專利名稱：預(yù)防脫毛及促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于預(yù)防脫毛及促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的、包含磷脂作為有效成分的組合物，更具體地，涉及用于預(yù)防脫毛及促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的、包含來(lái)源于動(dòng)物的磷脂作為有效成分的組合物。
背景技術(shù)：
過(guò)量的男性荷爾蒙作用、血液循環(huán)不良、由于過(guò)氧化物和細(xì)菌等導(dǎo)致的頭皮功能下降、遺傳因素、老化、壓力等被認(rèn)為是脫毛的原因，但是直至目前不知道脫毛的原因。近年來(lái)，由于因飲食生活改變而導(dǎo)致的營(yíng)養(yǎng)不均衡、因環(huán)境污染和社會(huì)環(huán)境而導(dǎo)致的壓力程度的增加等原因，擔(dān)心脫毛的人口的比例在增加，年齡在繼續(xù)降低，并且擔(dān)心脫毛的女性人口的比例也逐步地增加。為了治療及預(yù)防此類脫毛，已經(jīng)開發(fā)了具有用于刺激血液循環(huán)、強(qiáng)化毛囊功能、頭皮保濕及抑制男性荷爾蒙的以女性荷爾蒙作為主要成分的配方，或具有米諾地爾、非那雄胺、粘多糖生長(zhǎng)素(Trichosaccharide)等的配方。米諾地爾對(duì)毛發(fā)生長(zhǎng)的作用機(jī)理還不明確，但是認(rèn)為通過(guò)血管擴(kuò)張?jiān)黾訝I(yíng)養(yǎng)物供應(yīng)以及打開鉀通道的效果來(lái)誘導(dǎo)毛發(fā)生長(zhǎng)。非那雄胺是5-α還原酶抑制劑，用作治療前列腺的藥物和通過(guò)不同的劑量預(yù)防脫毛的藥物。粘多糖生長(zhǎng)素在方便性和效能方面是優(yōu)良的藥品。然而，由于用于制備非那雄胺的試劑是昂貴或高毒性的，所以存在制造成本高以及污染環(huán)境的問(wèn)題。特別是，存在以下問(wèn)題:由于難以去除副產(chǎn)物，所以目標(biāo)產(chǎn)物的純度降低；以及由于采用了其活性容易被水抑制的試劑和活性衍生物，所以難以大量生產(chǎn)。`

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明是被設(shè)計(jì)用于解決上述問(wèn)題以及滿足上述需求，本發(fā)明的目的是提供一種預(yù)防脫毛或促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的組合物。技術(shù)方案為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的例示性實(shí)施方式提供了用于預(yù)防脫毛或用于促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的組合物，其中該組合物包含作為有效成分的磷脂。根據(jù)本發(fā)明一種實(shí)施方式，磷脂優(yōu)選從動(dòng)物中提取，所述動(dòng)物優(yōu)選是家畜，例如，牛或豬，但本發(fā)明不限于此。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式，磷脂優(yōu)選采用從肺的洗滌液或肺組織的破碎物中提取，但本發(fā)明不限于此。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施例，磷脂優(yōu)選是“具有高飽和度和相對(duì)短的烴鏈(尾鏈)長(zhǎng)度的脂肪酸的磷脂質(zhì)”，更優(yōu)選烴鏈長(zhǎng)度為14 16，但本發(fā)明不限于此。例如，所述磷脂包含選自由二棕櫚酰磷脂酰膽堿、磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酸和磷脂酰肌醇所組成的組中的任一種。
根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，所述組合物更優(yōu)選包含2價(jià)陽(yáng)離子和含羧基的有機(jī)酸或其鹽，但本發(fā)明不限于此。以下對(duì)本發(fā)明進(jìn)行描述。本發(fā)明通過(guò)對(duì)所有脫毛癥狀如男性型脫毛和女性型脫毛中所體現(xiàn)出的一般生物化學(xué)或生理學(xué)的現(xiàn)象的文獻(xiàn)的調(diào)查提出解決脫毛的新方法。對(duì)脫毛的新調(diào)查以及脫毛的解決方案如下:Yanez Soler在他已公開的論文中提出如下假設(shè):脫毛是由從皮脂腺分泌的皮脂流入和進(jìn)入毛囊或真皮乳頭導(dǎo)致的，即使該皮脂應(yīng)該沿著毛發(fā)向外分泌。他提出在具有沿著頭發(fā)軸容易向外排出皮脂的條件的情況中，例如，當(dāng)毛發(fā)的厚度越厚或者毛發(fā)的密度越高時(shí)，不容易發(fā)生脫毛。解釋該假設(shè)的很好例子是與枕頭接觸的部位不出現(xiàn)脫毛現(xiàn)象。那是因?yàn)楫?dāng)人們睡覺(jué)時(shí)，由于枕頭毛發(fā)被壓扁并相互接觸，所以皮脂容易沿著毛發(fā)表面去除(Yanez Soler2004, Med.Hypotheses62:980-985)。*本發(fā)明假設(shè)導(dǎo)致脫毛的根本原因與由組成中性脂肪成分的皮脂的過(guò)度分泌及積累密切相關(guān)?；谏鲜黾僭O(shè)，我們嘗試解釋所有引起脫毛的原因。特別是，嘗試簡(jiǎn)單地地解釋男性隨著年齡增長(zhǎng)受脫毛之苦的理由。脫毛的生理學(xué)原因和生物化學(xué)的原因具有以下文獻(xiàn)中的共性和理論合理性?！蛐坌约に兀环N男生荷爾蒙，與體內(nèi)代表性的中性脂肪的三酰甘油(TG)和膽固醇(cholesterol)的增加密切相關(guān)(Kao 等人，2001, J.1nt.dermatol, 116:443-451)?！螂S著年齡增長(zhǎng)，與體內(nèi)的極性脂肪相比，中性脂肪的比例增加(Nazzaro-Porro等人，1979, J.1nvest.Dermatol, 73:112-117)。◎皮脂的分泌和皮脂腺的活躍與根據(jù)年齡的男性荷爾蒙的含量密切相關(guān)(Pochi等人，1979, J.1nvest.Demotol, 73:108-111)?！蛴捎趬毫Γ黾恿四懝檀?一種代表性中性脂肪)的合成(O Donnell等人，1987，J.Royal Society Med,80:339-341)?！蛟谝恍┌┌Y患者接受化療后，增加了中性脂肪(特別是三酰甘油)和低密度脂蛋白(LDL)及 LDL-膽固醇(Alexopoulos 等人，1992, Cancer Chemother.Pharmacol,30:412-416)。◎在組成皮脂及表皮周邊脂質(zhì)的不飽和脂肪酸處在通過(guò)由脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程產(chǎn)生的單線態(tài)氧(1O2)的氧化應(yīng)激的情況時(shí),可以發(fā)生脫毛(Naito等人,2008, International.J.Mol.Med.22:725-729)?！蛞恍┦苊撁嗟幕颊呖赡鼙憩F(xiàn)微炎癥。過(guò)度的皮脂分泌可能提供附著和增殖微生物的良好環(huán)境(Mah ◎等人，2000, Internatonal J.Dermatol, 39:576-584)。由以上列出的科學(xué)依據(jù)，可以容易推理出由于男性荷爾蒙、壓力及年齡增長(zhǎng)，體內(nèi)的中性脂肪的比例可能增加，并且由中性脂肪組成產(chǎn)生的過(guò)度皮脂分泌和合成可能引起脫毛癥狀。在由于遺傳因素引起脫毛的情況中，可以推理出當(dāng)存在對(duì)中性脂肪的機(jī)制的遺傳因素時(shí)，可以誘發(fā)極性脂肪和中性脂肪之間比例的不均衡，因此可以刺激脫毛。特別是，可以預(yù)料到由于線粒體主要起到脂 質(zhì)機(jī)制有關(guān)的作用，所以禿頭遺傳是線粒體傳遞路徑的母系遺傳。