)束后，夾層通冷水冷卻反應(yīng)料液；D、反應(yīng)液冷至30℃，加純化水，攪拌至有沉淀析出，冷置(＜5℃)析晶；E、沉淀甩干脫水，水洗至中性；F、離心分離后得甘氨雙唑粗品，濕重9.18～13.4公斤，收率47.0～51.4％。
(2)甘氨雙唑精制A、將甘氨雙唑粗品濕料置200升反應(yīng)釜內(nèi)，加35～65公斤DMF、50～80公斤純化水及少量濃氨水加熱回流溶解，加0.4公斤活性炭脫色，趁熱過濾。濾液置200升結(jié)晶罐內(nèi)，夾層通冷卻水，料液降溫至0～30℃。攪拌加入15％稀鹽酸調(diào)pH2～5，冷置(＜5℃)析晶；B、沉淀甩干脫水，用約200公斤純化水洗至中性；C、60～70℃烘干，得白色粉末狀結(jié)晶甘氨雙唑(精制品)6.09～8.04公斤(12.2～16.2mol)，熔點(diǎn)116～118℃，收率75.0～83.0％。
(3)甘氨雙唑鈉的制備-成鹽反應(yīng)A、于100升反應(yīng)釜中加入25～45公斤純化水、10～30公斤95％乙醇，升溫至40～80℃后，加8.7公斤(21.5mol)甘氨雙唑，攪拌均勻后，逐漸加入碳酸氫鈉粉末1～4公斤，于40～80℃攪拌溶解。溶解完畢加入活性炭0.5公斤，反應(yīng)0.5小時(shí)。
B、趁熱過濾，母液置200升結(jié)晶罐內(nèi)，降溫至5～30℃，攪拌加入無水乙醇25～75公斤，冷置(0～5℃)析出結(jié)晶。
C、甩干收集沉淀，用無水乙醇(約需25公斤)洗滌。
D、真空干燥得甘氨雙唑鈉粗品5.22～7.36公斤(9.10～12.8moL)，收率74.5～79.5％。
(4)甘氨雙唑鈉的精制將7.6公斤甘氨雙唑鈉粗品投入50升反應(yīng)釜，加入20～35公斤純化水、10～35公斤無水乙醇，攪拌下加熱至40～80℃，攪拌使完全溶解，攪拌加入活性碳0.3公斤，保溫30分鐘后趁熱過濾。濾液置100升結(jié)晶罐內(nèi)，降溫至5～30℃，攪拌加入無水乙醇25～60公斤，冷置(0～5℃)析出結(jié)晶。離心過濾并收集沉淀置真空干燥箱內(nèi)，于60～70℃/20mmHg干燥，得類白至微黃色結(jié)晶粉末狀甘氨雙唑鈉4.19～6.28公斤，收率80.3～85.3％。
本發(fā)明的合成工藝與現(xiàn)有技術(shù)比較如下表1甘氨雙唑粗品合成新、老工藝數(shù)據(jù)比較

注收率以氨三乙酸投料量計(jì)算表2甘氨雙唑粗品精制新、老工藝數(shù)據(jù)比較

質(zhì)量控制方法HPLC法，純度＞95％。
表3甘氨雙唑成鹽反應(yīng)新、老工藝數(shù)據(jù)比較

因此，本發(fā)明的工藝具有以下優(yōu)點(diǎn)1、用DMF取代吡啶作為酯化反應(yīng)的溶劑，甘氨雙唑的合成收率提高，各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)符合要求，其中成品的有關(guān)物質(zhì)得到了有效的控制。
2、新工藝甘氨雙唑鈉的總收率為30.1～31.6％，較老工藝的26.3～28.6％提高了3.0～3.8％，而每公斤單耗由828～864元降為650～686元。
3、新工藝大大降低了生產(chǎn)操作的勞動(dòng)強(qiáng)度，減輕了吡啶廢液處理的負(fù)擔(dān)，有利于三廢處理。
4、新工藝中試數(shù)據(jù)表明，新工藝的收率穩(wěn)定，成品質(zhì)量均能符合甘氨雙唑鈉國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)WS-166(X-143)-2002的各項(xiàng)規(guī)定。
本發(fā)明的關(guān)鍵中間體甘氨雙唑(酸)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)甘氨雙唑 本品為N，N-雙[(2-甲基-5-硝基-1H-咪唑-1-基)-乙氧羰甲基]甘氨酸。按無水物計(jì)算，含C18H22N8O10不得少于95.0％。
外觀 本品為類白色至微黃色的結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；無臭，味苦；遇光色漸變深。
溶解度 本品在熱乙醇中略溶，在水或丙酮中幾乎不溶。
色譜純度 照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄VD)測(cè)定。
避光操作。取本品約12.5mg，精密稱定，置25ml容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺1～2ml，振搖使溶解，再加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液(臨用新制)；取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成份峰保留時(shí)間的2倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，量取各雜質(zhì)峰面積，按峰面積歸一法計(jì)算，主成分峰面積應(yīng)大于95％。
本發(fā)明產(chǎn)品藥理、毒理、臨床結(jié)果如下一、藥理、毒理部分1、主要藥效學(xué)I化療增敏藥效學(xué)作用研究如下a、體外試驗(yàn)用常規(guī)體外細(xì)胞克隆活存的方法研究了甘氨雙唑鈉對(duì)卡鉑、環(huán)磷酰胺、和長(zhǎng)春新堿的化療增敏作用。
