一種肉蓯蓉生物防治抗病促生的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物防治肥的制備領(lǐng)域，具體設(shè)及一種肉巧蓉生物防治抗病促生的方 法。
【背景技術(shù)】
[000引 肉巧蓉（學(xué)名；Cistanche deserticola Ma)是高大草本，高40-160厘米，大部分 地下生，花期5-6月，果期6-8月。
[0003] 肉巧蓉是一種寄生在沙漠樹木梭梭根部的寄生植物，從梭梭寄主中吸取養(yǎng)分及水 份。素有"沙漠人參"之美譽(yù)，具有極高藥用價(jià)值，是中國傳統(tǒng)名貴中藥材。肉巧蓉味甘、性 溫，具有補(bǔ)腎壯陽、填精補(bǔ)髓、養(yǎng)血潤燥、悅色延年等功效，主治補(bǔ)腎陽、益精血、潤腸道。肉 巧蓉藥食兩用，長期食用可增加體力、增強(qiáng)耐力W及抵抗疲勞，同時(shí)又可W增強(qiáng)人類及動(dòng)物 的性能力及生育力。肉巧蓉在歷史上就被西域各國作為上貢朝廷的珍品，也是歷代補(bǔ)腎壯 陽類處方中使用頻度最高的補(bǔ)益藥物之一。
[0004] 危害肉巧蓉主要病害是莖腐病，化sarium sambucinum是病原菌之一。植物病理 真菌主要存在于±壤中，在植物生長中感染植物，引起植物病害、造成生產(chǎn)損失。因此，要從 生物防治的角度消除植物真菌病害，除了殺滅植株上的病理真菌，殺滅或抑制±壤中的病 理真菌也至關(guān)重要，而使用具有生物防治功效的生物肥是實(shí)現(xiàn)該一目的的有效途徑。在各 種生物肥中，長久W來我國應(yīng)用的都是無芽抱菌類。但是無芽抱菌抗逆性低，對于干燥高溫 的抵抗能力差，所W當(dāng)制成液體或者吸附劑時(shí)穩(wěn)定性不高。生物肥發(fā)展的新趨勢應(yīng)是大力 發(fā)展抗逆性高、能夠長期穩(wěn)定生存的芽抱桿菌。特別是芽抱桿菌能夠產(chǎn)生多種抗真菌物質(zhì)， 對植物病原菌有顯著抑制作用，并且對人畜無害，也不會(huì)污染環(huán)境，將在防治植物真菌病害 中起重要作用。
[0005] 芽抱桿菌形態(tài)上呈直或者近直的桿狀，好氧或者兼性厭氧，革蘭氏陽性，在特定環(huán) 境條件下能產(chǎn)生抗逆性內(nèi)生抱子。芽抱桿菌在植物中廣泛定殖，被認(rèn)為是公認(rèn)的食品級安 全微生物（generally regarded as safety, GRA巧?？莶菅勘U菌是一種典型的芽抱桿菌， 產(chǎn)生抗菌蛋白、多膚類物質(zhì)、脂類物質(zhì)及beta葡聚糖酶等抗菌物質(zhì)，特別是beta葡聚糖酶 等水解酶類與其抗植物病理真菌能力有密切關(guān)系，因?yàn)檎婢?xì)胞壁的組成是葡聚糖。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供了一種肉巧蓉生物防治抗病促生的方法，通過將產(chǎn)beta葡聚糖酶的 枯草芽抱桿菌（CICC 10339)融入肉巧蓉天然菌群中，制成能夠通過生物防治途徑有效抑 制殺滅肉巧蓉病理真菌的生物肥。
[0007] 一種肉巧蓉生物防治抗病促生的方法，包括W下步驟：
[000引 1)將枯草芽抱桿菌（CICC 10339)進(jìn)行培養(yǎng)，制成密度109~10 i°c化/血的高密度 菌懸液；
[0009] 2)將肉巧蓉健康枝條剪成小段進(jìn)行堆肥，堆肥過程中噴施步驟1)中的高密度菌 懸液，堆肥結(jié)束后進(jìn)行發(fā)酵，經(jīng)發(fā)酵后得到能有效抑制殺滅肉巧蓉病理真菌的生物肥，將該 生物肥用在肉巧蓉生物防治抗病促生上。
