一種黃芪提取物及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及一種黃芪提取物及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]中藥黃芪具有抗病毒、調(diào)節(jié)免疫、保護(hù)心肌的作用，是中醫(yī)常用藥，它對人體無毒副作用、來源充足，具備治療病毒性疾病的基礎(chǔ)，在臨床上常用于治療病毒性心肌炎，它可拮抗病毒感染心肌細(xì)胞對L型鈣通道的激活，抑制內(nèi)向鈉鈣交換電流，改善部分心電活動，
清除氧自由基。
[0003]目前市售的黃芪注射液一般采用水提醇沉的方法制備，注射劑中有效成分為黃芪皂苷，不含黃芪多糖或含量極少，而黃芪多糖也是黃芪的有效成分，具有增強免疫力、抗病毒、抗腫瘤、抗輻射、抗應(yīng)激、抗氧化等作用；并且醇沉法制得的注射液穩(wěn)定性較差，使其保存過程中易析出沉淀，影響使用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點與不足，提供一種黃芪提取物的制備方法。
[0005]本發(fā)明的另一目的在于提供通過上述制備方法得到的黃芪提取物。
[0006]本發(fā)明的再一目的在于提供所述黃芪提取物的應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn):一種黃芪提取物的制備方法，包括如下步驟:
[0008](1)將黃芪粉碎，加水浸泡，超聲提取，過濾，取濾液；將濾液濃縮，得到濃縮液；
[0009](2)在濃縮液中加入乙醇提取，共3次，具體如下:
[0010]①在濃縮液中加入乙醇，乙醇的用量按最終得到的溶液中含醇量達(dá)到體積百分比50?55%計算；冷藏放置，過濾，棄去濾渣，將濾液減壓回收乙醇至無醇味；
[0011 ] ②在步驟①最終得到的濾液中加入乙醇，乙醇的用量按最終得到的溶液中含醇量達(dá)到體積百分比65?75%，冷藏放置，過濾，棄去濾渣，濾液減壓回收乙醇至無醇味；
[0012]③在步驟②最終得到的濾液中加入乙醇，乙醇的用量按最終得到的溶液中含醇量達(dá)到體積百分比90%以上，冷藏放置，過濾，濾渣備用，濾液減壓回收乙醇至無醇味并濃縮濾液至浸膏狀，得到膏體；
[0013](3)黃芪皂苷提取液的制備:
[0014]①在步驟(2)③得到的膏體中加入注射用水溶解稀釋至0.5?1.5g/ml，冷藏放置，過濾，濾液減壓濃縮；
[0015]②將濃縮液的pH值調(diào)節(jié)為4?5，加入適量3% (w/w)明膠溶液；靜置后過濾，在得到的濾液中加入乙醇至含醇量為體積百分比75%，靜置，過濾，減壓回收乙醇后稀釋，超濾；
[0016]③超濾得到的濾液再減壓濃縮至5?6g/ml，得到黃芪皂苷提取液；
[0017](4)將步驟⑵③得到的濾渣除雜，得到得黃芪多糖提取液；
[0018](5)將步驟(3)得到的黃芪皂苷提取液和步驟⑷得到的黃芪多糖提取液組合，即為黃芪提取物。
[0019]步驟(1)的操作優(yōu)選如下:將黃芪粉碎，加水浸泡，超聲提取，過濾，取濾液；將得到的濾渣按前述步驟重復(fù)提取至少1次；將得到的濾液合并，濃縮，得到濃縮液。
[0020]所述的重復(fù)提取的次數(shù)優(yōu)選為2次。
[0021]步驟(1)中所述的水的體積用量優(yōu)選為相當(dāng)于所述黃芪質(zhì)量的10?15倍。
[0022]步驟⑴中所述的浸泡的時間優(yōu)選為8?12h。
[0023]步驟(1)中所述的超聲提取的條件優(yōu)選為50?70°C下超聲提取30?40min，超聲提取的頻率為40kHz。
[0024]步驟(1)中所述的濃縮的程度優(yōu)選為濃縮至1?3g/ml (即1ml濃縮液相當(dāng)于1?3g黃芪生藥)。
