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按植物偏愛密碼子合成降鈣素基因相關肽基因及其在植物中的應用的制作方法

文檔序號:3540292閱讀:450來源:國知局
專利名稱:按植物偏愛密碼子合成降鈣素基因相關肽基因及其在植物中的應用的制作方法
技術領域
本發(fā)明涉及分子生物學、酶學、生理學以及基因工程等領域。具體地,本發(fā)明涉及一種首次根據(jù)植物偏愛密碼子設計人工合成的降鈣素基因相關肽(Calcitoningene-related peptide,CGRP)的核酸序列。本發(fā)明還涉及降鈣素基因相關肽在植物中的表達。
本發(fā)明中,我們用化學合成法,首次根據(jù)植物偏愛密碼子設計了可以在植物中表達的具有生物活性的降鈣素基因相關肽及其編碼序列。
在本發(fā)明被公布之前,尚未有任何公開或報道過本專利申請中提及的在植物中表達的降鈣素基因相關肽編碼序列。
本發(fā)明的第二目的是提供一種在植物中表達的降鈣素基因相關肽。
本發(fā)明的第三目的是提供一種利用重組技術生產上述新的降鈣素基因相關肽的蛋白及核酸序列的方法。
本發(fā)明還提供了這種新的降鈣素基因相關肽和編碼序列的應用。
在本發(fā)明的一個方面,提供了一種人工設計并合成的含有新的降鈣素基因相關肽基因的克隆載體pGEM-5zf-cgrp,該載體包括根據(jù)植物偏愛密碼子設計的降鈣素基因相關肽的核酸序列,所述的核酸序列與SEQ ID NO.5中從核苷酸第18-130位DNA分子的核苷酸序列有至少75%的同源性;或者所述的核苷酸序列能在中度嚴緊條件下與SEQ ID NO.5中從核苷酸第18-130位的核苷酸序列雜交。較佳地,所述的序列編碼具有SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列的多肽。更佳地,所述的序列具有SEQID NO.5中從核苷酸第18-130位的核苷酸序列。
在本發(fā)明的另一方面,提供了一種在植物中表達的降鈣素基因相關肽,它包括具有SEQ ID NO.6氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段,或其活性衍生物。較佳地,該多肽是具有SEQ ID NO.6序列的多肽。
在本發(fā)明的另一方面,還提供了幾種表達載體,它包含上述的DNA分子。
在本發(fā)明的另一方面,還提供了一種用上述載體轉化的宿主細胞。在實例中該宿主細胞是煙草和番茄。
在本發(fā)明的另一方面,還提供了一種在植物中產生和表達具有活性的降鈣素基因相關肽的方法,其步驟如下(1)將人工合成的編碼具有降鈣素基因相關肽活性多肽的核苷酸序列可操作地連于表達調控序列,形成降鈣素基因相關肽蛋白表達載體,所述的核苷酸序列與SEQ IDNO.5中從核苷酸第18-130位的核苷酸序列有至少75%的同源性;(2)將步驟(1)中的表達載體轉入宿主細胞,形成降鈣素基因相關肽的重組細胞;(3)在適合表達降鈣素基因相關肽的條件下,培養(yǎng)步驟(2)中的重組細胞;(4)再生重組細胞,獲得表達降鈣素基因相關肽的轉基因植物及其后代,包括植物種子及植物組織。
較佳地,在該方法中使用的核酸序列具有SEQ ID NO.5中第18-130位的序列。
在本發(fā)明中,術語“降鈣素基因相關肽編碼序列”指編碼具有降鈣素基因相關肽活性的多肽的核苷酸序列,如SEQ ID NO.5中第18-130位核苷酸序列及其簡并序列。該簡并序列是指,位于SEQ ID NO.5序列的編碼框第18-130位核苷酸中,有一個或多個密碼子被編碼相同氨基酸的簡并密碼子所取代后而產生的序列。由于密碼子的簡并性,所以與SEQ ID NO.5中第18-130位核苷酸序列同源性低至約75%的簡并序列也能編碼出SEQ ID NO.6所述的序列。該術語還包括能在中度嚴緊條件下,更佳的在高度嚴緊條件下與SEQ ID NO.5中從核苷酸第18-130位的核苷酸序列雜交的核苷酸序列。該術語還包括與SEQ ID NO.5中從核苷酸第18-130位的核苷酸序列的同源性至少75%,較佳地至少80%,更佳地至少90%,最佳地至少95%的核苷酸序列。
