第六指在組織胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物教學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種第六指在組織胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用方法。
【背景技術(shù)】
[0002]人類(lèi)先天性指部骨骼畸形是一種常見(jiàn)的遺傳病。人類(lèi)胚胎發(fā)育從第四周末開(kāi)始在腹外側(cè)壁上出現(xiàn)兩對(duì)隆起，即上肢芽和下肢芽。經(jīng)過(guò)一系列發(fā)育過(guò)程形成正常四肢，由于遺傳缺陷可使肢體發(fā)育異常而導(dǎo)致肢體畸形，發(fā)病以多指較為普遍。第六指同樣有指節(jié)、指甲，也會(huì)隨著另外五指一起活動(dòng)，但是這對(duì)孩子的成長(zhǎng)會(huì)帶來(lái)一定的影響。所以，大部分的父母都會(huì)要求手術(shù)治療。治療時(shí)機(jī)單純性多指癥，特別是尺側(cè)單純性多指癥，沒(méi)有掌骨及掌指關(guān)節(jié)贅生，宜在嬰兒3-6月內(nèi)完成多指癥矯正手術(shù)治療。復(fù)合性多指癥，如橈側(cè)復(fù)合性多指以及中央多指并指等，多指癥矯正手術(shù)時(shí)間可推遲，但仍應(yīng)爭(zhēng)取在2歲前完成，以利家長(zhǎng)在心理上早日得到安慰，患兒亦不致有心理障礙。基于此，第六指的手術(shù)不僅解除了患者的生理和心理上的疾患，同時(shí)，手術(shù)后的第六指卻為醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)和科學(xué)研宄提供了良好的資源。由于第六指的易獲得性，以及與正常人體組織結(jié)構(gòu)的一致性，為組織胚胎學(xué)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)和學(xué)生學(xué)習(xí)醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)課程提供了組織來(lái)源，是一種值得推廣的應(yīng)用于組織胚胎學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明實(shí)施例的目的在于提供一種第六指在組織胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用方法，旨在解決組織胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中組織來(lái)源困難，為學(xué)生觀察正常的組織結(jié)構(gòu)提供豐富的組織來(lái)源。
[0004]本發(fā)明實(shí)施例是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種通過(guò)石蠟切片技術(shù)，將所獲得的第六指經(jīng)過(guò)一系列的固定、脫水、透明、包埋、切片、染色等技術(shù)，獲得指的石蠟切片，用于組織胚胎學(xué)的實(shí)驗(yàn)觀察上皮組織的復(fù)層扁平上皮，疏松結(jié)締組織，手指的部分骨骼肌的結(jié)構(gòu)，甚至于觀察軟骨和骨的結(jié)構(gòu)，此第六指的切片，解決了組織胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)中觀察正常組織結(jié)構(gòu)的四大組織中上皮組織、結(jié)締組織、肌肉組織的三大問(wèn)題。
[0005]本發(fā)明實(shí)施例的另一目的在于提供新鮮的骨組織和脂肪組織的組織來(lái)源問(wèn)題，解決了組織工程的實(shí)驗(yàn)中良好的細(xì)胞培養(yǎng)的原代培養(yǎng)的問(wèn)題。
[0006]本發(fā)明實(shí)施例是這樣實(shí)現(xiàn)的，通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，將獲得的第六指組織分離所需要的骨的細(xì)胞、脂肪細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，將分離純化的細(xì)胞進(jìn)行接種、傳代，最后在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察和記錄，為第六指在組織工程中的應(yīng)用提供良好的組織來(lái)源。
[0007]本發(fā)明提供的第六指在組織胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用方法，補(bǔ)充了實(shí)驗(yàn)教學(xué)中組織來(lái)源的問(wèn)題，為學(xué)生的自主制作石蠟切片和觀察正常的組織結(jié)構(gòu)提供了材料來(lái)源，不僅利于教學(xué)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)，提高了教學(xué)質(zhì)量，也為學(xué)生的自主學(xué)習(xí)提供了便利的組織來(lái)源。從教師的教學(xué)和學(xué)生學(xué)習(xí)兩方面都有所益處，此種方法應(yīng)當(dāng)值得推廣和應(yīng)用。
