一種固定化乳酸菌素顆粒的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種固定化乳酸菌素顆粒的制備方法，屬于乳酸菌素制備技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明取龍齒粉碎過(guò)篩，經(jīng)煅燒與乳酸乙醇溶液、甜菜堿靜置后，蒸餾過(guò)濾得過(guò)濾物干燥，加入硫酸二乙酯、灰黃霉素和蒸餾水混合，降溫過(guò)濾得過(guò)濾物，與MRS培養(yǎng)基、無(wú)菌水等混合滅菌得培養(yǎng)基，接種嗜酸乳桿菌培養(yǎng)，用紫外線照射改性篩選，將其經(jīng)二次發(fā)酵，過(guò)濾得過(guò)濾物，用卡拉膠溶液進(jìn)行覆蓋保護(hù)，再過(guò)濾得過(guò)濾物風(fēng)干制得固定化乳酸菌素顆粒。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明制備步驟簡(jiǎn)單，所得產(chǎn)品菌時(shí)效長(zhǎng)、抗代謝性能好、抗菌譜寬；使用用量減少了26.5％以上，貯存過(guò)程中無(wú)沉淀發(fā)生，活性高于其他產(chǎn)品23.6％以上。
【專利說(shuō)明】
一種固定化乳酸菌素顆粒的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種固定化乳酸菌素顆粒的制備方法，屬于乳酸菌素制備技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]乳酸菌素是由乳酸菌產(chǎn)生的一種具有活性的多肽或蛋白質(zhì)。大部分細(xì)菌素對(duì)近緣關(guān)系的細(xì)菌有抑制作用，少數(shù)細(xì)菌素抑菌譜很廣。主要可分為熱穩(wěn)定的小分子肽，熱敏感的大分子蛋白和羊毛硫抗生素。乳酸菌素是一種純?nèi)樗峋a(chǎn)生的制劑，是將脫脂乳經(jīng)殺菌、真空濃縮，再接種乳酸菌發(fā)酵后干燥而制成的乳酸菌體及其代謝產(chǎn)物的混合粉狀物，可作醫(yī)藥用或食品添加劑，屬功能型乳制品。乳酸菌除了本身對(duì)人體有健胃、整腸等保健功能外，其代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生許多有益物質(zhì)，這其中乳酸菌素的特殊功能引起科技產(chǎn)業(yè)界的極大關(guān)注。由于乳酸菌素性質(zhì)穩(wěn)定，不受加工條件限制，所以應(yīng)用范圍更為廣泛，可應(yīng)用在包括發(fā)酵制乳品、保健食品、化妝品及食品保鮮等領(lǐng)域。
[0003]隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人民生活水平的提高，人們對(duì)健康的重視程度也日益加強(qiáng)，無(wú)論從食品防腐劑、保鮮劑、抑菌素還是經(jīng)濟(jì)動(dòng)物增肥劑發(fā)展的角度來(lái)看，純天然食品防腐、保鮮劑取代或者部分取代化學(xué)防腐劑，不產(chǎn)生耐藥性且可通過(guò)基因工程改造的抑菌素替代原始抗生素，無(wú)毒素殘留飼料添加劑替代原始飼料添加劑是大勢(shì)所趨。