專利名稱：牛膝用于預(yù)防和/或治療胃癌前病變和胃癌的新制藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
牛膝為莧科多年生草本植物牛膝(Achyranthes bidentata Bi)的干燥根，別名百 倍、牛莖、懷牛膝、腳斯蹬等，性平，味甘苦酸，歸肝腎經(jīng)。具有活血祛瘀、補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、利 尿通淋、引血下行功效。牛膝為祛風(fēng)除濕、活血化瘀及治療婦科病癥的常用中藥，臨床用于 瘀血阻滯的月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、閉經(jīng)、產(chǎn)后瘀阻腹痛、跌打損傷及腰膝酸痛、下肢無力、尿血、小 便不利、尿道澀痛等癥。近年來對其藥理作用的研究取得了新的進(jìn)展，認(rèn)為其具有抗病毒、 免疫調(diào)節(jié)、鎮(zhèn)痛抗炎、抗衰老、降血壓等作用。在臨床上，含牛膝的中藥復(fù)方被制成外用或口 服劑應(yīng)用。研究證明，牛膝用于治療高血壓和咽喉腫痛等癥亦有較好的效果，七寶美髯顆 粒、八寶坤順丸、三兩半藥酒、三妙丸、天麻丸、木瓜丸、艾附暖宮丸、平肝舒絡(luò)丸、安坤贊育 丸、抗骨增生丸、龜齡集、補(bǔ)腎固齒丸、補(bǔ)腎益腦片、鎖陽固精丸、舒筋丸、梳風(fēng)定痛丸等著名 的中成藥中牛膝的用量、用途不斷加大拓寬。同時又是出口商品，具有較大的開發(fā)價值。胃癌是常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率及死亡率在我國皆居于惡性腫瘤的前列。 胃粘膜上皮細(xì)胞的癌變是一個漸進(jìn)過程，常經(jīng)歷多年的持續(xù)胃癌癌前病變階段，有些病人 最終會演變?yōu)槲赴Ｒ虼祟A(yù)防或治療胃癌前病變，阻止癌前病變轉(zhuǎn)化為惡性胃癌是防治胃 癌的一個重要途徑，對于降低我國癌癥發(fā)病率和病人死亡率具有重要意義。1.牛膝被報道有多方面的藥效作用，但未見有預(yù)防和/或治療治療胃癌前病變方 面的研究報道以往的研究證明牛膝有以下作用(1)鎮(zhèn)痛抗炎作用能明顯減輕二甲苯所致小 鼠耳腫脹、蛋清致大鼠足腫脹等急性炎性反應(yīng)，能降低大鼠瓊脂肉芽腫質(zhì)量，延長熱板上小 鼠舔足時間，有較強(qiáng)的陣痛抗炎作用(2)對心血管系統(tǒng)的作用具有擴(kuò)張血管、降低血壓和 抗動脈粥樣硬化作用(3)對子宮的作用對不同生理狀態(tài)下大鼠體外子宮均有明顯興奮作 用以及抗生育、抗早孕和抗著床作用。(4)增強(qiáng)免疫力提高免疫功能低下的小鼠脾臟與胸 腺指數(shù)，對抗小鼠的白細(xì)胞減少，提高T/B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率及巨噬細(xì)胞吞噬功能，促進(jìn)溶血 空斑的形成。(5)利尿作用懷牛膝水煎液有輕度利尿作用。(6)抗腫瘤作用有個別文獻(xiàn) 報道了川牛膝或牛膝多糖對S180肉瘤和H22肝癌和Lewis肺癌有一定抑制作用。但國內(nèi) 外文獻(xiàn)均未見有關(guān)懷牛膝用于預(yù)防和治療胃黏膜癌前病變的文獻(xiàn)記載或正式公開的研究 報道。2.懷牛膝臨床應(yīng)用廣泛，但未見其在預(yù)防和/或治療治療胃癌前病變方面的應(yīng)用
懷牛膝在臨床應(yīng)用廣泛，既可單獨(dú)使用，也可與其他藥物組成復(fù)方應(yīng)用，有口服、 外用制劑使用。其多用于瘀滯經(jīng)閉、產(chǎn)后瘀痛、跌撲傷痛、腰膝酸痛、足膝萎軟無力、吐血、衄 血、牙齦腫痛、頭痛暈眩、小便不利、淋浙澀痛及尿血等癥，近年也用于抗衰老、降血壓及治 療胃炎胃潰瘍方面。迄今，未見牛膝單獨(dú)或以牛膝為主要成分的復(fù)方以任何用藥途徑的相 關(guān)制劑用于的治療胃癌前病變臨床應(yīng)用報道。