一般認(rèn)為禿頭可以由任何與線粒體相關(guān)的突變或脂質(zhì)機(jī)制不均衡產(chǎn)生。一般認(rèn)為作為女性不顯示男性型脫毛的理由，女性顯示出相對(duì)低的生理學(xué)皮脂分泌，而且通常她們與男性相比徹底洗干凈她們的臉，以及在洗臉時(shí)通過(guò)使用多種化妝品有效去除她們的中性脂肪皮脂成分。此外，可以推論出化妝品中包含的多種脂肪酸、脂肪酸衍生物及多種的乳化劑成分防止中性脂肪皮脂具有高的粘度，使得她們沒(méi)有顯示出男性型脫毛癥狀。另外，一般可以基于同樣的理由來(lái)說(shuō)明具有少量體毛的亞洲人與具有大量體毛的西方人之間的差別。亞洲人以碳水化合物攝取為主，當(dāng)在體內(nèi)開始脂肪積累時(shí)容易增加儲(chǔ)存型的中性脂肪，使得亞洲人的體毛發(fā)育與西方人相比更低效?？梢曰谙嗤睦碛蓙?lái)說(shuō)明此現(xiàn)象。當(dāng)皮脂(一種中性脂肪)不沿著毛發(fā)往外排出，而是轉(zhuǎn)移到毛囊方向，然后累積時(shí)，在被毛細(xì)管提供營(yíng)養(yǎng)物的毛囊細(xì)胞及周邊細(xì)胞會(huì)存在問(wèn)題。由于細(xì)胞增殖和細(xì)胞活動(dòng)所需要的營(yíng)養(yǎng)物以膠束或者脂質(zhì)體(HDL或LDL，分泌囊包或者板層小體等)形式提供，所以如果皮脂(一種中性脂肪)在毛囊細(xì)胞周圍累積，則以被脂質(zhì)膜包圍狀態(tài)提供的營(yíng)養(yǎng)物的輸送會(huì)被中斷。另外，由于中性脂肪擠出水(水分)，所以將阻塞水溶性小分子(葡萄糖或氨基酸等)輸送至毛囊細(xì)胞?？梢悦?述為:當(dāng)發(fā)生脫毛時(shí)所共同表現(xiàn)出的毛囊小型化現(xiàn)象，其是通過(guò)抑制毛囊及所有相關(guān)的周邊細(xì)胞提供來(lái)自血管的良好營(yíng)養(yǎng)物，從而收縮細(xì)胞活動(dòng)及大小，然后脫落細(xì)胞。此外，可以推論出:如果根據(jù)毛囊細(xì)胞的周期毛發(fā)脫落一次，應(yīng)該再生長(zhǎng)新的毛發(fā)，但是中性脂肪的積累抑制了形成毛囊的干細(xì)胞輸送到真皮乳頭，由此抑制了形成新的毛發(fā)。近年來(lái)，由受脫毛之苦的2(Γ30歲年輕男性在增加。引起年輕男性脫毛的原因可以解釋為與如下的中性脂肪代謝有關(guān)。在20世紀(jì)80年代，植物油(大豆油、玉米油、葡萄籽油、棉籽油/橄欖油等)以廉價(jià)的價(jià)格大量流通，因此各種飲食生活中增加了油炸類或加油食物攝取。商業(yè)化的植物油主要通過(guò)采用中性溶劑(例如，正己烷等)的萃取法大量制備。由于用中性溶劑的萃取法不給包含于植物的極性脂質(zhì)包含到產(chǎn)品的條件或機(jī)會(huì)，因此幾乎純粹的中性脂肪組成的清晰且透明的油進(jìn)入市場(chǎng)。其結(jié)果是，可以推理出現(xiàn)代人攝取許多包含不飽和脂肪酸的植物中性脂肪，有了高的中性脂肪代謝依存度，還具有高水平的中性脂肪在體內(nèi)的累積和中性脂肪成分的皮脂分泌。如以上所述的，過(guò)多的中性脂肪可以引起脫毛。另外，由于來(lái)源于植物的中性脂肪包含大量不飽和脂肪酸，當(dāng)暴露在空氣中時(shí)，中性脂肪將通過(guò)一系列的化學(xué)反應(yīng)，即當(dāng)暴露在空氣中時(shí)通過(guò)與氧分子結(jié)合的“脂質(zhì)過(guò)氧化”。通過(guò)過(guò)氧化過(guò)程產(chǎn)生的氧化應(yīng)激可能引起脫毛加速。年輕人脫毛可以通過(guò)個(gè)人的精神壓力產(chǎn)生，但脫毛能夠由中性脂肪有關(guān)的一系列生理學(xué)作用來(lái)解釋。另外，認(rèn)為存在部分植物不飽和脂肪酸轉(zhuǎn)化為花生四烯酸，由此增加炎癥反應(yīng)的可能性。當(dāng)皮脂的分泌具有過(guò)多的中性脂肪成分以及皮脂逆向移動(dòng)到毛囊引起脫毛時(shí)，可以通過(guò)使用現(xiàn)有已知的傳統(tǒng)方法減輕脫毛的癥狀。例如，可以采取如下方法:例如，使用抑制雄性激素活性的方法來(lái)降低皮脂合成和皮脂分泌的方法；或者使用防止由膽固醇合成雄性激素的抑制劑來(lái)降低雄性激素活性的方法。例如，使用米諾地爾(血管擴(kuò)張劑的)和5α-還原酶(非那雄胺)的方法作為毛發(fā)生長(zhǎng)的解決方案。然而，眾所周知當(dāng)長(zhǎng)期使用上述兩種藥物時(shí)才能獲得效果，并且還眾所周知在某些使用者中沒(méi)有預(yù)防脫毛的效果。已有報(bào)道長(zhǎng)期服用非那雄胺可能產(chǎn)生如性功能障礙、精液減少及性欲減少等副作用(Kaufman等人，1998，J.Am.Acad.Dermatol, 39:578_589)，米諾地爾對(duì)一些患者可能伴隨如接觸性皮膚炎、濕疫等癥狀，或引起頭痛(Oslen 等人,2002, J.Am Acd.Dermatol, 47:377-385)。作為預(yù)防脫毛的其它方法，有用具有強(qiáng)力洗滌效果的洗滌劑、洗發(fā)劑等連續(xù)不斷地去除皮脂的方法。連續(xù)地去除皮脂的方法具有防止皮脂反向移動(dòng)到毛囊的可能性。然而，會(huì)存在如下機(jī)會(huì):如果用強(qiáng)力的洗滌劑或洗發(fā)劑，可能產(chǎn)生對(duì)頭皮或表皮的化學(xué)刺激，或可能損壞它們天然固有的保護(hù)功能，從而產(chǎn)生相反的效果。因此，存在一種穩(wěn)定的方法，其不是減少產(chǎn)物或皮脂分泌物、或者簡(jiǎn)單地去除皮脂累積的方法，而將皮脂的物性轉(zhuǎn)換為容易排出，由此預(yù)防脫發(fā)；并且還產(chǎn)生容易將營(yíng)養(yǎng)物供應(yīng)給毛囊細(xì)胞和周圍細(xì)胞的條件以促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)。根據(jù)本發(fā)明，發(fā)現(xiàn)當(dāng)將包含從動(dòng)物肺中提取后提純的磷脂、2價(jià)陽(yáng)離子、以及有機(jī)酸(關(guān)于防止通過(guò)采用有機(jī)酸、有機(jī)酸鹽和2價(jià)陽(yáng)離子的pH緩沖液來(lái)防止磷脂結(jié)塊的現(xiàn)象；例如，朽1檬酸、朽1檬酸鹽，pH值為5.8)的組合物局部應(yīng)用于小鼠的表皮時(shí),該組合物除了緩和表皮的發(fā)炎之外，可以促進(jìn)毛囊的分化和毛發(fā)生長(zhǎng)。本發(fā)明的觀察結(jié)果顯示出與傳統(tǒng)結(jié)果所觀測(cè)的不同類型的毛囊細(xì)胞活動(dòng)(毛囊形成的典型過(guò)程，即由表皮基底細(xì)胞層的發(fā)育開始，之后在新的膨脹部形成毛囊)。由觀察組織學(xué)檢查的結(jié)果，可以確定:分布在皮下組織層的已有的毛囊細(xì)胞快速分化并且生長(zhǎng)，與在傳統(tǒng)論文中已經(jīng)公開的大量結(jié)果相比產(chǎn)生了大量的毛囊(參見(jiàn)圖7和圖8)。由以上結(jié)果，我們考慮了用于毛發(fā)生長(zhǎng)的組合物的功能，然后創(chuàng)立了引起脫毛相關(guān)的新理論。因此，本發(fā)明是關(guān)于預(yù)防脫毛和促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的組合物。本發(fā)明創(chuàng)立關(guān)于脫毛原因的新理論，并且作為新概念提出了用于防止和促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的組合物。包含通過(guò)去除來(lái)源于動(dòng)物的肺組織的中性脂肪和蛋白質(zhì)而提純的磷脂、2價(jià)陽(yáng)離子(鈣離子和/或鎂離子)和/或有機(jī)酸(例如，檸檬酸和檸檬酸鹽)的組合物促進(jìn)了毛發(fā)生長(zhǎng)。