但乳酸菌素存在自身的缺點(diǎn)，如用量大、效價(jià)低、抗菌時(shí)效短、抗代謝性能差、抗菌譜窄等不足之處，以及優(yōu)勢(shì)菌株選育困難，菌株改造研究還有待加強(qiáng);抑菌譜很窄，在水溶液中溶解性不好，在貯存過(guò)程中會(huì)由于沉淀而喪失活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題:針對(duì)目前乳酸菌素用量大、抗菌時(shí)效短、抗代謝性能差、抗菌譜窄，在貯存過(guò)程中會(huì)由于沉淀而喪失活性的弊端，提供了一種取龍齒粉碎過(guò)篩，經(jīng)煅燒與乳酸乙醇溶液、甜菜堿靜置后，蒸餾過(guò)濾得過(guò)濾物干燥，加入硫酸二乙酯、灰黃霉素和蒸餾水混合，降溫過(guò)濾得過(guò)濾物，與MRS培養(yǎng)基、無(wú)菌水等混合滅菌得培養(yǎng)基，接種嗜酸乳桿菌培養(yǎng)，經(jīng)紫外線照射改性篩選，將其經(jīng)二次發(fā)酵，過(guò)濾得過(guò)濾物，用卡拉膠溶液進(jìn)行覆蓋保護(hù)，再過(guò)濾得過(guò)濾物風(fēng)干制得固定化乳酸菌素顆粒的方法。本發(fā)明制備步驟簡(jiǎn)單，有效解決了抗菌時(shí)效短、抗代謝性能差、抗菌譜窄問(wèn)題，使用用量小，貯存過(guò)程中無(wú)沉淀發(fā)生，活性尚。
[0005]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下所述的技術(shù)方案是:
(1)取龍齒放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，過(guò)20目篩，將過(guò)篩后的顆粒放入馬弗爐中，于200?250°C下煅燒5?8min，隨爐冷卻至室溫，按固液比1:2?3，將煅燒后的顆粒浸泡于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的乳酸乙醇溶液中，再置于超聲振蕩器中，在23?24KHZ下振蕩10?15min，隨后向其中加入煅燒后顆粒質(zhì)量3?6%的甜菜堿，攪拌均勻后置于40?50°C，靜置3?4h;
(2)在上述靜置結(jié)束后，將混合物放入蒸餾裝置中，在105?110°C下蒸餾I?3h，自然冷卻至室溫，再進(jìn)行過(guò)濾，使用蒸餾水沖洗過(guò)濾物直至沖洗液PH為中性，將過(guò)濾物放入真空干燥箱中，在70?80 °C下真空干燥2?3h;
(3)按質(zhì)量比15:2:1，取上述干燥后的過(guò)濾物、硫酸二乙酯和灰黃霉素放入容器中，向容器中加入容器中混合物體積4?6倍的蒸餾水，對(duì)容器進(jìn)行加熱至50?60°C，以200r/min攪拌3?5h后停止加熱，從容器底部通入5°C氫氣直至容器內(nèi)的混合物溫度降至10?15°C，進(jìn)行過(guò)濾，收集過(guò)濾物，得固定化乳酸菌素載體；
(4)按重量份數(shù)計(jì)，取45?50份上述所得的固定化乳酸菌素載體、30?35份MRS培養(yǎng)基、12?15份無(wú)菌水、4?6份蛋白胨及8?12份酵母膏，攪拌均勾，在110?120°C下濕熱滅菌12?15min，得培養(yǎng)基，按接種量13?16%，將嗜酸乳桿菌接種至培養(yǎng)基中，并將培養(yǎng)基移至恒溫培養(yǎng)箱中，在30?37°C下培養(yǎng)18?22h;
(5)在上述培養(yǎng)結(jié)束后將培養(yǎng)基倒入玻璃發(fā)酵罐中，使用紫外線照射玻璃發(fā)酵罐，設(shè)定溫度為30?37 °C，以140?160r/min攪拌發(fā)酵2?3h，隨后停止攪拌，繼續(xù)發(fā)酵3?4h后，將發(fā)酵罐中的混合物進(jìn)行過(guò)濾，使用10mL/min的蒸饋水沖洗過(guò)濾物8?1min，將沖洗后過(guò)濾物放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的卡拉膠溶液中靜置20?30min，再進(jìn)行過(guò)濾，收集過(guò)濾物放入風(fēng)干機(jī)中風(fēng)干，g卩可得到固定化乳酸菌素顆粒。