該術語還包括能編碼具有與天然的降鈣素基因相關肽相同功能的蛋白的SEQ IDNO.5中開放閱讀框序列的變異形式。這些變異形式包括(但并不限于)若干個(通常為1-90個,較佳地1-60個,更佳地1-20個,最佳地1-10個)核苷酸的缺失、插入和/或取代,以及在5’和/或3’端添加數(shù)個(通常為60個以內,較佳地為30個以內,更佳地為10個以內,最佳地為5個以內)核苷酸。
在本發(fā)明中,術語“降鈣素基因相關肽”指具有降鈣素基因相關肽活性的SEQ IDNO.6序列的多肽。該術語還包括具有與降鈣素基因相關肽在植物中表達相同功能的SEQ ID NO.6序列的變異形式。這些變異形式包括(但并不限于)若干個(通常為1-20個,較佳地1-15個,更佳地1-10個,最佳地1-5個)氨基酸的缺失、插入和/或取代,以及在C末端和/或N末端添加一個或數(shù)個(通常為15個以內,較佳地為10個以內,更佳地為5個以內)氨基酸。例如,在本領域中,用性能相近或相似的在植物中偏愛的氨基酸進行取代時,通常不會改變蛋白質的功能。又比如,在C末端和/或N末端添加一個或數(shù)個植物偏愛密碼子所表達的氨基酸通常也不會改變蛋白質的功能。該術語還包括在植物中的表達的降鈣素基因相關肽的活性片段和活性衍生物。
本發(fā)明的降鈣素基因相關肽的變異形式包括同源序列、保守性變異體、等位變異體、天然突變體、誘導突變體、在高或低的嚴緊條件下能與降鈣素基因相關肽DNA雜交的DNA所編碼的蛋白、以及利用抗降鈣素基因相關肽的抗血清獲得的多肽或蛋白。
在本發(fā)明中,“降鈣素基因相關肽保守性變異多肽”是指與SEQ ID NO.6的氨基酸序列相比,有至多10個,較佳地至多8個,更佳地至多5個氨基酸被性質相似或相近的氨基酸所替換而形成多肽。這些保守性變異多肽最好根據(jù)表1進行替換而產生。
表1


發(fā)明還包括人工合成的在植物中表達的降鈣素基因相關肽或多肽的類似物。這些類似物與降鈣素基因相關肽的差別可以是氨基酸序列上的差異,也可以是不影響序列的修飾形式上的差異,或者兼而有之。這些多肽包括天然或誘導的遺傳變異體。誘導變異體可以通過各種技術得到,如通過輻射或暴露于誘變劑而產生隨機誘變,還可通過定點誘變法或其他已知分子生物學的技術。類似物還包括具有不同于天然L-氨基酸的殘基(如D-氨基酸)的類似物,以及具有非天然存在的或合成的氨基酸(如β、γ-氨基酸)的類似物。應理解,本發(fā)明的多肽并不限于上述例舉的代表性的多肽。
修飾(通常不改變一級結構)形式包括體內或體外的多肽的化學衍生形式如乙?;螋然?。修飾還包括糖基化,如那些在多肽的合成和加工中或進一步加工步驟中進行糖基化修飾而產生的多肽。這種修飾可以通過將多肽暴露于進行糖基化的酶(如哺乳動物的糖基化酶或去糖基化酶)而完成。修飾形式還包括具有磷酸化氨基酸殘基(如磷酸酪氨酸,磷酸絲氨酸,磷酸蘇氨酸)的序列。還包括被修飾從而提高了其抗蛋白水解性能或優(yōu)化了溶解性能的多肽。
在本發(fā)明中,可選用本領域已知的各種載體,如市售的載體,包括質粒,粘粒等。在生產本發(fā)明的在植物中表達的降鈣素基因相關肽時,可以將降鈣素基因相關肽編碼序列可操作地連于表達調控序列,從而形成降鈣素基因相關肽表達載體。
如本文所用,“可操作地連于”指這樣一種狀況,即線性DNA序列的某些部分能夠影響同一線性DNA序列其他部分的活性。例如,如果信號肽DNA作為前體表達并參與多肽的分泌,那么信號肽(分泌前導序列)DNA就是可操作地連于多肽DNA;如果啟動子控制序列的轉錄,那么它是可操作地連于編碼序列;如果核糖體結合位點被置于能使其翻譯的位置時,那么它是可操作地連于編碼序列。一般,“可操作地連于”意味著相鄰,而對于分泌前導序列則意味著在閱讀框中相鄰。
在本發(fā)明中,術語“宿主細胞”為真核細胞。常用的真核宿主細胞包括酵母細胞、煙草細胞、番茄細胞及其它植物細胞。
還可用Nothern印跡法技術分析降鈣素基因相關肽基因產物的表達,即分析降鈣素基因相關肽的RNA轉錄物在細胞中的存在與否和數(shù)量。
