FACS 分離的BMMNC STRO-I細胞群制備的總RNA中SDF-I和甘油醒-3-憐酸脫氨酶（GAPDH)轉(zhuǎn) 錄物的相對表達。bp指不堿基對。
[0062] 圖4為顯示基質(zhì)細胞和原代長期培養(yǎng)物中CD146、CX化12和血管生成素1表達的 一系列圖示。（A)對基質(zhì)細胞系服5和HS27a的CD146 (MCAM) W及同種型對照的FACS分 析。度）對原代LTC第一代的CD146 W及同種型對照的FACS分析。通過FACS輔助的流式 分選將原代LTC分類成CD146W和CD146 1°細胞群。還指示了用于hi和Io細胞群的近似 設(shè)口。（C)將9個LTC的CX化12水平分類成CD146W和CD146 1°并通過RT-PCR定量（相對 于0-肌動蛋白，乘W因子1000)。來自同一培養(yǎng)物的成對樣品由線連接。值）同樣9個 LTC的血管生成素-1水平也通過RT-PCR定量（相對于0-肌動蛋白，乘W因子10000)。 圖A中的試驗W=個獨立試驗來驗證，圖B、C和D中的試驗W 9個獨立樣品來驗證。通過 Wilcoxon S配對檢驗圖C和D中數(shù)據(jù)集的統(tǒng)計學分析顯示在兩種情況下P-值<0. 01。
[0063] 圖5不出通過給予化原蛋白誘導內(nèi)皮功能障礙之后兩周時間內(nèi)治療和未治療的 綿羊血漿中的比-10水平（ng/ml)的平均值±SEM。
[0064] 圖6不出通過給予化原蛋白誘導內(nèi)皮功能障礙之后兩周時間內(nèi)治療和未治療的 綿羊血漿中的纖維蛋白原水平（g/L)的平均值±SEM。
[0065] 圖7不出通過給予化原蛋白誘導內(nèi)皮功能障礙之后兩周時間內(nèi)治療和未治療的 綿羊血漿中的肌動蛋白A水平（pg/ml)的平均值±SEM。
[0066] 圖8不出通過給予化原蛋白誘導內(nèi)皮功能障礙之后兩周時間內(nèi)治療和未治療的 綿羊血漿中的C-反應(yīng)蛋白水平（mg/L)的平均值±SEM。
[0067] 圖9不出通過給予化原蛋白誘導內(nèi)皮功能障礙之后兩周時間內(nèi)治療和未治療的 綿羊血漿中的C-反應(yīng)蛋白水平的變化百分比。
[0068] 圖10為顯示來自給予MPC("治療"）或鹽水（"對照"）的綿羊的綿羊冠狀動脈 (A和C)或指動脈度和D)的松弛百分比的一系列圖示，所述動脈用內(nèi)皮素-1收縮，隨后用 緩激膚（A)、卡己膽堿（C)或硝普鋼度和D)松弛。
[0069] 圖11為顯示通過給予膠原蛋白誘導內(nèi)皮功能障礙之后MPC + PPS治療和未治療的 綿羊血漿中相對于基線的峰值ILlO水平（ng/血）的平均值+SD的圖示。
[0070] 圖12為顯示通過給予膠原蛋白誘導內(nèi)皮功能障礙之后兩周時間內(nèi)MPC±PPS治療 和未治療的綿羊血漿中相對于基線的纖維蛋白原水平（g/L)變化的平均值+SEM的圖示。[007。 圖13為顯示通過給予膠原蛋白誘導內(nèi)皮功能障礙之后兩周時間內(nèi)MPC±PPS治療 和未治療的綿羊血漿中肌動蛋白A水平（pg/ml)的平均值±SEM。
[007引圖14為顯示通過給予膠原蛋白誘導內(nèi)皮功能障礙之后兩周時間內(nèi)MPC±PPS治療 和未治療的綿羊血漿中相對于基線的C-反應(yīng)蛋白水平變化的平均值±SEM。
[0073] 圖15為顯示來自給予MPC±PPS("治療"）或鹽水（"對照"）的綿羊的綿羊冠狀 動脈（A和C)或指動脈度和D)的松弛百分比的一系列圖示，所述動脈用內(nèi)皮素-1收縮， 隨后用緩激膚（A)、卡己膽堿（C)或硝普鋼度和D)松弛。
[0074] 發(fā)明詳述
[00巧]一般巧術(shù)巧所洗定女
[0076] 在本說明書中，除非另有明確說明或者上下文另有要求，提及單一步驟、物質(zhì)組合 物、步驟組或物質(zhì)組合物的組應(yīng)當理解為包括一個和多個（即一個或多個）此類步驟、物質(zhì) 組合物、步驟組或物質(zhì)組合物的組。
[0077] 除非另有明確說明，本文描述的各個實施方案或?qū)嵗覹必要的修改可適用于每 一個其他的實施方案。