本發(fā)明的特征在于:使用從動(dòng)物和人的肺組織向體外分泌的特定磷脂，其不同于從雞蛋或者大豆中提取的磷脂(一般稱為“軟磷脂”)，其中，由于從動(dòng)物或人分泌的磷脂對(duì)磷脂的氧化具有穩(wěn)定性，所以當(dāng)其應(yīng)用于暴漏在空氣中的頭皮和表皮部位時(shí)，是有利的。用在本申請(qǐng)說(shuō)明書的術(shù)語(yǔ)“提取物”的意思是指其通常為上述技術(shù)領(lǐng)域中熟知的粗提取物，然而在廣義上包括上述的溶劑組分。本發(fā)明的肺提取物通過(guò)使用溶劑來(lái)獲得，并且通過(guò)進(jìn)一步應(yīng)用提純工藝來(lái)獲得。例如，作為本發(fā)明的肺提取物，包括從提取物中通過(guò)具有某些分子截留值(cut-off value)的超濾膜所獲得的組分，和通過(guò)進(jìn)一步進(jìn)行的多種提純方法，例如，通過(guò)使用各種色譜的分離(通過(guò)根據(jù)大小、電荷、疏水性或親和力分離而制造的)所獲得的組分。根據(jù)本發(fā)明的肺提取物或者其餾分可以通過(guò)進(jìn)一步的工藝如真空蒸餾以及冷凍-干燥或噴霧干燥來(lái)制備成粉末類型。本發(fā)明的組合物起到非常有效地預(yù)防脫毛及促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的作用。在申請(qǐng)說(shuō)明書中所使用的術(shù)語(yǔ)“預(yù)防脫毛”和“促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)”用作相同的含義，并且與本技術(shù)領(lǐng)域中使用的其它術(shù)語(yǔ)、毛發(fā)生長(zhǎng)具有相同的含義。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)方式，本發(fā)明的組合物可以作為藥物組合物、化妝品組合物或食品組合物的形式提供。在其中本發(fā)明的 組合物作為藥物組合物制備的情況中，本發(fā)明的藥物組合物包括藥學(xué)上可接受的載體。包含于本發(fā)明的藥物組合物中的藥學(xué)上可接受的載體包括:作為在制備時(shí)常見(jiàn)使用的載體，乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯卩比咯烷酮、纖維素、水、糖漿、甲基纖維素、甲基羥基苯甲酸酯、丙基羥基苯甲酸酯、丙基羥基苯甲酸酯、滑石、硬脂酸、鎂及礦物油，但本發(fā)明不限于此。本發(fā)明的藥物組合物可以進(jìn)一步包括潤(rùn)滑劑、潤(rùn)濕劑、甜味劑、乳劑、懸浮液、防腐劑等。適合的藥學(xué)上可接受的載體或配方在雷明頓的制藥科學(xué)(1995，第十九版)(Remington，s Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995))中有詳細(xì)描述。本發(fā)明的藥物組合物可以口服或非腸道給藥，優(yōu)選地非腸道給藥。更優(yōu)選地，通過(guò)以局部應(yīng)用型進(jìn)行施用。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物的合適劑量可以根據(jù)諸如配制方法、給藥方法、患者年齡、患者體重、患者性別、患者病態(tài)、飲食、給藥期間、給藥途徑、排泄率、以及反應(yīng)靈敏度等因素進(jìn)行多種規(guī)定?；诔扇?，包含于本發(fā)明的藥物組合物中的磷脂(一種生物活性物質(zhì))的劑量在0.0oriooomg/kg范圍內(nèi)，優(yōu)選在0.0orioomg/kg,更優(yōu)選在0.01 50mg/kg。本發(fā)明的藥物組合物可以被制備為單位容量型，或者通過(guò)根據(jù)由熟知本發(fā)明相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員可以容易進(jìn)行的方法，用藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑將其放入高容量的容器來(lái)制備。此時(shí)， 劑型可以是溶液、懸浮液、糖漿劑、或在油或水介質(zhì)中的乳劑；或者可以是提取物、消散劑、粉末劑、顆粒劑、片劑或者膠囊劑的類型。另外，可以進(jìn)一步包括分散劑和穩(wěn)定劑。在其中本發(fā)明的組合物作為化妝品組合物制備的情況中，本發(fā)明組合物包含上述肺提取物和由此分離的磷脂，以及還包含通常用于化妝品組合物的成分，其中所述成分包括:例如，輔劑如抗氧化劑、穩(wěn)定劑、溶解劑、維生素、染料、調(diào)味品以及載體。此外，除了上述肺提取物和由此分離的磷脂之外，本發(fā)明的組合物可以使用與將不破壞本發(fā)明功能(毛發(fā)生長(zhǎng)功能)范圍內(nèi)通常使用的毛發(fā)生長(zhǎng)促進(jìn)劑和生發(fā)油混合的混合物。作為載體，可以使用凈化水、單價(jià)醇(乙醇或丙醇)、多價(jià)醇(甘油、1，3-丁二醇、或丙二醇)、高級(jí)脂肪酸(棕櫚酸或亞麻酸)、油脂(麥胚芽油、山茶油、希蒙得木油(jojobaoil)、橄欖油、角S烯、葵花油、澳洲堅(jiān)果油(macadamia nut oil)、鱷梨油、大豆添加水的卵磷脂、脂肪酸甘油酯)等，但本發(fā)明不限于此。另外，如果必要的話，可以添加表面活性劑、抗微生物劑、抗氧化劑、紫外線吸附劑、抗炎劑和清涼劑。表面活性劑可以包含選自聚氧乙烯、氫化的蓖麻油、聚氧乙烯、油基醚、單油酸聚氧乙烯醚、聚氧乙烯、單硬脂酸甘油酯、單硬脂酸山梨糖醇、單油酸聚氧乙烯醚、山梨糖醇、蔗糖脂肪酸酯、單月桂酸六聚甘油酯、聚氧乙烯還原的羊毛脂、Ρ0Ε、甘油焦谷氨酸酯、異硬脂酸、二酯、N-乙酰谷胺和異硬脂酸酯中的一種。抗菌劑可以包含選自扁柏酚、三氯生、雙氯苯雙胍己烷葡萄糖酸鹽、苯氧基乙醇、間苯二酚、異丙基甲基苯酚、甘葡環(huán)烴、水楊酸和巰氧毗啶鋅中的一種。作為抗氧化劑，可以使用由丁羥基茴香醚、五倍子酸、五倍子酸丙酯和異抗壞血酸鹽中的任一種作為紫外線吸附劑，可以使用二苯甲酮如二羥基二苯甲酮、黑色素、對(duì)氨基苯甲酸乙基酷(paraaminobenzoic acid ethyl)、對(duì)二甲氛基苯甲酸2_乙基己酷、西諾賽特(cynocite)、對(duì)甲氧基肉桂酸2-乙基己酯、2-(2-輕基-5-甲苯基)苯并三唑、咪唑丙烯酸和金屬氧化物顆粒中的任一種。
作為抗炎劑,可以使用格利蒂利汀酸二鉀(glythylic acid dipotassium)或尿囊素；作為清涼劑，可以使用辣椒酊或1-薄荷醇。所述組合物的劑型是能夠結(jié)合肺提取物和由此分離的磷脂作為有效成分的任意劑型，以及作為預(yù)防脫毛和促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的化妝品類型，它可以被制成各種類型如生發(fā)油、發(fā)乳、潤(rùn)發(fā)油、粉劑、溶液如凝膠、溶膠凝膠、乳液、油、蠟和氣溶膠，但本發(fā)明不限于此。本發(fā)明組合物可以進(jìn)一步包含用于促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的輔助成分。促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的輔助成分包括5 α -還原酶抑制劑、毛囊和毛囊活化劑、增加毛囊血液流量的成分、殺菌成分、頭皮屑防止劑、角蛋白軟化劑、清涼劑、保濕劑等。關(guān)于每個(gè)功能成分的實(shí)例如下:I) 5α-還原酶抑制劑綠茶提取物、非那雄胺、黃金側(cè)柏科籽提取物、苦參根狹葉提取物(sophoraangustifolia root extract)、亞麻酸、Y _亞麻酸、希蒙得木油、橄欖油、葵花油、鱷梨油、添加大豆的卵磷脂、丁香提取物、薏苡仁提取物、鹽膚木提取物(rhus semialata gallextracts)、姜黃提取物、檳榔提取物、黑兒茶提取物、牽牛子提取物、車前子提取物、降香黃檀提取物、甘草提取物、補(bǔ)骨脂提取物(bogolji extract)、沙巴棕、蘋果提取物等。2)毛囊和毛囊活性劑獐牙菜提取物、人參提取物、紅參提取物、軟棗獼猴桃果提取物(actinidiaarguta fruit extract)、丁香提取物、薏該仁提取物、地黃根提取物、何首烏根提取物、黃精提取物、泛酰乙醚(pantothenylethylether )、二泛酰醇(dipantothenol )、指甲花提取物、菖蒲提取物、扁柏酚、煙酰胺、L-薄荷醇等。3)增加毛囊血流的成分