降鈣素基因相關肽RNA的Nothern印跡分析和特異抗體的降鈣素基因相關肽Western印跡分析可以聯(lián)合使用,以證實在生物樣本中降鈣素基因相關肽的表達。
此外,本發(fā)明還提供了一種可用作探針的核酸分子,該分子通常具有降鈣素基因相關肽核苷酸編碼序列的8-50個連續(xù)核苷酸,較佳地具有15-50個連續(xù)核苷酸。該探針可用于檢測樣品中是否存在編碼的核酸分子。
本發(fā)明還提供了檢測樣品中是否存在核苷酸序列的降鈣素基因相關肽方法,它包括用上述的探針與樣品進行雜交,然后檢測探針是否發(fā)生了結合。較佳地,該樣品是PCR擴增后的產物,其中PCR擴增引物對應于降鈣素基因相關肽核苷酸編碼序列,并可位于該編碼序列的兩側或中間。引物長度一般為15-50個核苷酸。
本發(fā)明的降鈣素基因相關肽核苷酸編碼序列通??梢杂萌斯ず铣傻姆椒ǐ@得。
一旦獲得了有關的序列,就可以用重組法來大批量地獲得有關序列。這通常是將其克隆入載體,再轉入細胞,然后通過常規(guī)方法從增殖后的宿主細胞中分離得到有關序列。
表2為本發(fā)明的按植物偏愛密碼子設計人工合成的降鈣素基因相關肽與人類降鈣素基因相關肽核苷酸序列(GenBank Accession No.AAA52011.1)的同源比較(GAP)表。相同的核苷酸在兩個序列之間用豎線符標出。
表3為本發(fā)明的按植物偏愛密碼子設計的降鈣素基因相關肽與人類降鈣素基因相關肽的氨基酸序列(GenPept Accession No.K03512.1)的同源比較(FASTA)表。其中,相同的氨基酸在兩個序列之間用用豎線符標出。
實施例1,降鈣素基因相關肽基因的合成1.基因合成(gene synthesis)降鈣素基因相關肽基因由本實驗室根據(jù)植物偏愛密碼子設計并委托上海生工生物工程服務有限公司合成之后連入pGEM-5zf載體。
2.酶切(restriction enzyme cutting)將含合成基因的質粒載體用BamHI及SacI雙酶切,切下合成的降鈣素基因相關肽基因;3.連接(ligation)將切下的基因連入已經用BamHI及SacI切好的質粒pBI121和改造的pCAMBIA2301植物表達載體大片段中,用藍白篩選檢測轉化的大腸桿菌陽性克隆。
4.基因的PCR檢測以以下序列為引物,用合成的基因為模板進行PCR檢測SEQ ID NO.1GGA ATT CCG GAT CCA TGG GTT GCGSEQ ID NO.2CCC AAG GTT GCA GCT CGT TAT TAG AAAGCTPCR條件為94℃5分鐘,隨之以94℃30秒、56℃30秒和72℃1分鐘進行35個循環(huán),最后以72℃延伸10分鐘。電泳檢測PCR擴增產物,獲得擴增片段長度為151bp。
將基因轉入表達載體后用以下引物對所含基因進行PCR檢測SEQ ID NO.3ATG GCT TGC GAT ACT GCT ACCSEQ ID NO.4CAT CGC AAG ACC GGC AAC AGPCR條件為94℃5分鐘,隨之以94℃30秒、60℃30秒和72℃1分鐘進行35個循環(huán),最后以72℃延伸10分鐘。電泳檢測PCR擴增產物,獲得擴增片段長度為200bp。
實施例2,降鈣素基因相關肽基因的序列信息與同源性分析本發(fā)明的降鈣素基因相關肽基因的全長為151bp(含接頭),詳細序列見SEQ IDNO.5,其中開放讀框位于15-136位核苷酸。根據(jù)推導出的全長降鈣素基因相關肽的氨基酸序列,共37個氨基酸殘基,分子量為3792.3pI為9.50。詳細序列見SEQID NO.6。