[0078] 除了具體描述的那些外，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當理解，可對本文所述的公開內(nèi)容進 行變型和修改。應(yīng)當理解本公開包括所有運類變型和修改。本公開還單獨或整體地包括本 說明書提及的或說明的所有步驟、特征、組合物和化合物，W及所述步驟或特征的任何和所 有組合，或任何兩個或更多個所述步驟或特征。
[0079] 本公開不限于本文包括的本文所述的具體實施方案的范圍，其僅意圖用于例證目 的。如本文所述，功能等同的產(chǎn)品、組合物和方法明顯位于本公開的范圍內(nèi)。
[0080] 除非另有說明，利用分子生物學、微生物學、病毒學、重組DNA技術(shù)、溶液中的膚 合成、固相膚合成和免疫學的常規(guī)技術(shù)實施本公開，不需要過度的實驗。此類程序描述 于例女日 Sambrook, Fritsch&Maniatis, Molecular Cloning:A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, New York, Second Edition(1989)，整個 I、II 和 III 卷；DNA Cloning: A Practical Approach, Vols. land II (D. N. Glover, ed.，1985)，I民L Press,Oxford,全文；Oligonucleotide Synthesis : A Practical Approach(M. J. Gait, ed, 1984) II?L Press, Oxford,全文，尤其是其中 Gait 的文章，ppl-22 ;Atkinson et al，pp35-81;Sproat et al,PP 83-115;和 Wu et al,PP 135-151:4.Nucleic Acid Hybridization:A Practical Approach(B. D. Hames&S. J. Higginseds.，1985) I民L Press, Oxford,全文；Immobilized Cell and Enzymes:A Practical Approach(1986) I民L Press, Oxford,全文；Perbal, B.，A Practical Guide to Molecular Cloning (1984); Methods In Enzymology (S. Colowick and N. Kaplaneds.，Academic Press, Inc.)，整 個系歹[J ;J. F. Ramalho Ortigao, "The Chemistry of Peptide Synthesis"Knowledge database of Access to Virtual Laboratory website (Interactiva, Germany) ;Sa kakibara, D.，Teichman, J.，Lien,E.Land Fenichel,民.L. (1976). Biochem. Biophys. Res. Commun.73336-342 ;Merrifield,R.B. (1963)?J.Am.Chem.Soc. 85, 2149-2154 ; Barany,G. and Merrifield,民.B. (1979)，The Peptides (Gross, E. and Meienhofer, J. eds.)，vol. 2, pp. 1-284, Academic 化ess, New York. 12. Wlinsch, E. ed. (1974) Synthese von Peptiden in Houben-Weyls Metoden der Organischen Chemie (Miller，E. ed.)，vol.l5,4th edn?