(1)首先用0-1000μg/ml的甘氨雙唑鈉作用于胃癌SGC-790l細(xì)胞株，觀察甘氨雙唑鈉對(duì)細(xì)胞活存的影響。結(jié)果表明，當(dāng)甘氨雙唑鈉的濃度＜50μg/ml時(shí)，對(duì)為癌細(xì)胞的活存無明顯影響。確定甘氨雙唑鈉的增敏試驗(yàn)濃度不應(yīng)超過50μg/ml。
然后分別用卡鉑(0.5-60μg/ml)、環(huán)磷酰胺(1-100μg/ml)和長(zhǎng)春新堿(1-100μg/ml)分別作用于胃癌細(xì)胞，觀察化療藥物對(duì)細(xì)胞的影響。結(jié)果表明0.5μg/ml的卡鉑、10μg/ml的環(huán)磷酰胺、1μg/ml的長(zhǎng)春新堿即能使胃癌細(xì)胞的活存有顯著降低。
(2)選擇10、30和50μg/ml的甘氨雙唑鈉，分別與2μg/ml的卡鉑、5μg/ml的環(huán)磷酰胺和2μg/ml的長(zhǎng)春新堿共同作用于細(xì)胞，觀察甘氨雙唑鈉對(duì)三種化療藥物的化療增敏作用。結(jié)果表明甘氨雙唑鈉對(duì)卡鉑和環(huán)磷酰胺有明顯的增敏作用。與空白對(duì)照相比，單獨(dú)用卡鉑(2μg/ml)處理，細(xì)胞的活存減低為83％；加入甘氨雙唑鈉(10、30和50μg/ml)后，細(xì)胞活存分別降低到44％、26％和1.9％。單獨(dú)用環(huán)磷酰胺(5μg/ml)處理，細(xì)胞的活存降低為77％；加入甘氨雙唑鈉(10、30和50μg/ml)后，細(xì)胞活存分別降低到50％、16％和1.4％。表現(xiàn)出對(duì)烷化劑類抗腫瘤藥物的明顯的化療增敏作用。但加入長(zhǎng)春新堿后，未觀察到甘氨雙唑鈉的增敏作用。因此可以證實(shí)甘氨雙唑鈉對(duì)烷化劑類的抗腫瘤藥物有明顯的化療增敏作用。
b、整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)考慮到腫瘤臨床化學(xué)藥物治療中的復(fù)雜性，包括各種各樣的化療藥物、不同病理類型的腫瘤、不同的化療方案等，給動(dòng)物藥效試驗(yàn)帶來了復(fù)雜性。因此在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)選擇了兩條思路。一是甘氨雙唑鈉對(duì)典型的烷化劑抗腫瘤藥物治療不同腫瘤的增敏作用；二是甘氨雙唑鈉對(duì)典型的腫瘤用不同化療藥物治療的增敏作用。這樣基本可以反映甘氨雙唑鈉對(duì)不同化療藥物治療不同腫瘤的化療增敏作用。觀察的終點(diǎn)指標(biāo)為各組腫瘤體積的變化、各組腫瘤相對(duì)增長(zhǎng)速度、各組的腫瘤抑制率和近期治療效果。為了考察加用注射用甘氨雙唑鈉后，是否會(huì)同時(shí)增加抗腫瘤藥物的毒副反應(yīng)，而抗腫瘤藥物的主要毒副反應(yīng)是骨髓造血抑制，因此另外設(shè)計(jì)試驗(yàn)，重點(diǎn)考察了各組動(dòng)物在用藥期間的外周血象的變化，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。同時(shí)根據(jù)指導(dǎo)原則，甘氨雙唑鈉選擇了高、中、低三個(gè)給藥的劑量水平，主要選擇了臨床靜脈注射的給藥途徑進(jìn)行其增敏作用的觀察。
甘氨雙唑鈉選擇了1000、500、250mg/kg高、中、低三個(gè)劑量水靜脈給藥途徑，結(jié)果表明(1)與空白對(duì)照組相比，單獨(dú)使用卡鉑，對(duì)B16黑色素瘤、EMT6乳腺癌、Lewis肺癌和S180肉瘤4種試驗(yàn)?zāi)[瘤有明顯的治療作用，表現(xiàn)為腫瘤生長(zhǎng)速度減慢，腫瘤生長(zhǎng)延遲天數(shù)增加，腫瘤抑制率增加。
加用不同劑量的注射用甘氨雙唑鈉(1000、500、250mg/kg)后，與卡鉑治療組相比，腫瘤生長(zhǎng)速度明顯減慢，腫瘤生長(zhǎng)延遲天數(shù)和腫瘤抑制率明顯增加，有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)4種試驗(yàn)?zāi)[瘤，單獨(dú)卡鉑治療的腫瘤抑制率(給藥后第10天)分別為25.6％、43.9％、18.0％和47.0％。加用注射用甘氨雙唑鈉(500mg/kg)后分別增加到72.9％、76.5％、31.0％和78.0％。注射用甘氨雙唑鈉表現(xiàn)出明顯的化療增敏作用。
(2)與空白對(duì)照組相比，4種抗腫瘤化療藥物(絲裂霉素、足葉乙甙、環(huán)磷酰胺和卡鉑)治療Lewis肺癌，均表現(xiàn)出明顯的治療作用。表現(xiàn)為腫瘤生長(zhǎng)速度減慢，腫瘤生長(zhǎng)延遲天數(shù)增加，腫瘤抑制率增加。
加用不同劑量的注射用甘氨雙唑鈉(1000、500、250mg/kg)后，除足葉乙甙組外，與單獨(dú)絲裂霉素、環(huán)磷酰胺和卡鉑治療組相比，腫瘤生長(zhǎng)速度進(jìn)一步減慢，腫瘤生長(zhǎng)延遲天數(shù)和腫瘤抑制率明顯增加，有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
對(duì)Lewis肺癌，單獨(dú)絲裂霉素治療的腫瘤抑制率(給藥后第12天)為31.4％，加注射用甘氨雙唑鈉后提高為97.2％；單獨(dú)環(huán)磷酰胺治療的腫瘤抑制率(給藥后第12天)為71％，加注射用甘氨雙唑鈉后提高為94％；單獨(dú)卡鉑治療的腫瘤抑制率(給藥后第12天)為57％，加用注射用甘氨雙唑鈉(500mg/kg)后增加到82％。注射用甘氨雙唑鈉表現(xiàn)出明顯的化療增敏作用。