發(fā)明內(nèi)容
為了充分利用懷牛膝資源，擴(kuò)大懷牛膝的臨床應(yīng)用，本發(fā)明人采用化學(xué)致癌物誘 導(dǎo)大鼠胃粘膜良性增生/癌前病變/胃惡性癌癥模型，研究了牛膝提取物抑制化學(xué)致癌物 誘導(dǎo)的大鼠胃粘膜良性增生一胃黏膜癌前病變一胃惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程、預(yù)防胃癌前 病變和惡性胃癌發(fā)生的作用，證明牛膝可以明顯抑制胃粘膜的乳頭狀增生，減輕胃基底細(xì) 胞的不典型增生等癌前病變，減少胃腫瘤生長，減少惡性腫瘤發(fā)生率。證明了懷牛膝有防治 胃癌前病變，預(yù)防胃惡性癌癥發(fā)生的新作用。因此，本發(fā)明的目的是提供懷牛膝在制備預(yù)防 和/或治療胃癌前病變，防治胃癌藥物中的新應(yīng)用。技術(shù)解決方案本發(fā)明內(nèi)容為提供懷牛膝在制備預(yù)防和/或治療胃癌前病變、防治胃癌藥物中 的新應(yīng)用。所述的牛膝是懷牛膝干燥根的提取物，其制備可采取如下方法取懷牛膝飲片1000克加50%乙醇，回流提取四次，每次加乙醇量分別為4000、 3000,3000,3000ml回流1小時。第一次回流前浸泡8 12小時，合并四次回流液，過濾，去 不溶物，減壓回收乙醇，并濃縮至無醇味，加水稀釋至2500ml，冷藏24小時以上，濾過，澄明 液濃縮至1000ml。本發(fā)明的產(chǎn)品包括含有懷牛膝的涉及預(yù)防和/或治療胃黏膜癌前病變、防治胃癌 相關(guān)應(yīng)用的藥品、保健品、食品和化妝品。本發(fā)明的產(chǎn)品包括涉及含有懷牛膝的涉及預(yù)防和/或治療胃黏膜癌前病變、防治 胃癌相關(guān)應(yīng)用的人用和獸用產(chǎn)品。本發(fā)明再一方面還涉及預(yù)防和/或治療其他粘膜如膀胱、宮頸、子宮、小腸或大 腸、口腔、鼻咽、食管等的癌前病變和惡性腫瘤的相關(guān)應(yīng)用的人用或獸用藥品、保健品、食品 和化妝品。本發(fā)明再一方面還涉及以懷牛膝提取物為活性成分，以預(yù)防和/或治療胃黏膜癌 前病變、防治胃癌為適應(yīng)癥的藥物組合物。該藥物組合物可將本發(fā)明技術(shù)方案中所述的方 法制備的提取物或進(jìn)一步的精制物，與一種或多種藥學(xué)上可接受的固體或液體賦型劑和/ 或輔料結(jié)合，制成適于人或動物使用的任何劑型。給藥途徑可為腸道或非腸道途徑，如口 月艮、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮膚、陰道、直腸等。給 藥劑型可以是液體劑型、固體劑型或半固體劑型。液體劑型可以是溶液劑(包括真溶液和 膠體溶液)、乳劑、微乳、混懸劑、注射劑(包括水針劑、粉針劑和輸液)、滴眼劑、滴鼻劑、洗劑、搽劑等；固體制劑可以是片劑(包括普通片、腸溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡騰片、口 腔崩解片等)、膠囊劑(包括硬膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊)、顆粒劑、散劑、微丸、滴丸、栓劑、膜劑、貼片、氣(粉)霧劑、噴霧劑等；半固體制劑可以是軟膏劑、凝膠劑、糊劑等。制劑可以制 成普通制劑、也可以是緩釋劑、控釋劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)和效果1.懷牛膝資源非常廣泛，提取方法簡單易行，可制成膠囊劑、濃縮丸、顆粒劑、片劑、散劑、口服液、膜劑、噴霧劑、凝膠劑、注射劑、混懸劑或外用制劑等藥物制劑。2.經(jīng)大鼠試驗證明，懷牛膝能夠明顯抑制化學(xué)致癌物誘導(dǎo)的大鼠胃黏膜細(xì)胞增生，減少胃黏膜乳頭狀瘤生長，降低胃黏膜癌前病變不典型增生發(fā)生率，減少胃惡性腫瘤發(fā) 生率。牛膝用藥10、15、20周時腫瘤抑制率分別為48 57%、15 45%、30 49%。