平的病毒清除(98 ± 1 %和65 ± 14% (分別））（數(shù)據(jù)未顯示）。 因此，在缺乏抗原特異性反應(yīng)的情況下，非IAV LP的抗病毒活性隨時(shí)間降低，表明脂膚的 CD8+T細(xì)胞表位成分是采用IAV-LP的長(zhǎng)期保護(hù)所必需的。
[0099] 脂膚預(yù)防有效對(duì)抗高致病性IAV挑戰(zhàn)。為了測(cè)定Pam2切S的抗病毒活性是否有效對(duì) 抗高致病性感染，7天后采用高致病性HlNl病毒，PR8對(duì)接種脂膚的小鼠進(jìn)行挑戰(zhàn)。不但I(xiàn)AV-LP而且非IAV LP脂膚接種顯著地提高了采用PR8挑戰(zhàn)的小鼠的存活率(圖4)。雖然大多數(shù)采 用生理鹽水接種的小鼠死于感染，但是100%的采用IAV-LP接種的動(dòng)物和80%的采用非 IAV-LP接種的動(dòng)物從感染中存活下來(lái)。除了改善的存活率W外，非IAV-LP組中的通常與感 染有關(guān)的體重減輕的程度和臨床癥狀學(xué)也被降低（圖4)。
[0100] 由可溶性Pam2切S誘導(dǎo)的細(xì)胞因子表達(dá)譜。為了排除膚或來(lái)自于系統(tǒng)的表位-特異 性應(yīng)答的影響，我們通過(guò)將通常不溶性Pam2切S結(jié)合至聚乙二醇(PEG)來(lái)構(gòu)建Pam2切S的可 溶性形式。為了鑒定Pam2切S-PEGii對(duì)肺環(huán)境的影響，我們通過(guò)流式微球分析儀分析法測(cè)量 施用20nmol Pam2切s-PEGii(i.n)的C57BL/6小鼠的支氣管肺泡灌洗(BAL)液中與炎癥相關(guān) 的細(xì)胞因子的濃度（圖5)。在施用之后的第3天，我們檢測(cè)到與未處理的或接種生理鹽水的 小鼠相比，接種Pam2切S-PEGii的小鼠中化-6、化-10、MCP-1、IFN-丫、TNF-a和比-1化70濃度 的顯著增加。到第7天，Pam2切S-陽(yáng)Gii組中的細(xì)胞因子濃度已經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化至施用前的水平并且 與未處理組沒(méi)有顯著性差異（圖5)。
[0101] Pam2切S的抗病毒活性是不依賴抗原的。為了確認(rèn)Pam2切S部分對(duì)脂膚的早期抗病 毒活性負(fù)主要責(zé)任，采用20nmol的Pam2切S-PEGii對(duì)小鼠進(jìn)行鼻內(nèi)接種并在之后的第1、3或7 天采用10 4'5PFU H3N1病毒挑戰(zhàn)。圖6中所示的結(jié)果表明，采用Pam2切S-PEGii的接種降低肺病 毒載量至與非IAV-LP相同的程度，證實(shí)觀察到的脂膚的早期抗病毒活性是由Pam2切S介導(dǎo) 的。在施用之后的第1天至滿7天，采用Pam2切S-PEGii的預(yù)防在挑戰(zhàn)之后幾乎立刻降低了病 毒載量，掲示出Pam2Cys-PEGii預(yù)防能夠提供至少7天的保護(hù)窗。
[0102] 當(dāng)W單一的劑量被鼻內(nèi)遞送時(shí)，Pam2切S對(duì)抗IAV。在小鼠中通過(guò)鼻內(nèi)Q .n)，皮下 (S. C)或靜脈內(nèi)（i . V)途徑預(yù)防性施用聚乙二醇化Pam2CyS (PEG-Pam2切S)(在本文中也被稱 為Pam2切S-PEGii或P2C-PEGii)W及3天后采用致死劑量PR8病毒的隨后的挑戰(zhàn)之后，只有鼻 內(nèi)施用陽(yáng)G-Pam2Cys的小鼠得到保護(hù)W對(duì)抗與PR8感染有關(guān)的死亡和體重減輕(圖10)。
[0104] 多種Pam2切S變體賦予對(duì)抗IAV挑戰(zhàn)的保護(hù)。在采用致死劑量的PR8病毒挑戰(zhàn)之后， 經(jīng)由鼻內(nèi)途徑預(yù)防性施用20nmol的各種含有Pam2切S的構(gòu)建體的小鼠得到保護(hù)W對(duì)抗體重 降低（圖11A)和死亡（圖11B)。小鼠同樣得到保護(hù)W對(duì)抗與PR8感染有關(guān)的其他臨床癥狀(數(shù) 據(jù)未顯示）。
[0105] 當(dāng)W重復(fù)劑量給出時(shí)，Pam2切S是有效的。在采用致死劑量的PR8挑戰(zhàn)之后，施用單 一劑量的陽(yáng)G-化m2切S (或相隔S周的兩個(gè)劑量的PEG-Pam2切S)的Ba化/c小鼠得到保護(hù)W 對(duì)抗體重降低（圖12B)、死亡和其他臨床癥狀。陽(yáng)G-Pam2切S處理的小鼠中的病毒載量在處 死時(shí)是顯著較低的（圖12A)。