[0006]本發(fā)明的應(yīng)用方法:取1.0?2.0g將本發(fā)明制得的固定化乳酸菌素顆粒，用溫開水沖服，沖服后進(jìn)行口服，一日3次，可有效治療腸內(nèi)異常發(fā)酵，消化不良，腸炎等。該固定化乳酸菌素顆粒，抗菌時(shí)效長(zhǎng)、抗代謝性能好、抗菌譜寬，值得推廣與使用。
[0007]本發(fā)明與其他方法相比，有益技術(shù)效果是:
(1)本發(fā)明制備步驟簡(jiǎn)單，所得產(chǎn)品抗菌時(shí)效長(zhǎng)、抗代謝性能好、抗菌譜寬；
(2)使用用量減少了26.5%以上，貯存過(guò)程中無(wú)沉淀發(fā)生，活性高于其他產(chǎn)品23.6%以上。
【具體實(shí)施方式】
[0008]首先取龍齒放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，過(guò)20目篩，將過(guò)篩后的顆粒放入馬弗爐中，于200?250°C下煅燒5?8min，隨爐冷卻至室溫，按固液比1: 2?3，將煅燒后的顆粒浸泡于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的乳酸乙醇溶液中，再置于超聲振蕩器中，在23?24KHz下振蕩10?15min，隨后向其中加入煅燒后顆粒質(zhì)量3?6%的甜菜堿，攪拌均勻后置于40?50°C，靜置3?4h;然后在上述靜置結(jié)束后，將混合物放入蒸餾裝置中，在105?110°C下蒸餾I?3h，自然冷卻至室溫，再進(jìn)行過(guò)濾，使用蒸餾水沖洗過(guò)濾物直至沖洗液PH為中性，將過(guò)濾物放入真空干燥箱中，在70?80°C下真空干燥2?3h;按質(zhì)量比15:2:1，取上述干燥后的過(guò)濾物、硫酸二乙酯和灰黃霉素放入容器中，向容器中加入容器中混合物體積4?6倍的蒸餾水，對(duì)容器進(jìn)行加熱至50?60°C，以200r/min攪拌3?5h后停止加熱，從容器底部通入5°C氫氣直至容器內(nèi)的混合物溫度降至10?15°C，進(jìn)行過(guò)濾，收集過(guò)濾物，得固定化乳酸菌素載體;再按重量份數(shù)計(jì)，取45?50份上述所得的固定化乳酸菌素載體、30?35份MRS培養(yǎng)基、12?15份無(wú)菌水、4?6份蛋白胨及8?12份酵母膏，攪拌均勾，在110?120°C下濕熱滅菌12?15min，得培養(yǎng)基，按接種量13?16%，將嗜酸乳桿菌接種至培養(yǎng)基中，并將培養(yǎng)基移至恒溫培養(yǎng)箱中，在30?37°C下培養(yǎng)18?22h;最后在上述培養(yǎng)結(jié)束后將培養(yǎng)基倒入玻璃發(fā)酵罐中，使用紫外線照射玻璃發(fā)酵罐，設(shè)定溫度為30?37 0C，以140?160r/min攪拌發(fā)酵2?3h，隨后停止攪拌，繼續(xù)發(fā)酵3?4h后，將發(fā)酵罐中的混合物進(jìn)行過(guò)濾，使用10mL/min的蒸饋水沖洗過(guò)濾物8?1min，將沖洗后過(guò)濾物放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的卡拉膠溶液中靜置20?30min，再進(jìn)行過(guò)濾，收集過(guò)濾物放入風(fēng)干機(jī)中風(fēng)干，即可得到固定化乳酸菌素顆粒。
[0009]實(shí)例I
