專利名稱：清潔用酶和臭味預(yù)防的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了包含酰基轉(zhuǎn)移酶和酰基轉(zhuǎn)移酶的醇底物的組合物。在一些特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，組合物可用于生產(chǎn)芳香酯。在一些其它實(shí)施方式中，組合物可用于洗衣洗滌劑，以清潔含有至少一種甘油三酯的污潰。在另外一些實(shí)施方式中，組合物用于生產(chǎn)具有清潔性質(zhì)的化合物(例如表面活性酯)。
背景技術(shù)：
當(dāng)用含有脂肪酶的洗衣洗滌劑來清洗衣物，特別是被奶制品(例如，奶、冰淇淋或黃油)玷污的衣物時(shí)，衣物干燥后，通常會(huì)從織物中散發(fā)出類似嬰兒“嘔咳物”或變質(zhì)黃油的不愉悅的味道。人們認(rèn)為，這種臭味是脂肪酶催化水解存在于織物和/或洗滌衣物中的短鏈甘油三酯(例如，含C4至C12的甘油三酯)產(chǎn)生的。這種水解反應(yīng)產(chǎn)生了具有不愉悅的味道、揮發(fā)性并且導(dǎo)致持續(xù)臭味的短鏈脂肪酸(例如，丁酸)。盡管在臭味預(yù)防和/或向衣物添加愉人香味方面進(jìn)行了很多研究，但是本領(lǐng)域中仍需要解決該問題的洗衣組合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了包含?；D(zhuǎn)移酶和?；D(zhuǎn)移酶的醇底物的組合物。在一些特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，組合物可用于生產(chǎn)芳香酯。在一些其它實(shí)施方式中，組合物可用于洗衣洗滌劑，以清潔含有至少一種甘油三酯的污潰。在另外一些實(shí)施方式中，組合物用于生產(chǎn)具有清潔性質(zhì)的化合物(例如表面活性酯)。本發(fā)明提供了包含酰基轉(zhuǎn)移酶以及?；D(zhuǎn)移酶的醇底物的清潔組合物，其中，所述?；D(zhuǎn)移酶和醇底物以在清潔組合物與?；w組合時(shí)能有效產(chǎn)生可檢測(cè)到的酯的量存在。在一些實(shí)施方式中，酰基轉(zhuǎn)移酶是SGNH?；D(zhuǎn)移酶。在一些其它實(shí)施方式中，清潔組合物還包含酰基供體和作為?；D(zhuǎn)移酶催化的醇底物和?；w之間的反應(yīng)結(jié)果產(chǎn)生的酯。在又一些實(shí)施方式中，?；D(zhuǎn)移酶是SGNH酰基轉(zhuǎn)移酶，特別是AcT。在還一些實(shí)施方式中，酯是織物護(hù)理劑。在另一些實(shí)施方式中，織物護(hù)理劑是酯表面活性劑。在又一些實(shí)施方式中，酯是芳香酯。在一些實(shí)施方式中，?；w存在于物體上的污潰中。在一些其它實(shí)施方式中，含有?；w的物體被?；w弄臟了。在還一些實(shí)施方式中，?；w是Cl 至C18的?；w。在一些其它實(shí)施方式中，清潔組合物不包含脂肪酶，而在一些備選的實(shí)施方式中，清潔組合物還包含脂肪酶。在一些其它實(shí)施方式中，清潔組合物還包含蛋白酶、 淀粉酶、果膠酶、纖維素酶、角質(zhì)酶、果膠酸裂合酶、甘露聚糖酶或氧化還原酶。在一些其它實(shí)施方式中，清潔組合物還包含至少一種表面活性劑、助洗劑、聚合物、鹽、漂白活化劑、漂白系統(tǒng)、溶劑、緩沖劑或香料。本發(fā)明還提供了下述用于清潔的方法，所述方法包括將?；D(zhuǎn)移酶、酰基轉(zhuǎn)移酶的醇底物和?；w組合起來，其中，?；D(zhuǎn)移酶催化酰基基團(tuán)從?；w轉(zhuǎn)移到醇底物上，產(chǎn)生織物護(hù)理產(chǎn)物。在又一些實(shí)施方式中，酰基轉(zhuǎn)移酶是SGNH?；D(zhuǎn)移酶。在一些實(shí)施方式中，SGNH酰基轉(zhuǎn)移酶是AcT。在還一些實(shí)施方式中，酯是織物護(hù)理劑。在另一些實(shí)施方式中，織物護(hù)理劑是酯表面活性劑。在又一些實(shí)施方式中，酯是芳香酯。本發(fā)明還提供了包含SGNH?；D(zhuǎn)移酶和SGNH?；D(zhuǎn)移酶的醇底物的清潔組合物，其中，SGNH?；D(zhuǎn)移酶和醇底物以在清潔組合物與?；w接觸時(shí)能有效產(chǎn)生可檢測(cè)到的酯的量存在。在一些實(shí)施方式中，清潔組合物還包含含有?；w的物體以及作為 SGNH?；D(zhuǎn)移酶催化的醇底物和?；w之間的反應(yīng)結(jié)果產(chǎn)生的酯。在又一些實(shí)施方式中，酰基供體是Cl至C18或Cl至ClO的?；w。在額外的實(shí)施方式中，?；w是含有?；w的物體。在再一些實(shí)施方式中，含有?；w的物體被?；w弄臟了。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，物體被乳制品玷污。在另一些實(shí)施方式中，清潔組合物不包含脂肪酶， 而在一些備選的實(shí)施方式中，清潔組合物還包含脂肪酶或至少一種脂肪酶。在又一些其它實(shí)施方式中，清潔組合物是水性組合物。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，水性組合物除任何固體組分之外包含至少90%的水。在另一些實(shí)施方式中，酯是酯表面活性劑或芳香酯。在一些其它實(shí)施方式中，清潔組合物還包含至少一種表面活性劑。在另一些實(shí)施方式中，清潔組合物還包含過氧化物來源。在一些其它實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了還包含至少一種蛋白酶、淀粉酶、果膠酶、纖維素酶、角質(zhì)酶、果膠酸裂合酶、甘露聚糖酶和/或氧化還原酶或其混合物的清潔組合物。在再一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的清潔組合物包含至少一種表面活性劑、助洗劑、聚合物、鹽、漂白活化劑、漂白系統(tǒng)、溶劑、緩沖劑和/或香料或其混合物。本發(fā)明還提供了下述用于清潔的方法，所述方法包括將SGNH酰基轉(zhuǎn)移酶、SGNH酰基轉(zhuǎn)移酶的醇底物和被含?；w的物質(zhì)弄臟的物體組合起來，其中，SGNH?；D(zhuǎn)移酶能催化酰基基團(tuán)從?；w轉(zhuǎn)移到醇底物上，從而產(chǎn)生酯。在一些實(shí)施方式中，酯是C4至C6 的羧酸酯。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，酯是丁酸酯或丁酸芐酯。在還一些實(shí)施方式中，酯是伯醇和C4至C6脂肪酸的酯。在另一些實(shí)施方式中，物體是織物。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，織物被含油物質(zhì)弄臟了。在一些特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，織物被含三酰甘油的物質(zhì)弄臟了。在還一些實(shí)施方式中，含三酰甘油的物質(zhì)含有C4-C18三酰甘油。在另外一些實(shí)施方式中，SGNH酰基轉(zhuǎn)移酶催化?；鶊F(tuán)從織物上存在的酰基供體轉(zhuǎn)移到醇底物上，從而產(chǎn)生芳香酯。在再一些實(shí)施方式中，SGNH?；D(zhuǎn)移酶的醇底物還作為表面活性劑或乳化劑發(fā)揮作用。在又一些實(shí)施方式中，SGNH酰基轉(zhuǎn)移酶催化?；鶊F(tuán)從酰基供體轉(zhuǎn)移到表面活性劑或乳化劑上，從而產(chǎn)生酯。在一些其它實(shí)施方式中，所述方法還包括將過氧化物來源與SGNH ?；D(zhuǎn)移酶組合起來，所述方法導(dǎo)致產(chǎn)生過酸。本發(fā)明提供了包含?；D(zhuǎn)移酶(例如SGNH酰基轉(zhuǎn)移酶)和?；D(zhuǎn)移酶的醇底物的清潔組合物。 在這些實(shí)施方式中的一些中，酰基轉(zhuǎn)移酶和醇底物以在清潔組合物與含?；w的物體接觸時(shí)能有效產(chǎn)生可檢測(cè)到的酯的量存在。在一些實(shí)施方式中，清潔組合物還包含含?；w的物體和作為?；D(zhuǎn)移酶催化的醇底物與?；w之間的反應(yīng)的結(jié)果產(chǎn)生的酯。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，?；w是Cl至ClO的?；w。在一些其它實(shí)施方式中，清潔組合物還包含加入的與醇底物反應(yīng)的?；w(例如甘油三酯、脂肪酸酯等)。在一些特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，組合物產(chǎn)生的酯是芳香酯、表面活性酯、表面活性劑或織物護(hù)理劑或它們的組合。