[0025]步驟⑵①中所述的冷藏放置的條件優(yōu)選為于2?8°C放置至少15小時，優(yōu)選為15 ?20ho
[0026]步驟⑵②中所述的冷藏放置的條件優(yōu)選為于2?8°C放置至少24小時，優(yōu)選為24 ?48ho
[0027]步驟(2)③中所述的乙醇的用量優(yōu)選為按最終得到的溶液中含醇量達(dá)到體積百分比90?95%
[0028]步驟⑵③中所述的冷藏放置的條件優(yōu)選為于2?8°C放置至少24小時，優(yōu)選為24 ?48ho
[0029]步驟(3)①和③中所述的冷藏放置的條件優(yōu)選為于2?8°C放置24h。
[0030]步驟(3)①中所述的濃縮的程度為濃縮至4?6g/ml。
[0031]步驟(3)②中所述稀釋的程度優(yōu)選為每毫升相當(dāng)于黃芪生藥1?2g。
[0032]步驟(3)②中所述的超濾為通過5kDa超濾膜進(jìn)行超濾。
[0033]步驟⑷中所述的濾渣除雜的步驟優(yōu)選如下:在濾渣中加入水溶解，調(diào)節(jié)pH為
6.5?7.5，加入蛋白酶，蛋白酶的終濃度為質(zhì)量體積比2?3% ;在35?45°C下酶解3?5h，接著滅活，離心；在得到的上清液中加入相當(dāng)于上清液4?6倍體積的無水乙醇，靜置24h，過濾，棄去上清液；濾渣加水溶解，冷凍過夜，在室溫融化，離心，棄去沉淀；將上清液的pH值調(diào)節(jié)為4?5，在65?75°C下水浴4?6h，冷卻，調(diào)節(jié)pH值至7?7.5，靜置10?12h，粗濾，再超濾，取濾液減壓濃縮至浸膏狀，得到黃芪多糖提取液。
[0034]所述的蛋白酶優(yōu)選為中性蛋白酶，酶活力等于或大于10萬u/g。
[0035]所述的滅活的條件優(yōu)選為煮沸5?lOmin。
[0036]所述的離心的條件優(yōu)選為4000rpm離心5?15min。
[0037]所述的超濾為通過50kDa超濾膜進(jìn)行超濾。
[0038]—種黃芪提取物，通過上述制備方法得到，包括黃芪皂苷提取液和黃芪多糖提取液。
[0039]所述的黃芪提取物在制備用于治療心肌炎的藥物中的應(yīng)用。
[0040]該黃芪提取物直接制備用于治療心肌炎的藥物或是與其他藥物聯(lián)合制備用于治療心肌炎的藥物。
[0041]該黃芪提取物直接制備用于治療心肌炎的藥物，是將黃芪皂苷提取液和黃芪多糖提取液混合即可。
[0042]所述用于治療心肌炎的藥物的劑型，包括注射液、片劑、丸劑。
[0043]—種用于治療心肌炎的藥物，包括黃芪提取物和?；撬?。
[0044]所述用于治療心肌炎的藥物的制備方法，包含如下步驟:在上述黃芪皂苷提取液中加入?；撬幔芙猓喜⑸鲜鳇S芪多糖提取液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7?7.5，于2?8°C冷藏24?48h，過濾，稀釋至適量濃度，再調(diào)節(jié)pH值至7?7.5，精濾，灌封，滅菌，得到用于治療心肌炎的藥物，即復(fù)方黃芪注射液。
[0045]所述的牛磺酸的加入量為每毫升相當(dāng)于黃芪生藥的量(g)的1?3%。
[0046]所述的稀釋的濃度可根據(jù)實際使用情況而定，可稀釋為小劑量型，每毫升相當(dāng)于黃芪生藥1?2g ;也可稀釋至滴注液，每毫升相當(dāng)于黃芪生藥0.08?0.16go
[0047]所述的精濾為使用用孔徑在0.22 μm以下的微孔濾膜濾過實現(xiàn)。
[0048]所述的滅菌的條件應(yīng)為在100°C下滅菌30?40min。
[0049]本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點及效果:
[0050](1)本發(fā)明提供的制備方法是通過浸制藥物再超聲提取，可提高黃芪中有效成分的溶出率；并且在醇沉過程中分三步醇沉，由于黃芪多糖中活性較高的為小分子量多糖，并且大分子物質(zhì)會提高注射液的不安全性，因此前兩步醇沉廢渣棄去，可除去一部分蛋白質(zhì)、大分子多糖等雜質(zhì)；再保留第三步醇沉濾渣，利用蛋白酶及冷凍法除去剩余蛋白質(zhì)雜質(zhì)，并在酸性條件下水解降低多糖分子量，以便在超濾中提高多糖利用率，保留活性較高的小分子多糖，提高藥效，同時克服傳統(tǒng)一步醇沉提取多糖其雜質(zhì)含量過高的缺點(一般純度約50 %左右)，可提高純度約30 %?40 %。此外，利用明膠出去黃芪皂苷中少量鞣質(zhì)雜質(zhì)。
[0051](2)本發(fā)明提供的制備方法不僅可提高黃芪注射液的純度，保持注射液在儲存過程中的穩(wěn)定性，克服傳統(tǒng)簡單的水提醇沉法雜質(zhì)較多易析出沉淀的缺點，并且可直接制成小劑量注射液或滴注液，使用方便。
[0052](3)本發(fā)明提供的治療心肌炎藥物保留了黃芪中皂苷及多糖的有效成分，并加入適量的?；撬?，可提高治療效果。
【具體實施方式】
[0053]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。
[0054]實施例1
[0055]取黃芪飲片粉碎，加入相當(dāng)于黃芪生藥10倍體積的水，浸泡8h，在50°C下超聲提取30min，超聲頻率為40kHz ;過濾，重復(fù)2次，合并濾液，減壓濃縮至2g/ml。加入乙醇沉淀除去雜質(zhì)，分三次處理，第一次加入乙醇使含醇量達(dá)到體積百分比50%，冷藏放置15h，過濾，棄去濾渣，濾液減壓回收乙醇至無醇味；第二次在濾液中加入乙醇使含醇量為65%，冷藏放置24h，過濾，棄去濾渣，濾液減壓回收乙醇至無醇味；第三次在濾液加入乙醇使含醇量達(dá)90%，冷藏放置24h，過濾，濾渣備用；濾液減壓回收乙醇至無醇味并濃縮濾液至浸膏狀，加入注射用水溶解稀釋至0.5g/ml，冷藏放置24h，過濾，再減壓濃縮至4g/ml，調(diào)節(jié)pH值為5，加入體積百分比為1%的已配置好的明膠溶液，靜置后過濾，濾液加入乙醇至含醇量達(dá)體積百分比的75%，靜置，過濾，減壓回收乙醇后稀釋，用5kDa的超濾膜超濾，收集濾液，將其減壓濃縮至5g/ml，冷藏24h，過濾，得到黃芪皂苷提取液。采用高效液相色譜法測試提取液中黃芪甲苷含量為1.25mg/ml，測定條件為采用C18柱，以乙腈:水=3:7為流動相，流速lml/min。最后在提取液中加入?；撬幔蛊錆舛冗_(dá)0.lg/ml，溶解。
[0056]將上述保留的濾渣加水溶解，調(diào)節(jié)pH為6.5，加入蛋白酶(中性蛋白酶，10萬u/g，下同)，終濃度為2% ;在37°C下酶解3h后煮沸5min，4000r/min條件下離心lOmin，加入所得清液5倍體積的無水乙醇，沉淀，靜置24h，過濾，濾渣加水溶解，冷凍過夜，在室溫緩慢融化，4000r/min條件下離心棄去沉淀；調(diào)節(jié)pH為5，在65°C下水浴4h，冷卻，調(diào)節(jié)pH至
7.5，靜置10h，粗濾，再用50kDa的超濾膜超濾，取濾液減壓濃縮至浸膏狀，制得黃芪多糖提取液。采用凝膠色譜法測得該黃芪多糖分子量多分布于25000?35000，占總糖的73%;并取適量提取液蒸發(fā)至干，用比色法測得其純度為89%。
[0057]合并上述加入?；撬岬狞S芪皂苷提取液及黃芪多糖提取液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.5，冷藏24h，過濾，稀釋至2g/ml，再調(diào)節(jié)pH至7.5，用0.22 μ m的微孔濾膜精濾，灌封，100°C下滅菌30min，即得復(fù)方黃芪注射液。本