[0106] 陽(yáng)G-Pam2切S在較低劑量下是有效的。當(dāng)采用較低劑量的PEG-Pam2切S對(duì)小鼠進(jìn)行 預(yù)防性處理并在3天后采用致死劑量的PR8病毒挑戰(zhàn)時(shí)，與生理鹽水組相比，所有小鼠中仍 然實(shí)現(xiàn)對(duì)抗體重降低和死亡的保護(hù)（圖13)。
[0107] 對(duì)抗IAV挑戰(zhàn)的保護(hù)不依賴于IFN-丫或1型干擾素（即IFN-a)。采用陽(yáng)G-Pam2切S處 理的，缺乏IFN- 丫（B6. IFN- 丫 -/-)或者缺乏對(duì)1型干擾素(如干擾素-a; IFNAR-/-)的應(yīng)答能 力的小鼠得到保護(hù)W對(duì)抗與PR8感染有關(guān)的體重降低和致死性(圖14)。
[010引陽(yáng)G-Pam2切S作為治療劑是有效的。當(dāng)采用104'中即的Udorn病毒（甲型流感）（i .n) 挑戰(zhàn)小鼠并且在4小時(shí)后為其施用20nmol PEG-Pam2切s(i.n)時(shí)，鼻、口咽部、氣管和肺中發(fā) 現(xiàn)降低的病毒載量。特別地，與生理鹽水組相比，肺中的病毒載量顯示出Logi04或10000倍的 降低（圖15)。
[0109] Pam2切S作為抗細(xì)菌劑是有效的。采用PEG-Pam2切S對(duì)小鼠進(jìn)行預(yù)處理（i.n.)時(shí)， 在采用嗜肺軍團(tuán)菌的i.n.挑戰(zhàn)之后，它們顯示出顯著降低的肺和氣管細(xì)菌載量（圖16A)。肺 中的細(xì)菌載量在第2天和第3天達(dá)到高峰。直至施用PEG-Pam2切S之后的第7天同樣能夠?qū)崿F(xiàn) 降低的細(xì)菌載量并且顯示了在挑戰(zhàn)之前3天（圖16B)或7天（圖16C)接受PEG-Pam2Cys預(yù)防的 小鼠感染后3天的細(xì)菌載量。
[0110] 討論
[0111] 固有免疫應(yīng)答在感染的控制中所發(fā)揮的至關(guān)重要的作用表明在感染之前的固有 免疫系統(tǒng)的早期激活能夠提供增強(qiáng)的保護(hù)W對(duì)抗感染原，如病毒或細(xì)菌的挑戰(zhàn)。本研究的 結(jié)果表明，包含化R2激動(dòng)劑的可溶性化R2部分的施用引起施用其的受試者中的固有免疫應(yīng) 答，其特征在于，所述免疫應(yīng)答是非抗原特異性的。此外，通過(guò)根據(jù)本發(fā)明的組合物的預(yù)防 性鼻內(nèi)施用引起的肺部變化與增加的對(duì)于隨后暴露于病毒和細(xì)菌的抵抗性有關(guān)，表明運(yùn)樣 的組合物適合于作為對(duì)抗病毒和細(xì)菌感染的預(yù)防劑，特別是當(dāng)存在有流行性或大流行暴發(fā) 的高風(fēng)險(xiǎn)性時(shí)。根據(jù)本發(fā)明的預(yù)防性和治療性方法還具有不需要感染原（或其抗原成分或 特定株)的在先知識(shí)的優(yōu)點(diǎn)并因此(例如)在流感大流行的過(guò)程中特別有用。根據(jù)本發(fā)明的 組合物能夠被冷凍干燥并且在室溫下是穩(wěn)定的，其穩(wěn)定性同樣意味著它非常適合于在準(zhǔn)備 用于大流行的情況中的儲(chǔ)存。
[0112] 參考文獻(xiàn)；
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【主權(quán)項(xiàng)】
1. 組合物在制備用于通過(guò)在受試者中引起固有免疫應(yīng)答來(lái)治療或預(yù)防疾病的藥物中 的用途，其中所述組合物包含TLR2部分，其中所述TLR2部分包含結(jié)合至增溶劑的TLR2激動(dòng) 劑，并且其中所述疾病不是通過(guò)針對(duì)所述TLR2部分的體液或細(xì)胞免疫應(yīng)答來(lái)治療或預(yù)防 的。2. 組合物在制備用于通過(guò)在受試者中引起固有免疫應(yīng)答來(lái)治療或預(yù)防癌癥的藥物中 的用途，其中所述組合物包含TLR2部分，其中所述TLR2部分包含結(jié)合至增溶劑的TLR2激動(dòng) 劑，并且其中所述TLR2部分不誘導(dǎo)針對(duì)所述癌癥的特異的細(xì)胞或體液免疫應(yīng)答。3. 組合物在制備用于治療或預(yù)防由感染原引發(fā)的疾病的藥物中的用途，其中所述組合 物包含TLR2部分，其中所述TLR2部分包含結(jié)合至增溶劑的TLR2激動(dòng)劑，并且其中所述TLR2 部分不誘導(dǎo)針對(duì)所述感染原的特異的細(xì)胞或體液免疫應(yīng)答。