II放射增敏作用用離體培養(yǎng)的中國(guó)倉(cāng)鼠V79細(xì)胞體外試驗(yàn)集合S180、Lewis肺癌、B16黑色素瘤和EMT6乳腺癌四種腫瘤小鼠整體試驗(yàn)的方法，證明了甘氨雙唑鈉的放射增敏作用。實(shí)驗(yàn)同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組和單獨(dú)照射兩種對(duì)照組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。分別設(shè)米索硝唑、SR-2508等幾個(gè)文獻(xiàn)中公認(rèn)的放射增敏作用比較肯定的化合物作為陽(yáng)性藥物對(duì)照組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果均經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)使用了腹腔注射和靜脈注射兩種給藥途徑，甘氨雙唑鈉藥物劑量至少設(shè)高、中、低三個(gè)劑量進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
(1)體外實(shí)驗(yàn)a.甘氨雙唑鈉對(duì)有氧和乏氧細(xì)胞的IC50值分別為35.70mmol/L和23.50mmol/L，證實(shí)甘氨雙唑鈉對(duì)乏氧細(xì)胞的毒性明顯大于有氧細(xì)胞。
b.藥物濃度為0.1～1.38mmol/L時(shí)的增敏比(SER值)為1.26～2.32。
c.C1.6值(放射增敏比SER值為1.6時(shí)，增敏劑的藥物濃度)為0.418mmol/L。
d.對(duì)受照的有氧細(xì)胞未表現(xiàn)出放射增敏作用。
e.在相同實(shí)驗(yàn)條件下比較了等克分子藥物濃度(0.3mmol/L)，甘氨雙唑鈉、米索硝唑、甲硝唑的放射增敏作用。結(jié)果表明，甘氨雙唑鈉的增敏比(SER值)為1.76，高于米索硝唑(1.52)和甲硝唑(1.07)。
(2)整體實(shí)驗(yàn)a.選用Lewis肺癌、B16黑色素瘤、EMT6乳腺癌和S180等四種腫瘤模型，觀察了0.1～1.8mmol/kg(57.3～1032.2mg/kg)甘氨雙唑鈉對(duì)0～32Gyγ線單次照射的放射增敏作用。結(jié)果表明與單獨(dú)照射相比，加用甘氨雙唑鈉后腫瘤生長(zhǎng)速度明顯減慢，腫瘤抑制率增加，腫瘤生長(zhǎng)延遲天數(shù)增加，四種腫瘤模型均得到相同結(jié)果。SER值大部分在1.3以上。
b.甘氨雙唑鈉對(duì)四種腫瘤模型放射增敏作用的敏感性有差異，其中對(duì)Lewis肺癌和B16黑色素瘤效果更好一些。
c.用荷Lewis肺癌和EMT6乳腺癌小鼠證明了0.1、1.0mmol/kg(57.3～573mg/kg)的甘氨雙唑鈉對(duì)分次劑量r線照射也有放射增敏作用。
d.等克分子量(0.1mmol/kg)甘氨雙唑鈉的放射增敏作用比甲硝唑及SR-2508的增敏效果好。
e.小數(shù)連續(xù)用藥2州(每次200mg/kg，每周二次)，然后照射0～6Gy γ線，與單獨(dú)照射相比，加用甘氨雙唑鈉后對(duì)小鼠骨髓CFU-GM和CFU-S無明顯的影響，對(duì)體重和脾指數(shù)也無明顯影響。上述結(jié)果證實(shí)甘氨雙唑鈉對(duì)受照的輻射較敏感的正常造血組織無放射增敏作用。
2、一般藥理試驗(yàn)分別用小鼠和大鼠研究了150～900mg/kg的甘氨雙唑鈉靜脈注射后對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的影響。結(jié)果表明，甘氨雙唑鈉150～900mg/kg(450～2700mg/m2)對(duì)小鼠的一般行為活動(dòng)和協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)無明顯影響。當(dāng)劑量為300～900mg/kg(1800～5400mg/m2)靜脈注射時(shí)，可影響大鼠的探究活動(dòng)，主要表現(xiàn)為爬格試驗(yàn)的方格間穿行次數(shù)減少和豎起、修飾次數(shù)減少，呈量-效關(guān)系。
用貓觀察了50～300mg/kg的甘氨雙唑鈉靜脈注射對(duì)心血管和呼吸系統(tǒng)的影響。當(dāng)藥物劑量小于100mg/kg時(shí)，對(duì)麻醉貓的血壓和心率無明顯影響。對(duì)心電圖無明顯影響。當(dāng)藥物劑量為300mg/kg時(shí)，具有明顯的降壓作用。同時(shí)可觀察到心電圖的T波增高。50～300mg/kg的劑量對(duì)麻醉貓呼吸頻率和幅度無明顯影響。
3、急性毒性試驗(yàn)以腹腔注射(ip)和靜脈注射(iv)兩種給藥途徑，分別觀察了甘氨雙唑鈉對(duì)大鼠、小鼠的急性毒性反應(yīng)。
大劑量(3200mg/kg)給小鼠靜脈注射甘氨雙唑鈉后，動(dòng)物在一分鐘內(nèi)出現(xiàn)步態(tài)不穩(wěn)、動(dòng)作失調(diào)、蹦跳亂竄、全身肌肉抽搐，藥后1～15分鐘，出現(xiàn)動(dòng)物死亡。不死亡者24～48小時(shí)后恢復(fù)正常。雌、雄小鼠的LD50無顯著差異。經(jīng)用加權(quán)概率單位回歸法統(tǒng)計(jì)，LD50值為2675.89mg/kg小鼠腹腔注射的LD50值為3959.52mg/kg。
