專利名稱：減輕化療引起的不良效果的組合物及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及減輕化療所引起的不良作用的組合物及方法，如應(yīng)用順鉑的化療。
背景技術(shù)：
治療癌癥的一個方法是采用化療，其中將一種或多種對癌細(xì)胞有毒的或有害的化學(xué)物質(zhì)給藥于癌癥患者。遺憾的是，大多數(shù)的化療劑(雖然不是全部的)會導(dǎo)致不希望的作用，從而對患者的健康產(chǎn)生有害的影響。
例如，化療劑順鉑(順式-二胺二氯鉑)是一種重金屬復(fù)合物，其由兩個氯原子和兩個氨分子在順式位置包圍中央的鉑原子。順鉑可導(dǎo)致快速分裂細(xì)胞的DNA的鏈內(nèi)和鏈之間的交聯(lián)，從而阻止了DNA、RNA和/或蛋白的合成。
順鉑(通常和其它的化療劑如紫杉醇、環(huán)磷酰胺、長春花堿、阿霉素和博來霉素)通常應(yīng)用于治療患有轉(zhuǎn)移性睪丸癌、轉(zhuǎn)移性卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、膀胱癌、頭部癌以及頸部癌的患者。遺憾的是，順鉑可導(dǎo)致多種副反應(yīng)，比如癲癇、外周神經(jīng)病、耳毒性、聽力喪失、耳聾、眩暈、頭昏、視力模糊、作嘔、嘔吐、食欲缺乏、腹瀉、便秘、骨髓抑制、血小板減少、貧血、中性白細(xì)胞減少和中毒性腎損害。
因此，需要一種減輕或清除化療副反應(yīng)的組合物和方法。特別是，需要一種減輕或清除順鉑化療的一種、多種或全部的副反應(yīng)的組合物和方法。
發(fā)明簡述一方面，本發(fā)明提供化學(xué)保護(hù)劑組合物，其各自包含至少兩種本發(fā)明公開的化學(xué)保護(hù)劑(chemoprotectant)。本發(fā)明的化學(xué)保護(hù)劑組合物是很有效的，例如，它能改善化療引起的至少一種副反應(yīng)。
另一方面，本發(fā)明提供藥物組合物，其各自包括(a)化學(xué)保護(hù)劑，其選自甲硫氨酸、N-乙酰基-DL-甲硫氨酸、S-腺苷甲硫氨酸、半胱氨酸、同型半胱氨酸、胱硫醚(cystathione)、半胱胺、N-乙酰半胱氨酸、谷胱甘肽、谷胱甘肽乙酯、谷胱甘肽二乙酯、谷胱甘肽三乙酯、半胱胺、DiNAC、RibCys、RibCyst、β-LactCys、α-LactCys、MeliCys、MaltCys、CellCys、OTCA、別嘌呤醇、1-甲基別嘌呤醇、2-甲基別嘌呤醇、5-甲基別嘌呤醇、7-甲基別嘌呤醇、1，5-二甲基別嘌呤醇、2，5-二甲基別嘌呤醇、1，7-二甲基別嘌呤醇、2，7-二甲基別嘌呤醇、5，7-二甲基別嘌呤醇、2，5，7-三甲基別嘌呤醇、1-乙氧羰基別嘌呤醇、1-乙氧羰基-5-甲基別嘌呤醇、2-苯基-1，2-苯并異硒唑基-3(2H)-酮和6-diSeCD和(b)化療劑。
另一方面，本發(fā)明提供減少化療產(chǎn)生的至少一種副作用的方法，該方法包括給予接受化療的患者一定量的化學(xué)保護(hù)劑，該一定量的化學(xué)保護(hù)劑能有效地改善化療的至少一種副作用?；瘜W(xué)保護(hù)劑組合物包括一種或多種(比如至少兩種)本文公開的化學(xué)保護(hù)劑。


參考下面的詳細(xì)說明以及相應(yīng)的附圖，本發(fā)明的上述方面和具有的許多其它優(yōu)點(diǎn)將更容易被領(lǐng)會和理解。其中，圖1顯示出在培養(yǎng)基中活的、培養(yǎng)的NuTu-19卵巢癌細(xì)胞的百分率對順鉑濃度的曲線圖?；罴?xì)胞的數(shù)目是在順鉑存在下培養(yǎng)24小時后進(jìn)行測量的。
圖2顯示出在培養(yǎng)基中活的、培養(yǎng)的NuTu-19卵巢癌細(xì)胞的百分率對N-乙酰-半胱氨酸(NAC)濃度(單位是μM)的曲線圖。上面的曲線表示的是在N-乙酰-半胱氨酸存在下但沒有順鉑存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。下面的曲線表示的是在N-乙酰-半胱氨酸和順鉑(濃度為43μM)都存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。
圖3顯示出在培養(yǎng)基中活的、培養(yǎng)的NuTu-19卵巢癌細(xì)胞的百分率對依布硒啉濃度的曲線圖。上面的曲線表示的是在依布硒啉存在下但沒有順鉑存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。下面的曲線表示的是在依布硒啉和順鉑(濃度為43μM)都存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。
圖4顯示出在培養(yǎng)基中活的、培養(yǎng)的NuTu-19卵巢癌細(xì)胞的百分率對別嘌呤醇濃度的曲線圖。上面的曲線表示的是在別嘌呤醇存在下但沒有順鉑存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。下面的曲線表示的是在別嘌呤醇和順鉑(濃度為43μM)都存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。