在一些實(shí)施方式中，含酰基供體的物體被?；w弄臟了。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，酰基供體是油性物質(zhì)，例如動(dòng)物脂肪、植物脂肪、奶制品等。在另一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，酰基供體和醇底物的組合導(dǎo)致芳香酯、表面活性酯、水溶性酯或織物護(hù)理劑或其任何組合的產(chǎn)生。事實(shí)上，本發(fā)明意欲提供益處的組合。在一些實(shí)施方式中，清潔組合物還包含至少一種脂肪酶。在一些其它實(shí)施方式中， 清潔組合物還包含至少一種表面活性劑和/或至少一種過氧化物來源。在一些實(shí)施方式中，清潔組合物的表面活性劑或乳化劑作用于醇底物，用于?；D(zhuǎn)移。在另一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的清潔組合物還包含至少一種額外的酶，它們包括但不限于半纖維素酶、過氧化物酶、蛋白酶、纖維素酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角質(zhì)酶、果膠酶、果膠酸裂合酶、淀粉酶、甘露聚糖酶、角蛋白酶、還原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂加氧酶、木質(zhì)素酶、支鏈淀粉酶、鞋酸酶、戍聚糖酶、malanases、β -葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、軟骨素酶、漆酶和淀粉酶或其混合物。在一些實(shí)施方式中，使用包含常規(guī)可應(yīng)用的酶(例如蛋白酶、脂肪酶、角質(zhì)酶和/或纖維素酶)與?；D(zhuǎn)移酶的酶組合(即“混合物”)。在另一些實(shí)施方式中，清潔組合物還包含至少一種表面活性劑、助洗劑、聚合物、 鹽、漂白活化劑、溶劑、緩沖劑或香料等，如本文更詳細(xì)描述的。在一些實(shí)施方式中，清潔組合物是水性組合物。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，清潔組合物除了任何固體組分之外包含至少大約90%的水。本發(fā)明還提供了利用本文提供的清潔組合物的清潔方法。這些方法通常包括將酰基轉(zhuǎn)移酶(例如，SGNH?；D(zhuǎn)移酶)、酰基轉(zhuǎn)移酶的醇底物和被含酰基供體的物質(zhì)弄臟的物體(例如織物)組合，其中，酰基轉(zhuǎn)移酶能催化酰基基團(tuán)從?；w轉(zhuǎn)移到醇底物上，從而產(chǎn)生酯。在一些實(shí)施方式中，物體被含油物質(zhì)(例如，含三酰甘油的物質(zhì)，例如，含C4-C18 三酰甘油的物質(zhì))弄臟。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，含油物質(zhì)與醇組合，產(chǎn)生的酯是芳香酯，而在一些其它實(shí)施方式中，產(chǎn)生是非芳香酯，在又一些實(shí)施方式中，產(chǎn)生了表面活性劑或其它織物護(hù)理劑或這些酯的組合。在這些實(shí)施方式中的一些中，使用?；D(zhuǎn)移酶，通過與脂肪酶協(xié)同工作，增加從三酰甘油去除?；湹乃俾剩缓?或?qū)Ⅴ；溑c醇底物連起來，由此形成酯產(chǎn)物而非揮發(fā)性脂肪酸，從而降低甘油三酯水解通常產(chǎn)生的臭味的量。在一些特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明還提供了用于產(chǎn)生芳香酯的組合物。在一些實(shí)施方式中，組合物包含?；D(zhuǎn)移酶(例如，SGNH?；D(zhuǎn)移酶)、酰基轉(zhuǎn)移酶的醇底物和?；w，其中，酰基轉(zhuǎn)移酶能在水性環(huán)境中催化?；鶊F(tuán)從酰基供體轉(zhuǎn)移到醇底物，從而產(chǎn)生芳香酯。在一些特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，醇底物和?；w被用來產(chǎn)生特別的芳香酯。 在一些實(shí)施方式中，組合物是還包含芳香酯的水性組合物。在一些其它實(shí)施方式中，組合物是脫水的組合物，其中在隨后對(duì)組合物進(jìn)行再水化時(shí)產(chǎn)生芳香酯。在一些實(shí)施方式中，?；w向醇底物提供Cl至ClO的?；湣Ｔ谝恍┨貏e優(yōu)選的實(shí)施方式中，用于產(chǎn)生芳香酯的組合物是清潔組合物。在一些實(shí)施方式中，酰基轉(zhuǎn)移酶被固定到固相支持體上。在另一些實(shí)施方式中，組合物包含食品。在一些其它實(shí)施方式中，組合物是清潔組合物。在再一些實(shí)施方式中，組合物還含有至少一種表面活性劑。本發(fā)明還提供了利用本文提供的組合物來產(chǎn)生至少一種芳香酯的方法。通常，這些方法包括將酰基轉(zhuǎn)移酶(例如SGNH?；D(zhuǎn)移酶)、?；D(zhuǎn)移酶的醇底物和?；w組合起來，其中，?；D(zhuǎn)移酶催化酰基基團(tuán)從?；w轉(zhuǎn)移到醇底物上，從而產(chǎn)生芳香酯。在一些實(shí)施方式中，醇底物和?；w產(chǎn)生了特別的芳香酯。在組合物被脫水的一些實(shí)施方式中，所述方法包括在組合之后對(duì)組分進(jìn)行再水化的步驟。在一些實(shí)施方式中，通過加入任何合適的水性介質(zhì)，包括水、奶或唾液來進(jìn)行再水化。因此，在一些實(shí)施方式中，在咀嚼期間發(fā)生再水化，以釋放芳香酯。在一些其它實(shí)施方式中，醇底物和?；w在水性環(huán)境中組合。附圖簡(jiǎn)述當(dāng)參考附圖閱讀時(shí)，能最好地理解下文詳細(xì)描述的內(nèi)容的某些方面。應(yīng)當(dāng)強(qiáng)調(diào)，根據(jù)通常的實(shí)踐，附圖的多個(gè)特征并不代表量度。相反，為清楚而言，多個(gè)特征的尺寸可任意擴(kuò)大或縮小。圖I提供的圖顯示了用甘油三丁酸酯(tributyrin)和兩種?；D(zhuǎn)移酶時(shí)順-3-己烯醇、2-苯基乙醇和2-甲基-I- 丁醇向其各自的丁酰酯的轉(zhuǎn)化。圖2提供的圖顯示了在10、30和120分鐘時(shí)酰基轉(zhuǎn)移酶(AcT)的游離和溶膠_凝膠包裹形式用于用甘油三乙酸酯來對(duì)順-3-己烯醇的酯化的比較。圖3提供了 LC/MS數(shù)據(jù)的組圖，其顯示了在洗滌劑背景中使用甘油三丁酸酯和AcT 對(duì)四甘醇的酯交換。圖4提供了 LC/MS數(shù)據(jù)的組圖，其顯示了在洗滌劑背景中使用甘油三丁酸酯和AcT 對(duì)13C-U-甘油的酯交換。圖5提供的圖顯示了在存在脂肪酶和AcT時(shí)從乳脂和苯甲醇產(chǎn)生丁酸芐酯。圖6提供了對(duì)用于從乳脂生產(chǎn)芳香酯的一種示例性方法的闡述。圖7提供了對(duì)來自蛋黃/山梨糖醇與1)KLM3突變體pLA231和2)對(duì)照溫育的脂類TLC分析。在該圖中，“PE”是磷脂酰乙醇胺，“PC”是磷脂酰膽堿。圖8提供了經(jīng)KLM3，pLA231處理的樣品2467-112-1 :蛋黃/山梨糖醇的GLC色譜圖。圖9提供了對(duì)樣品2467-112-2 :蛋黃/山梨糖醇對(duì)照樣品的GLC色譜圖。