服用 的大鼠的胃粘膜上，可見乳頭狀腫瘤較模型組在體積和數(shù)量上明顯減少(小)，胃粘膜光滑 度增加，胃重量較模型組減小，并有統(tǒng)計學(xué)意義。試驗10周時，模型組癌前病變(I III度 不典型增生)發(fā)生率為83.3%，惡性癌變發(fā)生率為16.7%。而牛膝lg/kg組僅有I II度 不典型增生，發(fā)生率明顯降低，僅為40%，惡性癌變發(fā)生率為0%。試驗20周時，模型組的 動物有80%發(fā)生惡性變成為胃癌，而牛膝lg/kg組僅有40%動物惡性變。結(jié)果表明，牛膝 具有預(yù)防和治療胃癌前病變、防治惡性胃癌的作用。
四

附圖為造模15周時各組的胃粘膜腫瘤生長情況。共有5組動物的胃照片，包括對照組、模型組、牛膝1. Og/kg、牛膝2. Og/ kg、牛膝 4. Og/kg從圖中可見，對照組胃黏膜表面光滑，有正常的皺褶，但無突起的腫物生長。模型 組胃黏膜面有大量乳頭狀瘤生長，腫瘤向胃腔突起呈菜花狀，有的動物腫瘤表面有局限性 出血、壞死；由于腫瘤生長，整個胃體積較對照組明顯增大。牛膝1. Og/kg,2. 0g/kg、4. Og/ kg劑量組的胃體積均較模型組明顯減小，胃黏膜表面的腫瘤數(shù)目以及大小均較模型組減 少，有較多的未長腫瘤的粘膜區(qū)，表面光滑的區(qū)域增多。
五具體實施例方式1.牛膝的制備方法取懷牛膝飲片1000克加50%乙醇，回流提取四次，每次加乙醇量分別為4000、 3000,3000,3000ml回流1小時。第一次回流前浸泡8 12小時，合并四次回流液，過濾，去 不溶物，減壓回收乙醇，并濃縮至無醇味，加水稀釋至2500ml，冷藏24小時以上，濾過，澄明 液濃縮至1000ml。2.動物實驗方法將SD大鼠按隨機(jī)分為4組，分別為①正常組；②模型組(馬兜鈴酸10mg/kg造 成胃粘膜良性增生一胃黏膜癌前病變一胃惡性腫瘤模型)；③牛膝lg/kg組；④牛膝2g/kg 組。⑤牛膝4g/kg組。除了對照組以外，② ⑤組均隔日灌胃一次含馬兜鈴酸10mg/kg的 造模藥，直至20周。除了灌胃造模藥物以外，模型組還每日灌胃給予蒸餾水5ml/kg。牛膝 各劑量組灌胃給予不同劑量的牛膝受試物5ml/kg。共給藥20周。分別于給藥后10、15、 20周取1/3動物處死，摘取每只動物的胃，用電子分析天平稱量胃重量；按照每只動物的體 重，折算胃指數(shù)。計算各組腫瘤抑制率和腫瘤指數(shù)抑制率。胃指數(shù)(胃重量/IOOg體重)=胃重量g/體重gX 100各組腫瘤重量(g)=試驗組胃重量_對照組胃重量腫瘤抑制率(％)=(用藥組腫瘤重量-模型組腫瘤重量)/模型組腫瘤重 量 X100腫瘤指數(shù)抑制率(％ )=(用藥組腫瘤指數(shù)_模型組腫瘤指數(shù))/ (模型組腫瘤指 數(shù)-對照組腫瘤指數(shù))X100
然后將胃用10%中性福爾馬林固定，用石蠟包埋、切片。采用HE(HaematoxyIin & Eosin)染色，用顯微鏡進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察，記錄各組發(fā)生胃粘膜乳頭狀增生、胃黏膜癌前 病變(I、IIJII度不典型增生)和惡性胃癌發(fā)生的動物數(shù)。3.試驗結(jié)果3. 1牛膝對腫瘤生長的預(yù)防和治療作用采用馬兜鈴酸10mg/kg造模10周，大鼠的胃黏膜即可見有多發(fā)性乳頭狀瘤生長， 腫瘤重量達(dá)到1. 08g，腫瘤指數(shù)為0. 28 ；造模15,20周后，腫瘤重量分別為1. 05、1. 59g，腫 瘤指數(shù)分別為0. 32,0. 29。牛膝1. 0,2. 0,4. Og/kg劑量組在用藥10周時的腫瘤抑制率達(dá)到 48. 15 57. 4% ；20周時腫瘤抑制率為30. 8 49. .結(jié)果表明牛膝具有明顯的預(yù)防腫 瘤生長的作用。結(jié)果見表1-3。