，第 I 和 2 部分，l'hieme，Stuttgart;Bodanszky，M. (1984)Principles of Peptide Synthesis,Springer-Verlag,Heidelberg ； Bodanszky, M. &Bodanszky, A. (1984)The Practice of Peptide Synthesis,Springer-Verl ag, Heide化erg ;Bodanszky，M. (1985) Int.J. Peptide Protein Res. 25, 449-474 ;Handbook of Experimental Immunology, Vols. I-IV (D. M. Weir and C. C. Blackwelleds.，1986, Black well Scientific Publications) ; W及Animal Cell Culture:Practical Approach, Third EditionQohn R.W.Masterseds.，2000) ,ISBN 0199637970,全文。
[0081] 在本說明書中，除非上下文另有要求，單詞"包括（comprise)或者變體 (comprises或comprising)"應(yīng)當被理解為意指包括所述的步驟或要素或整體（integer)， 或者步驟或要素或整體的組，但不排除任何其他步驟或要素或整體，或者要素或整體的組。
[0082] 如本文所用，術(shù)語"源自"應(yīng)當被理解為指示，指定整體（integer)可^獲自特定 來源，雖然不一定直接來自該來源。在源自干細胞和/或其后代細胞的可溶性因子的情形 下，該術(shù)語應(yīng)當理解為指干細胞和/或其后代細胞的體外培養(yǎng)期間產(chǎn)生的一個或多個因 子，例如蛋白、膚、糖類等。
[0083] 如本文所用，術(shù)語"內(nèi)皮功能障礙"將被理解為意指個體運樣的狀態(tài)（例如，全身 狀態(tài)），其W血管舒張與血管收縮物質(zhì)之間不平衡為特征，和/或其W內(nèi)皮作用向著降低血 管舒張和/或促炎狀態(tài)和/或促凝血特征變化為特征。用于檢測內(nèi)皮功能障礙的方法對本 領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見和/或如本文所述。
[0084]如本文所用，術(shù)語"由內(nèi)皮功能障礙引起的病癥"將被理解為意指其中內(nèi)皮功能障 礙起病理學作用的任何醫(yī)學病癥。在一實例中，所述病癥為血管病癥。例如，所述病癥為屯、 血管疾?。ㄈ绺哐獕骸⒐跔顒用}疾病、慢性屯、力衰竭和外周動脈疾?。悄虿〉难懿l(fā) 癥（如腎?。┗蚵阅I衰竭。
[0085] 如本文所用，術(shù)語"腎病"將被理解為意指W腎受損為特征的病癥，并且包括非炎 性腎病（腎變?。┖脱仔阅I病（腎炎）。腎病的原因包括腎小球中IgA抗體的沉積，給予止 痛劑，黃嚷嶺氧化酶缺乏和/或長期接觸鉛或其鹽?？尚纬赡I病的慢性病癥包括全身性紅 斑狼瘡（SLE)，糖尿病或高血壓（血壓高），其分別導致糖尿病腎病和高血壓腎病。
[0086] 術(shù)語"糖尿病腎病"（又被稱為Kimmelstiel-Wilson綜合征或結(jié)節(jié)性糖尿病腎小 球硬化和毛細管間腎小球腎炎）將被理解為指由腎臟腎小球中的毛細血管病變引起的進 展性腎病癥。它W腎病綜合征和彌漫性腎小球硬化癥為特征。通常在該病癥中檢測到的首 次實驗室異常為陽性微量白蛋白尿測試。通常，當常規(guī)尿分析患有糖尿病的人顯示尿液中 蛋白太多（蛋白尿）時，診斷為疑似的。尿分析也可在尿液中顯示糖尿病，特別是血糖控制 不良時。血清肌酢可隨腎損傷進展而增加?？蓪⒛I臟活組織檢查用于確認診斷，盡管運在 具有隨時間記錄的蛋白尿進展W及檢查眼睛視網(wǎng)膜時出現(xiàn)糖尿病視網(wǎng)膜病變的明確情況 下并不總是必要的。
[0087] 本文使用的術(shù)語"全身炎癥反應(yīng)綜合征"（或"SIRS")與其通常意義一致，是指沒 有感染源的全身炎癥狀態(tài)。診斷SIRS有四個主要癥狀，盡管運些中的任意兩個就足W診斷 (參見，例如Nystrom(Iggs)Journal of Antimicrobial Qiemotherapy, 41, Suppl A, 1-7).