圖10提供了從Grindsted SMO鑒定的山梨糖醇單油酸酯的GLC/MS譜和在用KLM3 pLA 231處理的蛋黃/山梨糖醇(2467-112-1)中鑒定的峰的MS譜。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了包含?；D(zhuǎn)移酶和?；D(zhuǎn)移酶的醇底物的組合物。在一些特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，組合物可用于生產(chǎn)芳香酯。在一些其它實(shí)施方式中，組合物可用于洗衣洗滌劑，以清潔含有至少一種甘油三酯的污潰。在另一些實(shí)施方式中，組合物被用于生產(chǎn)具有清潔性質(zhì)的化合物(例如，表面活性酯)。除非另有指明，本發(fā)明的某些方面的實(shí)踐涉及分子生物學(xué)、微生物學(xué)、蛋白質(zhì)純化、蛋白質(zhì)工程、蛋白質(zhì)和DNA測(cè)序以及重組DNA領(lǐng)域中的常用的常規(guī)技術(shù)，它們是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。本文提到的所有專利、專利申請(qǐng)、文章和公開文獻(xiàn)，包括上文和下文中提到的，都通過引用明確并入本文。
此外，本文提供的標(biāo)題并非是對(duì)本發(fā)明的多個(gè)方面或?qū)嵤┓绞降南拗疲蓞⒄兆鳛檎w的說明書而得到所述標(biāo)題。因此，下文示出的術(shù)語將參照作為整體的說明書進(jìn)行更詳細(xì)地定義。但是，為方便對(duì)本發(fā)明的理解，下文對(duì)多個(gè)術(shù)語進(jìn)行了定義。定義除非另有指明，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語都具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常的理解相同的含義。雖然與本文的描述相似或等同的任何方法和材料都可用于本文所述的實(shí)踐，但本文仍描述了示例性的方法和材料。在本文中使用時(shí)，除非上下文另有清楚指示，單數(shù)術(shù)語“一個(gè)/種”和“這個(gè)/種”(“a”、“an”和“the”)也包括復(fù)數(shù)指代。 除非另有指明，分別地，核酸是按照5’至3’的方向從左到右書寫的；氨基酸是按照氨基到羧基的方向從左到右書寫的。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明并不限于所述的具體方法、方案和試劑，它們可根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員使用它們的背景而有所改變。應(yīng)當(dāng)注意，本說明書通篇中給出的每個(gè)最大數(shù)值限制包括每一個(gè)更低的數(shù)值限制，就好像在本文中明確給出了這些更低的數(shù)值限制。本說明書通篇中給出的每個(gè)最小數(shù)值限制也將包括每一個(gè)更高的數(shù)值限制，就好像在本文中明確給出了這些更高的數(shù)值限制。本說明書通篇中給出的每個(gè)數(shù)值范圍也將包括落在此類較寬數(shù)值范圍內(nèi)的每一個(gè)較窄的數(shù)值范圍，這就好像在本文中明確給出了這些較窄的數(shù)值范圍。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“?；鶊F(tuán)”表示式(RC = 0-)的有機(jī)基團(tuán)。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“?；北硎緦Ⅴ；?RC0-)基團(tuán)從一個(gè)分子(“?；w”) 轉(zhuǎn)移到另一個(gè)分子(“底物”)上的化學(xué)反應(yīng)，通常這通過用?；鶊F(tuán)取代底物-OH基團(tuán)的氫來實(shí)現(xiàn)。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“?；w”指在?；D(zhuǎn)移反應(yīng)中提供?；鶊F(tuán)的分子。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“醇底物”指包含與碳原子結(jié)合的反應(yīng)活性羥基(-0H)的任何有機(jī)分子。該術(shù)語不包括多糖和蛋白質(zhì)。水不是醇底物。示例性的醇底物包括但不限于脂肪族醇、脂環(huán)族醇和芳香族醇、萜烯醇和多元醇(包括單體、二聚、三聚和四聚多元醇)。 在一些實(shí)施方式中，醇含有一個(gè)以上羥基。醇底物能在下文所述的酰基轉(zhuǎn)移反應(yīng)中接受?；鶊F(tuán)。在一些實(shí)施方式中，醇是伯醇、仲醇或叔醇。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“轉(zhuǎn)移酶”指能催化官能化合物向一系列底物轉(zhuǎn)移的酶。術(shù)語“酰基轉(zhuǎn)移酶”在本文中使用時(shí)指通常被分類為E. C. 2. 3. I. X的酶，它們能將?；鶊F(tuán)從酰基供體(例如脂類)轉(zhuǎn)移到醇底物上。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“⑶SX?；D(zhuǎn)移酶”指具有含⑶SX序列基序(其中X通常是L)(通常在N-末端附近)的區(qū)分性活性位點(diǎn)的?；D(zhuǎn)移酶。GDSX酶具有5條共有序列 (I-V)。這些酶是已知的(見,例如,Upton et al. ,Trends Biochem. Sci,20 :178-179[1995] 和 Akoh et al. , Prog. Lipid Res.，43 :534-52 [2004])。GDSX ?；D(zhuǎn)移酶的一個(gè)亞組在共有序列中含有保守的SG和H殘基。這些⑶SX?；D(zhuǎn)移酶被稱為“SGNH?；D(zhuǎn)移酶”。在本文中使用時(shí)“SGNH?；D(zhuǎn)移酶”指SGNH水解酶家族的?；D(zhuǎn)移酶，其中，SGNH 水解酶家族的成員含有SGNH水解酶類型的酯酶結(jié)構(gòu)域，其具有三層的a/0/a結(jié)構(gòu)，其中，￠-片層由五條平行鏈構(gòu)成。含有該結(jié)構(gòu)域的酶作為酯酶、脂肪酶和?；D(zhuǎn)移酶發(fā)揮作用，但是與典型脂肪酶僅有極少的序列同源性(見Akoh et al. , Prog. Lipid Res. ,43 534-552[2004]和 Wei et al.，Nat. Struct. Biol.，2 :218-223 [1995])。已在多個(gè)物種中發(fā)現(xiàn)了含SGNH水解酶類型的酯酶結(jié)構(gòu)域的蛋白，這包括但不限于來自瘡痂病鏈霉菌(Streptomyces scabies)的酯酶(見 Sheffield et al. , Protein Eng. , 14 :513-519[2001])、來自流感C病毒、冠狀病毒和環(huán)狀病毒的病毒血細(xì)胞凝集素酯酶表面糖蛋白的酯酶(見，Molgaard et al. , Acta Crystallogr. D 58 :111_119[2002])； 哺乳動(dòng)物乙酰水解酶(見，Lo et al.，J. MoI. Biol.，330 =539-551 [2003]);真菌鼠李糖半乳糖醒酸聚糖乙酰酯酶(見，Molgaard et al.，Structure 8 :373-383[2000])和來自大腸桿菌的多功能酶硫酯酶I(TAP)(見，Molgaard et al. , Acta Crystallogr. D 60 472-478 [2004])。SGNH水解酶類型的酯酶結(jié)構(gòu)域含有獨(dú)特的氫鍵網(wǎng)絡(luò)，其穩(wěn)定它們的催化中心。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，它們含有保守的Ser/Asp/His催化三聯(lián)體。SGNH?；D(zhuǎn)移酶還以檢錄號(hào)cd01839.3被描述于GENBANK 數(shù)據(jù)庫(kù)(通過引用并入本文)的保守結(jié)構(gòu)域數(shù)據(jù)庫(kù)中。SGNH?；D(zhuǎn)移酶在與?；w接觸時(shí)形成?；?酶中間體，并將?；鶊F(tuán)轉(zhuǎn)移到除了水之外的受體上。