【附圖說(shuō)明】
[0008]圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的第六指在組織胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用方法流程圖；
[0009]圖2是本發(fā)明實(shí)施例提供的第六指在組織胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用展示示意圖。
[0010]圖中:(a)上皮組織，復(fù)層扁平上皮；(b)結(jié)締組織，疏松結(jié)締組織；(C)結(jié)締組織，透明軟骨；⑷神經(jīng)組織，環(huán)層小體；(e)指甲；(f)汗腺。
【具體實(shí)施方式】
[0011]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0012]下面結(jié)合附圖及具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用原理作進(jìn)一步描述。
[0013]如圖1和圖2所示，本發(fā)明實(shí)施例的第六指在組織胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用方法包括以下步驟:基于此，我課題組聯(lián)合我院骨科中心，將所患六指畸形手術(shù)的患者，進(jìn)行了登記造冊(cè)，將部分手術(shù)的六指進(jìn)行保存并用于組織胚胎學(xué)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)。實(shí)驗(yàn)流程:1.手術(shù)后迅速將第六指投入到10%福爾馬林固定液中固定48小時(shí)；2.隨即流水沖洗12-24小時(shí)，去除固定液；3.將流水沖洗后的組織塊依次放入70%、80%、90%、95%的乙醇內(nèi)各8小時(shí)，無(wú)水乙醇內(nèi)4小時(shí)，充分脫去組織塊中的水分；4.將透明好的第六指放入已經(jīng)融化的石蠟中(56-60°C )，逐漸浸入石蠟中大約1.5小時(shí)；5.將已經(jīng)融化的石蠟倒入金屬包埋框中，然后把浸透的組織塊放入浸蠟框的中央，冷卻后第六指就會(huì)被包埋在石蠟塊內(nèi)；6.將包埋好的組織塊固定在木塊上，再放置到切片機(jī)上，切成4 μ m厚的切片，放入溫水中展開(kāi)，再貼到載玻片上并放入烤箱中烤干。7.取出烤干的載玻片，放入二甲苯中5-6分鐘，脫去石蠟，然后再把切片依次放入100%、95%、90%、80%、70%乙醇中各4分鐘。脫掉二甲苯。8.把切片放入hematoxylin中染色10分鐘，細(xì)胞核嗜堿性被染成紫藍(lán)色，再放入0.5%鹽酸乙醇中分化20秒左右，流水沖洗20分鐘，再浸入0.5% eosin中染色7分鐘，細(xì)胞質(zhì)嗜酸性染成粉紅色，水洗數(shù)秒洗去浮色，再用70 %、80 %、90 %、95 %、100 %、100 %乙醇脫水各2分鐘，二甲苯透明8分鐘，用加拿大樹(shù)膠進(jìn)行封片后，可以用于教學(xué)觀察指的微細(xì)結(jié)構(gòu)。
[0014]第六指的石蠟切片可以做整張的橫切和縱切，用于組織胚胎學(xué)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)，由于此種標(biāo)本容易獲得，組織結(jié)構(gòu)與正常手指的結(jié)構(gòu)一致，可以用于組織胚胎學(xué)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)；第六指的獲得容易，可以從骨科手術(shù)室獲得，及時(shí)獲得，可以用于人組織工程的科學(xué)研宄，分離人的上皮細(xì)胞，脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞，用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研宄。將手術(shù)后的第六指迅速浸泡于PBS液中，將第六指的皮膚和皮下組織分離后，剝出指骨，剔除骨膜、血管和結(jié)締組織，放入有雙抗(青霉素100U/ml，鏈霉素100pg/ml)的Hanks液中浸洗數(shù)次，將骨片放入青霉素小瓶剪成l_4mm3的小塊后，加入1.5mg/ml的II型膠原酶溶液(Hanks液配制，37 °C水浴2小時(shí)后置4°C冰箱過(guò)夜)，與組織塊的體積比為2:1。37°C水浴振搖消化20分鐘，期間不時(shí)用手搖瓶，棄去上懸液，重新加入膠原酶溶液消化，45分鐘后收集上懸液，如此反復(fù)三次，集中所有上懸液，1000轉(zhuǎn)/分5分鐘離心，倒掉上清，沉淀用Hanks液同樣轉(zhuǎn)速離心洗滌三次，用2ml含20% FCS、青霉素100U/ml、鏈霉素100 μ g/ml的DMEM完全培養(yǎng)液混懸細(xì)胞，剩余骨片棄去，計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞，可得細(xì)胞約IxlO6個(gè)/ml。從而為組織工程中細(xì)胞培養(yǎng)的原代細(xì)胞提供了組織和細(xì)胞來(lái)源。