將按植物偏愛密碼子設計合成的降鈣素基因相關肽全長序列及其編碼蛋白質用BLAST程序在Non-redundant GenBank+EMBL+DDBJ+PDB和Non-redundantGenBank CDS translations+PDB+SwissProt+Superdate+PIR數(shù)據(jù)庫中進行核苷酸和蛋白質同源性檢索,結果發(fā)現(xiàn)它與人類降鈣素基因相關肽基因存在一定的同源性。在核苷酸水平上,它與人類降鈣素基因相關肽基因的全編碼序列(GenBank AccessionNo.K03512.1)有72%的相同性(見表2),在氨基酸水平上,它與人類降鈣素基因相關肽(GenPept Accession No.AAA52011.1)的第36-72位氨基酸殘基有100%的相似性(見表3)。由上可見,在植物中表達的降鈣素基因相關肽與人類降鈣素基因相關肽基因無論從核酸還是蛋白水平上都存在較高的同源性,可以認為兩者在功能上也有很高相似性。
實施例3,降鈣素基因相關肽在煙草和番茄細胞中進行真核細胞表達含目的基因(降鈣素基因相關肽基因)表達載體的構建將含降鈣素基因相關肽基因的中間載體PGEM-5zf進一步克隆到植物雙元表達載體(如pBI121、pCAMBIA2301)中,在保證閱讀框架正確的前提下鑒定好的表達載體,再將其轉入農桿菌(如EHA105)中,利用葉盤法技術轉化模式植物煙草和番茄。
利用葉盤法轉化煙草1.用無菌牙簽挑取YEB選擇平板上的陽性菌落,接種于2mlYEB液體(Sm+,Kan+),28度,200rpm振蕩培養(yǎng)24-36小時;2.室溫下4,000g離心10min;3.棄上清,菌體用1/2MS液體培養(yǎng)基懸浮,稀釋到原體積的5-20倍,使菌液的OD600=0.5左右;4.取生長兩周左右的煙草的無菌葉片,去掉其主葉脈,將其剪成約1平方厘米見方的小葉片;5.將葉片放入制備好的菌液中,浸泡2-5min,在無菌濾紙上吸干菌液;6.把經侵染的葉片放于MS培養(yǎng)基上,28℃暗培養(yǎng)48小時;7.將葉片轉到含卡那霉素(Kan)的篩選培養(yǎng)基(MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+Kan 50mg/L+cb 250mg/L)上,25-28℃光照下培養(yǎng),7-15天可見抗性愈傷組織的形成;8.約20天后可見分化芽長出,待芽長大后,切下,置于生根培養(yǎng)基(1/2MS+NAA0.5mg/L+Kan 25mg/L)上進行生根培養(yǎng),2-7天左右生根;9.等根系發(fā)達后,將植株取出,用無菌水洗凈附著的固體培養(yǎng)基,移入土壤中,剛開始用玻璃罩罩幾天,待植株健壯后再取下玻璃罩,溫室中培養(yǎng)。轉化番茄1.將番茄種子滅菌后播于1/2MS培養(yǎng)基上,約10天左右長出子葉;2.農桿菌培養(yǎng)過夜,OD為0.8-1.5,室溫下4,000g離心10min;3.棄上清,菌體用1/2MS液體培養(yǎng)基懸浮,加入子葉浸泡10分鐘;4.在無菌濾紙上吸干菌液;將子葉放在MS1培養(yǎng)基上,共培養(yǎng)兩天;5.將葉片轉到含Kan的愈傷和分化培養(yǎng)基(MS+ZT1.0mg/L+IAA1.0mg/L+Kan50mg/L+cb250mg/L)上,25-28℃光照下培養(yǎng),7-15天可見抗性愈傷組織的形成和植株再生;6.待芽長大后約1-2厘米的時將幼芽移植在生根培養(yǎng)基中(1/2MS)上進行生根培養(yǎng),2-7天左右生根;7.根系發(fā)達后,將植株取出,用無菌水洗凈附著的固體培養(yǎng)基,在珍珠巖中馴化一周,用1%的MS澆灌,移入土中。利用western blot檢測降鈣素基因相關肽在轉基因煙草和番茄植株中的表達1.蛋白的提取a)取50mg葉片,加入100ul 1*PBS(KH2PO40.2g/l,Na2HPO41.15g/l,KCl0.2g/l,NaCl8g/l)于1.5ml離心管中研磨;b)13000,4℃離心10分鐘;c)取上清,備用。注以上過程于冰上進行。
2.蛋白的定量參考Bradford法(Bradford,1976)。取2ul蛋白樣品,加入1ml Bradford試劑,混勻后,分光光度計測OD595。