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“典型脂肪酶”指具有脂肪酶活性以及標(biāo)志性GXSXG基序 (其含有活性位點(diǎn)絲氨酸)的酶(見，例如，Derewenda et al.，Biochem Cell Biol. ,69 842-51 [1991])。在一些實(shí)施方式中，典型脂肪酶是三酰甘油酯脂肪酶，其具有針對(duì)三酰甘油酯的snl和sn3位置的特異性。SGNH?；D(zhuǎn)移酶和GDSL酰基轉(zhuǎn)移酶具有相似的結(jié)構(gòu)，兩者都在結(jié)構(gòu)上與典型脂肪酶不同。術(shù)語“酯交換”在本文中使用時(shí)指酶催化的?；鶊F(tuán)從脂類供體(非游離脂肪酸) 轉(zhuǎn)移到?；荏w(非水)上。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“醇解”指酶催化的通過與醇ROH的反應(yīng)來對(duì)酸衍生物的共價(jià)鍵進(jìn)行的切割，使得產(chǎn)物之一與醇的H組合，另一產(chǎn)物與醇的OR基團(tuán)組合。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“水解”指酶催化的?；鶊F(tuán)從脂類轉(zhuǎn)移至水分子的OH基團(tuán)。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“水性”用于短語“水性組合物”和“水性環(huán)境”中時(shí)指由至少大約50%的水構(gòu)成的組合物。在一些實(shí)施方式中，水性組合物包含至少大約50%的水， 至少大約60%的水，至少大約70%的水，至少大約80%的水，至少大約90%的水，至少大約 95%的水或者至少大約97%的水。在一些實(shí)施方式中，水性組合物的剩余部分的一部分包含至少一種醇。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，術(shù)語“水性”指較之蒸餾水而言具有至少大約0. 75，至少大約0. 8，至少大約0. 9或者至少大約0. 95的水活度(Aw)的組合物。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“芳香酯”指具有愉人香氣或味道的酯。該術(shù)語包括芳香酯和香味酯(flavorsome esters)。這些酯是本領(lǐng)域中公知的。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“織物護(hù)理劑”指具有清潔性質(zhì)和/或給織物帶來益處的化合物。此類化合物包括表面活性劑和乳化劑。在一些實(shí)施方式中，織物護(hù)理劑賦予軟化、織物手感的改進(jìn)、消除起球、顏色駐留等益處。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“表面活性酯”指具有表面活性劑性質(zhì)的酯，其中，表面活性劑是降低液體表面張力的化合物。
在本文中使用時(shí)，術(shù)語“可檢測(cè)到的香味”指可由人的鼻子或味蕾檢測(cè)到的芳香酯的量。以僅可通過質(zhì)譜儀而非人的鼻子或味蕾檢測(cè)到的量存在的芳香酯并非可檢測(cè)到的香味。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“物體”指待清潔的物體。其意欲表示，本發(fā)明包括適于清潔的任何物體，這包括但不限于織物(例如,衣物)、內(nèi)飾、地毯、硬表面(例如,工作臺(tái)、地板等)或餐具(例如，盤、杯、碟、碗、刀叉、銀器等)。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“玷污”或“弄臟”表示物體臟了。對(duì)于被玷污的物體來說， 污潰并不必肉眼看見。例如，被玷污或弄臟的物體指含有來自動(dòng)物(例如奶制品)、植物、人汗液等的脂肪物質(zhì)的物體(例如織物)。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“奶制品”指奶(例如，全脂、低脂、脫脂奶或酪乳)或者由其制得的產(chǎn)品，例如，任何類型的奶酪(例如，奶油奶酪、硬奶酪、軟奶酪等)、黃油、酸奶和冰淇淋。事實(shí)上，本發(fā)明并不限于任何特定奶制品的，任何基于奶的產(chǎn)品都被該定義所包括。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“含?；w的物體”指包含酰基供體的物體(例如，甘油三酯)。在一些實(shí)施方式中，?；w作為污潰存在。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“固定的”在固定的酶的上下文中表示酶被固定(例如束縛)到基質(zhì)(例如固體或半固體的支持體)上，而非在溶液中游離。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“在溶液中”指并沒有固定到基質(zhì)上并且在液體組合物中游離的分子(例如酶)。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“有效......的量”和“有效量”在短語“有效產(chǎn)生可檢測(cè)
到的酯的量”的上下文中指在所使用的條件下產(chǎn)生想要的產(chǎn)品的組分(例如，酶、底物、?；w或其任何組合)的量。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“過氧化氫來源”包括過氧化氫以及能自發(fā)或酶促產(chǎn)生過氧化氫作為反應(yīng)產(chǎn)物的系統(tǒng)的組分。在本文中使用時(shí)，“個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品”指用于毛發(fā)、皮膚、頭皮和牙齒的清潔、漂白和 /或消毒的產(chǎn)品，其包括但不限于洗發(fā)水、潤(rùn)膚露、沐浴露、局部保濕劑、牙膏和/或其它局部清潔劑。在一些特別的實(shí)施方式中，這些產(chǎn)品用于人類，在一些其它實(shí)施方式中，這些產(chǎn)品可用于非人類的動(dòng)物(例如，獸用應(yīng)用中)。在本文中使用時(shí)，“清潔組合物”和“清潔制劑”指可用于從待清潔的物體(例如織物、餐具、隱形眼鏡、其它固體基質(zhì)、毛發(fā)(洗發(fā)水)、皮膚(肥皂和霜?jiǎng)?、牙齒(漱口水、牙膏)等)去除不想要的化合物的組合物。該術(shù)語包括針對(duì)想要的特定類型的清潔組合物和產(chǎn)品形式(例如，液體、凝膠劑、粒劑或噴霧組合物)選擇的任何材料/化合物，只要組合物與酰基轉(zhuǎn)移酶和組合物中存在的任何其它酶和/或組分相容即可?？紤]到待清潔的物體/ 表面以及想要的用于使用期間所用的清潔條件的組合物的形式，可容易地對(duì)清潔組合物材料加以特別的選擇。所述術(shù)語還指適于對(duì)任何物體和/或表面進(jìn)行清潔、漂白、消毒和/或滅菌的任何組合物。所述術(shù)語意欲包括但不限于洗滌劑組合物(例如，液體和/或固體洗衣洗滌劑和精細(xì)織物洗滌劑，適于清潔玻璃、木材、陶瓷和金屬臺(tái)面和窗戶等的硬表面清潔制劑；地毯清潔劑；爐灶清潔劑；織物清新劑(fresheners);織物軟化劑和紡織品和洗衣預(yù)去潰劑以及餐具洗滌劑)。