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米諾地爾、銀杏提取物、紅參提取物、辣椒酊、醋酸生育酚酯、煙堿酸芐酯等。4 )殺菌及角蛋白溶解劑水楊酸、指甲花提取物、菖蒲提取物、吡羅克酮乙醇胺等。5)頭皮屑防止劑酮康唑、綠茶提取物等。6)清涼劑L-薄荷醇等。7)保濕劑橄欖油、希蒙得木油、山茶油、葵花油、澳洲堅(jiān)果油、鱷梨油等。以下對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。本發(fā)明中提出的關(guān)于脫毛的解決方案如下:1.用極性脂肪改變皮脂(一種中性脂肪)的性質(zhì)。一種代表性極性脂肪的磷脂是特定的兩性材料，并且可以與中性脂肪很好的混合，同時(shí)也可以很好地與水混合。通過(guò)使用此類性質(zhì)的磷脂改變皮脂的性質(zhì)。皮脂可以很好地與水混合，因此該皮脂可以容易地排出，并且可能使皮脂不向后流到毛囊且不積累。因此，積累的皮脂不會(huì)阻塞輸送至血管的營(yíng)養(yǎng)物。磷脂是組成細(xì)胞膜的脂質(zhì)，并且可以作為毛囊細(xì)胞和周圍相關(guān)細(xì)胞所需要的細(xì)胞膜構(gòu)成物提供。肥皂或者洗發(fā)劑可以相對(duì)容易地去除皮脂成分中具有小極性的脂肪酸或膽固醇，但很難去除完全中性的脂肪如三酰甘油或膽固醇。因此，如果頻繁地使用肥皂或洗發(fā)劑，會(huì)逐漸降低脂肪酸、膽固醇等的比例，所以存在可能產(chǎn)生皮脂凝固的擔(dān)心。由于使用磷脂質(zhì)改變皮脂的性質(zhì)的方法可以防止固化，所以期待皮脂容易被排出，并且在用肥皂或洗發(fā)劑時(shí)容易被去除。2.應(yīng)選擇磷脂，然后使用。由于植物磷脂包含大量不飽和脂肪酸，當(dāng)在應(yīng)用于頭皮或表皮時(shí)通過(guò)暴露在空氣中從而與氧氣接觸時(shí)，它們會(huì)經(jīng)受脂類過(guò)氧化過(guò)程。通過(guò)脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程產(chǎn)生的單線氧
(1O2)離子可能負(fù)面地影響(氧化應(yīng)激)表皮細(xì)胞和毛囊細(xì)胞。先前報(bào)道有脂類過(guò)氧化可能引起脫毛(Naito 等人，2008, International J.Mol.Med, 22:725-729)或斑秀癥狀(Koca 等人，2005, Med.Sc1.Monit.11:296-299)。為了在身體的表皮上使用磷脂，不飽和脂肪酸的含量低或者不飽和脂肪酸不包含于磷脂中。在生理學(xué)方面與氧高度接觸的肺是僅有的包含大量不飽和脂肪酸的器官。一般認(rèn)為肺的該特性是用于降低肺表面的表面張力以容易呼吸的方法，而且還由于在呼吸時(shí)連續(xù)暴露于氧氣中是不可避免，肺的該特性是防止脂質(zhì)過(guò)氧化的副作用的進(jìn)化結(jié)果之一。其結(jié)果是，包括人類的所有動(dòng)物的肺具有大量的“含大量飽和脂肪酸的磷脂”，并且在肺的表面連續(xù)分泌這樣的磷脂。因此，最優(yōu)選采用來(lái)自動(dòng)物肺的磷脂作為能夠應(yīng)用在表皮或頭皮的磷脂。存在采用植物提取油或特定脂肪酸作為一些與脫毛相關(guān)的產(chǎn)品的情況。植物提取油或來(lái)源于植物的脂肪酸可以允許皮脂液化(增加流動(dòng)性)。另外，它們可以通過(guò)容易排出而顯示出對(duì)預(yù)防脫毛及促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的效果。然而，不能充分地認(rèn)為相反的效果是由不飽和脂肪酸-氧化引起的。3.用于使磷脂效果最大化的輔助因子，二價(jià)陽(yáng)離子。難以通過(guò)給頭皮簡(jiǎn)單地提供磷脂來(lái)預(yù)防脫毛或期望毛發(fā)快速生長(zhǎng)。2價(jià)陽(yáng)離子，特別是鈣離子(Ca2+離子)是供應(yīng)由外部提供給到真皮乳頭和相關(guān)周圍細(xì)胞的磷脂所必不可少的。通常，鈣離子(Ca2+離子)或鎂離子(Mg2+離子)用于細(xì)胞-細(xì)胞間識(shí)別，并且是用于膠束或脂質(zhì)融合至所選擇的細(xì)胞膜所必不可少的因素。為了在活體中表現(xiàn)出所選擇的磷脂的效果，2價(jià)陽(yáng)離子應(yīng)該實(shí)質(zhì)上共存的。另外，期待這樣的2價(jià)陽(yáng)離子中和磷脂的磷酸酯基團(tuán)的負(fù)極性，以便磷脂可以確定它們的取向，或者具有穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。用于本發(fā)明中的非限制性實(shí)例的2價(jià)陽(yáng)離子鈣的濃度仿效了在活體中的肺表面的鈣離子濃度，然后應(yīng)用它。4.為了磷脂的有效功能的有機(jī)酸輔助因子。由于脂質(zhì)極性端部具有極強(qiáng)的極性，所以磷脂表現(xiàn)出通過(guò)2價(jià)陽(yáng)離子強(qiáng)烈聚集的現(xiàn)象。通過(guò)2價(jià)陽(yáng)離子聚集的磷脂不容易分散在表皮上，由于聚集物的尺寸大，所以不容易滲透到表皮里，使得難以期待預(yù)防脫毛或者促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的良好效果。為了使磷脂通過(guò)2價(jià)陽(yáng)離子隨機(jī)聚集最小化，可以在組合物中使用表現(xiàn)出強(qiáng)烈負(fù)極性的有機(jī)酸(例如，與TCA周期有關(guān)的有機(jī)酸如檸檬酸鹽/檸檬酸、琥珀酸鹽/琥珀酸)。這些有機(jī)酸通過(guò)2價(jià)陽(yáng)離子在涉及磷脂聚集的相互作用中發(fā)揮作用。該作用是通過(guò)代表性的螯合劑乙二胺四乙酸(EDTA)固定2價(jià)金屬離子的不同方式。另外，存在如下優(yōu)點(diǎn):有機(jī)酸以共軛酸或共軛堿(例如，檸檬酸或檸檬酸鈉)類型存在，使得有機(jī)酸可以用作控制應(yīng)用于頭皮上的液體制劑的PH值的緩沖液。

本發(fā)明的原創(chuàng)性使用磷脂促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的方法的實(shí)例在現(xiàn)有的專利中有公開。
美國(guó)專利第4，828，837號(hào)和美國(guó)專利第4，761，288號(hào)公開了通過(guò)采用磷脂制備的脂質(zhì)體以使米諾地爾的效果最大化。這些專利使用了采用磷脂(卵磷脂)和合成的二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、大豆或蛋黃的脂質(zhì)體包封米諾地爾。另外，為了穩(wěn)定磷脂結(jié)構(gòu)，該專利提出了另外使用膽固醇的實(shí)例。本發(fā)明的目的是采用從動(dòng)物肺中提取，然后提純后的純化的磷脂促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)，而不是傳送促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的成分如米諾地爾。利用公知常識(shí)，難以判斷活體中的構(gòu)成成分磷脂刺激了分布在基底層的干細(xì)胞，使得該干細(xì)胞可以分化為毛囊細(xì)胞。因此，本發(fā)明的原理是通過(guò)使用從動(dòng)物的肺組織中提純的純磷脂改變皮脂(一種中性脂肪成分的)的性質(zhì)來(lái)防止皮脂固化，以及容易地排出或去除。