[0010] 本發(fā)明中，將肉巧蓉健康枝條剪成小節(jié)堆肥，使所制備生物肥中的菌群即為健康 肉巧蓉植株本身天然菌群，此菌群與肉巧蓉植株協(xié)同進(jìn)化生長，形成了互益共生體系，對病 害真菌有一定生物防治作用。進(jìn)一步地，將能夠產(chǎn)beta葡聚糖酶的枯草芽抱桿菌（CICC 10339)加入堆肥中，顯著加強(qiáng)對肉巧蓉病害真菌的生物防治作用?？莶菅勘U菌（CICC 10339)由于產(chǎn)beta葡聚糖酶，對肉巧蓉植株纖維有良好分解作用，為堆肥發(fā)酵過程所必 須，故能夠充分融入到堆肥菌群中穩(wěn)定持久地增殖。如同乳酸菌對于動(dòng)物的益生作用，抑制 殺滅植物病理真菌的微生物可W稱之為植物益生菌。本發(fā)明所制備生物肥中，枯草芽抱桿 菌（CICC 10339)即是肉巧蓉益生菌，對肉巧蓉病理真菌有顯著生物防治作用。
[0011] 步驟1)中，枯草芽抱桿菌（CICC 10339)采用現(xiàn)有技術(shù)，來自中國工業(yè)微生物菌 種保藏管理中屯、（CICC)，地址；北京市朝陽區(qū)酒仙橋中路24號院6號樓；保藏日期為2007 年，菌種保持編號為10339?？莶菅勘U菌（CICC 10339)可W向中國工業(yè)微生物菌種保藏 管理中屯、購買。
[0012] 將枯草芽抱桿菌（CICC 10339)進(jìn)行培養(yǎng)，包括；枯草芽抱桿菌（CICC10339)的出 發(fā)密度為1〇6~1〇7個(gè)/111以接種至液體培養(yǎng)基中接種量為1%~5%，33°C~39°C振蕩培養(yǎng) 20~2她，至菌液密度為10 9~10 i°c化/mL的高密度菌懸液。
[0013] 進(jìn)一步優(yōu)選，將枯草芽抱桿菌（CICC 10339)進(jìn)行培養(yǎng)，包括；枯草芽抱桿菌（CICC 10339)的出發(fā)密度為106~10 7個(gè)/111以接種至液體培養(yǎng)基中接種量為2%~3%，36°C~ 37°C振蕩培養(yǎng)22~26h，至菌液密度為10 9~10 i°c化/mL的高密度菌懸液。
[0014] 所述的液體培養(yǎng)基，W 1L計(jì)，包括W下組分：
[0015]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種肉蓯蓉生物防治抗病促生的方法，其特征在于，包括以下步驟： 1) 將枯草芽孢桿菌CICC 10339進(jìn)行培養(yǎng)，制成密度IO9~10 ltlCfVmL的高密度菌懸 液； 2) 將肉蓯蓉健康枝條剪成小段進(jìn)行堆肥，堆肥過程中噴施步驟1)中的高密度菌懸液， 堆肥結(jié)束后進(jìn)行發(fā)酵，經(jīng)發(fā)酵后得到能有效抑制殺滅肉蓯蓉病理真菌的生物肥，將該生物 肥用在肉蓯蓉生物防治抗病促生上。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肉蓯蓉生物防治抗病促生的方法，其特征在于，步驟1)中，將 枯草芽孢桿菌CICC 10339進(jìn)行培養(yǎng)，包括：枯草芽孢桿菌CICC 10339的出發(fā)密度為IO6~ IO7個(gè)/mL，接種至液體培養(yǎng)基中接種量為1%~5%，33°C~39°C振蕩培養(yǎng)20~28h，至菌 液密度為IO 9~10 1(lcfu/mL的高密度菌懸液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的肉蓯蓉生物防治抗病促生的方法，其特征在于，步驟1)中，將 枯草芽孢桿菌CICC 10339進(jìn)行培養(yǎng)，包括：枯草芽孢桿菌CICC 10339的出發(fā)密度為IO6~ IO7個(gè)/mL，接種至液體培養(yǎng)基中接種量為2%~3%，36°C~37°C振蕩培養(yǎng)22~26h，至菌 液密度為IO 9~10 1(lcfu/mL的高密度菌懸液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的肉蓯蓉生物防治抗病促生的方法，其特征在于，所述的液 體培養(yǎng)基，以IL計(jì)，包括以下組分： 葡萄糖 11~17g; 牛肉膏 20~30g; 磷酸二氫鉀 1.5~3.5g; 花生餅粉 7~13g; 調(diào)節(jié) pH = 6. 