事實(shí)上，除非另有指明，術(shù)語“清潔組合物”在本文中使用時(shí)包括粒劑或粉劑形式的所有用途的或重負(fù)荷洗滌劑，尤其是清潔洗滌劑；液體、凝膠劑或糊劑形式的所有用途的洗滌劑，尤其是重負(fù)荷液體(HDL)類型的；液體精細(xì)織物洗滌劑；手洗餐具洗滌劑或輕負(fù)荷餐具洗滌劑，尤其是高泡沫類型的那些；機(jī)洗餐具洗滌劑，包括多種片狀、顆粒、液體和漂洗輔助類型的，用于家庭和公共機(jī)構(gòu)的；液體清潔和消毒劑，包括抗細(xì)菌的洗手類型的、清潔條塊(cleaning bars)、漱口水、口齒清潔劑、車或地毯清洗劑、浴室清潔劑；洗發(fā)水和染發(fā)液；沐浴露和泡沫浴露以及金屬清潔劑；以及清潔用助劑例如漂白添加劑和“污潰貼”、“預(yù)處理”和/或“預(yù)洗滌”類型的。在本文中使用時(shí)，用術(shù)語“洗滌劑組合物”和“洗滌劑制劑”表示意欲用于清潔被弄臟的物體的洗滌介質(zhì)中的混合物。在一些實(shí)施方式中，在提到對(duì)織物和/或衣服進(jìn)行洗滌時(shí)使用該術(shù)語(例如“洗衣洗滌劑”)。在一些備選的實(shí)施方式中，該術(shù)語指其它洗滌劑， 例如用于清潔餐具、銀器、刀叉等的洗滌劑(例如“餐具洗滌洗滌劑”)。本發(fā)明不欲受到任何特別的洗滌劑制劑或組合物的限制。事實(shí)上，除了?；D(zhuǎn)移酶之外，該術(shù)語還包括含有表面活性劑、其它轉(zhuǎn)移酶、水解酶和其它酶、氧化還原酶、助洗劑、漂白劑、漂白活化劑、藍(lán)色試劑和熒光染料、結(jié)塊抑制劑、掩蔽劑、酶活化劑、抗氧化劑和增溶劑的洗滌劑。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“硬表面清潔組合物”指用于清潔硬表面，例如地板、臺(tái)面、 櫥柜、墻壁、瓷磚、浴室和廚房設(shè)備等的洗滌劑組合物。此類組合物以任何形式提供，其包括但不限于固體、液體、乳液等。在本文中使用時(shí)，“餐具洗滌組合物”指用于清潔餐具和用于食物消費(fèi)和/或食物操作的其它器具的所有形式的組合物，其包括但不限于凝膠劑、粒劑和液體形式。在本文中使用時(shí)，“織物清潔組合物”指用于清潔織物的所有形式的洗滌劑組合物，其包括但不限于凝膠劑、粒劑、液體和棒劑形式。在本文中使用時(shí)，“紡織品”指機(jī)織織物以及適于轉(zhuǎn)化為或用作為紗線、機(jī)織物、編織品和非機(jī)織織物的短纖維(staple fibers)和纖絲(filament)。該術(shù)語包括從天然以及合成(例如人造)纖維制造的紗線。在本文中使用時(shí)，“紡織品材料”是用于纖維、紗線中間物、紗線、織物和從織物制造的產(chǎn)品(例如衣服和其它產(chǎn)品)的一般性術(shù)語。在本文中使用時(shí)，“織物”包括任何紡織品材料。因此，該術(shù)語意欲包括衣服以及織物、紗線、纖維、非機(jī)織材料、天然材料、合成材料以及任何其它紡織品材料。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“相容”表示在正常使用情況下，清潔組合物材料不將?；D(zhuǎn)移酶的酶促活性降低到?；D(zhuǎn)移酶不能像所期待的那樣有效的程度。在下文中詳細(xì)示例了 一些特定的清潔組合物材料。在本文中使用時(shí)，“酶的有效量”表示實(shí)現(xiàn)特定應(yīng)用(例如個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品、清潔組合物等)中需要的酶促活性所必需的酶的量。此類有效量是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員易于確定的，它們基于很多因素，例如所使用的具體的酶或變體，清潔應(yīng)用，清潔組合物的特定組成以及是否需要液體、凝膠或干的(例如顆粒、條形)組合物等。在本文中使用時(shí)，“非織物清潔組合物”包括硬表面清潔組合物、餐具洗滌組合物、 個(gè)人護(hù)理清潔組合物(例如口腔清潔組合物、口齒清潔組合物、個(gè)人清潔組合物等)以及適用于紙漿和造紙工業(yè)的組合物。
在本文中使用時(shí)，術(shù)語“酶促轉(zhuǎn)化”指通過將底物或中間產(chǎn)物與酶相接觸將底物改變?yōu)橹虚g產(chǎn)物或?qū)⒅虚g產(chǎn)物改變?yōu)榻K產(chǎn)物。在一些實(shí)施方式中，通過將底物或中間產(chǎn)物直接暴露給合適的酶來進(jìn)行接觸。在一些其它實(shí)施方式中，接觸包括將底物或中間產(chǎn)物暴露給表達(dá)和/或分泌所述酶，和/或?qū)⒛康牡孜锖?或中間產(chǎn)物分別代謝成想要的中間產(chǎn)物和/或終產(chǎn)物的生物。在本文中使用時(shí)，“目的蛋白質(zhì)”指被分析、鑒定和/或修飾的蛋白質(zhì)(例如酶或 “目的酶”)。天然存在的目的蛋白質(zhì)和重組蛋白都可用于本發(fā)明。在本文中使用時(shí)，“蛋白質(zhì)”指由氨基酸組成并被本領(lǐng)域技術(shù)人員識(shí)別為蛋白質(zhì)的任何組合物。術(shù)語“蛋白質(zhì)”、“肽”和多肽在本文中可互換使用。其中肽是蛋白質(zhì)的一部分的情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員理解上下文中所述術(shù)語的使用。在本文中使用時(shí)，功能上和/或結(jié)構(gòu)上相似的蛋白質(zhì)被認(rèn)為是“相關(guān)蛋白質(zhì)”。在一些實(shí)施方式中，這些蛋白質(zhì)源于不同的屬和/或種，包括生物的綱之間的差異(例如，細(xì)菌蛋白質(zhì)和真菌蛋白質(zhì))。在一些實(shí)施方式中，這些蛋白質(zhì)源于不同的屬和/或種，包括生物的綱之間的差異(例如，細(xì)菌酶和真菌酶)。在另外一些實(shí)施方式中，提供了來自相同物種的相關(guān)蛋白質(zhì)。事實(shí)上，本發(fā)明并不限于來自任何特別來源的相關(guān)蛋白質(zhì)。此外，術(shù)語 “相關(guān)蛋白質(zhì)”包括三級(jí)結(jié)構(gòu)同源物和一級(jí)序列同源物。在另一些實(shí)施方式中，該術(shù)語包括有免疫交叉反應(yīng)性的蛋白質(zhì)。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“衍生物”是指通過在C-和N-末端之一或二者添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸，在氨基酸序列的一個(gè)或多個(gè)不同位點(diǎn)取代一個(gè)或多個(gè)氨基酸，和/或在蛋白質(zhì)的一端或兩端或氨基酸序列的一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)缺失一個(gè)或多個(gè)氨基酸，和/或在氨基酸序列的一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)插入一個(gè)或多個(gè)氨基酸而從該蛋白質(zhì)獲得的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)衍生物的制備可通過對(duì)編碼天然蛋白質(zhì)的DNA序列加以修飾，將該DNA序列轉(zhuǎn)化進(jìn)合適的宿主以及表達(dá)經(jīng)修飾的DNA序列以形成衍生蛋白質(zhì)來實(shí)現(xiàn)。相關(guān)(以及衍生)蛋白質(zhì)包含“變體蛋白質(zhì)”。在一些實(shí)施方式中，變體蛋白質(zhì)與親本蛋白質(zhì)不同，互相之間有少量的氨基酸殘基差異。有差異的氨基酸殘基的數(shù)量可以是一個(gè)或多個(gè)(例如大約I、大約2、大約3、大約4、大約5、大約10、大約15、大約20、大約30、 大約40、大約50或更多個(gè))氨基酸殘基。在一些實(shí)施方式中，變體之間不同氨基酸的數(shù)量在大約I至大約10個(gè)之間。在一些特別的實(shí)施方式中，相關(guān)蛋白質(zhì)以及特別是變體蛋白質(zhì)包含至少大約35%，大約40%，大約45%，大約50%，大約55%，大約60%，大約65%，大約70%，大約75%，大約80%，大約85%，大約90%，大約95%，大約97%，大約98%或大約99%的氨基酸序列同一性。此外，本文中使用的相關(guān)蛋白質(zhì)或變體蛋白質(zhì)指在顯著區(qū)域的數(shù)量方面與另一相關(guān)蛋白質(zhì)或親本蛋白質(zhì)有所不同的蛋白質(zhì)。例如，在一些實(shí)施方式中， 變體蛋白質(zhì)具有與親本蛋白質(zhì)不同的大約I、大約2、大約3、大約4、大約5或大約10個(gè)相應(yīng)的顯著區(qū)域。本領(lǐng)域已知有若干方法適于產(chǎn)生本發(fā)明的酶的變體，所述方法包括但不限于位點(diǎn)飽和誘變、掃描誘變、插入誘變、隨機(jī)誘變、定點(diǎn)誘變和定向進(jìn)化以及多種其它重組方法。在一些實(shí)施方式中，對(duì)同源蛋白質(zhì)進(jìn)行工程改造，以產(chǎn)生具有想要的活性的酶。在一些實(shí)施方式中，經(jīng)工程改造的蛋白質(zhì)被包括在SGNH水解酶蛋白質(zhì)家族中。在一些實(shí)施方式中，經(jīng)工程改造的蛋白質(zhì)包含下述保守殘基中的至少一個(gè)或其組合L6、W14、W34、L38、R56、D62、L74、L78、H81、P83、M90、K97、G110、L114、L135、F180、G205。在一些備選的實(shí)施方