圖5顯示出在培養(yǎng)基中活的、培養(yǎng)的NuTu-19卵巢癌細(xì)胞的百分率對N-乙酰-半胱氨酸濃度的曲線圖。上面的曲線表示的是在N-乙酰-半胱氨酸和依布硒啉(濃度為47μM)存在下但沒有順鉑存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。下面的曲線表示的是在N-乙酰-半胱氨酸、依布硒啉(濃度為47μM)和順鉑(濃度為43μM)都存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。
圖6顯示出在培養(yǎng)基中活的、培養(yǎng)的NuTu-19卵巢癌細(xì)胞的百分率對別嘌呤醇濃度的曲線圖。上面的曲線表示的是在別嘌呤醇和依布硒啉(濃度為47μM)存在下但沒有順鉑存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。下面的曲線表示的是在別嘌呤醇、依布硒啉(濃度為47μM)和順鉑(濃度為43μM)都存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。
圖7顯示出在43μM的順鉑(10)、或43μM的順鉑和47μM依布硒啉(12)、或47μM依布硒啉(14)存在時，體外培養(yǎng)的大鼠耳蝸中的內(nèi)耳毛細(xì)胞的數(shù)量。
圖8顯示出用鹽水和二甲亞砜(載體對照)(20)、或順鉑(劑量為16mg/每公斤體重)和依布硒啉(劑量為16mg/每公斤體重)(22)處理的大鼠在8kHz、16kHz、24kHz和32kHz處的聽覺固定閾值變化。每次測定10個耳蝸。
圖9顯示出用順鉑(劑量為16mg/每公斤體重)和別嘌呤醇(劑量為16mg/每公斤體重)(30)、或順鉑(劑量為16mg/每公斤體重)、別嘌呤醇(劑量為8mg/每公斤體重)和依布硒啉(劑量為8mg/每公斤體重)(32)處理的大鼠在8kHz，16kHz，24kHz和32kHz處的聽覺固定閾值變化。每次測定4個耳蝸。
圖10A顯示出聯(lián)合采用順鉑、鹽水和DMSO處理大鼠后，其左耳蝸外部毛細(xì)胞喪失的百分比與左耳蝸頂部的距離圖。
圖10B顯示出聯(lián)合采用順鉑和依布硒啉處理大鼠后，其左耳蝸外部毛細(xì)胞喪失的百分比與左耳蝸頂部的距離圖。
優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)說明本文中的術(shù)語“化學(xué)保護(hù)劑”是指能夠改善化療的至少一種副作用的化學(xué)物質(zhì)。
本文中的術(shù)語“化學(xué)保護(hù)劑組合物”是指包括至少一種化學(xué)保護(hù)劑并可能包括超過一種化學(xué)保護(hù)劑的組合物?；瘜W(xué)保護(hù)劑組合物可包括一種或多種化學(xué)保護(hù)劑，以及促進(jìn)對哺乳動物受治療者給予化學(xué)保護(hù)劑組合物的藥學(xué)可接受的載體。
本文中的術(shù)語“改善化療的至少一種副作用”包括(a)減少化療的至少一種副作用的程度和/或持續(xù)時間；和/或(b)徹底清除化療的至少一種副作用；和/或(c)阻止一種或多種在不給予本發(fā)明的化學(xué)保護(hù)劑組合物的情況下可能出現(xiàn)的化療副作用的發(fā)作。
本文中的術(shù)語“化療劑”是指一種給予哺乳動物受治療者后能夠?qū)Π┌Y細(xì)胞產(chǎn)生破壞、或其它副作用的制劑。
另一方面，本發(fā)明提供改善化療產(chǎn)生的至少一種副作用的方法，該方法包括給予接受化療的患者一定量的化學(xué)保護(hù)劑組合物，該一定量的化學(xué)保護(hù)劑組合物能夠有效的改善化療的至少一種副反應(yīng)。該方法適用于任何接受任何形式的化療的哺乳動物受治療者，比如人類患者。
化學(xué)保護(hù)劑組合物包括一種或多種化學(xué)保護(hù)劑。除非另有說明，本文公開的任意一個化學(xué)保護(hù)劑的任何異構(gòu)體或互變異構(gòu)體都適用于本發(fā)明。本發(fā)明的化學(xué)保護(hù)劑組合物也包括一些含有一個或多個含硫基團(tuán)(比如巰基或硫醇基)的化學(xué)保護(hù)劑。含有一個或多個含硫基團(tuán)的化學(xué)保護(hù)劑的代表性例子是甲硫氨酸；N-乙?；?DL-甲硫氨酸；S-腺苷甲硫氨酸；半胱氨酸；同型半胱氨酸；胱硫醚；半胱胺；N-乙酰半胱氨酸；谷胱甘肽；谷胱甘肽乙酯；谷胱甘肽二乙酯；谷胱甘肽三乙酯；半胱胺；N，N′-二乙酰基-L-胱氨酸(DiNAC)；2(R，S)-D-核糖-(1′，2′，3′，4′-四羥丁基)-四氫噻唑-4(R) 羧酸(RibCys)；2-烷基四氫噻唑；2(R，S)-D-核糖-(1′，2′，3′，4′-四羥丁基)四氫噻唑(RibCyst)；2(R，S)-D-葡萄糖基-(1′，2′，4′，5′-四羥戊基-3′-O-D-吡喃半乳糖基)四氫噻唑基-4(R)-羧酸(β-LactCys)；2(R，S)-D-葡萄糖基-(1′，2′，4′，5′-四羥戊基-3′-O-α-D-吡喃半乳糖基)四氫噻唑-4(R)-羧酸(α-LactCys)；2(R，S)-D-葡萄糖基-(1′，2′，3′，4′-四羥戊基-5′-O-a-D-吡喃半乳糖基)四氫噻唑-4(R)-羧酸(MeliCys)；2(R，S)-D-葡萄糖基-(1′，2′，4′，5′-四羥戊基-3′-O-α-D-吡喃葡萄糖基)四氫噻唑-4(R)-羧酸(MaltCys)；2(R，S)-D-葡萄糖基-(1′，2′，4′，5′-四羥戊基-3′-O-β-D-吡喃葡萄糖基)四氫噻唑-4(R)-羧酸(CellCys)和2-氧-L-四氫噻唑-4-羧酸(OTCA)。
