5，7-二羥基-4`-O-(6``-O-β-D-葡萄糖)-β-D-葡萄糖黃酮在制備抗炎藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種黃酬巧化合物的用途；具體設(shè)及5,7-二徑 基-4' -0- (6'' -0- 0 -D-葡萄糖）-0 -D-葡萄糖黃酬在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 具有血管系統(tǒng)的活體組織對(duì)損傷因子的防御性反應(yīng)稱為炎癥，炎癥是十分常見(jiàn)而 又重要的基本病理過(guò)程，體表的外傷感染和各器官的大部分常見(jiàn)病和多發(fā)?。ㄈ缜?、癡、臟 么、化炎、腎炎等）都屬于炎癥性疾病。炎癥病變主要在局部，但局部病變與整體又互為影 響。在比較嚴(yán)重的炎癥性疾病，特別是病原微生物在體內(nèi)蔓延擴(kuò)散時(shí)，常出現(xiàn)明顯的全身性 反應(yīng)。
[0003] 傳統(tǒng)消炎藥易使病菌產(chǎn)生抗藥性，且在代謝過(guò)程對(duì)肝和腎臟損傷較大。開(kāi)發(fā)新型 天然抗炎藥是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)關(guān)注的焦點(diǎn)。
[0004] 5,7-二徑基-4' -0- (6''-0- 0 -D-葡萄糖）-0 -D-葡萄糖黃酬是從天然植物新貴 中提取所得，在制備抗炎藥物中有著良好的應(yīng)用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[000引本發(fā)明的目的是5, 7-二徑基-4- -0- (6- - -0- 0 -D-葡萄糖）-0 -D-葡萄糖黃酬在 制備抗炎藥物中的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明化合物5, 7-二徑基-4- -0- (6- - -0- 0 -D-葡萄糖）-0 -D-葡萄糖黃酬為天 然產(chǎn)物，其結(jié)構(gòu)式如下：
[0007]
[0008] 該化合物為從新貴中提取所得，為黃棟色不定形粉末，化學(xué)鑒定如下：
[0009] 該化合物的Ihnmr化OOMHz，DMSO-de)中，5 13. 50 (1H，d)為黃酬5位徑基質(zhì)子特 征信號(hào)，5 6. 98 (lH，d，J= 11.4Hz)，6.88 (lH，d，J= 6.3Hz)為 5, 7 二氧取代黃酬A環(huán) 6、8 位質(zhì)子信號(hào)，58.09(2H，dd，J=8.甜z，2'，6'-H)，7.21(2H，dd，J=9.4Hz，3'，5'-H) 構(gòu)成B環(huán)的AA'BB'偶合系統(tǒng)；6.56(lH，s)為黃酬C環(huán)3位質(zhì)子信號(hào)。5 5.04(lH，d，J =9. 4化），4. 62 (1H，d，J= 9.細(xì)Z)為糖的端基質(zhì)子信號(hào)，根據(jù)其偶合常數(shù)可知為葡萄糖的 端基構(gòu)型為0構(gòu)型。5 :4.20~3. 20之間的多重峰為糖連接徑基的質(zhì)子信號(hào)。
[0010] "CNMR(150MHz，DMSO-de)譜中，5 182. 83,164. 35,163. 30,160. 84,157. 26 為五個(gè) SP2雜化碳信號(hào)，其中5 182. 83為幾基碳信號(hào)，可知此化合物為黃酬類化合物。5 100. 33， 77. 64,82. 02, 73. 54, 71. 38,65. 51 和 5 103. 8, 73. 65, 79. 42, 70. 14, 77. 02,61. 12 分別為兩 組葡萄糖碳信號(hào)，結(jié)合氨譜中端基質(zhì)子的偶合常數(shù)可知葡萄糖的端基構(gòu)型為0構(gòu)型。
[0011] 綜合上述信息可得出片段1~2
陽(yáng)〇1引 HMBC譜中，質(zhì)子信號(hào)5 8. 09化-2-)與5 160. 84 (C-4-),128. 62 (C-6-)碳信號(hào)遠(yuǎn) 程相關(guān)，質(zhì)子信號(hào) 5 7. 21 (H-3-)與 124. 39 (C-1-)，160. 84 (C-4-)，119. 45 (C-5-)，碳信號(hào)遠(yuǎn) 程相關(guān)，5 5. 04 (H-r')與160. 84 (C-4')碳信號(hào)遠(yuǎn)程相關(guān)，可確定1個(gè)葡萄糖連在C-4'位 上。質(zhì)子信號(hào)5 4.62(H-r'')與70.09(C-6'')碳信號(hào)遠(yuǎn)程相關(guān)，由此可確定葡萄糖連在 C-4'位葡萄糖的C-6'''位上。
[0015] 信號(hào)歸屬為：