[0015]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種第六指在組織胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用方法，其特征在于，該第六指在組織胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用方法包括:通過(guò)手術(shù)獲取第六指，經(jīng)過(guò)特定濃度的固定，脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色和封片，最終用于組織學(xué)與胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)上皮組織、結(jié)締組織、軟骨和骨以及肌肉組織的觀察。2.如權(quán)利要求1所述的第六指在組織胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用方法，其特征在于，該第六指在組織胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用方法的具體步驟如下: 步驟一，手術(shù)后迅速將第六指投入到10%福爾馬林固定液中固定48小時(shí)； 步驟二，隨即流水沖洗12-24小時(shí)，去除固定液； 步驟三，將流水沖洗后的組織塊依次放入70 %、80 %、90 %、95 %的乙醇內(nèi)各8小時(shí)，無(wú)水乙醇內(nèi)4小時(shí)，充分脫去組織塊中的水分； 步驟四，將透明好的第六指放入已經(jīng)融化的石蠟中56-60°C，逐漸浸入石蠟中大約1.5小時(shí)； 步驟五，將已經(jīng)融化的石蠟倒入金屬包埋框中，然后把浸透的組織塊放入浸蠟框的中央，冷卻后第六指就會(huì)被包埋在石蠟塊內(nèi)； 步驟六，將包埋好的組織塊固定在木塊上，再放置到切片機(jī)上，切成4 μ m厚的切片，放入溫水中展開(kāi)，再貼到載玻片上并放入烤箱中烤干； 步驟七，取出烤干的載玻片，放入二甲苯中5-6分鐘，脫去石蠟，然后再把切片依次放入100%、95%、90%、80%、70%乙醇中各4分鐘，脫掉二甲苯； 步驟八，把切片放入hematoxylin中染色10分鐘，細(xì)胞核嗜堿性被染成紫藍(lán)色，再放入.0.5%鹽酸乙醇中分化20秒，流水沖洗20分鐘，再浸入0.5% eosin中染色7分鐘，細(xì)胞質(zhì)嗜酸性染成粉紅色，水洗數(shù)秒洗去浮色，再用70 %、80 %、90 %、95 %、100 %、100 %乙醇脫水各2分鐘，二甲苯透明8分鐘，用樹(shù)膠進(jìn)行封片后，用于教學(xué)觀察指的微細(xì)結(jié)構(gòu)。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種第六指在組織胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用方法，通過(guò)手術(shù)獲取第六指，經(jīng)過(guò)特定濃度的固定，一定方式的脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色和封片，最終用于組織學(xué)與胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)上皮組織、結(jié)締組織、軟骨和骨以及肌肉組織的觀察，替代了在組織學(xué)與胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中正常人體組織標(biāo)本不易獲取，擴(kuò)展了實(shí)驗(yàn)資源的有效利用性。另一方面，第六指的易獲得性，可以從骨科手術(shù)室獲得，及時(shí)獲得，可以用于人組織工程的科學(xué)研究，采用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，分離第六指的上皮細(xì)胞，脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞，獲得的細(xì)胞更接近真實(shí)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究。
【IPC分類(lèi)】G09B23/28
【公開(kāi)號(hào)】CN104916200
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510320129
【發(fā)明人】白生賓, 陳紅香, 鐘近潔, 廖禮彬, 馮樹(shù)梅, 秦紋, 李甜, 毛曉峰
【申請(qǐng)人】新疆醫(yī)科大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年9月16日
【申請(qǐng)日】2015年6月11日