別嘌呤醇(C5H4N4O)和它的互變異構(gòu)體作為化學(xué)保護(hù)劑在本發(fā)明的實(shí)施中也是有效的。在本發(fā)明的實(shí)施中，作為化學(xué)保護(hù)劑的下述代表性的別嘌呤醇衍生物也都很有效1-甲基別嘌呤醇；2-甲基別嘌呤醇；5-甲基別嘌呤醇；7-甲基別嘌呤醇；1，5-二甲基別嘌呤醇；2，5-二甲基別嘌呤醇；1，7-二甲基別嘌呤醇；2，7-二甲基別嘌呤醇；5，7-二甲基別嘌呤醇；2，5，7-三甲基別嘌呤醇；1-乙氧羰基別嘌呤醇和1-乙氧羰基-5-甲基別嘌呤醇。
在本發(fā)明的實(shí)施中，有用的其它化學(xué)保護(hù)劑的實(shí)例也包括2苯基-1，2-苯并異硒唑基-3(2H)酮(依布硒啉)和6A，6B-二亞硒酸-6A′，6B′-硒橋β-環(huán)糊精(6-diSeCD)。
表1列出了一些本文描述的化學(xué)保護(hù)劑的代表性有效劑量范圍。表1列出的化學(xué)保護(hù)劑優(yōu)選口服或靜脈內(nèi)給藥。表1列出的化學(xué)保護(hù)劑可以在哺乳動物受治療者服用一種或多種化療劑之前、期間或之后給藥。這樣，哺乳動物受治療者就可以針對每個劑量的化療劑接受相應(yīng)劑量的化學(xué)保護(hù)劑。
在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，一種或多種表1列出的化學(xué)保護(hù)劑是在從給予哺乳動物受治療者化療劑之前的18小時到給予之后的18小時這個時間段的任何時間給藥予哺乳動物受治療者的。在本發(fā)明的另一些具體實(shí)施方案中，一種或多種表1列出的化學(xué)保護(hù)劑是在從給予哺乳動物受治療者化療劑之前的1小時到給予之后的1小時這個時間段的任何時間給藥予哺乳動物受治療者的。在本發(fā)明的還有一些具體實(shí)施方案中，一種或多種表1列出的化學(xué)保護(hù)劑是在從給予哺乳動物受治療者化療劑之前的10分鐘到給予之后的10分鐘這個時間段的任何時間給藥予哺乳動物受治療者的。在本發(fā)明的此外的一些具體實(shí)施方案中，一種或多種表1列出的化學(xué)保護(hù)劑是在給予哺乳動物受治療者化療劑的同時給藥予哺乳動物受治療者的。
縮寫″mg″意思是毫克。
表1

化學(xué)保護(hù)劑組合物可包括一種或多于一種的化學(xué)保護(hù)劑。因此，本發(fā)明的化學(xué)保護(hù)劑可以包括本文描述的任何單個化學(xué)保護(hù)劑的任何組合。在包括多于一種化學(xué)保護(hù)劑的化學(xué)保護(hù)劑組合物的具體實(shí)施方案中，該組合物可以被制成能提供如表1所列出的有效劑量的單個化學(xué)保護(hù)劑成分的制劑。例如，如表1所示，本發(fā)明的甲硫氨酸和N-乙酰基甲硫氨酸的優(yōu)選劑量是每天5mg到5000mg。因此，本發(fā)明的一些化學(xué)保護(hù)劑組合物也可被制成能提供每天5mg到5000mg的劑量的甲硫氨酸和N-乙酰基-甲硫氨酸。
另一方面，本發(fā)明提供化學(xué)保護(hù)劑組合物，其可包括至少兩種(例如2、3、4、5、6、7、8、9或10種)本文公開的化學(xué)保護(hù)劑。例如，一些化學(xué)保護(hù)劑組合物可包括至少一種選自組A、至少一種選自組B和至少一種選自組C的化學(xué)保護(hù)劑，其中組A、B和C包括下列化學(xué)保護(hù)劑組A(谷胱甘肽或谷胱甘肽前體)甲硫氨酸；N-乙酰基-DL-甲硫氨酸；S-腺苷甲硫氨酸；半胱氨酸；N-乙酰-半胱氨酸；谷胱甘肽；谷胱甘肽乙酯；谷胱甘肽二乙酯；谷胱甘肽三乙酯；DiNAC；RibCys；同型半胱氨酸；胱硫醚；半胱胺；OTCA和RibCyst。
組B(強(qiáng)抗氧劑)別嘌呤醇；1-甲基別嘌呤醇；2-甲基別嘌呤醇；5-甲基別嘌呤醇；7-甲基別嘌呤醇；1，5-二甲基別嘌呤醇；2，5-二甲基別嘌呤醇；1，7-二甲基別嘌呤醇；2，7-二甲基別嘌呤醇；5，7-二甲基別嘌呤醇；2，5，7-三甲基別嘌呤醇；1-乙氧羰基別嘌呤醇；和1-乙氧羰基-5-甲基別嘌呤醇。
組C(谷胱甘肽過氧化酶模擬物)依布硒啉和6-diSeCD。
本發(fā)明的化學(xué)保護(hù)劑組合物是有效的，例如，能改善化療的至少一種副作用。本發(fā)明的化學(xué)保護(hù)劑組合物能應(yīng)用于本發(fā)明的方法中以改善化療的至少一種副作用。
本發(fā)明的化學(xué)保護(hù)劑組合物可以被制成某一劑量，當(dāng)將其給藥于進(jìn)行化療的患者時，該劑量能有效改善一種或多種化療副作用。比如，在某些實(shí)施方案中，化學(xué)保護(hù)劑組合物被制成能提供有效劑量的表1化學(xué)保護(hù)劑。
本發(fā)明的化學(xué)保護(hù)劑組合物可通過任何途徑給藥如口服或非腸道給藥。非腸道給藥的方式包括局部、動脈內(nèi)、皮下、髓內(nèi)、靜脈內(nèi)或鼻內(nèi)給藥。除了一種或多種化學(xué)保護(hù)劑，化學(xué)保護(hù)劑組合物還包括合適的藥用載體，該藥用載體包含賦形劑，或其它促進(jìn)化學(xué)保護(hù)劑組合物給藥于進(jìn)行化療的哺乳動物受治療者的化合物。制備和施藥技術(shù)的詳細(xì)描述可參考最新版本的“Remington′s Pharmaceutical Sciences”(Maack Publishing Co，Easton，PA)。