式中，這些經(jīng)工程改造的蛋白質(zhì)包含⑶SL-GRTT和/或ARTT基序。在另一些實(shí)施方式中， 酶是多聚體，其包括但不限于二聚體、八聚體和四聚體。在一些實(shí)施方式中，為建立一級(jí)結(jié)構(gòu)的同源性，將?；D(zhuǎn)移酶的氨基酸序列與酰基轉(zhuǎn)移酶的一級(jí)氨基酸序列以及與在序列已知的所有?；D(zhuǎn)移酶中已知不變的一組殘基直接相比較。對(duì)保守殘基加以比對(duì)之后(其中允許必要的插入和缺失以保持比對(duì)(即，避免由于任意缺失和插入導(dǎo)致保守殘基消除))，與?；D(zhuǎn)移酶一級(jí)序列中特定氨基酸等同的殘基被確定。在一些實(shí)施方式中，對(duì)保守殘基的比對(duì)確定了 100%的等同殘基。但是，對(duì)超過大約75%或者低至大約50%的保守殘基的比對(duì)也足以確定等同殘基。在一些實(shí)施方式中，催化性的絲氨酸和組氨酸殘基的保守性被保持。在一些實(shí)施方式中，保守殘基可用于確定其它?；D(zhuǎn)移酶(例如，來自分枝桿菌屬(Mycobacterium)的物種以及任何其它生物的?；D(zhuǎn)移酶)中包皮垢分枝桿菌 (M. smegmatis)酰基轉(zhuǎn)移酶的相應(yīng)等同氨基酸殘基。在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，WO 05/056782中提供的編碼包皮垢分枝桿菌酰基轉(zhuǎn)移酶的DNA序列被修飾。在一些實(shí)施方式中，下述殘基被修飾Cys7、AsplO、Serll、Leul2、 Thrl3、Trpl4、Trpl6、Pro24、Thr25、Leu53、Ser54、Ala55、Thr64、Asp65、Arg67、Cys77、 Thr91、Asn94、Asp95、Tyr99、Vall25、Prol38、Leul40、Prol46、Prol48、Trpl49、Phel50、 Ilel53、Phel54、Thrl59、Thrl86、Ilel92、Ilel94 和 Phel96。然而，本發(fā)明并不欲限于在這些位置被修飾的序列。事實(shí)上，本發(fā)明意欲包括多種修飾和修飾的組合。在一些其它實(shí)施方式中，通過在其三級(jí)和四級(jí)結(jié)構(gòu)已通過X-射線晶體學(xué)確定的酰基轉(zhuǎn)移酶的三級(jí)和四級(jí)結(jié)構(gòu)水平上確定同源性來定義等同殘基。就該上下文來說，“等同殘基”被定義為這樣的殘基比對(duì)后，羰基水解酶和包皮垢分枝桿菌?；D(zhuǎn)移酶的特定氨基酸殘基的兩個(gè)或多個(gè)主鏈原子的原子坐標(biāo)在大約0. 13nm和大約0. Inm內(nèi)(N對(duì)N、CA對(duì) CAX對(duì)C以及0對(duì)0)。在最佳模型被定向及定位，以實(shí)現(xiàn)所討論的?；D(zhuǎn)移酶與包皮垢分枝桿菌?；D(zhuǎn)移酶非氫的蛋白質(zhì)原子的原子坐標(biāo)的最大重疊之后，達(dá)成比對(duì)。如本領(lǐng)域所已知的，最佳模型是在可獲得的最高分辨率下針對(duì)實(shí)驗(yàn)衍射數(shù)據(jù)實(shí)現(xiàn)最低R因子的晶體模型。功能上和/或結(jié)構(gòu)上與包皮垢分枝桿菌?；D(zhuǎn)移酶的特定殘基類似的等同殘基被定義為優(yōu)先采用下述構(gòu)象的?；D(zhuǎn)移酶的那些氨基酸，所述構(gòu)象它們改變、修飾或調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，從而以確定的并且歸因于包皮垢分枝桿菌?；D(zhuǎn)移酶的特定殘基的方式實(shí)現(xiàn)底物結(jié)合和/或催化的改變。此外，它們是以下述程度占據(jù)類似位置的?；D(zhuǎn)移酶的殘基(在已通過X-射線晶體學(xué)獲得三級(jí)結(jié)構(gòu)的情況下)，所述程度使得雖然給定殘基的主鏈原子基于占據(jù)同源位置并不滿足等同性的標(biāo)準(zhǔn)，但是殘基的至少兩個(gè)側(cè)鏈原子的原子坐標(biāo)位于包皮垢分枝桿菌?；D(zhuǎn)移酶的相應(yīng)側(cè)鏈原子的0. 13nm之內(nèi)。包皮垢分枝桿菌酰基轉(zhuǎn)移酶的三維結(jié)構(gòu)的坐標(biāo)被確定，并且示于W005/056782的實(shí)施例14中，并可按照上文所概括的，用于在三級(jí)結(jié)構(gòu)水平上確定等同殘基。對(duì)野生型和突變蛋白質(zhì)的表征是通過任何合適的手段來完成的，其優(yōu)選基于對(duì)目的性質(zhì)的評(píng)估。例如，在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，測(cè)定PH和/或溫度以及洗滌劑穩(wěn)定性和/或氧化穩(wěn)定性。事實(shí)上，預(yù)期可使用在這些特征(pH、溫度、蛋白水解穩(wěn)定性、洗滌劑穩(wěn)定性和/或氧化穩(wěn)定性)的一個(gè)或多個(gè)方面具有多種穩(wěn)定性程度的酶。
在本文中使用時(shí)，“對(duì)應(yīng)于”指蛋白質(zhì)或肽中列舉的位置上的殘基，或與蛋白質(zhì)或肽中列舉的殘基類似、同源或等同的殘基。在本文中使用時(shí)，“相應(yīng)區(qū)域”通常指沿著相關(guān)蛋白質(zhì)或親本蛋白質(zhì)的類似位置。術(shù)語“編碼......的核酸分子”、“編碼......的核酸序列”、“編碼......的DNA
序列”和“編碼......的DNA”指沿著脫氧核糖核酸鏈的脫氧核糖核苷酸的順序或序列。這
些脫氧核糖核苷酸的順序決定了沿著多肽(蛋白質(zhì))鏈的氨基酸的順序。DNA序列由此編碼氨基酸序列。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“類似序列”指蛋白質(zhì)中提供與目的蛋白質(zhì)(典型地，最初目的蛋白質(zhì))相似的功能、二級(jí)結(jié)構(gòu)和/或保守殘基的序列。例如，在含有a螺旋或@折疊結(jié)構(gòu)的表位區(qū)域中，在類似序列中替換氨基酸能保持相同的特定結(jié)構(gòu)。該術(shù)語還指核苷酸序列和氨基酸序列。在一些實(shí)施方式中，開發(fā)這樣的類似序列，使得替換氨基酸導(dǎo)致顯示相似或改進(jìn)功能的變體酶。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，目的蛋白質(zhì)中氨基酸的三級(jí)結(jié)構(gòu)和 /或保守殘基位于目的區(qū)段或片段上或附近。因此，在目的區(qū)段或片段含有例如a螺旋或 ^折疊結(jié)構(gòu)時(shí)，替換氨基酸保持該特定結(jié)構(gòu)。在本文中使用時(shí)，“同源蛋白質(zhì)”指具有與目的蛋白質(zhì)(例如來自另一來源的?；D(zhuǎn)移酶)相似作用和/或結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)(例如?；D(zhuǎn)移酶)。同源物并不必須在進(jìn)化上相關(guān)。因此，該術(shù)語意欲包括從不同物種獲得的相同或相似的酶(即，在結(jié)構(gòu)和功能方面)。 在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，人們想要鑒定出具有與目的蛋白質(zhì)相似的四級(jí)、三級(jí)和/或一級(jí)結(jié)構(gòu)的同源物，因?yàn)橛脕碜酝次锏念愃茀^(qū)段替換目的蛋白質(zhì)中的區(qū)段或片段將降低改變的破壞性。