[0016]咱NMR化00MHz，DMS0-de) 5 13. 50-13. 44(d，lH)，8. 09(dd，J=8.甜z，2H)，7. 21(， J= 9. 4Hz，2H)，6. 98(d，J= 11. 4Hz，lH)，6. 88(d，J= 6. 3Hz，lH)，6. 56(s，lH)，5. 04(d，J =9. 4,Hz,IH)，4. 62 (d，IH，J= 9.細(xì)z)
[0017]ESI-MSm/z:595. 1665 [M+H] +
[0018]"CNMRdSOMHz，DMSO-de) 5 :164. 35 (C-2)，94. 25 (C-3)，182. 83 (C-4)， 160. 03 (C-5)，104. 24 (C-6)，164. 35 化-7)，104. 24 (C-8)，157. 26 化-9)，105. 18 (C-IO)， 124. 39(C-r)，128. 62(C-2-，C-6-)，160. 84(C-4-)，117. 08(C-3-，C-5-)，4--O-Glc: 100. 33 (C-r-)，77. 64 (C-2--)，80. 02 (C-3--)，73. 5(C-4--)，71. 38(C-5--)， 65. 51 (C-6- -)，6- --O-Glc:103. 87 (C-r- -)，73. 65 (C-2- - -)，79. 42 (C-3---)， 70. 14 (C-4- - -)，77. 02 (C-5- - -)，61. 52 (C-6---)。
[0019] 化合物結(jié)構(gòu)歸屬及相關(guān)譜圖數(shù)據(jù)見(jiàn)表I
[0020] 表1本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)歸屬及其相關(guān)譜數(shù)據(jù)
[0021]
[0022] 為了說(shuō)明本發(fā)明化合物的抗炎活性，特將同屬于新貴藥材的異牡荊巧、芹菜素、異 荘草巧作為對(duì)照說(shuō)明本發(fā)明化合物的優(yōu)異抗炎效果。
[0023] 新貴提取抗炎活性實(shí)驗(yàn)
[0024] 1、實(shí)驗(yàn)材料 陽(yáng)0巧]1. 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[00%] SPF級(jí)昆明種系小鼠，雄性，體重18-22g，均為廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中屯、提供。 試驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可SCXK(桂）2009-0002,試驗(yàn)動(dòng)物使用許可證SCXK(桂）2009-0005。
[0027] 1. 2實(shí)驗(yàn)藥品與試劑
[0028] 醋酸地塞米松片，由天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：130328 ;角叉菜 膠由Sigma公司生產(chǎn)，批號(hào)：9000071 :
[0029] 受試藥品：本發(fā)明化合物5, 7-二徑基-4--0-(6- --0-0-D-葡萄糖）-0-D-葡萄 糖黃酬、異荘草巧、異牡荊巧、芹菜素，自制。
[0030] 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均Wx+S表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)
[0031] 2、試驗(yàn)方法
[0032] 2. 1二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)
[0033] 所有受試藥分成S批實(shí)驗(yàn)，每次取小鼠，20-22g，雌雄各半，10只/組，給藥組灌胃 給予（i.g.)。組別分別為：空白對(duì)照組、地塞米松對(duì)照組、各受試藥物組?？瞻讓?duì)照組給予 等體積的含DMSO5%和含吐溫80 0. 1 %的水溶液，給藥后比，于小鼠右耳正反面均勻涂抹 二甲苯50y1/只，Ih后脫頸椎處死，用9mm打孔器在左右相同的部位打下耳片，精確稱重， 計(jì)算腫脹度（mg)及腫脹抑制率（％)。
[0034] 腫脹度（mg)=右耳耳片重（mg)-左耳耳片重（mg)。 W35] 抑制率=(空白組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度）/空白組平均腫脹 度X100%。
[0036] 2. 2角叉菜膠致小鼠足腫脹的影響
[0037] 動(dòng)物分組及給藥方法同前（2. 2. 1)，末次給藥后比，在每鼠右側(cè)足趾皮下注射1% 角叉菜膠0. 05ml，化后沿踩關(guān)節(jié)剪下左右兩足，稱重，計(jì)算腫脹度及腫脹抑制率。 陽(yáng)03引腫脹度（mg)=右足重量（mg)-左足重量（mg)