化學(xué)保護(hù)劑組合物的口服制劑可選用本領(lǐng)域已知的常規(guī)藥用載體制備成適合口服的劑型。采用這樣的載體可將化學(xué)保護(hù)劑組合物制成片劑、丸劑、糖衣片、膠囊、液體制劑、凝膠、糖漿、結(jié)晶漿液、懸浮液等等適于患者攝入的形式。
口服應(yīng)用的化學(xué)保護(hù)劑組合物的制備可通過以下方式來實(shí)現(xiàn)將一種或多種化學(xué)保護(hù)劑和固體賦形劑混合，并在添加合適的其它化合物后(如果需要)，任選磨碎所得混合物，加工制粒，以制備片核或糖衣片核。適合的賦形劑是糖類或蛋白類填充劑，包括但不限于，糖類，包括乳糖、蔗糖、甘露醇、或山梨醇，玉米、小麥、大米、馬鈴薯、或其它植物的淀粉；纖維素如甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、或羧甲基纖維素鈉；和樹膠，包括阿拉伯膠和黃芪膠；蛋白類，如明膠和膠原。如果需要，也可以添加崩解劑或增溶劑，如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、褐藻酸、或其鹽，比如藻酸鈉。
可以給糖衣片核提供合適的包衣，如濃縮的糖溶液，其可包含阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波普凝膠、聚乙二醇和/或二氧化鈦、紫膠漆溶液、以及合適的有機(jī)溶劑或其混合物。染料或色素也可以被添加到片劑或糖衣片的包衣中以使得產(chǎn)品便于區(qū)別或表征活性化合物的量(如劑量)。
用于口服的化學(xué)保護(hù)劑組合物可被制備成，如明膠制成的推出型(push-fit)膠囊、明膠制成的軟密封膠囊以及包衣如甘油或山梨醇。推出型膠囊可含有化學(xué)保護(hù)劑，并混合有填充劑或黏合劑如乳糖或淀粉，潤滑劑如滑石粉、或硬脂酸鎂，和可選擇的穩(wěn)定劑。在軟膠囊中，化學(xué)保護(hù)劑可以被溶解或懸浮在合適的液體中，比如脂肪油、液體石蠟、或液體聚乙二醇，可添加或不添加穩(wěn)定劑。
用于非腸道給藥的化學(xué)保護(hù)劑組合物包含一種或多種化學(xué)保護(hù)劑的水溶液。為了進(jìn)行注射，本發(fā)明的化學(xué)保護(hù)劑組合物可被制成水性溶液，優(yōu)選采用生理相容性的緩沖液，如Hank′s溶液、，Ringer′s溶液或生理鹽水。水性注射懸浮劑可包括能夠增加懸浮劑黏性的物質(zhì)，如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或右旋糖酐。另外，化學(xué)保護(hù)劑懸浮劑可以被制備成適當(dāng)?shù)挠托宰⑸鋺腋?。合適的親脂性溶劑或載體包括脂肪油如芝麻油、或合成的脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酯，或脂質(zhì)體?？蛇x擇地，懸浮劑也可以包括合適的穩(wěn)定劑，其能夠增加化合物的溶解度，以允許制成高度濃縮的溶液。
對局部或鼻腔給藥而言，適于透過特定屏障的滲透劑也可以用于制劑中。這樣的滲透劑是本領(lǐng)域所熟知的。
本發(fā)明所述的化學(xué)保護(hù)劑組合物可以按照本領(lǐng)域所熟知的方式制備(如通過常規(guī)的混和、溶解、制粒、制備糖丸、粉碎、乳化、裝入膠囊、吸附(entrapping)或冷凍干燥步驟)?；瘜W(xué)保護(hù)劑組合物也可以通過常規(guī)的方法(如包衣)改進(jìn)，以實(shí)現(xiàn)適當(dāng)?shù)尼尫盘匦裕缇忈屷尫呕虬邢蜥尫拧?br> 化學(xué)保護(hù)劑組合物也可以以鹽的形式提供，并且能與許多酸形成鹽，包括但不限于鹽酸、硫酸、醋酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、琥珀酸等等。鹽在水溶液中或其它質(zhì)子性溶劑中比相應(yīng)的自由堿形式更易溶。
在化學(xué)保護(hù)劑組合物與可接受的載體被制備成制劑后，它們可被保存在適當(dāng)?shù)娜萜髦胁①N上標(biāo)簽備用。
給藥的實(shí)際用量依據(jù)給予治療的個體而定，優(yōu)選的用量是不產(chǎn)生明顯的副作用且能達(dá)到想要的效果的最優(yōu)用量。本領(lǐng)域技術(shù)人員完全可以很好的決定有效用量。當(dāng)然，本領(lǐng)域技術(shù)人員也應(yīng)該認(rèn)識到分開的和部分的劑量也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
對任何化學(xué)保護(hù)劑組合物而言，有效劑量最初可以通過細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)或任意適當(dāng)?shù)膭游锬Ｐ?如靈長類動物，大鼠、豚鼠和其它小的實(shí)驗(yàn)動物)來估計。動物模型還可以用來確定所需的濃度范圍和給藥途徑。這些資料將被用于確定給予人或其它動物的有效劑量和給藥途徑。