大劑量(5000mg/kg)給大鼠靜脈注射甘氨雙唑鈉后，經(jīng)數(shù)分鐘出現(xiàn)步態(tài)不穩(wěn)、動(dòng)作失調(diào)、扭體，然后動(dòng)物伏臥、閉眼、四肢震顫，藥后1小時(shí)起開始死亡，24小時(shí)后不死亡動(dòng)物恢復(fù)正常。性別間LD50無明顯差異，LD50值為2691.63mg/kg(2576.89～2811.49mg/kg)。大鼠腹腔注射甘氨雙唑鈉后，毒性反應(yīng)與靜脈注射相似，LD50值為2911.44mg/kg(2652.13～3196.09mg/kg)。
上述結(jié)果表明，靜脈給藥，大鼠和小鼠的LD50值均大于2g/kg，腹腔給藥對(duì)大鼠的LD50值大于2g/kg，對(duì)小鼠的LD50值在4g/kg左右，可以認(rèn)為該藥的毒副作用不太大。
4、全身用藥毒性試驗(yàn)注射用甘氨雙唑鈉對(duì)家兔耳緣靜脈血管刺激試驗(yàn)結(jié)果表明，在注射部位僅見進(jìn)針的機(jī)械損傷，未見明顯的與藥物相關(guān)的刺激反應(yīng)，給藥組及陰性對(duì)照組無明顯的不同。
家兔紅血球溶血試驗(yàn)和對(duì)豚鼠過敏試驗(yàn)結(jié)果呈陰性反應(yīng)。
5、長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)選用SD大鼠和Beagle犬兩種動(dòng)物。
(1)大鼠腹腔注射甘氨雙唑鈉3個(gè)月毒性試驗(yàn) 大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，劑量設(shè)置以等滲藥液腹腔注射最大容許量作為高劑量，以10∶3∶1劑距，設(shè)置中、低劑量組。連續(xù)腹腔注射3個(gè)月后，高劑量組600mg/kg/天(相當(dāng)于3600mg/m2/天)雄性大鼠體重增長(zhǎng)受到輕度抑制。其余中、低劑量組(180、60mg/kg/天，相當(dāng)于1080、360mg/m2/天)未見其他與藥物有關(guān)的明顯毒性癥狀。血清生化和尿常規(guī)檢查，均未發(fā)現(xiàn)與藥物有關(guān)的異常結(jié)果，測(cè)量值均在正常值范圍內(nèi)。給藥及恢復(fù)期終止時(shí)病理檢查全身各臟器均未見明顯病變，鏡檢也未發(fā)現(xiàn)有與藥物有關(guān)的毒性反應(yīng)。確定的無毒性反應(yīng)劑量為60mg/kg/天(360mg/m2/天)。
(2)犬靜脈滴注甘氨雙唑鈉3個(gè)月毒性試驗(yàn) Beagle犬的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)設(shè)置60、180、600mg/kg/天(1200、3600、12000mg/m2/天)3個(gè)劑量組，每次靜脈滴注給藥連續(xù)三個(gè)月。結(jié)果表明，對(duì)動(dòng)物體重、攝食量、血液常規(guī)、血清生化、尿常規(guī)、心電圖和眼底檢查等均未見與藥物有關(guān)的異常變化。甘氨雙唑鈉給予動(dòng)物后所發(fā)生的與藥物-劑量有關(guān)的毒性反應(yīng)主要為惡心、嘔吐、輕度流涎、輕微肌肉震顫等中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。引起動(dòng)物死亡的主要原因?yàn)檠貉h(huán)系統(tǒng)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙，具有劑量依賴性。
6、致突變?cè)囼?yàn)(1)微生物回復(fù)突變(Ames)試驗(yàn) 應(yīng)用組氨酸缺陷型鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100和TA102為指示微生物，測(cè)試50～5000μg/皿甘氨雙唑鈉的制突變性。結(jié)果表明，四菌株在加和不加代謝活化系統(tǒng)條件下，在1000、500μg/皿劑量以下為陰性結(jié)果。
(2)哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn) 結(jié)果表明，20～1280μg/ml各劑量組的細(xì)胞突變率在加和不加S9代謝活化條件下，均小于自發(fā)突變率的3倍。而在同等條件下，陽(yáng)性對(duì)照物甲基磺酸乙酯(EMS)和苯并芘分別遠(yuǎn)大于自發(fā)突變率的3倍。因此證實(shí)甘氨雙唑鈉的哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)結(jié)果為陰性。
(3)染色體畸變?cè)囼?yàn) 采用中國(guó)倉(cāng)鼠肺成纖維細(xì)胞(CHL)體外實(shí)驗(yàn)方法，檢測(cè)了甘)氨雙唑鈉對(duì)哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞染色體畸變率的影響。結(jié)果表明，在250～1000μg/ml劑量下，各濃度試驗(yàn)組的染色體畸變率與空白對(duì)照組無顯著性差異。未見甘氨雙唑鈉誘發(fā)CHL細(xì)胞染色體畸變。
(4)微核試驗(yàn) 采用性成熟的NIH小鼠，對(duì)甘氨雙唑鈉進(jìn)行了哺乳動(dòng)物體內(nèi)微核試驗(yàn)。結(jié)果表明，139.9～1399mg/kg劑量的各試驗(yàn)組微核率與陰性對(duì)照組的微核率無顯著差異，未顯示本藥物誘發(fā)小數(shù)骨髓多染紅細(xì)胞微核增加的效應(yīng)。
7、生殖毒性(1)一般生殖毒性 試驗(yàn)結(jié)果表明，高劑量組(300mg/kg)對(duì)雄性小鼠的體重增長(zhǎng)有一定影響。中劑量組(100mg/kg)和高劑量組動(dòng)物睪丸重量相對(duì)增加，精子活動(dòng)度有不同程度下降。對(duì)雄鼠生育力、雌鼠受孕率及仔鼠的生長(zhǎng)發(fā)育、哺育等情況均無明顯影響。