5 ~7. 5。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的肉蓯蓉生物防治抗病促生的方法，其特征在于，所述的液體 培養(yǎng)基，以IL計(jì)，包括以下組分： 葡萄糖 Mg; 牛肉膏 25g; 磷酸二氫鉀 2.45g; 花生餅粉 IOg; 調(diào)節(jié) pH = 7. 0。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肉蓯蓉生物防治抗病促生的方法，其特征在于，步驟2)中，堆 肥過程中噴施步驟1)中的高密度菌懸液，包括：在堆肥內(nèi)部溫度達(dá)到30°C~34°C時(shí)，噴施 步驟1)中的高密度菌懸液，繼續(xù)堆肥，待堆肥內(nèi)部溫度達(dá)到41°C~45°C時(shí)堆肥結(jié)束。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的肉蓯蓉生物防治抗病促生的方法，其特征在于，步驟2)中，堆 肥過程中噴施步驟1)中的高密度菌懸液，包括：在堆肥內(nèi)部溫度達(dá)到32°C時(shí)，噴施步驟1) 中的高密度菌懸液，繼續(xù)堆肥，待堆肥內(nèi)部溫度達(dá)到43 °C時(shí)堆肥結(jié)束。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肉蓯蓉生物防治抗病促生的方法，其特征在于，步驟2)中，堆 肥結(jié)束后，將堆肥攪拌攤涼。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肉蓯蓉生物防治抗病促生的方法，其特征在于，步驟2)中，所 述的發(fā)酵采用自然狀態(tài)下發(fā)酵。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種肉蓯蓉生物防治抗病促生的方法，包括：將枯草芽孢桿菌制成密度109～1010cfu/mL的高密度菌懸液；將肉蓯蓉健康枝條剪成小段進(jìn)行堆肥，堆肥過程中噴施枯草芽孢桿菌高密度菌懸液，經(jīng)發(fā)酵后得到能有效抑制殺滅肉蓯蓉病理真菌的生物肥，將該生物肥用在肉蓯蓉生物防治抗病促生上。本發(fā)明中，產(chǎn)beta葡聚糖酶的枯草芽孢桿菌是對肉蓯蓉起抗病促生作用的植物益生菌，將其加入堆肥中，顯著加強(qiáng)對肉蓯蓉病害真菌的生物防治和促生作用。堆肥過程處理簡便，無廢水排放，投資少、能耗低、易操作，易于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)，具有良好的經(jīng)濟(jì)效益和廣闊的應(yīng)用前景。
【IPC分類】C05F17-00, C05G3-00
【公開號】CN104672010
【申請?zhí)枴緾N201510063142
【發(fā)明人】胡慧雯, 徐薇薇, 吳淵, 阮暉, 杜巖松, 許麗珍, 吳孔華, 莫建平, 史金昕波, 繆丹, 俞雨, 吳盛彬, 徐騰洋
【申請人】浙江大學(xué)
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2015年2月4日