化學(xué)保護(hù)劑組合物的治療效果和可能的毒性可通過標(biāo)準(zhǔn)的藥理學(xué)方法在細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動物中加以確定(如ED50，對50％的群體治療有效的劑量；和LD50，對50％的群體致死的劑量)。治療效果和毒性作用的劑量比率就是治療指數(shù)，表示為比率ED50/LD50。優(yōu)選的化學(xué)保護(hù)組合物能表現(xiàn)出較大的治療指數(shù)。從細(xì)胞試驗(yàn)和動物研究獲得的數(shù)據(jù)被用來確定用于人或其它哺乳動物的劑量范圍。這種化合物的劑量優(yōu)選在循環(huán)濃度范圍之中，包括具有很少或沒有毒性的ED50。劑量在該范圍內(nèi)的改變依賴于所用的劑型、病人的敏感性和給藥的途徑。
另一方面，本發(fā)明提供藥物組合物，包括(a)化學(xué)保護(hù)劑，其選自甲硫氨酸、N-乙?；?DL-甲硫氨酸、S-腺苷甲硫氨酸、半胱氨酸、同型半胱氨酸、胱硫醚、半胱胺、N-乙酰半胱氨酸、谷胱甘肽、谷胱甘肽乙酯、谷胱甘肽二乙酯、谷胱甘肽三乙酯、半胱胺、DiNAC、RibCys、RibCyst、β-LactCys、α-LactCys、MeliCys、MaltCys、CellCys、OTCA、別嘌呤醇、1-甲基別嘌呤醇、2-甲基別嘌呤醇、5-甲基別嘌呤醇、7-甲基別嘌呤醇、1，5-二甲基別嘌呤醇、2，5-二甲基別嘌呤醇、1，7-二甲基別嘌呤醇、2，7-二甲基別嘌呤醇、5，7-二甲基別嘌呤醇、2，5，7-三甲基別嘌呤醇、1-乙氧羰基別嘌呤醇、1-乙氧羰基-5-甲基別嘌呤醇、2-苯基-1，2-苯并異硒唑基-3(2H)-酮和6-diSeCD；和(b)化療劑。
在本發(fā)明的藥物組合物中有用的化療劑的實(shí)例包括順鉑、卡鉑、oxyplatin、長春花堿、阿霉素、博來霉素、紫杉醇、、環(huán)磷酰胺、多柔比星、六甲蜜胺、甲氨蝶呤、和氟尿嘧啶。在一些實(shí)施例中，化療劑含有鉑。含有鉑的化療劑的例子是順鉑、卡鉑和oxyplatin?；旌纤幬锝M合物以提供一種或多種化療劑的劑量，該劑量能有效殺死癌細(xì)胞或?qū)Π┘?xì)胞產(chǎn)生其它副作用。也可以混合藥物組合物以提供改善化療劑的至少一種不利效果的有效劑量的一種或多種化學(xué)保護(hù)劑。前述的每一種化學(xué)保護(hù)劑的每日施用的劑量方案已經(jīng)在表1中列出。順鉑的每日施用的劑量方案的例子是每周一次，每次劑量50-200mg/m2，化療4到6周。本發(fā)明的藥物組合物具有能以一定量的一種或多種化學(xué)保護(hù)劑和一定量的一種或多種化療劑同時給藥的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明的化學(xué)保護(hù)劑組合物、藥物組合物以及相應(yīng)的方法能用于改善應(yīng)用任何化療劑帶來的任何副作用。當(dāng)按照本發(fā)明的方法使用時，本發(fā)明的一些化學(xué)保護(hù)劑組合物和藥物組合物能改善大多數(shù)或全部的化療副作用。例如，本發(fā)明的組合物和方法能改善任何一種下述的化療劑引起的一種、一些或全部的副作用，這些化療劑是順鉑、卡鉑、oxyplatin、長春花堿、阿霉素、博來霉素、紫杉醇、環(huán)磷酰胺、多柔比星、六甲蜜胺、甲氨蝶呤、和氟尿嘧啶。前述的化療劑的主要副作用是中毒性腎損害、神經(jīng)毒性、耳毒性、骨髓抑制、脫發(fā)、體重喪失、嘔吐、作嘔和免疫抑制。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以很容易的通過常規(guī)試驗(yàn)確定用于改善特定的化療劑的一種或多種副作用所需要的大多數(shù)的有效化學(xué)保護(hù)劑組合物。
下述的實(shí)施例僅僅說明目前預(yù)計實(shí)施本發(fā)明的最優(yōu)選方式，但不能解釋為對本發(fā)明的限制。本文所引用的所有文獻(xiàn)都明確引入作為本發(fā)明的參考。
實(shí)施例1這個實(shí)施例通過MTS細(xì)胞存活試驗(yàn)，顯示出N-乙酰基半胱氨酸、依布硒啉和別嘌呤醇單獨(dú)或聯(lián)合使用并沒有抑制順鉑殺死培養(yǎng)的NuTu-19卵巢癌腫瘤細(xì)胞的能力。
NuTu-19細(xì)胞以每孔3000細(xì)胞的濃度被放置在96孔培養(yǎng)皿中，在37℃下培養(yǎng)24小時，其間通入5％的二氧化碳?xì)怏w。N-乙?；腚装彼?、依布硒啉或別嘌呤醇和NuTu-19細(xì)胞被培養(yǎng)1小時或4小時，然后加入順鉑，在37℃下進(jìn)一步培養(yǎng)24小時，其間通入5％的二氧化碳?xì)怏w。再用培養(yǎng)基將NuTu-19細(xì)胞清洗，并與順鉑一起額外培養(yǎng)24小時。
將NuTu-19細(xì)胞用磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗兩次，然后用MTS試驗(yàn)測定存活的細(xì)胞數(shù)量。MTS是(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓的縮寫。MTS試驗(yàn)是一種比色的方法，其是基于MTS分解代謝成甲產(chǎn)物來確定活細(xì)胞的數(shù)量，其中甲產(chǎn)物是可以溶解于組織培養(yǎng)介質(zhì)的。96孔培養(yǎng)皿中的甲產(chǎn)物在490nm的吸光率可用平板讀數(shù)計直接測定。在490nm增加的吸光率與每孔培養(yǎng)皿中增加的甲產(chǎn)生量相對應(yīng)，這通常由于在每孔培養(yǎng)皿存在更多的活細(xì)胞。