(2)致畸試驗(yàn) 對(duì)受孕母鼠致畸敏感期的毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，高劑量組(1399mg/kg)吸收胎增加，活胎率和平均窩活胎數(shù)下降，可造成一定程度(總畸胎率7.42％)的胎鼠畸形，有一定的母鼠毒性。中劑量(279.8mg/kg)時(shí)表現(xiàn)出輕度母體毒性，但無胚胎毒性和致畸作用。
(3)圍產(chǎn)期毒性試驗(yàn) 甘氨雙唑鈉在圍產(chǎn)期和哺乳期給藥(300mg/kg)，對(duì)出生活胎率、哺育成活率、仔鼠的學(xué)習(xí)記憶能力、生殖能力無明顯的影響，但對(duì)某些生理發(fā)育(門齒萌出、睪丸下降、張耳)和反射發(fā)育的成熟有延緩作用。在有輕微母體毒性劑量時(shí)，還可導(dǎo)致仔鼠生長(zhǎng)發(fā)育遲緩。
8、藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)采用HPLC方法測(cè)定小鼠及大鼠靜脈注射甘氨雙唑鈉后生物樣品中甘氨雙唑鈉及其代謝產(chǎn)物甲硝唑的含量。經(jīng)測(cè)定效應(yīng)與濃度的相關(guān)性、回收率、精密度考察，試驗(yàn)所用方法和HPLC條件符合藥代動(dòng)力學(xué)研究要求。小鼠體外轉(zhuǎn)化試驗(yàn)表明，甘氨雙唑鈉在水、全血、肝勻漿中都不穩(wěn)定，尤以血中降解最迅速。90min的轉(zhuǎn)化率分別為27.3％、91.8％和41.1％。甲硝唑在水、全血、肝勻漿中90min的生成率分別為8.2％、67.3％和27.3％。小鼠靜脈注射甘氨雙唑鈉57.3、171.9、515.7mg/kg三個(gè)劑量的藥代動(dòng)力學(xué)研究表明，甘氨雙唑鈉在小鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)化或消除很快，呈一房室模型，三個(gè)劑量的消除半衰期分別為0.5、0.8和1.0min。C0分別為209.6、567.3和3102.8μg/ml。濃度一時(shí)間曲線下的面積AUC分別為282.4、1127.5和6700.8μg·min/ml。C0和AUC均與劑量呈正相關(guān)(r為0.992、0.993)。甘氨雙唑鈉的代謝產(chǎn)物甲硝唑達(dá)峰很快，消除較慢，呈二房室模型，三個(gè)劑量的達(dá)峰時(shí)間分別為0.5、1.0和1.2min，消除半衰期為63.2、68.2和64.3min，Cmax為25.7、59.7和145.5μg/ml，AUC分別為1014.7、3914.9和11178.7μg·min/ml。Cmax和AUC均與劑量呈正相關(guān)(r均為0.999)。表現(xiàn)出一級(jí)動(dòng)力學(xué)特征。
組織分布試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)大鼠靜脈注射甘氨雙唑鈉171.9mg/kg后，甘氨雙唑鈉迅速分布到各組織中，主要發(fā)現(xiàn)在血流充足的心、肺、腎及消化道中，藥后2min及5min，甘氨雙唑鈉組織含量最高，20min大幅度降低。其代謝物甲硝唑在各組織的含量在2min和5min較高，高于相應(yīng)時(shí)間的甘氨雙唑鈉含量，20min后，各組織含量下降。
大鼠靜脈注射甘氨雙唑鈉171.9mg/kg后，甘氨雙唑鈉的排泄以尿?yàn)橹鳎瑥哪蛑信判沟脑幷冀o藥總量的8.4％，甲硝唑及另一未知代謝物的排泄分別占33.4％和39.2％，即從尿中共排除給藥總量的81％。膽汁排泄較少，甘氨雙唑鈉和甲硝唑分別占11.5％和10.1％。糞排泄極少，甘氨雙唑鈉和甲硝唑分別占給藥量的0.14％和0.06％。甘氨雙唑鈉平均蛋白結(jié)合率僅為14.2±2.2％。
二、臨床部分(放射增敏作用)1、I期臨床試驗(yàn)(1)靜脈途徑給予注射用甘氨雙唑鈉劑量達(dá)900mg/m2，對(duì)外周血象，呼吸、脈搏、血壓、體溫等基礎(chǔ)生命體征，腎功能等無明顯影響。
(2)劑量達(dá)900mg/m2，部分病人可出現(xiàn)竇性心動(dòng)過速、ST段改變等心電圖的變化，可作為臨床使用的監(jiān)測(cè)藥物毒性的一個(gè)指標(biāo)。
(3)劑量達(dá)900mg/m2，部分病人可出現(xiàn)ALT升高的肝功能損傷，長(zhǎng)時(shí)間使用本藥時(shí)應(yīng)注意監(jiān)測(cè)病人的肝功能。
(4)劑量達(dá)900mg/m2，對(duì)病人的神經(jīng)系統(tǒng)無明顯的影響。
(5)與用藥有關(guān)的不良反應(yīng)主要有消化道的惡心嘔吐和便秘及心功能的改變。
(6)初步放射治療的結(jié)果提示，本藥對(duì)腫瘤組織內(nèi)的乏氧細(xì)胞有較好的放射增敏作用。
(7)綜合考慮藥代動(dòng)力學(xué)和臨床前的研究結(jié)果，II期臨床研究的推薦劑量為800mg/m2。
2、II期臨床第一階段試驗(yàn)本階段試驗(yàn)采用隨機(jī)、雙盲、平行對(duì)照的設(shè)計(jì)，共入組218例確診的頭頸部、食管和肺部腫瘤進(jìn)行放射治療的病人。由于各種原因脫落和剔除13例，有效的統(tǒng)計(jì)病例205名。試驗(yàn)組在常規(guī)放射治療的同時(shí)使用注射用甘氨雙唑鈉(800mg/m2)，對(duì)照組使用安慰劑。結(jié)果表明(1)注射用甘氨雙唑鈉對(duì)頭頸部腫瘤、食管癌和肺癌的放射治療有肯定的放射增敏療效，表現(xiàn)為增加腫瘤抑制率、減少CR和PR的照射劑量，提高CR或CR+PR病人的百分率。目前的資料提示可增加CR、PR的緩解時(shí)間。