[0088] 術(shù)語"敗血癥"是指SIRS的一種形式，其由疑似或證實的感染引起（參見，例如 Nystrom(Iggs)Journal of Antimicrobial Qiemotherapy, 41, Suppl. A, 1-7)。導致敗血病 的感染可由例如病毒、真菌、原生動物或細菌引起。
[0089] 術(shù)語"敗血性休克"是指具有低血壓的敗血癥，盡管用流體足夠復蘇（難治性 低血壓），連同存在灌注異常（參見，例如Nystrom(Iggs)Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 41, Suppl. A, 1-7)。
[0090] 術(shù)語"敗血癥樣病癥"是指患者出現(xiàn)類似于敗血癥或敗血性休克的癥狀但是 炎性介質(zhì)級聯(lián)和/或血流動力學參數(shù)變化并非主要或初始由感染因子引起的狀態(tài)。例 如，敗血癥樣病癥可見于患有急性或慢性肝衰竭的患者（參見Wasmuth H E,et al.J 胎patol. 2005February ;42(2) :195-201),屯、臟驟停之后患有復蘇后疾病的患者（參見 A化ie C et al.Qirr Opin Crit Care. 2004化]16;10(3):208-12)，癌癥化療之后患有敗血 癥-樣癥狀的患者（參見 Tsuji E et al.Int J Cancer.2003Nov.l;107(2):303-8)，經(jīng) 歷用重組TNF-a肢體隔離熱灌注或類似治療的患者（參見Zwaveling J H et al.化it Care Med. 1996May;24巧）：765-70)或者新生兒敗血癥-樣疾?。▍⒁奊riff in M P et al.Pediatr Res. 2003June ;53 (6):920-6)。
[0091] 如本文所用，術(shù)語"有效量"應(yīng)當被理解為意指足夠量的干細胞和/或其后代細胞 和/或源自它們的可溶性因子，W實現(xiàn)個體中血管擴張（例如在存在內(nèi)皮擴張劑如緩激膚 或卡己膽堿的情形下）顯著增加和/或個體內(nèi)皮中或個體組織或其組織區(qū)域（如功能障礙 的內(nèi)皮區(qū)域）中血管生成素I水平增加。該術(shù)語并不意味著每次都針對運些效果測試"有 效量"，而是指該量能夠在初步研究中確立，并且基于運些研究結(jié)果可推斷該量將在大部分 個體中具有相同的效果。
[0092] 如本文所用，術(shù)語"治療有效量"應(yīng)當被理解為意指足夠量的干細胞和/或其后代 細胞和/或源自它們的可溶性因子，W治療由內(nèi)皮功能障礙引起的病癥或其癥狀或其臨床 指征。
[0093] 如本文所用，術(shù)語"預(yù)防有效量"應(yīng)當被理解為意指足夠量的干細胞和/或其后代 細胞和/或源自它們的可溶性因子，W預(yù)防或抑制或延緩由內(nèi)皮功能障礙導致的病癥或其 癥狀或其臨床指征的出現(xiàn)。
[0094] 如本文所用，術(shù)語"低劑量"應(yīng)當被理解為意指干細胞和/或其后代的量少于 1 X 1〇6,但仍足W為本文所定義的"有效量"和/或本文所定義的"治療有效量"和/或"預(yù) 防有效量"。例如，低劑量包括0. 5X IO6或更少的細胞，或者0. 4X 10 6或更少的細胞，或者 0. 3 X 1〇6或更少的細胞，或者0. 1 X 10 6或更少的細胞。
[0095] 如本文所用，術(shù)語"高劑量"應(yīng)當被理解為高于1. 5 X IO6細胞/kg。例如，劑量包 括約1. 5X IO6至約4X 10 6細胞/kg。例如，高劑量包括約1. 5X 10 6或約2X 10 Vkg。
[0096] 提及"固定的身體劑量"應(yīng)當被理解為意指不考慮其體重而給予個體或個體群體 規(guī)定的劑量。