皮脂的順利消除可以預(yù)防脫毛，并且有助于毛囊細(xì)胞能夠容易地接受來(lái)自于毛細(xì)管的營(yíng)養(yǎng)物，使得它可以活化毛囊細(xì)胞和相關(guān)的周圍細(xì)胞，由此促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)。從蛋黃或大豆中提取的磷脂包含大量不飽和脂肪酸，使得存在通過(guò)氧接觸的容易過(guò)氧化而將氧化應(yīng)激施加于毛囊細(xì)胞和相關(guān)的周圍細(xì)胞的高可能性。因此，如果可以，優(yōu)選使用包含大量飽和脂肪酸的從動(dòng)物肺中提純的磷脂，代替使用包含不飽和脂肪酸的磷脂(卵磷脂)。本發(fā)明涉及一種使 用有機(jī)酸或有機(jī)酸鹽(共軛酸或共軛堿)以防止由鈣引起的磷脂聚集、以及2價(jià)陽(yáng)離子的組合物。因此，本發(fā)明具有完全不同于任何常見(jiàn)的磷脂相關(guān)產(chǎn)品的原創(chuàng)性。通過(guò)同時(shí)使用這樣的2價(jià)離子、以及有機(jī)酸和有機(jī)酸鹽，不利于制備出結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的脂質(zhì)體。其原因是具有強(qiáng)極性的磷脂的端基相互推出極性基。由于二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)的含量高，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的脂質(zhì)體是不利的。例如，已報(bào)道當(dāng)在4度下儲(chǔ)存純DPPC脂質(zhì)體，在 2 周內(nèi)完全被破碎(Launois-Surpas 等人，1992, Colloid Polym.Sc1.270:901-911 )。為了改變存在于頭皮或表皮上的皮脂的性質(zhì)，本發(fā)明優(yōu)選采用簡(jiǎn)單懸浮液型磷月旨。這是因?yàn)楫?dāng)傳送的脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定時(shí)，可以理解為不容易與暴露在頭皮或在皮脂腺里的皮脂混合。為了改變皮脂的性質(zhì)而采用磷脂的方法比采用多種脂肪酸的毛發(fā)生長(zhǎng)解決方法具有更好的優(yōu)勢(shì)(美國(guó)專利號(hào)US2007/0154432A1)。因?yàn)橹舅峥赡軐?duì)細(xì)胞脂類膜結(jié)構(gòu)有不利影響，并且還可以容易地用作為細(xì)菌或真菌的能量來(lái)源。另外，脂肪酸的中間代謝物具有表現(xiàn)出不好氣味的特性(例如，丁酸、丙酸等)，使得存在很多不利點(diǎn)。此外，亞油酸通過(guò)人類細(xì)胞的新陳代謝變成花生四烯酸，然后最終成為白三烯-B4 (Ieukotriene-BO或前列腺素E2。這兩種物質(zhì)起到增加炎癥反應(yīng)的作用，使得當(dāng)長(zhǎng)期使用它們時(shí)，這具有刺激脫毛的潛力(Mahet 等人，2000, Inernational.Dermatol.,39:576_584)。使用脂肪酸的毛發(fā)生長(zhǎng)產(chǎn)品可以起初通過(guò)與皮脂良好融合的皮脂軟化特性而表現(xiàn)出毛發(fā)生長(zhǎng)效果。然而，不能忽略當(dāng)由于長(zhǎng)期使用它們而聚集時(shí)，這具有表現(xiàn)負(fù)面功能的潛力。作為本發(fā)明的組合物中的成分，所述組合物包含通過(guò)去除動(dòng)物肺中的中性脂肪和肽(蛋白質(zhì))的純磷脂、2價(jià)陽(yáng)離子(例如，鈣離子和/或鎂離子)、或有機(jī)酸(例如，檸檬酸檸檬酸鹽、琥珀酸/琥珀酸鹽、或蘋果酸/蘋果酸鹽)和用于線粒體的三羧酸循環(huán)中的有機(jī)酸(共軛酸或共軛堿)。另外，本發(fā)明的目的是通過(guò)改變由皮脂腺分泌的皮脂的性質(zhì)而容易地去除或排出皮脂，然后預(yù)防脫毛和促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)。組合物的各種用途作為本發(fā)明的組合物，所述組合物對(duì)分布在表皮上的干細(xì)胞給予任何作用或刺激以形成新的毛囊細(xì)胞，然后促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)，這在理論上或?qū)嶒?yàn)上都是沒(méi)有根據(jù)或者根據(jù)足。然而，在理論上或在實(shí)驗(yàn)上已經(jīng)證明了本發(fā)明的組合物改變了皮脂的性質(zhì)而容易地排出或去除皮脂，由此促進(jìn)毛發(fā)快速生長(zhǎng)。作為通過(guò)傳統(tǒng)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)找出毛發(fā)生長(zhǎng)的機(jī)制的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)毛囊細(xì)胞的分化和產(chǎn)生是在被受傷、然后治愈后自然產(chǎn)生的(Cheng-Ming Chuong, 2007, Nature447:265-266和Ito等人，2007，Nature447:316-320)。當(dāng)本專利的組合物應(yīng)用于在形成輕傷后的輕傷處時(shí)，在傷口愈合過(guò)程期間新分化的毛囊細(xì)胞可以快速生長(zhǎng)，然后可以穩(wěn)定生長(zhǎng)毛發(fā)。促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的目的更強(qiáng)于預(yù)防脫毛的目的。作為另一種方法，期待在應(yīng)用米諾地爾或非那雄胺后表現(xiàn)出細(xì)毛發(fā)生長(zhǎng)的情況中，當(dāng)應(yīng)用本發(fā)明的組合物時(shí)，可以快速誘導(dǎo)毛發(fā)生長(zhǎng)，由此計(jì)劃毛發(fā)的穩(wěn)定生長(zhǎng)。在其中脫毛進(jìn)行中的人的頭皮上存在細(xì)毛發(fā)(稱作細(xì)軟毛)的情況下，預(yù)料到在頭皮上應(yīng)用本發(fā)明的組合物，使得它通過(guò)細(xì)毛發(fā)的快速生長(zhǎng)有助于緩和脫毛癥狀。此外，預(yù)料的是在對(duì)癌癥患者進(jìn)行化療之前或者之后，當(dāng)應(yīng)用本發(fā)明組合物時(shí)，可以防止由化療的副作用而導(dǎo)致的脫毛，以及當(dāng)在完成化療后生長(zhǎng)新的毛發(fā)時(shí)，還可以使新的毛發(fā)快速生長(zhǎng)，所以所述組合物有助于患者的恢復(fù)。發(fā)明效果由本發(fā)明的說(shuō)明書可以看出，本發(fā)明通過(guò)采用從動(dòng)物中提純的磷脂改變中性脂肪成分的皮脂的特性可以防止皮脂固化以及容易地排出或去除皮脂。順利地消除皮脂可以預(yù)防脫毛，并且?guī)椭壹?xì)胞容易接受來(lái)自毛細(xì)血管的營(yíng)養(yǎng)物以活化毛囊細(xì)胞和相關(guān)的周圍細(xì)胞，由此毛發(fā)快速生長(zhǎng)。