(2)使用注射用甘氨雙唑鈉可非常顯著提高頭頸部腫瘤、食管癌和肺癌的腫瘤全消率(CR率)。
(3)頭頸部腫瘤療效達(dá)到CR和PR的SER值分別為1.27和1.31；食管癌和肺癌的Dt4000cGy時(shí)腫瘤局部控制率由單獨(dú)放射治療組的39.18％提高到62.75％(P＝0.001)；兩組的全消率由單獨(dú)放射治療組的30.9％提高到55.9％(P＝0.001)，表現(xiàn)出明顯的放射增敏作用。
(4)一個(gè)放射治療療程使用注射用甘氨雙唑鈉，使用的劑量達(dá)800mg/m2/次，連續(xù)使用21次，病人的耐受性良好。
(5)推薦臨床使用的劑量(800mg/m2/次，每周3次，連續(xù)6～7周)出現(xiàn)的不良反應(yīng)發(fā)生率與單獨(dú)照射相比，未觀察到注射用甘氨雙唑鈉的不良反應(yīng)發(fā)生率增加。
(6)個(gè)別肝功能異常的病例，使用本藥后出現(xiàn)肝功能明顯損害的結(jié)果。對(duì)肝功能異常病人是否應(yīng)嚴(yán)加限制使用本藥，有待繼續(xù)擴(kuò)大病例數(shù)后得出結(jié)論。
(7)I期臨床研究觀察到，當(dāng)使用注射用甘氨雙唑鈉的劑量較大時(shí)，個(gè)別病人可觀察到心電圖的改變，表現(xiàn)為心動(dòng)過速、T波改變等。II期臨床試驗(yàn)觀察到這種情況兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，但應(yīng)在以后大范圍的試驗(yàn)中，注意觀察病人的心電圖和心功能，以便得出明確結(jié)論。
3、II期臨床第二階段試驗(yàn)本階段試驗(yàn)采用隨機(jī)、平行對(duì)照的設(shè)計(jì)，共入組411例確診的頭頸部、食管和肺部腫瘤進(jìn)行放射治療的病人。由于各種原因脫落和剔除9例，有效的統(tǒng)計(jì)病例402名。試驗(yàn)組在常規(guī)放射治療的同時(shí)使用注射用甘氨雙唑鈉(800mg/m2)，隨機(jī)按2∶1(試驗(yàn)組∶對(duì)照組)的比例設(shè)單獨(dú)放射治療的對(duì)照組。在較大范圍觀察了注射用甘氨雙唑鈉的有效性和安全性。結(jié)果表明(1)注射用甘氨雙唑鈉對(duì)頭頸部腫瘤、食管癌和肺癌的放射治療有肯定的放射增敏作用，表現(xiàn)為增加腫瘤抑制率、減少CR和PR的照射劑量，提高CR或CR+PR病人的百分率。
(2)使用注射用甘氨雙唑鈉可非常顯著提高頭頸部腫瘤、食管癌和肺癌的腫瘤全消(CR)率(P＝0.003)。
(3)頭頸部腫瘤轉(zhuǎn)移灶療效達(dá)到CR和PR的SER值分別為1.39和1.26；食管癌和肺癌的Dt4000cGy時(shí)腫瘤局部控制率由單獨(dú)放射治療組的41.22％提高到54.76％(P＝0.012)；兩組的全消率由單獨(dú)放射治療組的28.2％提高到44.0％(P＝0.003)，表現(xiàn)出明顯的放射增敏作用。
(4)一個(gè)放射治療療程使用注射用甘氨雙唑鈉，使用的劑量達(dá)800mg/m2/次，連續(xù)使用21次，病人的耐受性良好。
(5)推薦臨床使用的劑量(800mg/m2/次，每周3次，連續(xù)6～7周)出現(xiàn)的不良反應(yīng)發(fā)生率與單獨(dú)照射相比，未觀察到注射用甘氨雙唑鈉的不良反應(yīng)發(fā)生率增加。
(6)使用注射用甘氨雙唑鈉后，對(duì)食管癌、頭頸部腫瘤放射治療的皮膚、粘膜不良反應(yīng)有減少的趨勢(shì)。
(7)使用注射用甘氨雙唑鈉后，盡管總體上肝功能的化驗(yàn)指標(biāo)均在正常值范圍內(nèi)，但有部分試驗(yàn)者用藥前后的不良反應(yīng)表現(xiàn)在肝功能的改變方面。結(jié)合第一階段的試驗(yàn)結(jié)果，長(zhǎng)期使用本品時(shí)應(yīng)該重視對(duì)肝臟功能的監(jiān)測(cè)。肝功能異常的患者應(yīng)慎用本藥。
(8)I期臨床研究觀察到，當(dāng)使用注射用甘氨雙唑鈉的劑量較大時(shí)，少數(shù)病人可觀察到心電圖或心功能的改變，表現(xiàn)為心動(dòng)過速、心電圖T波改變等。經(jīng)隨機(jī)雙盲和隨機(jī)對(duì)照的II期臨床第一、第二階段試驗(yàn)證明，治療前心電圖正常、治療后與心肌缺血和心律異常有關(guān)的心電圖改變的例數(shù)，兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。證實(shí)本藥對(duì)心電圖無明顯影響。
(9)使用本品后未觀察到明顯的消化道的不良反應(yīng)，對(duì)腎功能和心電圖無明顯影響。
(10)使用本品后未觀察到明顯的神經(jīng)系統(tǒng)的毒副反應(yīng)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1、甘氨雙唑的制備-酯化反應(yīng)A、于100升反應(yīng)釜中加入氨三乙酸6.0公斤(I，31.4mol)、DMF30公斤和乙酸酐12公斤(118mol)，于50℃保溫?cái)嚢璺磻?yīng)6小時(shí)；B、加入甲硝唑14.0公斤(81.8mol)于反應(yīng)釜中，于40℃繼續(xù)保溫?cái)嚢璺磻?yīng)7小時(shí)；C、反應(yīng)結(jié)束后，夾層通冷水冷卻反應(yīng)料液；D、反應(yīng)液冷至30℃，加純化水，攪拌至有沉淀析出，冷置(＜5℃)析出結(jié)晶；E、沉淀甩干脫水，水洗至中性；F、離心分離后得甘氨雙唑粗品，濕重9.18公斤，收率47.0％。