[0097] 如本文所用，術(shù)語"治療（treat/treatment/treating)"應(yīng)當被理解為意指給予治 療有效量的可溶性因子和/或細胞，并且減輕或抑制由內(nèi)皮功能障礙引起的病癥的癥狀， 使得個體不再被臨床診斷為患有該病癥，或者使得病癥的水平或嚴重程度被減輕。
[0098] 如本文所用，術(shù)語"預(yù)防（prevent/preventing/prevention)"應(yīng)當被理解為意指 給予預(yù)防有效量的可溶性因子和/或細胞，并且阻止或阻礙或延緩由內(nèi)皮功能障礙引起的 病癥的發(fā)生或進展。
[0099] 如本文所用，術(shù)語"可溶性因子"應(yīng)當理解為指干細胞和/或其后代產(chǎn)生的可溶于 水的任何分子，例如，蛋白、膚、糖蛋白、糖膚、脂蛋白、脂膚、糖類等。此類可溶性因子可W為 細胞內(nèi)的，和/或由細胞分泌。此類可溶性因子可W為復合混合物（例如，上清液）和/或 其一部分，和/或可W為純化的因子。在本公開的一實例中，可溶性因子位于上清液中，或 包含在上清液中。因此，本文中設(shè)及給予一種或多種可溶性因子的任何實例都應(yīng)當理解為 加W必要的修改后適用于給予上清液。
[0100] 如本文所用，術(shù)語"上清液"是指在適當?shù)呐囵B(yǎng)基例如液體培養(yǎng)基中，體外培養(yǎng)干 細胞和/或其后代后產(chǎn)生的非細胞物質(zhì)。通常，上清液通過W下產(chǎn)生：于適當?shù)臈l件和時間 下在培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞，然后通過諸如離屯、的方法去除細胞物質(zhì)。在施用前上清液可W經(jīng) 過或可W不經(jīng)過進一步的純化步驟。在一實例中，上清液包含少于IO 5個的活細胞，例如少 于1〇4,如少于1〇3,例如，沒有活細胞。
[0101] 如本文所用，術(shù)語"正?；蚪】祩€體"應(yīng)當被理解為意指通過本領(lǐng)域已知和/或本 文所述的任何方法評估的沒有內(nèi)皮功能障礙的個體。在一實例中正常"或"健康個體"并 不患有任何由內(nèi)皮功能障礙引起的病癥的癥狀。 引內(nèi)巧功能瞳礙
[0103] 評估內(nèi)皮功能的眾多測試為本領(lǐng)域內(nèi)已知和/或在下文被描述，并且可用于檢測 內(nèi)皮功能障礙。
[0104] 當測試內(nèi)皮功能時常見的評估參數(shù)為內(nèi)皮依賴性血管舒張。在冠狀動脈中， 運由多普勒流量測定通過造影進行，評估內(nèi)皮依賴性激動劑，主要是乙酷膽堿的作用 (Schachinger et al., Circulation 101:1899 - 1906, 2000)。
[0105] 通過正電子發(fā)射斷層掃描利用冠狀動脈灌注測量的冷加壓試驗也可用作內(nèi)皮功 能的測量（Gokce et al.，Am Coll Cardiol 41:1769 - 1775,2003).
[0106] 由于剪切應(yīng)力為內(nèi)皮對釋放NO的刺激，無創(chuàng)技術(shù)由在反應(yīng)性充血期間誘導 剪切應(yīng)力增加W通過超聲來評估流量介導的化動脈血管舒張而組成（Celermajer et al.,Lancet ；340:1111-1115, 1992)。
[0107]由于內(nèi)皮功能障礙伴隨有動脈炎癥，內(nèi)皮功能障礙的標志物包括可溶形式的 ICAM-I、VCAM-I和E-選擇素，其可在血漿中評估。
[010引微量白蛋白尿有一段時間已被認為是內(nèi)皮功能障礙的表現(xiàn)。大多數(shù)病理狀況下微 量白蛋白尿似乎是腎小球中毛細血管壁的失調(diào)，導致白蛋白經(jīng)毛細血管漏出。在糖尿病中， 內(nèi)皮功能障礙已與微量白蛋白尿相關(guān)聯(lián)，并且可出現(xiàn)在微量白蛋白尿發(fā)生之前。已顯示微 量白蛋白尿與內(nèi)皮功能障礙的標志物相關(guān)聯(lián)。
[0109]屯、肌血流量和代謝活性的