表1給藥后10周胃重量/系數(shù)比較) 注(1)腫瘤抑制率(％)=(模型組胃重量-牛膝組胃重量)/(模型組胃重量-對 照組胃重量)X100(2)腫瘤指數(shù)抑制率(％)=(模型組胃指數(shù)-牛膝組胃指數(shù))/(模型組胃指 數(shù)-對照組胃指數(shù))X100(3)與對照組比較，牛膝提取物各組與模型組比較，*P < 0. 05廣P < 0.01 ；***P < 0. 001 (下表相同)表2給藥后15周胃重量/系數(shù)比較) 注同表1表3給藥后20周胃重量/系數(shù)比較G ±i5D ) 注同表12. 2牛膝預(yù)防胃癌前病變和防止癌前病變惡性變的預(yù)防和治療作用采用病理組織形態(tài)學(xué)檢查，結(jié)果顯示，試驗10周時，模型組癌前病變(I III度 不典型增生)發(fā)生率為83.3%，惡性癌變發(fā)生率為16.7%。而牛膝1.0、2. Og/kg組僅有 I II度不典型增生，癌前病變發(fā)生率明顯降低，分別為40%、60%，癌前病變抑制率分別 為52.0%、28.0%。這兩個劑量組的惡性癌變發(fā)生率為0%。試驗20周時，模型組的動物 有80%發(fā)生惡性變成為胃癌，而牛膝1. 0,2. 0,4. Og/kg組僅有40 50%動物惡性變?yōu)槲?癌，抑制率分別37. 5 50%。結(jié)果表明，牛膝具有預(yù)防和治療胃癌前病變、減少惡性胃癌發(fā) 生率的作用。結(jié)果見表4。表4牛膝預(yù)防/治療胃癌前病變和預(yù)防胃癌發(fā)生的結(jié)果
權(quán)利要求
牛膝用于預(yù)防和/或治療胃黏膜癌前病變和胃癌的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的牛膝是牛膝的根的水煎液、蒸餾液、 揮發(fā)油或有機(jī)溶劑提取物。
3.根據(jù)權(quán)利1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物產(chǎn)品包括含有牛膝的藥物組合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3，其特征在于，所述的藥物產(chǎn)品包括藥品、保健品、食品、化妝Pm o
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4，其特征在于，所述的藥物產(chǎn)品包括膠囊劑、濃縮丸、顆粒劑、 片劑、散劑、混懸劑、口服液、凝膠劑、噴霧劑、滴鼻劑、滴眼劑、膜劑、注射液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4、5，其特征在于，所述的藥物產(chǎn)品包括人用和獸用。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及牛膝用于預(yù)防和/或治療胃癌前病變和胃癌的新制藥用途，以提供懷牛膝在預(yù)防和/或治療胃癌前病變，防治惡性胃腫瘤藥物中的新的應(yīng)用。采用有機(jī)溶劑提取方法制備牛膝活性部分。經(jīng)過動物試驗發(fā)現(xiàn)，牛膝可以明顯抑制胃黏膜細(xì)胞不典型增生，抑制癌前病變，防止胃惡性腫瘤發(fā)生，這些作用在牛膝以往的研究和臨床上未見報道和應(yīng)用，故本發(fā)明具有獨(dú)特性及新穎性。牛膝資源廣泛，提取方法簡便，可制成多種劑型；胃癌是我國常見的惡性腫瘤之一，在我國其發(fā)病率居各類腫瘤的首位，臨床用藥需求巨大。因此本發(fā)明具有很強(qiáng)的實用性，其在預(yù)防和/或治療胃黏膜癌前病變、預(yù)防胃惡性腫瘤發(fā)生方面的應(yīng)用前景十分廣闊。
文檔編號A61Q19/00GK101862360SQ20101018125
公開日2010年10月20日 申請日期2010年5月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月25日
發(fā)明者李春英, 梁愛華 申請人:中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所