圖1是從豬肺中提取并提純的磷脂的薄層色譜分析的照片。在圖1中，I道的試樣是在二氧化硅色譜柱之前從豬肺中提取的磷脂，2道的試樣是從豬肺中提取的純化磷脂，3道的試樣是PC (左旋-阿爾法-磷酸卵磷脂，西格瑪#P3556) ；4道的試樣是PI (磷脂酰肌醇鈉鹽，F(xiàn)luka#79403) ；5道的試樣是PS (3-順-磷脂酰-左旋-絲氨酸鈉鹽，西格瑪#P5660 )；6道的試樣是PA( 3-順式-磷脂酸鈉鹽，西格瑪#P9511);7道的試樣是PE(左旋-阿爾法-磷脂酰乙醇胺，西格瑪#P7943) ；8道的試樣是DPPC (1-2- 二棕櫚酰基-順式-丙三醇-3-膽堿磷酸，西格瑪# 4329) ;9道的試樣是大豆卵磷脂(純正化學(xué)#86015-1201，日本)。通過(guò)使用薄層色譜確認(rèn)了特定磷脂的類型。通過(guò)使用薄層色譜確認(rèn)的磷脂是DPPC、PC、PS、PI和PE。用于薄層色譜的顯色劑是氯仿:甲醇:水(65:25:4，體積比)。在噴射5%的硫酸鹽溶于乙醇的溶液后，在190度下加熱以碳化和確認(rèn)每個(gè)成分。在圖2中，I道的試樣是由豬肺中提純的磷脂；2道的試樣是由大豆提取的磷脂(大豆卵磷脂，純正化學(xué)#86015-1201，日本)；以及3道試樣是由蛋黃提取的磷脂(雞蛋卵磷脂，東京化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社札0022，日本)。從薄層色譜的方法，確認(rèn)了由豬肺中提取的磷脂與眾所周知的常見(jiàn)磷脂具有完全不同的成分。圖31是證實(shí)了毛囊的活化現(xiàn)象的照片。在使用DNFB(2，4_二硝基氟苯)敏化功能引起發(fā)炎的小鼠背部表皮上應(yīng)用通過(guò)由豬肺中提取的磷脂，進(jìn)行了確認(rèn)降低發(fā)炎的實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果是，偶然地證實(shí)了活化毛囊細(xì)胞的生長(zhǎng)。圖3是表皮組織的正常背部；圖4是僅用DNFB治療的小鼠表皮組織；圖5是應(yīng)用他克莫司(商品名，普特皮，日本安斯泰來(lái)制藥有限公司)之后的表皮組織；圖6是應(yīng)用地塞米松(0.1%地塞米松乙醇溶液)之后的表皮組織；圖7應(yīng)用由豬肺中提取的磷脂(IOmg/ml)后的表皮組織；以及圖8是以15天為應(yīng)用期應(yīng)用由豬肺磷脂(10mg/ml)中提取的磷脂(20mg/ml)后的表皮組織。在橢圓形紅色虛線內(nèi)存在大量活化的毛囊細(xì)胞。部分觀察到典型類型的脫毛(表現(xiàn)為細(xì)胞基層凹陷和毛囊細(xì)胞分化的現(xiàn)象)(圖5中應(yīng)用他克莫司)。在應(yīng)用本發(fā)明的組合物(圖7和8)之后，在細(xì)胞基層下存在活化的毛囊細(xì)胞，其中活化的毛囊細(xì)胞顯示出與常見(jiàn)類型的毛發(fā)生長(zhǎng)相比不同類型的毛發(fā)生長(zhǎng)。圖9-11是本發(fā)明的組合物對(duì)促進(jìn)小鼠毛發(fā)生長(zhǎng)的效果的照片圖。圖9是在去除實(shí)驗(yàn)用小鼠(balb/c)的毛發(fā)后應(yīng)用鹽溶液2周后的結(jié)果的照片圖。圖10是在去除同種同齡的小鼠的毛發(fā)后應(yīng)用所述組合物2周之后的小鼠狀態(tài)。通過(guò)肉眼可以發(fā)現(xiàn)明確的小鼠毛發(fā)生長(zhǎng)。圖11是在去除實(shí)驗(yàn)用小鼠(C3H)的毛發(fā)后比較應(yīng)用蒸餾水的小鼠和應(yīng)用組合物的小鼠之間長(zhǎng)度。確認(rèn)了應(yīng)用所述組合物的小鼠的毛發(fā)(右側(cè))快速生長(zhǎng)。刻度尺間距為
`Imnin圖12 16是在將本發(fā)明的組合物應(yīng)用于人體的實(shí)例的照片圖。將含有濃度為5mg/ml的磷脂的組合物應(yīng)用于顯示脫毛的志愿者之后，然后觀測(cè)結(jié)果。將一滴(分別為5(T60ml)所述組合物應(yīng)用于2cmX 2cm脫毛區(qū)域每天兩次，并揉擦約20秒。圖12是志愿者A在應(yīng)用之前的外觀；圖13是應(yīng)用后15周的外觀；圖14是應(yīng)用后20周的外觀；圖15是志愿者B應(yīng)用之前的外觀；以及圖16是應(yīng)用后15周的外貌；甚至使用肉眼也可以容易和清楚地觀察到所述組合物的效果。圖17-24是含各種濃度的有機(jī)酸的組合的本發(fā)明組合物的效果的照片圖。通過(guò)實(shí)驗(yàn)用小鼠(C3H)的去除毛發(fā)面積為基準(zhǔn)計(jì)算毛發(fā)生長(zhǎng)面積的比例，將毛發(fā)生長(zhǎng)效果轉(zhuǎn)換成數(shù)據(jù)化(實(shí)驗(yàn)例4:毛發(fā)生長(zhǎng)效果實(shí)驗(yàn))；參見(jiàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)例3的內(nèi)容(有機(jī)酸效果和大豆卵磷脂效果)和表格。圖17是僅應(yīng)用蒸餾水的實(shí)驗(yàn)組；圖18是僅應(yīng)用米諾地爾(5%)的實(shí)驗(yàn)組；圖19是應(yīng)用由豬肺中提取的磷脂+1.5mM CaCl2 + 2.5mM檸檬酸鹽/檸檬酸(pH值為5.8)的實(shí)驗(yàn)組；圖20是應(yīng)用由豬肺中提取的磷脂+1.5mM CaCl2 + 5mM檸檬酸鹽/檸檬酸(pH值為
5.8)的實(shí)驗(yàn)組；圖21是應(yīng)用由豬肺中提取的磷脂+1.5mM CaCl2 + 7mM檸檬酸鹽/檸檬酸(pH值為5.8)的實(shí)驗(yàn)組；圖22是應(yīng)用由豬肺中提取的磷脂+1.5mM CaCl2 + 5mM檸檬酸鹽/檸檬酸+ 5mM蘋果酸鹽/蘋果酸(pH值為5.8)的實(shí)驗(yàn)組；圖23是應(yīng)用由豬肺中提取的磷脂+1.5mM CaCl2 + 2.5mM檸檬酸鹽/檸檬酸+ 2.5mM蘋果酸鹽/蘋果酸(pH值為5.8)的實(shí)驗(yàn)組；以及圖24是應(yīng)用由大豆卵磷脂中提取的磷脂+1.5mM CaCl2 + 5mM檸檬酸鹽/檸檬酸(pH值為5.8)的實(shí)驗(yàn)組。確認(rèn)了當(dāng)組合物含有有機(jī)酸的濃度為5mM的檸檬酸時(shí)，觀察到最有效的結(jié)果，在含有與其他檸檬酸循環(huán)相關(guān)的有機(jī)酸(例如，蘋果酸)組合的情況中，表現(xiàn)出相當(dāng)優(yōu)秀的毛發(fā)生長(zhǎng)效果。圖25 27是本發(fā)明的組合物中所含有的2價(jià)陽(yáng)離子的效果的照片圖。采用5mM琥珀酸鹽/琥珀酸(pH值為5.8)代替了組合物中所含有的5mM檸檬酸鹽/檸檬酸(pH值為5.8)。在應(yīng)用該組合物之后，觀察到改變后的組合物對(duì)毛發(fā)生長(zhǎng)的效果。圖25是僅應(yīng)用蒸餾水的實(shí)驗(yàn)組；圖26是應(yīng)用含有1.5mM CaCl2 + 5mM檸檬酸鹽/檸檬酸(pH值為5.8)的組合物(應(yīng)用2.5周)的實(shí)驗(yàn)組。以及圖27是應(yīng)用含有1.5mM CaCl2 +5mM琥珀酸鹽/琥珀酸(pH值為5.8)的組合物的實(shí)驗(yàn)組。發(fā)現(xiàn)應(yīng)用含琥珀酸的組合物的小鼠的毛發(fā)生長(zhǎng)沒(méi)有規(guī)律，而且與應(yīng)用含檸檬酸的組合物的小鼠的毛發(fā)生長(zhǎng)狀態(tài)相比具有粗糙的結(jié)構(gòu)?？梢源_認(rèn)琥珀酸鹽最優(yōu)選作為包含于所述組合物中的有機(jī)酸，并且琥珀酸鹽也具有促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的效果。圖28-29是作為包含于本發(fā)明組合物中的2價(jià)陽(yáng)離子鎂離子的效果的照片圖。將包含1.5mM MgCl2代替1.5mM CaCl2的組合物應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)用小鼠(Balb/c)2周?？刂茖?shí)驗(yàn)用動(dòng)物組(圖28)應(yīng)用了蒸餾水，并且在效果組應(yīng)用了由豬肺提取的20mg/ml磷脂質(zhì)，1.5mM MgCl2和5mM檸檬酸鹽。其中包含鎂離子的組合物單獨(dú)表現(xiàn)了不同類型的毛發(fā)生長(zhǎng)。發(fā)現(xiàn)包含于組合物的2價(jià)陽(yáng)離子中鈣離子最有效的促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)，并且鎂離子對(duì)毛發(fā)生長(zhǎng)也有效果。圖30和31是與本發(fā)明組合物的劑型相關(guān)的實(shí)驗(yàn)。