3.SDS-PAGE分離蛋白SDS-PAGE的制備參考《分子克隆》(Sambrook等,1989);a)加樣前,將樣品置于含50mmol/LDTT的加樣緩沖液(2*加樣緩沖液甘油2.4g,1M Tris-HCl pH6.81ml;溴酚蘭0.01%,H2O定容至20ml),煮沸10分鐘;b)室溫100V電壓下聚丙烯酰胺凝膠電泳,直到指示劑(溴酚蘭)前沿達到凝膠底部。
4.蛋白質向硝酸纖維膜上轉移a)轉移之前,用轉移緩沖液(39mmol甘氨酸,48mmol Tris Base,0.037%SDS,20%甲醇)平衡凝膠和硝酸纖維膜30分鐘;b)室溫下用半干式電轉儀轉移1h,凝膠兩側各墊3層Whatman濾紙;5.膜上蛋白的檢測a)將硝酸纖維膜浸在封閉液中,37℃緩慢搖動、封閉60分鐘(封閉液取5g脫脂奶粉溶于100ml 1*PBS(含0.5g疊氮鈉));b)再將濾膜浸泡在洗滌緩沖液中,37℃洗滌兩次,每次15分鐘;c)加入第一抗體(抗降鈣素基因相關肽的抗體),37℃溫育30分鐘;同步驟b),洗滌三次;d)加入第二抗體(親和素-堿性磷酸酶復合物),37℃溫育30分鐘;同步驟b),洗滌兩次;e)加入底物顯色觀察蛋白條帶。
本發(fā)明涉及的序列及記號分列如下(1)SEQ ID NO.1的信息(i)序列特征(A)長度24bp(B)類型核苷酸(C)鏈性單鏈(D)拓撲結構線性
(ii).分子類型寡核苷酸(iii).序列描述SEQ ID NO.1GGAATTCCGGATCCATGGGTTGCG(2)SEQIDNO.2的信息(i)序列特征(A)長度30bp(B)類型核苷酸(C)鏈性單鏈(D)拓撲結構線性(ii).分子類型寡核苷酸(iii).序列描述SEQ ID NO.2CCCAAGGTTGCAGCTCGTTATTAGAAAGCT(3)SEQ ID NO.3的信息(i)序列特征(A)長度21bp(B)類型核苷酸(C)鏈性單鏈(D)拓撲結構線性(ii).分子類型寡核苷酸(iii).序列描述SEQ ID NO.3ATGGCTTGCGATACTGCTACC(4)SEQ ID NO.4的信息(i)序列特征(A)長度20bp(B)類型核苷酸(C)鏈性單鏈(D)拓撲結構線性(ii).分子類型寡核苷酸(iii).序列描述SEQ ID NO.4
CATCGCAAGACCGGCAACAG(5)SEQ ID NO.5的信息(i)序列特征(A)長度151bp(B)類型核苷酸(C)鏈性單鏈(D)拓撲結構線性(ii).分子類型核苷酸(iii).序列描述SEQ ID NO.51GGAATTCCGGATCCATGGCTTGCGATACTGCTACCTGCGTTACTCATAGG51 CTTGCTGGACTTCTTTCTAGGTCTGGAGGAGTTGTTAAGAACAACTTCGT100 TCCAACCAACGTTGGATCTAAGGCTTTCTAATAACGAGCTCCAAGCTTGG151 G(6)SEQ ID NO.6的信息(i)序列特征(A)長度37氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈性單鏈(D)拓撲結構線性(ii).分子類型多肽(iii).序列描述SEQ ID NO.61ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKAF37表2p 18 gcttgcgatactgctacctgcgttactcataggcttgctggacttctttc|| || || ||||| || || || |||||| |||| || || | ||h 106 gcctgtgacactgccacttgtgtgactcatcggctggcaggcttgctgagp 69 taggtctggaggagttgttaagaacaacttcgttccaaccaacgttggat|| || || || || || ||||||||||| || || ||||| || || |h 156 cagatcagggggtgtggtgaagaacaactttgtgcccaccaatgtgggttp 119 ctaaggctttc| || || ||h 206 ccaaagcctttPercent Identity72%in nt