在一些實(shí)施方式中，同源蛋白質(zhì)能誘導(dǎo)與目的蛋白質(zhì)相似的免疫應(yīng)答。在本文中使用時(shí)，“同源基因”指來自不同物種的至少一對(duì)基因，所述基因互相對(duì)應(yīng)，并且所述基因互相相同或非常相似。該術(shù)語包括通過物種形成(即，新物種的發(fā)展)分離的基因(例如，直向同源基因)以及已通過遺傳復(fù)制分離的基因(例如，共生同源基因)。 這些基因編碼“同源蛋白質(zhì)”。在本文中使用時(shí)，“直向同源物”和“直向同源基因”指通過物種形成從共同祖先基因(即，同源基因)進(jìn)化出的不同物種中的基因。典型地，直向同源物在進(jìn)化期間保留了相同的功能。對(duì)直向同源物的鑒定可用于在新測(cè)序的基因組中可靠地預(yù)測(cè)基因功能。在本文中使用時(shí)，“共生同源物”和“共生同源基因”指通過在基因組中復(fù)制而相關(guān)的基因。盡管直向同源物在進(jìn)化過程中保留了相同的功能，但是共生同源物則進(jìn)化出新的功能，即使一些功能通常與原來的功能相關(guān)。共生同源基因的例子包括編碼胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、彈性蛋白酶和凝血酶的基因，它們都是絲氨酸蛋白酶并且在同一物種中一起存在。在本文中使用時(shí)，“野生型”、“天然”和“天然存在的”蛋白質(zhì)是自然界中發(fā)現(xiàn)的那些。術(shù)語“野生型序列”和“野生型基因”在本文中可互換使用，它們表示在宿主細(xì)胞中是天然的或天然存在的序列?？砂凑毡绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的一般性方法來獲得編碼天然存在的蛋白質(zhì)的基因。所述方法通常包括合成具有編碼目的蛋白質(zhì)區(qū)域的推定序列的經(jīng)標(biāo)記探針，從表達(dá)該蛋白質(zhì)的生物制備基因組文庫(kù)，以及通過與所述探針的雜交從文庫(kù)篩選目的基因。然后可對(duì)陽(yáng)性雜交克隆進(jìn)行作圖和測(cè)序?？墒褂帽绢I(lǐng)域已知的任何合適方法來確定序列間的同源性程度(見,例如，Smithand Waterman, Adv. AppI. Math. ,2 :482[1981] ；Needleman and ffunsch, J. MoI. Biol. ,48 443[1970] ；Pearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 :2444[1988];程序，例如 Wisconsin Genetics 軟件包(Genetics Computer Group,Madison, WI)中的 GAP、BESTFIT、 FASTA 和 TFASTA 以及 Devereux et al. , Nucl. Acid Res.，12 :387-395 [1984])。在本文中使用時(shí)，“百分比)核酸序列同一性”被定義為候選序列中與序列的核苷酸序列相同的核苷酸殘基的百分比。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“雜交”表示核酸鏈與互補(bǔ)鏈通過堿基配對(duì)相連的過程，這是本領(lǐng)域已知的。在本文中使用時(shí)，短語“雜交條件”表示雜交反應(yīng)進(jìn)行的條件。典型地，通過條件的“嚴(yán)緊性”程度來對(duì)這些條件加以歸類，其中在所述條件下測(cè)量雜交。嚴(yán)緊性程度可基于例如核酸結(jié)合復(fù)合體或探針的解鏈溫度(Tm)。例如，“最大嚴(yán)緊度”典型地大約Tm-5°C時(shí) (比探針的Tm低5°C )下發(fā)生；“高嚴(yán)緊度”比Tm低大約5-10° 中等嚴(yán)緊度”比探針的 Tm低大約10-20° 低嚴(yán)緊度”比Tm低大約20-25°。備選或額外地，雜交條件基于雜交和/或一次或多次嚴(yán)緊洗滌的鹽或離子強(qiáng)度條件。例如，6x SSC=非常低的嚴(yán)緊度；3x SSC =低至中等的嚴(yán)緊度；Ix SSC =中等嚴(yán)緊度；以及0. 5x SSC=高嚴(yán)緊度。功能上，最大嚴(yán)緊度條件可用于鑒定具有與雜交探針有嚴(yán)格同一性或接近嚴(yán)格同一性的核酸序列；而高嚴(yán)緊度條件用于鑒定與探針具有大約80%或更高的序列同一性的核酸序列。對(duì)于需要高選擇性的應(yīng)用而言，在一些實(shí)施方式中，可能想要使用相對(duì)嚴(yán)緊的條件來形成雜交體(例如，使用相對(duì)低的鹽和/或高溫度條件)。在提到至少兩條核酸或多肽時(shí)，短語“實(shí)質(zhì)性相似”和“實(shí)質(zhì)性同一”通常表示 多核苷酸或多肽包含較之參照(即野生型)序列而言具有至少大約40%同一性，至少大約 50%同一性，至少大約60%同一‘注,至少大約75%同一性，至少大約80%同一‘注,至少大約90%同一性，至少大約95%同一性，至少大約97%同一性，一些時(shí)候多達(dá)大約98%和大約99%序列同一性的序列?？墒褂靡阎某绦?，例如BLAST、ALIGN和CLUSTAL，采用標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)來確定序列同一性(見，例如，Altschul, et al.，J. Mol. Biol. 215 =403-410[1990], Henikoff et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 :10915 [1989]、Karin et al. , Proc. Natl. Acad. Sci USA 90 :5873[1993]和 Higgins et al, Gene 73 :237-244[1988])。用于進(jìn)行 BLAST 分析的軟件是公眾可通過 National Center for Biotechnology Information 獲得的。此外，可使用 FASTA 來檢索數(shù)據(jù)庫(kù)(Pearson et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA85 2444-2448[1988])。兩條多肽實(shí)質(zhì)性同一的一種指征是第一條多肽與第二條多肽有免疫交叉反應(yīng)性。典型地，由于保守氨基酸取代而有所不同的幾條多肽具有免疫交叉反應(yīng)性。因此，當(dāng)兩條肽不同僅在于保守取代時(shí)，該多肽與第二多肽實(shí)質(zhì)性同一。兩條核酸序列實(shí)質(zhì)性同一的指征是兩條分子能在嚴(yán)緊條件(例如在中等至高度嚴(yán)緊度范圍內(nèi))下互相雜交。術(shù)語“回收的”、“分離的”和“分開的”在本文中使用時(shí)表示從中除去了至少一種與之天然相關(guān)聯(lián)的組分的蛋白質(zhì)、細(xì)胞、核酸或氨基酸。在某些情況下，經(jīng)分離的蛋白質(zhì)是分泌進(jìn)培養(yǎng)基然后從該培養(yǎng)基回收的蛋白質(zhì)。術(shù)語“重組”表示在宿主細(xì)胞中不天然存在的多核苷酸或多肽。重組分子可以含有兩種或多種天然發(fā)生的序列，它們以不天然發(fā)生的方式連接在一起。重組細(xì)胞含有重組多核苷酸或多肽。使用重組方法生產(chǎn)的蛋白質(zhì)是用正常情況下不生產(chǎn)這些蛋白質(zhì)的宿主細(xì)胞來生產(chǎn)的。術(shù)語“異源”表示正常情況下并不相互關(guān)聯(lián)的元件。例如，如果宿主細(xì)胞生產(chǎn)異源蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)是正常情況下并不在該宿主細(xì)胞中生產(chǎn)的。類似地，與異源編碼序列有效連接的啟動(dòng)子是與編碼序列有效連接的啟動(dòng)子，所述啟動(dòng)子在野生型宿主細(xì)胞中通常并不與該編碼序列有效連接。在提到多核苷酸或蛋白質(zhì)表達(dá)時(shí)，術(shù)語“同源”指在表達(dá)其的宿主細(xì)胞中天然存在的多核苷酸或蛋白質(zhì)。