圖30中的中間試管顯示由于1.5mM氯化鈣而聚集的純化磷脂的現(xiàn)象。圖30中的右邊試管顯示由于加入5mM檸檬酸鹽/檸檬酸(pH值為5.8)沒(méi)有產(chǎn)生因鈣而導(dǎo)致的聚集磷脂的狀態(tài)。圖30中的左邊試管是將所述組合物分散于蒸餾水中的渾濁結(jié)果。由上述結(jié)果可以確定:包含于所述組合物中的有機(jī)酸對(duì)促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)起重要的作用，并且有機(jī)酸是保持渾濁的均勻化組合物的狀態(tài)所必不可少的因素。通過(guò)確認(rèn)在蒸餾水中形成半透明的奶色溶液來(lái)確定脂質(zhì)體的形成。然而，混合有5mM檸檬酸/檸檬酸鹽+1.5mM氯化鈣的溶液(右邊試管)具有均勻化的渾濁狀態(tài)，并且存在不透明的絮凝顆粒，使得它可以被確定為未形成脂質(zhì)體(參考照片，可以通過(guò)右邊不透明的試管來(lái)區(qū)別)。圖31是為了形成脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)采用從肺中提取的磷脂在圓形燒瓶上形成脂質(zhì)膜后通過(guò)劇烈漩渦嘗試形成脂質(zhì)體的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。將經(jīng)過(guò)同樣過(guò)程的大豆卵磷脂維持透明的脂質(zhì)溶液狀態(tài)(圖31的左側(cè)圖)，但當(dāng)從動(dòng)物肺中提取的磷脂放置約I小時(shí)時(shí)，會(huì)產(chǎn)生很多氣泡和許多的沉淀物(圖31的右側(cè)圖)?？梢源_定磷脂和用于本發(fā)明的溶液的條件不利于形成脂質(zhì)體。下面由非限定的實(shí)施例來(lái)更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明。然而下面的實(shí)施例僅是說(shuō)明本發(fā)明，但是本發(fā)明的范圍不限于下述的實(shí)施例。實(shí)施例1:從豬肺中提純磷脂在由危害分析臨界控制點(diǎn)(HACCP)授權(quán)的屠宰場(chǎng)屠宰豬后，立即獲取肺組織，然后儲(chǔ)存于冰水浴中。屠宰后，在5小時(shí)內(nèi)使用豬肺組織，或者在不立即使用的情況下，將其儲(chǔ)存在-20度下，然后必要時(shí)解凍且使用它。磷脂質(zhì)的提取過(guò)程如下:I)研磨豬肺組織；2)去除肺組織中的血液；3)沉淀全部脂質(zhì)；4)用有機(jī)溶劑提取全部脂質(zhì)；5)用中性溶劑去除中性脂肪；6)為了去除剩下的中性脂肪、肽和蛋白質(zhì)，采用二氧化硅色譜柱提純；7)去除溶劑并干燥。I)研磨豬肺組織從豬肺組織中去除堅(jiān)硬的組織(例如，器官)或粗血管(例如，主動(dòng)脈和肺動(dòng)脈)，切割成4 X 4 X 4cm大小，然后采用磨機(jī)研磨豬肺。將冷生理鹽水(700ml)加入到研磨后的組織中(250g)，然后使用帶金屬葉片的攪拌機(jī)(HMF-390，韓一電機(jī)公司，韓國(guó))進(jìn)一步研磨I分鐘。2)去除肺組織中的血液將用混合機(jī)研磨后的肺組織放置于冰水浴I小時(shí)以使其冷卻。將冷卻后的肺組織在4度、4500g下離心分離40分鐘(Component-R，韓一電機(jī)公司，韓國(guó))以收集沉淀物，然后去除稀釋的血上清液。3)沉淀全部脂質(zhì)將包含5mM CaCl2的儲(chǔ)存溶液(70mM NaCl)添加到所獲得的沉淀物中，然后放入冰水浴中I小時(shí)以使其冷卻。冷卻后的試樣在4度、4500g下離心分離45分鐘以獲得沉淀物。使用鈣離子誘導(dǎo)肺組織中的獨(dú)特蛋白質(zhì)和磷脂的聚集，然后即使在較低的離心加速度(g)下也容易誘導(dǎo)沉淀。4)用有機(jī)溶劑提取全部脂質(zhì)將4倍體積的二氯甲烷:乙醇(2:1的體積比)混合溶液傾倒入所獲得的沉淀物中以去除含水材料溶液，然后獲得有機(jī)酸-可溶解材料(全部脂質(zhì)包含磷脂)。使用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀去除溶劑，然后濃縮所包含的脂質(zhì)材料。5)用中性溶劑去除中性脂肪將濃縮后的含磷脂組分再溶解于二氯甲烷，然后應(yīng)用于二氧化硅色譜柱以去除包含于試樣中的膽固醇、三酰甘油、脂肪酸等，然后獲得純磷脂。采用直徑長(zhǎng)度比為1:4的玻璃色譜柱，以及采用默克230-400目(Merck230-400mesh)目作為硅膠。起初采用無(wú)極性或中性的溶劑，然后逐漸采用高極性度的顯色劑，以首先洗提中性脂肪，最后洗提極性脂肪，由此容易提純。依次使用I體積硅膠的丙酮以及I體積硅膠的二氯甲烷；為了得到磷脂，采用7體積硅膠的二氯甲烷:乙醇:水(6:8:1的體積比)運(yùn)行色譜柱。將洗提后的組分應(yīng)用于薄層色譜(TLC)以確認(rèn)磷脂的洗提。從薄層色譜挑選并獲得具有0.3^0.7的Rf值(磷脂Rf值)的脂質(zhì)組分。使用三氯甲烷:甲醇:水(65:25:4體積比)作為薄膜色譜的顯色劑。6)為了去除剩余的中性脂肪、肽和蛋白質(zhì)采用二氧化硅色譜柱提純采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀從最后獲得的磷脂組分中去除有機(jī)溶劑。此外，向所獲得的磷脂固體中加入純乙醇，然后進(jìn)行再蒸發(fā)過(guò)程以去除剩余的二氯甲烷。最后，采用冷凍干燥器在-85度下去除剩余的水分以獲得粉末型磷脂。7)去除有機(jī)溶劑并干燥通過(guò)使用薄層色譜(TLC)確認(rèn)純化后的磷脂的純度。在薄層色譜上存在的脂質(zhì)上噴射5%的溶于乙醇的硫酸溶液，然后在190度進(jìn)行炭化以顯色。采用三氯甲烷:甲醇:水(65:25:4的體積比)作為薄層色譜顯色劑。顯色溶液有很強(qiáng)的極性；中性脂肪如脂肪酸和膽固醇具有高的運(yùn)轉(zhuǎn)率(Rf值為0.8以上)；但是蛋白質(zhì)或肽不會(huì)從打點(diǎn)處(dotting point)移動(dòng)(Rf值為0.1以下)。磷脂具有0.3^0.76的Rf值。證實(shí)了 DPC (二棕櫚酰磷脂酰膽堿)、PC (磷脂酰膽堿)、PS (磷脂酰絲氨酸)、PE (磷脂酰乙醇胺)、PI (磷脂酰)以及PA (磷脂酸)包含于采用薄層色譜提純的磷脂中(圖1)。

由薄層色譜分析證實(shí)了從肺部提取的磷脂(卵磷脂)具有完全不同于在大豆卵磷脂或雞蛋卵磷脂中所包含的成分(圖2)。
通過(guò)在薄層色譜上噴射0.2%的溶于乙醇的茚三酮溶液，確認(rèn)了包含于試樣中的蛋白質(zhì)或肽是否存在。在用茚三酮染色的薄層色譜上未檢測(cè)到蛋白質(zhì)或肽(未提供該結(jié)果)。試樣中所包含的全部磷脂的濃度是通過(guò)使用Fiske-Subbarow試劑改良的巴氏實(shí)驗(yàn)(Miller KJ，1985，細(xì)菌學(xué)期刊，162:263-270)定量分析的。通過(guò)采用HPLC-ELS (蒸發(fā)光散色)檢測(cè)系統(tǒng)(Water e2695模塊系統(tǒng)，美國(guó))，定量分析在肺試樣中所包含的獨(dú)特磷脂DPPC的含量。購(gòu)買L-a- 二棕櫚酰磷脂酰膽堿(西格瑪化學(xué)有限公司，美國(guó))用于濃度分析。在全部試樣中包含的DPPC的含量被確認(rèn)為約32% (該結(jié)果未提供)。實(shí)施例2:組合物的制備由于提純的磷脂以粉末類型存在，為了應(yīng)用于表皮，將磷脂分散在水中。在磷脂質(zhì)分散在水后，在121度和15Ib/cm2壓力下進(jìn)行15分鐘高壓滅菌。作為輔助因子使用的2價(jià)陽(yáng)離子(氯化鈣或氯化鎂)和有機(jī)酸(檸檬酸、馬來(lái)酸等)被制備成濃縮溶液、分別進(jìn)行高壓滅菌、加入到分散的磷脂溶液中、以及然后至所需的濃度。有機(jī)酸的制備物是通過(guò)混合酸形式(例如，檸檬酸)和鈉鹽形式(例如，檸檬酸三鈉)的PH值為5.8的緩沖溶液。為了驗(yàn)證效果，采用磷脂的濃度分別為5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml,2價(jià)陽(yáng)離子濃度為1.5mM,有機(jī)酸的濃度(有機(jī)酸和有機(jī)酸鹽的總濃度)最終為5mM。