實(shí)施例2、甘氨雙唑的制備-酯化反應(yīng)A、于100升反應(yīng)釜中加入氨三乙酸7.0公斤(I，36.6mol)、DMF30公斤和乙酸酐16公斤(157mol)，于65℃保溫?cái)嚢璺磻?yīng)4小時(shí)；B、加入甲硝唑18.0公斤(105mol)于反應(yīng)釜中，于60℃繼續(xù)保溫?cái)嚢璺磻?yīng)5小時(shí)；C、反應(yīng)結(jié)束后，夾層通冷水冷卻反應(yīng)料液；D、反應(yīng)液冷至30℃，加純化水，攪拌至有沉淀析出，冷置(＜5℃)析出結(jié)晶；E、沉淀甩干脫水，水洗至中性；F、離心分離后得甘氨雙唑粗品，濕重11.3公斤，收率49.6％。
實(shí)施例3、甘氨雙唑的制備-酯化反應(yīng)A、于100升反應(yīng)釜中加入氨三乙酸8.0公斤(I，41.8mol)、DMF30公斤和乙酸酐20公斤(196mol)，于80℃保溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)；B、加入甲硝唑22.0公斤(128mol)于反應(yīng)釜中，于80℃繼續(xù)保溫?cái)嚢璺磻?yīng)3小時(shí)；C、反應(yīng)結(jié)束后，夾層通冷水冷卻反應(yīng)料液；D、反應(yīng)液冷至30℃，加純化水，攪拌至有沉淀析出，冷置(＜5℃)析出結(jié)晶；E、沉淀甩干脫水，水洗至中性；F、離心分離后得甘氨雙唑粗品，濕重13.4公斤，收率51.4％。
實(shí)施例4、甘氨雙唑精制A、將甘氨雙唑粗品濕料9.18公斤置200升反應(yīng)釜內(nèi)，加35公斤DMF、80公斤純化水及少量濃氨水加熱回流溶解，加0.4公斤活性炭脫色，趁熱過濾。濾液置200升結(jié)晶罐內(nèi)，夾層通冷卻水，料液降溫至0℃。攪拌加入15％稀鹽酸調(diào)pH2～5，冷置(＜5℃)析出結(jié)晶；B、沉淀甩干脫水，用約200公斤純化水洗至中性；C、60～70℃烘干，得白色粉末狀結(jié)晶甘氨雙唑(精制品)6.09公斤(12.9mol)，熔點(diǎn)116～118℃，收率83.0％。
實(shí)施例5、甘氨雙唑精制A、將甘氨雙唑粗品濕料11.3公斤置200升反應(yīng)釜內(nèi)，加50公斤DMF、65公斤純化水及少量濃氨水回流溶解，加0.4公斤活性炭脫色，趁熱過濾。濾液置200升結(jié)晶罐內(nèi)，夾層通冷卻水，料液降溫至15℃。攪拌加入15％稀鹽酸調(diào)pH2～5，冷置(＜5℃)析出結(jié)晶；B、沉淀甩干脫水，用約200公斤純化水洗至中性；C、60～70℃烘干，得白色粉末狀結(jié)晶甘氨雙唑(精制品)7.14公斤(14.3mol)，熔點(diǎn)116～118℃，收率79.0％。
實(shí)施例6、甘氨雙唑精制A、將甘氨雙唑粗品濕料13.4公斤置200升反應(yīng)釜內(nèi)，加65公斤DMF、50公斤純化水及少量濃氨水回流溶解，加0.4公斤活性炭脫色，趁熱過濾。濾液置200升結(jié)晶罐內(nèi)，夾層通冷卻水，料液降溫至30℃。攪拌加入15％稀鹽酸調(diào)pH2～5，冷置(＜5℃)析出結(jié)晶；B、沉淀甩干脫水，用約200公斤純化水洗至中性；C、60～70℃烘干，得白色粉末狀結(jié)晶甘氨雙唑(精制品)8.04公斤(16.2mol)，熔點(diǎn)116～118℃，收率75.0％。
實(shí)施例7、甘氨雙唑鈉的制備-成鹽反應(yīng)A、于100升反應(yīng)釜中加入25公斤純化水、30公斤95％乙醇，升溫至80℃后，加6.09公斤(12.9mol)甘氨雙唑，攪拌均勻后，逐漸加入碳酸氫鈉粉末1.0公斤，于80℃攪拌溶解。溶解完畢加入活性炭0.5公斤，反應(yīng)0.5小時(shí)。
B、趁熱過濾，母液置200升結(jié)晶罐內(nèi)，降溫至30℃左右，攪拌加入無水乙醇25公斤，冷置(0～5℃)析出結(jié)晶。
C、甩干收集沉淀，用無水乙醇(約需25公斤)洗滌。
D、真空干燥得甘氨雙唑鈉粗品5.22公斤(9.11moL)，收率74.5％。
實(shí)施例8、甘氨雙唑鈉的制備-成鹽反應(yīng)
A、于100升反應(yīng)釜中加入35公斤純化水、20公斤95％乙醇，升溫至60℃后，加7.14公斤(14.3mol)甘氨雙唑，攪拌均勻后，逐漸加入碳酸氫鈉粉末2.5公斤，于60℃攪拌溶解。溶解完畢加入活性炭0.5公斤，反應(yīng)0.5小時(shí)。
B、趁熱過濾，母液置200升結(jié)晶罐內(nèi)，降溫至17℃左右，攪拌加入無水乙醇50公斤，冷置(＜5℃)析出結(jié)晶。
C、甩干收集沉淀，用無水乙醇(約需25公斤)洗滌。
D、真空干燥得甘氨雙唑鈉粗品6.33公斤(10.6moL)，收率77.0％。
實(shí)施例9、甘氨雙唑鈉的制備-成鹽反應(yīng)A、于100升反應(yīng)釜中加入45公斤純化水、10公斤95％乙醇，升溫至40℃后，加8.04公斤(16.2mol)甘氨雙唑，攪拌均勻后，逐漸加入碳酸氫鈉粉末4.0公斤，于40℃攪拌溶解。溶解完畢加入活性炭0.5公斤，反應(yīng)0.5小時(shí)。
B、趁熱過濾，母液置200升結(jié)晶罐內(nèi)，降溫至5℃左右，攪拌加入無水乙醇75公斤，冷置(0～5℃)析出結(jié)晶。
C、甩干收集沉淀，用無水乙醇(約需25公斤)洗滌。