圖1顯示出在培養(yǎng)基中活的、培養(yǎng)的NuTu-19卵巢癌細(xì)胞的百分率對順鉑濃度的曲線圖。圖1列出的數(shù)據(jù)表明培養(yǎng)的NuTu-19卵巢癌細(xì)胞與順鉑一起培養(yǎng)24小時后被殺死。
圖2顯示出在培養(yǎng)基中活的、培養(yǎng)的NuTu-19卵巢癌細(xì)胞的百分率對N-乙酰-半胱氨酸濃度的曲線圖。上面的曲線表示的是在N-乙酰-半胱氨酸存在下但沒有順鉑存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。下面的曲線表示的是在N-乙酰-半胱氨酸和順鉑(濃度為43μM)都存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。圖2中的數(shù)據(jù)表明N-乙酰-半胱氨酸并沒有抑制順鉑殺死培養(yǎng)基中NuTu-19卵巢癌細(xì)胞的能力。
圖3顯示出在培養(yǎng)基中活的、培養(yǎng)的NuTu-19卵巢癌細(xì)胞的百分率對依布硒啉濃度的曲線圖。上面的曲線表示的是在依布硒啉存在下但沒有順鉑存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。下面的曲線表示的是在依布硒啉和順鉑(濃度為43μM)都存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。圖3中列出的數(shù)據(jù)表明依布硒啉并沒有抑制順鉑殺死培養(yǎng)基中NuTu-19卵巢癌細(xì)胞的能力。
圖4顯示出在培養(yǎng)基中活的、培養(yǎng)的NuTu-19卵巢癌細(xì)胞的百分率對別嘌呤醇濃度的曲線圖。上面的曲線表示的是在別嘌呤醇存在下但沒有順鉑存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。下面的曲線表示的是在別嘌呤醇和順鉑(濃度為43μM)都存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。圖4中列出的數(shù)據(jù)表明別嘌呤醇并沒有抑制順鉑殺死培養(yǎng)基中NuTu-19卵巢癌細(xì)胞的能力。
圖5顯示出在培養(yǎng)基中活的、培養(yǎng)的NuTu-19卵巢癌細(xì)胞的百分率對N-乙酰-半胱氨酸濃度的曲線圖。上面的曲線表示的是在N-乙酰-半胱氨酸和依布硒啉(濃度為47μM)存在下但沒有順鉑存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。下面的曲線表示的是在N-乙酰-半胱氨酸、依布硒啉(濃度為47μM)和順鉑(濃度為43μM)都存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。圖5中列出的數(shù)據(jù)表明N-乙酰-半胱氨酸和依布硒啉的組合并沒有抑制順鉑殺死培養(yǎng)基中NuTu-19卵巢癌細(xì)胞的能力。
圖6顯示出在培養(yǎng)基中活的、培養(yǎng)的NuTu-19卵巢癌細(xì)胞的百分率對別嘌呤醇濃度的曲線圖。上面的曲線表示的是在別嘌呤醇和依布硒啉(濃度為47μM)存在下但沒有順鉑存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。下面的曲線表示的是在別嘌呤醇、依布硒啉(濃度為47μM)和順鉑(濃度為43μM)都存在時，培養(yǎng)的NuTu-19細(xì)胞的存活率。圖6中列出的數(shù)據(jù)表明別嘌呤醇和依布硒啉的組合并沒有抑制順鉑殺死培養(yǎng)基中NuTu-19卵巢癌細(xì)胞的能力。
實(shí)施例2這個實(shí)施例表明在體外依布硒啉保護(hù)內(nèi)耳毛細(xì)胞免受順鉑的傷害。
每次處理來自P3-4小鼠幼畜的三個耳蝸，將其在0.4微米MilliCell-CM中培養(yǎng)，并加入NeuroBasal A培養(yǎng)基和B27補(bǔ)充物。
培養(yǎng)24小時后，加入依布硒啉到培養(yǎng)基中，培養(yǎng)10分鐘，然后加入最終濃度為43μM的順鉑。另一個對照組，采用43μM的順鉑處理，第二個對照組采用47μM依布硒啉處理，但不加入順鉑。所有的培養(yǎng)物都在37℃下，通入5％的二氧化碳?xì)怏w培養(yǎng)24小時。
采集培養(yǎng)的外植體，固定、用鈣結(jié)合蛋白(用于檢測毛細(xì)胞)和DAPI(4′，6-Diamindino-2-苯基吲哚；用于檢測核DNA)染色。
圖7顯示出在43μM的順鉑(10)、或43μM的順鉑和47μM依布硒啉(12)、或47μM依布硒啉(14)存在時，體外培養(yǎng)的大鼠耳蝸中的內(nèi)耳毛細(xì)胞的數(shù)量。圖7中列出的數(shù)據(jù)表明在體外依布硒啉保護(hù)內(nèi)耳毛細(xì)胞免受順鉑的損害。