4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述TLR2激動(dòng)劑選自Pam2Cys、 Pam3Cys、Ste2Cys、Lau2Cys和OctCys。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其中所述TLR2激動(dòng)劑是Pam2Cys。6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述增溶劑是PEG或極性多肽。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其中所述極性多肽選自R4、H4、E8和H8。8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其中所述增溶劑是PEG。9. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其中所述增溶劑包含PEG以及R4、H4、H8、EB8和E8中的任 一種。10. 根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述組合物被鼻內(nèi)施用至受試者。11. 根據(jù)權(quán)利要求3至10中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述感染原是病毒。12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的用途，其中所述病毒是甲型流感病毒。13. 根據(jù)權(quán)利要求3至10中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述感染原是結(jié)核分枝桿菌 Mycobacteriumtuberculosis或嗜肺軍團(tuán)菌Legionellapneumophila。14. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其中所述癌癥由感染原引發(fā)。15. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的用途，其中所述癌癥由人類乳頭狀瘤病毒、丙型肝炎病毒或 EB病毒引發(fā)。16. -種藥物組合物，其包含有效量的TLR2部分和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑，所述 藥物組合物通過(guò)在受試者中引起固有免疫應(yīng)答來(lái)治療或預(yù)防疾病，其中所述TLR2部分包含 結(jié)合至增溶劑的TLR2激動(dòng)劑，并且其中所述疾病不是通過(guò)針對(duì)所述TLR2部分的體液或細(xì)胞 免疫應(yīng)答來(lái)治療或預(yù)防的。17. 根據(jù)權(quán)利要求1至15中任一項(xiàng)所述的用途或根據(jù)權(quán)利要求16所述的組合物，其中所 述組合物不包含TLR9激動(dòng)劑。
【專利摘要】本發(fā)明涉及新型免疫刺激方法。具體地，本發(fā)明涉及一種通過(guò)引起受試者固有免疫應(yīng)答來(lái)治療或預(yù)防疾病的方法，所述方法包含為受試者施用有效量的包含溶液中的TLR2部分的組合物，其特征在于所述TLR2部分包含TLR2激動(dòng)劑并且其特征在于所述疾病不是通過(guò)針對(duì)所述TLR2部分的體液或細(xì)胞免疫應(yīng)答來(lái)治療或預(yù)防的。
【IPC分類】A61P31/04, A61K47/34, A61P35/00, A61P37/04, A61P31/16, A61K31/198, A61K45/06, A61K47/42
【公開(kāi)號(hào)】CN105477640
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510939940
【發(fā)明人】D·C·杰克遜, A·譚, W·曾
【申請(qǐng)人】墨爾本大學(xué)
【公開(kāi)日】2016年4月13日
【申請(qǐng)日】2011年9月22日
【公告號(hào)】CA2811957A1, CN103189072A, EP2618842A1, EP2618842A4, US20130230544, WO2012037612A1