[0039] 抑制率=(空白組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度）/空白組平均腫脹度X100%
[0040] 3、結(jié)果與分析
[0041] 3. 1對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響
[0042] 與空白組相比，地塞米松組，受試藥物組耳腫脹度均有下降。見(jiàn)表2
[0043] 表2受試藥物對(duì)小鼠耳腫脹度的影響（x±s)n=10
W45] 注：與空白組比較，沖< 0. 05
[0046] 3. 2對(duì)角叉菜膠致小鼠足腫脹的影響
[0047] 與空白組相比，地塞米松組，受試藥物組足趾腫脹度均有下降，結(jié)果見(jiàn)表3。 W48] 表3受試藥物對(duì)小鼠足趾腫脹度的影響（；±s)n= 10
[0050] 注：與空白組比較，沖< 0. 05 陽(yáng)〇5U 4、結(jié)論
[0052] 二甲苯致小鼠耳片腫脹及角叉菜膠誘發(fā)小鼠足爪腫脹是常用的急性炎癥模型，主 要表現(xiàn)為局部的充血、水腫及滲出等病理反應(yīng)過(guò)程，是應(yīng)用最多的研究藥物抗炎作用的方 法之一。本試驗(yàn)應(yīng)用運(yùn)兩種模型，對(duì)受試藥抗炎活性進(jìn)行了篩選。結(jié)果顯示，本發(fā)明化合物 5, 7-二徑基-4' -0- (6'' -0- 0 -D-葡萄糖）-0 -D-葡萄糖黃酬具有顯著的抗炎活性。
【附圖說(shuō)明】：
[0053] 附圖1化合物半制備液相分離圖
[0054] 附圖2化合物的Ihnmr譜圖化OOMHz，DMSO-de) 陽(yáng)化5] 附圖3化合物的"CNMR譜圖（150MHz，DMSO-de)
[0056] 附圖4化合物的服QC譜圖
[0057] 附圖5化合物的HMBC譜圖
【具體實(shí)施方式】 陽(yáng)05引 實(shí)施例1
[0059] 新貴干草粉碎后，準(zhǔn)確稱量500g，于1化圓底燒瓶中加入SOOOmL蒸饋水，在加熱套 中120°C回流提取地，抽濾得濾液，將濾渣放入圓底燒瓶中，加入4000mL蒸饋水再次回流提 取化，合并濾液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至浸膏。水提醇沉后，抽濾得濾液，濃縮得浸膏。
[0060] 取所得新貴粗提浸膏用蒸饋水溶解，依次用石油酸、乙酸乙醋和飽和正下醇循環(huán) 萃取，直至萃取層為無(wú)色。取正下醇部位進(jìn)行濃縮，得正下醇萃取部位。
[0061] 取正下醇萃取部位蒸饋水溶解后上樣到Dioi大孔樹(shù)脂柱上端，17小時(shí)靜態(tài)吸附 后，分別用去離子水洗脫，30%濃度的乙醇直至洗脫液為無(wú)色，收集洗脫液，濃縮至浸膏，真 空干燥。 陽(yáng)06引取30%濃度的乙醇洗脫部化使用純凈水溶解后，放置4°C冰箱內(nèi)48小時(shí)，過(guò)濾沉 淀，濾液進(jìn)半制備液相進(jìn)行分離。
[0063] 色譜柱：蘇州環(huán)球C18半制備柱（IOmmIDX250mm, 10ym)
[0064] 流動(dòng)相：乙臘-0. 4 %冰醋酸水溶液 陽(yáng)0化]檢測(cè)波長(zhǎng)：273nm
[0066]流速：3. 0血? min-1
[0067] 進(jìn)樣量：2. 0血
[0068] 柱溫：室溫 W例洗脫梯度：如表4
[0070] 表4流動(dòng)相洗脫程序
[0071]
[0072] 該條件下得到的色譜圖如圖1，本發(fā)明化合物5, 7-二徑基-4' -0-化'' -0- 0 -D-葡 萄糖）-0 -D-葡萄糖黃酬，出峰時(shí)間為12. 40min，分離該組分，干燥即得。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 5, 7-二羥基-4' -ο- (6'' -ο-β-D-葡萄糖）-β-D-葡萄糖黃酮在制備抗炎藥物中的 應(yīng)用。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述炎癥為無(wú)菌性炎癥。
【專利摘要】本發(fā)明涉及5，7-二羥基-4`-O-(6``-O-β-D-葡萄糖)-β-D-葡萄糖黃酮在制備抗炎藥物中的應(yīng)用，本藥物系天然植物菥蓂中提取，實(shí)驗(yàn)顯示其具有良好的抗炎效果。
【IPC分類】C07H15/26, C07H1/08, A61P29/00, A61K31/7048
【公開(kāi)號(hào)】CN105343118
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510938075
【發(fā)明人】王立升, 程麗媛, 蔣敏捷
【申請(qǐng)人】廣西大學(xué)
【公開(kāi)日】2016年2月24日
【申請(qǐng)日】2015年12月17日