首先取龍齒放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，過(guò)20目篩，將過(guò)篩后的顆粒放入馬弗爐中，于225°C下煅燒6min，隨爐冷卻至室溫，按固液比1:2，將煅燒后的顆粒浸泡于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的乳酸乙醇溶液中，再置于超聲振蕩器中，在23KHz下振蕩lOmin，隨后向其中加入煅燒后顆粒質(zhì)量3%的甜菜堿，攪拌均勻后置于40°C，靜置3h;然后在上述靜置結(jié)束后，將混合物放入蒸餾裝置中，在105°C下蒸餾lh，自然冷卻至室溫，再進(jìn)行過(guò)濾，使用蒸餾水沖洗過(guò)濾物直至沖洗液PH為中性，將過(guò)濾物放入真空干燥箱中，在70°C下真空干燥2h;按質(zhì)量比15: 2:1，取上述干燥后的過(guò)濾物、硫酸二乙酯和灰黃霉素放入容器中，向容器中加入容器中混合物體積4倍的蒸餾水，對(duì)容器進(jìn)行加熱至50°C，以200r/min攪拌3h后停止加熱，從容器底部通入5°C氫氣直至容器內(nèi)的混合物溫度降至10°C，進(jìn)行過(guò)濾，收集過(guò)濾物，得固定化乳酸菌素載體；再按重量份數(shù)計(jì)，取45份上述所得的固定化乳酸菌素載體、30份MRS培養(yǎng)基、12份無(wú)菌水、4份蛋白胨及8份酵母膏，攪拌均勻，在110°C下濕熱滅菌12min，得培養(yǎng)基，按接種量13%，將嗜酸乳桿菌接種至培養(yǎng)基中，并將培養(yǎng)基移至恒溫培養(yǎng)箱中，在30°C下培養(yǎng)18h ；最后在上述培養(yǎng)結(jié)束后將培養(yǎng)基倒入玻璃發(fā)酵罐中，使用紫外線照射玻璃發(fā)酵罐，設(shè)定溫度為30°C，以140r/min攪拌發(fā)酵2h，隨后停止攪拌，繼續(xù)發(fā)酵3h后，將發(fā)酵罐中的混合物進(jìn)行過(guò)濾，使用10mL/min的蒸餾水沖洗過(guò)濾物8min，將沖洗后過(guò)濾物放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的卡拉膠溶液中靜置20min，再進(jìn)行過(guò)濾，收集過(guò)濾物放入風(fēng)干機(jī)中風(fēng)干，即可得到固定化乳酸菌素顆粒。
[0010]取1.0g將本發(fā)明制得的固定化乳酸菌素顆粒，用溫開水沖服，沖服后進(jìn)行口服，一日三次，可有效治療腸內(nèi)異常發(fā)酵，消化不良，腸炎等。該固定化乳酸菌素顆粒，抗菌時(shí)效長(zhǎng)、抗代謝性能好、抗菌譜寬，值得推廣與使用。
[0011]實(shí)例2
首先取龍齒放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，過(guò)20目篩，將過(guò)篩后的顆粒放入馬弗爐中，于225°C下煅燒6min，隨爐冷卻至室溫，按固液比1:3，將煅燒后的顆粒浸泡于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的乳酸乙醇溶液中，再置于超聲振蕩器中，在24KHz下振蕩13min，隨后向其中加入煅燒后顆粒質(zhì)量5 %的甜菜堿，攪拌均勻后置于45°C，靜置4h;然后在上述靜置結(jié)束后，將混合物放入蒸餾裝置中，在108°C下蒸餾2h，自然冷卻至室溫，再進(jìn)行過(guò)濾，使用蒸餾水沖洗過(guò)濾物直至沖洗液PH為中性，將過(guò)濾物放入真空干燥箱中，在75°C下真空干燥3h;按質(zhì)量比15: 2:1，取上述干燥后的過(guò)濾物、硫酸二乙酯和灰黃霉素放入容器中，向容器中加入容器中混合物體積5倍的蒸餾水，對(duì)容器進(jìn)行加熱至55°C，以200r/min攪拌4h后停止加熱，從容器底部通入5°C氫氣直至容器內(nèi)的混合物溫度降至13°C，進(jìn)行過(guò)濾，收集過(guò)濾物，得固定化乳酸菌素載體；再按重量份數(shù)計(jì)，取48份上述所得的固定化乳酸菌素載體、33份MRS培養(yǎng)基、14份無(wú)菌水、5份蛋白胨及10份酵母膏，攪拌均勾，在115 °C下濕熱滅菌14min，得培養(yǎng)基，按接種量15 %，將嗜酸乳桿菌接種至培養(yǎng)基中，并將培養(yǎng)基移至恒溫培養(yǎng)箱中，在34°C下培養(yǎng)20h ；最后在上述培養(yǎng)結(jié)束后將培養(yǎng)基倒入玻璃發(fā)酵罐中，使用紫外線照射玻璃發(fā)酵罐，設(shè)定溫度為35°C，以150r/min攪拌發(fā)酵3h，隨后停止攪拌，繼續(xù)發(fā)酵4h后，將發(fā)酵罐中的混合物進(jìn)行過(guò)濾，使用10mL/min的蒸餾水沖洗過(guò)濾物9min，將沖洗后過(guò)濾物放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的卡拉膠溶液中靜置25min，再進(jìn)行過(guò)濾，收集過(guò)濾物放入風(fēng)干機(jī)中風(fēng)干，即可得到固定化乳酸菌素顆粒。
[0012]取1.5g將本發(fā)明制得的固定化乳酸菌素顆粒，用溫開水沖服，沖服后進(jìn)行口服，一日3次，可有效治療腸內(nèi)異常發(fā)酵，消化不良，腸炎等。該固定化乳酸菌素顆粒，抗菌時(shí)效長(zhǎng)、抗代謝性能好、抗菌譜寬，值得推廣與使用。
[0013]實(shí)例3
首先取龍齒放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，過(guò)20目篩，將過(guò)篩后的顆粒放入馬弗爐中，于250°C下煅燒8min，隨爐冷卻至室溫，按固液比1:3，將煅燒后的顆粒浸泡于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的乳酸乙醇溶液中，再置于超聲振蕩器中，在24KHz下振蕩15min，隨后向其中加入煅燒后顆粒質(zhì)量6%的甜菜堿，攪拌均勻后置于50°C，靜置4h;然后在上述靜置結(jié)束后，將混合物放入蒸餾裝置中，在IlOtC下蒸餾3h，自然冷卻至室溫，再進(jìn)行過(guò)濾，使用蒸餾水沖洗過(guò)濾物直至沖洗液PH為中性，將過(guò)濾物放入真空干燥箱中，在80°C下真空干燥3h;按質(zhì)量比15: 2:1，取上述干燥后的過(guò)濾物、硫酸二乙酯和灰黃霉素放入容器中，向容器中加入容器中混合物體積6倍的蒸餾水，對(duì)容器進(jìn)行加熱至60°C，以200r/min攪拌5h后停止加熱，從容器底部通入5°C氫氣直至容器內(nèi)的混合物溫度降至15°C，進(jìn)行過(guò)濾，收集過(guò)濾物，得固定化乳酸菌素載體；再按重量份數(shù)計(jì)，取50份上述所得的固定化乳酸菌素載體、35份MRS培養(yǎng)基、15份無(wú)菌水、6份蛋白胨及12份酵母膏，攪拌均勻，在120°C下濕熱滅菌15min，得培養(yǎng)基，按接種量16%，將嗜酸乳桿菌接種至培養(yǎng)基中，并將培養(yǎng)基移至恒溫培養(yǎng)箱中，在37°C下培養(yǎng)22h ；最后在上述培養(yǎng)結(jié)束后將培養(yǎng)基倒入玻璃發(fā)酵罐中，使用紫外線照射玻璃發(fā)酵罐，設(shè)定溫度為37°C，以160r/min攪拌發(fā)酵3h，隨后停止攪拌，繼續(xù)發(fā)酵4h后，將發(fā)酵罐中的混合物進(jìn)行過(guò)濾，使用10mL/min的蒸餾水沖洗過(guò)濾物1min，將沖洗后過(guò)濾物放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的卡拉膠溶液中靜置30min，再進(jìn)行過(guò)濾，收集過(guò)濾物放入風(fēng)干機(jī)中風(fēng)干，即可得到固定化乳酸菌素顆粒。