在本文中使用時(shí)，“宿主細(xì)胞”通常是使用本領(lǐng)域已知的重組DNA技術(shù)構(gòu)建的載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染過的原核或真核宿主。經(jīng)轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞能復(fù)制編碼蛋白質(zhì)變體的載體或表達(dá)想要的蛋白質(zhì)變體。在編碼蛋白質(zhì)變體的前或前原形式的載體的情況下，典型地，此類變體表達(dá)的時(shí)候從宿主細(xì)胞分泌進(jìn)宿主細(xì)胞培養(yǎng)基。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及某些?；D(zhuǎn)移酶高效催化水性環(huán)境中?；鶊F(tuán)從酰基供體(例如C2至C20的酯)向醇底物轉(zhuǎn)移的活性。如本文中更詳細(xì)描述的，在一些實(shí)施方式中，這些酶的這種活性被用于制備具有愉人香味或風(fēng)味的酯。在一些其它實(shí)施方式中，這些酶的活性優(yōu)選用于在清潔應(yīng)用中減少臭味。并不限于任何具體的酶、醇底物或?；w，以及僅僅是為了幫助對(duì)本文所述的方法的一些實(shí)施方式的理解，下文闡述了通過本發(fā)明方法的一些實(shí)施方式進(jìn)行的反應(yīng)，其中“AcT”代表“酰基轉(zhuǎn)移酶”。
權(quán)利要求
1.清潔組合物，其包含a)?；D(zhuǎn)移酶，和b)所述?；D(zhuǎn)移酶的醇底物；其中，所述?；D(zhuǎn)移酶和醇底物以在所述清潔組合物與酰基供體組合時(shí)有效產(chǎn)生可檢測(cè)到的酯的量存在。
2.權(quán)利要求I的組合物，其中所述?；D(zhuǎn)移酶是SGNH?；D(zhuǎn)移酶。
3.權(quán)利要求I的清潔組合物，還包含c)酰基供體，以及d)所述?；D(zhuǎn)移酶催化的所述醇底物和所述?；w之間的反應(yīng)所產(chǎn)生的酯。
4.權(quán)利要求3的組合物，其中所述?；D(zhuǎn)移酶是SGNH酰基轉(zhuǎn)移酶。
5.權(quán)利要求3的清潔組合物，其中所述酯是織物護(hù)理劑。
6.權(quán)利要求5的清潔組合物，其中所述織物護(hù)理劑是酯表面活性劑。
7.權(quán)利要求3的方法，其中所述酯是芳香酯。
8.權(quán)利要求I的清潔組合物，其中所述?；w存在于物體上的污潰中。
9.權(quán)利要求I的清潔組合物，其中所述含有?；w的物體被所述酰基供體弄臟。
10.權(quán)利要求I的清潔組合物，其中所述?；w是Cl至C18?；w。
11.權(quán)利要求I的清潔組合物，其中所述清潔組合物不包含脂肪酶。
12.權(quán)利要求I的清潔組合物，其中所述清潔組合物還包含脂肪酶。
13.權(quán)利要求I的清潔組合物，其中所述清潔組合物還包含蛋白酶、淀粉酶、果膠酶、纖維素酶、角質(zhì)酶、果膠酸裂合酶、甘露聚糖酶和/或氧化還原酶。
14.權(quán)利要求I的清潔組合物，其中所述清潔組合物還包含表面活性劑、助洗劑、聚合物、鹽、漂白活化劑、漂白系統(tǒng)、溶劑、緩沖劑和/香料。
15.清潔方法,其包括將a)?；D(zhuǎn)移酶b)所述酰基轉(zhuǎn)移酶的醇底物，和c)?；w組合，其中所述?；D(zhuǎn)移酶催化?；鶊F(tuán)從所述酰基供體轉(zhuǎn)移到所述醇底物上以產(chǎn)生織物護(hù)理產(chǎn)物。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所述?；D(zhuǎn)移酶是SGNH?；D(zhuǎn)移酶。
17.權(quán)利要求15的方法，其中所述織物護(hù)理產(chǎn)物是酯表面活性劑或芳香酯。
18.清潔組合物，其包含a)SGNH?；D(zhuǎn)移酶，以及b)所述SGNH?；D(zhuǎn)移酶的醇底物；其中，所述SGNH?；D(zhuǎn)移酶和醇底物以在所述清潔組合物與酰基供體接觸時(shí)有效產(chǎn)生可檢測(cè)到的酯的量存在。
19.權(quán)利要求18的清潔組合物，還包含c)含?；w的物體，以及d)所述SGNH?；D(zhuǎn)移酶催化的所述醇底物和所述?；w之間的反應(yīng)所產(chǎn)生的酯。
20.權(quán)利要求18
21.權(quán)利要求18
22.權(quán)利要求21
23.權(quán)利要求21
24.權(quán)利要求18
25.權(quán)利要求18
26.權(quán)利要求18
27.權(quán)利要求2690%的水。
28.權(quán)利要求18
29.權(quán)利要求18的清潔組合物，其中所述?；w是Cl至C18的?；w。的清潔組合物，其中所述?；w是含?；w的物體。的清潔組合物，其中所述含酰基供體的物體被所述?；w弄臟。 的清潔組合物，其中所述物體被乳制品玷污。的清潔組合物，其中所述清潔組合物不包含脂肪酶。的清潔組合物，其中所述清潔組合物還包含脂肪酶。的清潔組合物，其中所述清潔組合物是水性組合物。的清潔組合物，其中所述清潔組合物除任何固體組分之外包含至少的清潔組合物，其中所述酯是芳香酯。的清潔組合物，其中所述清潔組合物還包含至少一種蛋白酶、淀粉酶、 果膠酶、纖維素酶、角質(zhì)酶、果膠酸裂合酶、甘露聚糖酶或氧化還原酶或其混合物。
30.權(quán)利要求18的清潔組合物，其中所述清潔組合物還包含至少一種表面活性劑、助洗劑、聚合物、鹽、漂白活化劑、漂白系統(tǒng)、溶劑、緩沖劑或香料。
31.清潔方法，所述方法包括將a)SGNH?；D(zhuǎn)移酶b)所述SGNH酰基轉(zhuǎn)移酶的醇底物，和c)被含?；w的物質(zhì)弄臟的物體組合，其中所述SGNH?；D(zhuǎn)移酶催化?；鶊F(tuán)從所述?；w轉(zhuǎn)移到所述醇底物上以產(chǎn)生酯。
32.權(quán)利要求31的方法，其中所述酯是C4至C6羧酸酯。
33.權(quán)利要求31的方法，其中所述酯是丁酸酯或丁酸芐酯。
34.權(quán)利要求31的方法，其中所述酯是伯醇和C4至C6脂肪酸的酯。
35.權(quán)利要求31的方法，其中所述物體是織物。
36.權(quán)利要求35的方法，其中所述織物被含油物質(zhì)弄臟。
37.權(quán)利要求35的方法，其中所述織物被含三酰甘油酯的物質(zhì)玷污。
38.權(quán)利要求37的方法，其中所述含三酰甘油酯的物質(zhì)含有C4-C18三酰甘油酯。
39.權(quán)利要求31的方法，其中所述SGNH?；D(zhuǎn)移酶催化酰基基團(tuán)從所述織物上存在的?；w轉(zhuǎn)移到所述醇底物上以產(chǎn)生芳香酯。
40.權(quán)利要求31的方法，其中所述SGNH?；D(zhuǎn)移酶的所述醇底物還作為表面活性劑或乳化劑。
41.權(quán)利要求40的方法，其中所述SGNH?；D(zhuǎn)移酶催化?；鶊F(tuán)從所述?；w轉(zhuǎn)移到所述表面活性劑或乳化劑上以產(chǎn)生酯。
42.權(quán)利要求31的方法，其中所述方法還包括將過氧化物的來源與所述SGNH?；D(zhuǎn)移酶組合，并且所述方法導(dǎo)致產(chǎn)生過酸。
全文摘要
本發(fā)明清潔用酶和臭味預(yù)防提供了包含?；D(zhuǎn)移酶和?；D(zhuǎn)移酶的醇底物的組合物。在一些特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，組合物可用于生產(chǎn)芳香酯。在一些其它實(shí)施方式中，組合物可用于洗衣洗滌劑，以清潔含有至少一種甘油三酯的污漬。在另外一些實(shí)施方式中，組合物用于生產(chǎn)具有清潔性質(zhì)的化合物(例如表面活性酯)。
文檔編號(hào)C11D3/386GK102604753SQ20121000658
公開日2012年7月25日 申請(qǐng)日期2008年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月27日
發(fā)明者A·J·保羅斯, J·B·瑟, J·C·麥考利夫, J·D·米克爾森 申請(qǐng)人:丹尼斯科美國(guó)公司