實(shí)驗(yàn)例1:毛發(fā)生長(zhǎng)效果的測(cè)試:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)I (觀察毛發(fā)生長(zhǎng)效果)為了制備特應(yīng)性皮炎、或接觸性皮膚炎和過(guò)敏性皮炎的動(dòng)物樣本，用DNFB敏化處理I周后，然后將DNFB以每2周共10次應(yīng)用于小鼠的背部以人為誘發(fā)過(guò)敏性炎癥。根據(jù)先前出版的文獻(xiàn)(論文)(Inagaki等人，Eur J Pharmacol, 546:189-196)進(jìn)行給藥顯示出效果的材料和精制劑的方法、以及制備動(dòng)物樣本的表述。自從應(yīng)用DNFB5次后，將本發(fā)明的組合物、他克莫司軟膏(商品名，普特皮阿斯特拉制藥有限公司，韓國(guó))、以及地塞米爾(西格瑪化學(xué)有限公司，美國(guó)， 0.1%溶于乙醇的溶液)以60ml量每天兩次分別應(yīng)用于發(fā)生炎癥的小鼠的背部。在應(yīng)用后10天，收集小鼠組織檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。在應(yīng)用本發(fā)明組合物(磷脂的濃度為10mg/ml (圖7)和20mg/ml (圖8))的小鼠組織上觀察到積極的毛囊生長(zhǎng)，而在應(yīng)用地塞米松(圖6)的小鼠組織上并沒(méi)有觀察到。在小鼠背部治愈的過(guò)程中，應(yīng)用他克莫司的小鼠組織上觀測(cè)到通過(guò)將基底細(xì)胞的干細(xì)胞分化成毛囊細(xì)胞而形成新的毛囊細(xì)胞以及凹陷的現(xiàn)象(圖5)，但是在應(yīng)用本發(fā)明組合物的小鼠組織的基底細(xì)胞膜下存在毛囊細(xì)胞的生長(zhǎng)。此結(jié)果是能夠推論出本發(fā)明的組合物具有毛發(fā)生長(zhǎng)功能，勝于預(yù)防脫毛功能的根據(jù)。實(shí)驗(yàn)例2:毛發(fā)生長(zhǎng)效果測(cè)試:動(dòng)物測(cè)試2 (毛發(fā)生長(zhǎng)的生長(zhǎng)速率的測(cè)試)購(gòu)買(韓國(guó)京畿道三南市東方生物(Oriental Bi0.SungNam-si, Kyungg1-do, Korea)同年齡的雄性實(shí)驗(yàn)用小鼠(5周齡，白變種實(shí)驗(yàn)室小鼠(balb/c))，并且在新環(huán)境下適應(yīng)一周。自由提供食物和水并通過(guò)調(diào)整成上午8點(diǎn)開燈并下午8點(diǎn)關(guān)燈，調(diào)整了晝夜規(guī)律。為了飼養(yǎng)采用動(dòng)物飼養(yǎng)機(jī)(DJ-201，DaejongLab, Seoul, Korea)，調(diào)節(jié)濕度、溫度、空氣清潔和循環(huán)為25度和50%濕度。以5只小鼠為一組進(jìn)行了測(cè)試。去除同齡(6周)的雄性小鼠的毛發(fā)后，應(yīng)用本發(fā)明的組合物，然后觀察毛發(fā)生長(zhǎng)。作為對(duì)比組，采用相等量的蒸餾水代替所述組合物，并以同樣次數(shù)揉擦(圖9)。所述組合物通過(guò)混合將20mg/ml磷脂與包含1.5mM的CaCl2和5mM朽1檬酸/朽1檬酸鹽(朽1檬酸、無(wú)鹽和檸檬酸三鈉鹽)的溶液混合來(lái)簡(jiǎn)單地制備。將60ml的組合物按每日2次使用2周(除星期六和星期日，共10天)(圖10)。2周后,兩組之間存在明顯的差異(圖9和圖10)。除了 Balb/c實(shí)驗(yàn)用小鼠外，通過(guò)采用C3H實(shí)驗(yàn)用小鼠比較了毛發(fā)生長(zhǎng)的生長(zhǎng)速率。通過(guò)將僅使用蒸餾水和所述組合物的小鼠毛發(fā)拔下，比較了它們的長(zhǎng)度。圖11是由兩實(shí)驗(yàn)組拔出的毛發(fā)的長(zhǎng)度，并且每刻度表示Imm間距。實(shí)驗(yàn)例3:用于毛發(fā)生長(zhǎng)效果的測(cè)試:志愿者測(cè)試選擇正在進(jìn)行脫毛或者已經(jīng)進(jìn)行了相當(dāng)多脫毛的志愿者，然后應(yīng)用包含濃度為5mg/ml磷脂的本發(fā)明組合物。排除了給藥影響脫毛的藥物或在頭皮上應(yīng)用該藥物的志愿者。選擇13位志愿者并且進(jìn)行志愿者實(shí)驗(yàn)。7位志愿者參加直到15 20周實(shí)驗(yàn)完成為止。平均年齡是37歲。將一滴(約5(T70ml)本發(fā)明的組合物以每天2次滴到脫毛部位(2cmX2cm)，然后揉擦20秒。沒(méi)節(jié)制或推薦使用洗發(fā)劑、洗滌劑、食物、酒類或抽煙。在日常生活期間應(yīng)用所述組合物。在應(yīng)用所述組合物后的志愿者有4個(gè)問(wèn)題，其中所述問(wèn)題涉及脫毛減少的變化、毛發(fā)增加、毛發(fā)的生長(zhǎng)速率以及毛發(fā)的厚度。志愿者選擇他們滿意的標(biāo)準(zhǔn)，最大(Γ5分涉及上述每個(gè)問(wèn)題。[表 1]
權(quán)利要求
1.一種用于預(yù)防脫毛或促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的組合物，該組合物包含磷脂作為有效成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述磷脂從動(dòng)物中提取。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述磷脂從?；蜇i中提取。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的組合物，其中，所述磷脂從動(dòng)物肺中提取。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的組合物，其中，所述磷脂選自由二棕櫚酰磷脂酰膽堿、磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酸和磷脂酰肌醇所組成的組中。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，進(jìn)一步包括選自由2價(jià)陽(yáng)離子、和含羧基的有機(jī)酸或其鹽所組成的組中的一種或多種成分。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述組合物是藥物組合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述組合物是化妝品組合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其中，所述化妝品組合物是生發(fā)油、發(fā)乳、頭發(fā)洗劑、洗發(fā)香波、染發(fā)液 、護(hù)發(fā)素、發(fā)膠、氣霧劑、潤(rùn)發(fā)油、粉劑或凝膠劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種預(yù)防脫毛或促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)，并且包含磷脂作為有效成分的組合物。更詳細(xì)地，本發(fā)明涉及一種預(yù)防脫毛或促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)，并且包含從動(dòng)物萃取的磷脂作為有效成分的組合物。
文檔編號(hào)A61Q5/00GK103079536SQ201180035321
公開日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2011年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月19日
發(fā)明者崔性鉉 申請(qǐng)人:株式會(huì)社百謳必得