[0014]取2.0g將本發(fā)明制得的固定化乳酸菌素顆粒，用溫開水沖服，沖服后進(jìn)行口服，一日3次，可有效治療腸內(nèi)異常發(fā)酵，消化不良，腸炎等。該固定化乳酸菌素顆粒，抗菌時(shí)效長(zhǎng)、抗代謝性能好、抗菌譜寬，值得推廣與使用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種固定化乳酸菌素顆粒的制備方法，其特征在于具體制備步驟為: (1)取龍齒放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，過(guò)20目篩，將過(guò)篩后的顆粒放入馬弗爐中，于200?250°C下煅燒5?8min，隨爐冷卻至室溫，按固液比1:2?3，將煅燒后的顆粒浸泡于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的乳酸乙醇溶液中，再置于超聲振蕩器中，在23?24KHZ下振蕩10?15min，隨后向其中加入煅燒后顆粒質(zhì)量3?6%的甜菜堿，攪拌均勻后置于40?50°C，靜置3?4h; (2)在上述靜置結(jié)束后，將混合物放入蒸餾裝置中，在105?110°C下蒸餾I?3h，自然冷卻至室溫，再進(jìn)行過(guò)濾，使用蒸餾水沖洗過(guò)濾物直至沖洗液PH為中性，將過(guò)濾物放入真空干燥箱中，在70?80 °C下真空干燥2?3h; (3)按質(zhì)量比15:2:1，取上述干燥后的過(guò)濾物、硫酸二乙酯和灰黃霉素放入容器中，向容器中加入容器中混合物體積4?6倍的蒸餾水，對(duì)容器進(jìn)行加熱至50?60°C，以200r/min攪拌3?5h后停止加熱，從容器底部通入5°C氫氣直至容器內(nèi)的混合物溫度降至10?15°C，進(jìn)行過(guò)濾，收集過(guò)濾物，得固定化乳酸菌素載體； (4)按重量份數(shù)計(jì)，取45?50份上述所得的固定化乳酸菌素載體、30?35份MRS培養(yǎng)基、12?15份無(wú)菌水、4?6份蛋白胨及8?12份酵母膏，攪拌均勾，在110?120°C下濕熱滅菌12?15min，得培養(yǎng)基，按接種量13?16%，將嗜酸乳桿菌接種至培養(yǎng)基中，并將培養(yǎng)基移至恒溫培養(yǎng)箱中，在30?37°C下培養(yǎng)18?22h; (5)在上述培養(yǎng)結(jié)束后將培養(yǎng)基倒入玻璃發(fā)酵罐中，使用紫外線照射玻璃發(fā)酵罐，設(shè)定溫度為30?37 °C，以140?160r/min攪拌發(fā)酵2?3h，隨后停止攪拌，繼續(xù)發(fā)酵3?4h后，將發(fā)酵罐中的混合物進(jìn)行過(guò)濾，使用10mL/min的蒸饋水沖洗過(guò)濾物8?1min，將沖洗后過(guò)濾物放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的卡拉膠溶液中靜置20?30min，再進(jìn)行過(guò)濾，收集過(guò)濾物放入風(fēng)干機(jī)中風(fēng)干，g卩可得到固定化乳酸菌素顆粒。
【文檔編號(hào)】A61P31/04GK106074622SQ201610492239
【公開日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月29日
【發(fā)明人】郭舒洋, 盛海豐, 宋奇
【申請(qǐng)人】郭舒洋