D、真空干燥得甘氨雙唑鈉粗品7.36公斤(12.3moL)，收率79.5％。
實(shí)施例10、甘氨雙唑鈉的精制將5.22公斤甘氨雙唑鈉粗品投入50升反應(yīng)釜，加入20公斤純化水、30公斤無水乙醇，攪拌下加熱至80℃，攪拌使完全溶解，攪拌加入活性碳0.3公斤，保溫30分鐘后趁熱過濾。濾液置100升結(jié)晶罐內(nèi)，降溫至30℃，攪拌加入無水乙醇25公斤，冷置(0～5℃)析出結(jié)晶。離心過濾并收集沉淀置真空干燥箱內(nèi)，于60～70℃/20mmHg干燥，得類白至微黃色結(jié)晶粉末狀甘氨雙唑鈉4.19公斤，收率80.3％。
實(shí)施例11、甘氨雙唑鈉的精制將6.33公斤甘氨雙唑鈉粗品投入50升反應(yīng)釜，加入27公斤純化水、20公斤無水乙醇，攪拌下加熱至60℃，攪拌使完全溶解，攪拌加入活性碳0.3公斤，保溫30分鐘后趁熱過濾。濾液置100升結(jié)晶罐內(nèi)，降溫至17℃，攪拌加入無水乙醇45公斤，冷置(0～5℃)析出結(jié)晶。離心過濾并收集沉淀置真空干燥箱內(nèi)，于60～70℃/20mmHg干燥，得類白至微黃色結(jié)晶粉末狀甘氨雙唑鈉5.25公斤，收率83.0％。
實(shí)施例12、甘氨雙唑鈉的精制將7.36公斤甘氨雙唑鈉粗品投入50升反應(yīng)釜，加入35公斤純化水、10公斤無水乙醇，攪拌下加熱至40℃，攪拌使完全溶解，攪拌加入活性碳0.3公斤，保溫30分鐘后趁熱過濾。濾液置100升結(jié)晶罐內(nèi)，降溫至5℃，攪拌加入無水乙醇65公斤，冷置(0～5℃)析出結(jié)晶。離心過濾并收集沉淀置真空干燥箱內(nèi)，于60～70℃/20mmHg干燥，得類白至微黃色結(jié)晶粉末狀甘氨雙唑鈉6.28公斤，收率85.3％。
權(quán)利要求
1.一種甘氨雙唑鈉合成工藝，其特征在于該工藝包括下列步驟(1)甘氨雙唑的制備-酯化反應(yīng)A、于100升反應(yīng)釜中加入氨三乙酸6.0～8.0公斤(I，31.4～41.8mol)、DMF 30公斤和乙酸酐12～20公斤(118～196mol)，于50～80℃保溫?cái)嚢璺磻?yīng)2～6小時(shí)；B、加入甲硝唑14.0～22.0公斤(81.8～128mol)于反應(yīng)釜中，于40～80℃繼續(xù)保溫?cái)嚢璺磻?yīng)3～7小時(shí)；C、反應(yīng)結(jié)束后，夾層通冷水冷卻反應(yīng)料液；D、反應(yīng)液冷至30℃，加純化水，攪拌至有沉淀析出，冷置＜5℃，12小時(shí)；E、沉淀甩干脫水，水洗至中性；F、離心分離后得甘氨雙唑粗品，濕重9.18～13.4公斤，收率47.0～51.4％；(2)甘氨雙唑精制A、將甘氨雙唑粗品濕料置200升反應(yīng)釜內(nèi)，加35～65公斤DMF、50～80公斤純化水及少量濃氨水加熱回流溶解，加0.4公斤活性炭脫色，趁熱過濾。濾液置200升結(jié)晶罐內(nèi)，夾層通冷卻水，料液降溫至0～30℃。攪拌加入15％稀鹽酸調(diào)pH2～5，冷置(＜5℃)析晶；B、沉淀甩干脫水，用約200公斤純化水洗至中性；C、60～70℃烘干，得白色粉末狀結(jié)晶甘氨雙唑(精制品)6.09～8.04公斤(12.2～16.2mol)，熔點(diǎn)116～118℃，收率75.0～83.0％；(3)甘氨雙唑鈉的制備-成鹽反應(yīng)A、于100升反應(yīng)釜中加入25～45公斤純化水、10～30公斤95％乙醇，升溫至40～80℃后，加8.7公斤(21.5mol)甘氨雙唑，攪拌均勻后，逐漸加入碳酸氫鈉粉末1～4公斤，于40～80℃攪拌溶解。溶解完畢加入活性炭0.5公斤，反應(yīng)0.5小時(shí)；B、趁熱過濾，母液置200升結(jié)晶罐內(nèi)，降溫至5～30℃，攪拌加入無水乙醇25～75公斤，冷置(0～5℃)析出結(jié)晶；C、甩干收集沉淀，用無水乙醇(約需25公斤)洗滌；D、真空干燥得甘氨雙唑鈉粗品5.22～7.36公斤(9.10～12.8moL)，收率74.5～79.5％；(4)甘氨雙唑鈉的精制將7.6公斤甘氨雙唑鈉粗品投入50升反應(yīng)釜，加入20～35公斤純化水、10～35公斤無水乙醇，攪拌下加熱至40～80℃，攪拌使完全溶解，攪拌加入活性碳0.3公斤，保溫30分鐘后趁熱過濾，濾液置100升結(jié)晶罐內(nèi)，降溫至5～30℃，攪拌加入無水乙醇25～60公斤，冷置(0～5℃)析出結(jié)晶，離心過濾并收集沉淀置真空干燥箱內(nèi)，于60～70℃/20mmHg干燥，得類白至微黃色結(jié)晶粉末狀甘氨雙唑鈉4.19～6.28公斤，收率80.3～85.3％。
2.一種通過權(quán)利要求1所述方法制得的甘氨雙唑鈉在制備具有化療增敏和放射增敏藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明公開了一種甘氨雙唑鈉合成新工藝。本發(fā)明的工藝以氨三乙酸為原料，在N，N－二甲基酰胺中與乙酸酐反應(yīng)，產(chǎn)品精制后再與碳酸氫鈉成鹽制得。本發(fā)明的工藝反應(yīng)收率高、成本低，減輕勞動(dòng)強(qiáng)度，有利于環(huán)保，宜于規(guī)模化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07D233/91GK1603312SQ0315129
公開日2005年4月6日 申請(qǐng)日期2003年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月29日
發(fā)明者宣堅(jiān)鋼, 吳蓉蓉, 莫道明, 代朝陽(yáng) 申請(qǐng)人:廣州萊泰制藥有限公司