在本實(shí)施例的試驗(yàn)中應(yīng)用的順鉑和依布硒啉的濃度與實(shí)施例1的細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)中應(yīng)用的順鉑和依布硒啉的濃度是完全相同的。因此，實(shí)施例1和2中的試驗(yàn)結(jié)果都表明了應(yīng)用實(shí)施例中所述的濃度，依布硒啉并沒有抑制順鉑對NuTu-19卵巢腫瘤細(xì)胞的毒性作用，但是卻保護(hù)內(nèi)耳毛細(xì)胞免受順鉑的毒性損害。
實(shí)施例3本實(shí)施例表明在體內(nèi)應(yīng)用依布硒啉以及聯(lián)合應(yīng)用依布硒啉和別嘌呤醇，都能保護(hù)大鼠內(nèi)耳毛細(xì)胞免受順鉑的損害。
用聽覺喚起的腦干反應(yīng)(Auditory Evoked BrainstemResponse)(ABR)來對給藥順鉑和化學(xué)保護(hù)劑之前和之后的大鼠的聽力作出評定。在對大鼠以16mg/kg體重的劑量腹腔內(nèi)給藥順鉑前1小時，腹腔內(nèi)給藥依布硒啉或DMSO(載體對照)。給藥順鉑七十二小時后，采集ABR數(shù)據(jù)，處死大鼠，收集耳蝸，切開，用FITC--鬼筆環(huán)肽(用于檢測毛細(xì)胞中的F-肌動蛋白)和DAPI(用于檢細(xì)胞核DNA)染色。
圖8顯示出用順鉑(劑量為16mg/kg體重)、鹽水和二甲亞砜(載體對照)(20)、或順鉑(劑量為16mg/每公斤體重)和依布硒啉(劑量為16mg/每公斤體重)(22)處理的大鼠在8kHz，16kHz，24kHz和32kHz處聽覺的固定閾值變化。每次測定10個耳蝸。PTS是聽力喪失的量度，圖8中的數(shù)據(jù)表明用依布硒啉和順鉑處理大鼠與只用順鉑而不用依布硒啉處理的大鼠比較，PTS的減少更小一些(即，聽力喪失更小一些)圖9顯示出用順鉑(劑量為16mg/每公斤體重)和別嘌呤醇(劑量為16mg/每公斤體重)(30)、或順鉑(劑量為16mg/kg體重)、別嘌呤醇(劑量為8mg/每公斤體重)和依布硒啉(劑量為8mg/每公斤體重)聯(lián)合(32)處理的大鼠在8kHz，16kHz，24kHz和32kHz處聽覺的固定閾值變化。每次測定4個耳蝸。圖9中的數(shù)據(jù)表明用依布硒啉和別嘌呤醇處理大鼠與只用別嘌呤醇而不用依布硒啉處理的大鼠比較，PTS的減少更小一些。
另外，將在本實(shí)施例中用順鉑和依布硒啉組合處理的大鼠的耳蝸切下。將用順鉑、鹽水和DMSO(對照)處理的大鼠的耳蝸也切下。耳蝸的外部聽覺毛細(xì)胞的數(shù)量是順著耳蝸每0.1mm的間隔統(tǒng)計的。從對照大鼠和被處理的大鼠得出的代表性結(jié)果分別顯示在圖10A和10B中。圖10A和10B中的結(jié)果表明聯(lián)合應(yīng)用順鉑和依布硒啉處理的大鼠的耳蝸中外部毛細(xì)胞的喪失的百分率比只用順鉑而不用依布硒啉處理的大鼠的耳蝸中外部毛細(xì)胞的喪失的百分率低。
盡管本文只對本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方案作了說明和描述，但可以理解為在不背離本發(fā)明的主旨和范圍的情況下，可以作出各種改變。
權(quán)利要求
1.一種化學(xué)保護(hù)劑組合物，其包含至少兩種選自下述的化學(xué)保護(hù)劑甲硫氨酸、N-乙?；?DL-甲硫氨酸、S-腺苷甲硫氨酸、半胱氨酸、同型半胱氨酸、胱硫醚、半胱胺、N-乙酰半胱氨酸、谷胱甘肽、谷胱甘肽乙酯、谷胱甘肽二乙酯、谷胱甘肽三乙酯、半胱胺、DiNAC、RibCys、RibCyst、β-LactCys、α-LactCys、MeliCys、MaltCys、CellCys、OTCA、別嘌呤醇、1-甲基別嘌呤醇、2-甲基別嘌呤醇、5-甲基別嘌呤醇、7-甲基別嘌呤醇、1，5-二甲基別嘌呤醇、2，5-二甲基別嘌呤醇、1，7-二甲基別嘌呤醇、2，7-二甲基別嘌呤醇、5，7-二甲基別嘌呤醇、2，5，7-三甲基別嘌呤醇、1-乙氧羰基別嘌呤醇、1-乙氧羰基-5-甲基別嘌呤醇、2-苯基-1，2-苯并異硒唑基-3(2H)-酮和6-diSeCD。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化學(xué)保護(hù)劑組合物，其包含選自別嘌呤醇、2-苯基-1，2-苯并異硒唑基-3(2H)-酮和N-乙酰半胱氨酸的至少兩種化學(xué)保護(hù)劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化學(xué)保護(hù)劑組合物，其包含別嘌呤醇和2-苯基-1，2-苯并異硒唑基-3(2H)-酮。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的化學(xué)保護(hù)劑組合物，其包含別嘌呤醇和N-乙酰半胱氨酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的化學(xué)保護(hù)劑組合物，其包含2-苯基-1，2-苯并異硒唑基-3(2H)-酮和N-乙酰半胱氨酸。