overlap上列本發(fā)明的按植物偏愛密碼子設計的降鈣素基因相關肽的核酸序列下列人類的降鈣素基因相關肽的核酸序列(GenBank Accession No.K03512.1)表3p ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKAF 37|||||||||||||||||||||||||||||||||||||h 36 ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKAF 72plantcgrp本發(fā)明的按植物偏愛密碼子設計的降鈣素基因相關肽氨基酸序列humcgrp人類降鈣素基因相關肽氨基酸序列(GenBankAccessionNo.AAA52011.1)
權利要求
1.一種人工合成的DNA分子,其特征在于,它包括根據(jù)植物偏愛密碼子設計的編碼具有降鈣素基因相關肽活性的多肽的核苷酸序列,而且所述的核苷酸序列與SEQ ID NO.5中從核苷酸第18-130位的核苷酸序列有至少75%的同源性;或者所述的核苷酸序列能在中度嚴緊條件下與SEQ ID NO.5中從核苷酸第18-130位的核苷酸序列雜交。
2.如權利要求1所述的DNA分子,其特征在于,所述的序列編碼具有SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列的多肽。
3.如權利要求1所述的DNA分子,其特征在于,該序列具有SEQ ID NO.5中從核苷酸第18-130位的核苷酸序列。
4.一種在植物中表達的降鈣素基因相關肽多肽,其特征在于,它包括具有SEQID NO.6氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段,或其活性衍生物。
5.如權利要求4所述的多肽,其特征在于,該多肽是在植物中表達的具有SEQ IDNO.6序列的多肽。
6.一種載體,其特征在于,它包含權利要求1所述的DNA。
7.一種用權利要求6所述載體轉化的宿主細胞,其特征在于它是真核細胞。
8.一種在植物中產生和表達具有降鈣素基因相關肽活性的多肽的方法,特征在于其步驟如下(1)將人工合成的編碼具有降鈣素基因相關肽活性多肽的核苷酸序列可操作地連于表達調控序列,形成降鈣素基因相關肽蛋白表達載體,所述的核苷酸序列與SEQ IDNO.5中從核苷酸第18-130位的核苷酸序列有至少75%的同源性;(2)將步驟(1)中的表達載體轉入宿主細胞,形成降鈣素基因相關肽蛋白的重組細胞(3)在適合表達降鈣素基因相關肽的條件下,培養(yǎng)步驟(2)中的重組細胞;(4)再生重組細胞,獲得表達降鈣素基因相關肽的轉基因植物及其后代,包括植物種子及植物組織。
9.一種核酸分子,其特征在于,它包含權利要求1所述的DNA分子中8-100個連續(xù)核苷酸。
10.一種用于檢測樣品中是否存在降鈣素基因相關肽核苷酸序列的方法,其特征在于它包括用權利要求9所述探針與樣品進行雜交,然后檢測探針是否發(fā)生了結合,該樣品是PCR擴增后的產物,其中PCR擴增引物對應于降鈣素基因相關肽核苷酸編碼序列,并可位于該編碼序列的兩側或中間,引物長度為15~50個核苷酸。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種按植物偏愛密碼子設計合成的編碼降鈣素基因相關肽的基因。涉及包含所說基因的融合基因構建體,攜帶該構建體的新的重組表達載體。該表達載體具有在普通植物中高效表達的特性。還涉及被所說的表達載體轉化的植物細胞,以及由所說的轉化細胞產生的表達降鈣素基因相關肽的轉基因植物及其后代,包括植物種子及植物組織。本發(fā)明還提供了在樣品中檢測降鈣素基因相關肽核酸序列和多肽的方法。
文檔編號C07K14/575GK1342756SQ0112691
公開日2002年4月3日 申請日期2001年9月28日 優(yōu)先權日2001年9月28日
發(fā)明者唐克軒, 龐永珍, 趙凌俠, 孫小芬 申請人:復旦大學
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