6.一種改善化療法的至少一種副作用的方法，該方法包括給予接受化療的受試者一定量的化學(xué)保護(hù)劑組合物，該一定量的化學(xué)保護(hù)劑組合物能有效改善化療的至少一種副反應(yīng)，所述的化學(xué)保護(hù)劑組合物包括選自L-甲硫氨酸、N-乙酰基-DL-甲硫氨酸、S-腺苷甲硫氨酸、半胱氨酸、同型半胱氨酸、胱硫醚、半胱胺、N-乙酰半胱氨酸、谷胱甘肽、谷胱甘肽乙酯、谷胱甘肽二乙酯、谷胱甘肽三乙酯、DiNAC、RibCys、RibCyst、β-LactCys、α-LactCys、MeliCys、MaltCys、CellCys、OTCA、別嘌呤醇、1-甲基別嘌呤醇、2-甲基別嘌呤醇、5-甲基別嘌呤醇、7-甲基別嘌呤醇、1，5-二甲基別嘌呤醇、2，5-二甲基別嘌呤醇、1，7-二甲基別嘌呤醇、2，7-二甲基別嘌呤醇、5，7-二甲基別嘌呤醇、2，5，7-三甲基別嘌呤醇、1-乙氧羰基別嘌呤醇、1-乙氧羰基-5-甲基別嘌呤醇、2-苯基-1，2-苯并異硒唑基-3(2H)-酮和6-diSeCD的化學(xué)保護(hù)劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述的化學(xué)保護(hù)劑組合物包含選自別嘌呤醇、2-苯基-1，2-苯并異硒唑基-3(2H)-酮和N-乙酰半胱氨酸的化學(xué)保護(hù)劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述的化學(xué)保護(hù)劑組合物包含別嘌呤醇和2-苯基-1，2-苯并異硒唑基-3(2H)-酮。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述的別嘌呤醇以10-2400mg/天的劑量給藥，且所述的2-苯基-1，2-苯并異硒唑基-3(2H)-酮以5-5000mg/天的劑量給藥。
10.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述的化學(xué)保護(hù)劑組合物包含別嘌呤醇和N-乙酰半胱氨酸。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述的別嘌呤醇以10-2400mg/天的劑量給藥，且所述的N-乙酰半胱氨酸以5-5000mg/天的劑量給藥。
12.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述的化學(xué)保護(hù)劑組合物包含2-苯基-1，2-苯并異硒唑基-3(2H)-酮和N-乙酰半胱氨酸。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述的2-苯基-1，2-苯并異硒唑基-3(2H)-酮以5-5000mg/天的劑量給藥，且所述的N-乙酰半胱氨酸以5-5000mg/天的劑量給藥。
14.一種化學(xué)保護(hù)劑組合物，包含(a)選自甲硫氨酸、N-乙?；?DL-甲硫氨酸、S-腺苷甲硫氨酸、半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、谷胱甘肽、谷胱甘肽乙酯、谷胱甘肽二乙酯、谷胱甘肽三乙酯、DiNAC、RibCys、同型半胱氨酸、胱硫醚、半胱胺、OTCA和RibCyst的化學(xué)保護(hù)劑；(b)選自別嘌呤醇、1-甲基別嘌呤醇、2-甲基別嘌呤醇、5-甲基別嘌呤醇、7-甲基別嘌呤醇、1，5-二甲基別嘌呤醇、2，5-二甲基別嘌呤醇、1，7-二甲基別嘌呤醇、2，7-二甲基別嘌呤醇、5，7-二甲基別嘌呤醇、2，5，7-三甲基別嘌呤醇、1-乙氧羰基別嘌呤醇和1-乙氧羰基-5-甲基別嘌呤醇的化學(xué)保護(hù)劑；和(c)選自依布硒啉和6-diSeCD的化學(xué)保護(hù)劑。
15.一種藥物組合物，包含(a)化學(xué)保護(hù)劑，其選自甲硫氨酸、N-乙?；?DL-甲硫氨酸、S-腺苷甲硫氨酸、半胱氨酸、同型半胱氨酸、胱硫醚、半胱胺、N-乙酰半胱氨酸、谷胱甘肽、谷胱甘肽乙酯、谷胱甘肽二乙酯、谷胱甘肽三乙酯、半胱胺、DiNAC、RibCys、RibCyst、β-LactCys、α-LactCys、MeliCys、MaltCys、CellCys、OTCA、別嘌呤醇、1-甲基別嘌呤醇、2-甲基別嘌呤醇、5-甲基別嘌呤醇、7-甲基別嘌呤醇、1，5-二甲基別嘌呤醇、2，5-二甲基別嘌呤醇、1，7-二甲基別嘌呤醇、2，7-二甲基別嘌呤醇、5，7-二甲基別嘌呤醇、2，5，7-三甲基別嘌呤醇、1-乙氧羰基別嘌呤醇、1-乙氧羰基-5-甲基別嘌呤醇、2-苯基-1，2-苯并異硒唑基-3(2H)-酮和6-diSeCD；和(b)化療劑。
16.權(quán)利要求15所述的方法，其中所述的化療劑含鉑。
17.權(quán)利要求16所述的方法，其中所述的化療劑包括順鉑。
全文摘要
一方面，本申請涉及化學(xué)保護(hù)劑組合物，其包含至少兩種本發(fā)明公開的化學(xué)保護(hù)劑。本發(fā)明的化學(xué)保護(hù)劑組合物是很有效的，例如，它能減輕至少一種化療引起的副反應(yīng)。另一方面，本發(fā)明提供一種減少至少一種化療產(chǎn)生的副作用的方法，該方法包括給予接受化療的患者一定量的化學(xué)保護(hù)劑組合物，以有效地改善至少一種化療的副作用。
文檔編號C07H19/167GK1596111SQ02823676
公開日2005年3月16日 申請日期2002年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2001年11月29日
發(fā)明者J·基爾, E·D·林奇 申請人:桑得醫(yī)藥品公司