一種組合物及其在防治肝臟損傷藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 引起肝損傷的原因有多個：1、病毒感染：由多種肝炎病毒引起，具有傳染性強(qiáng)，傳 播途徑復(fù)雜，流行面廣泛，發(fā)病率高等特點。2、藥物或化學(xué)毒物：許多藥物和化學(xué)毒物都可 引起肝臟損傷，發(fā)生藥物性肝炎或中毒性肝炎。3、酗酒：酒精對肝臟的損害是很嚴(yán)重的，損 害的后果包括酒精性肝炎、酒精性脂肪肝、酒精性肝硬化，主要是由于酒精（乙醇）及其代 謝產(chǎn)物乙醛的毒性對肝細(xì)胞直接損害造成的。4、其他原因：原發(fā)和繼發(fā)的肝臟腫瘤、心功 能不全導(dǎo)致肝臟淤血、某些先天性肝臟疾病、靜脈高價營養(yǎng)等，都可以造成不同程度的肝損 害，這些肝損害的早期表現(xiàn)往往是ALT(轉(zhuǎn)氨酶）或膽紅素的升高，不祛除病因，肝臟的損害 會進(jìn)一步加重。目前在我國由于上述原因每年發(fā)生肝損傷的人數(shù)眾多，形勢不容樂觀。急 需研發(fā)高效低毒的防治肝臟損傷藥物。
[0003] 肝臟損傷的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產(chǎn)物中尋 找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物具有 重要價值。
[0004] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個2011年發(fā)表（AyumiOhsakietal.，2011. SalviskinoneA,aditerpenewithanewskeletonfromSalviaprzewalskii. TetrahedronLetters52(2011) 1375 - 1377)的化合物，我們對化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾， 獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合 物并對該組合物抗肝臟損傷活性進(jìn)行了評價，其具有抗肝臟損傷活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合 物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為95%和5%。
[0006]
[0007] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。
[0008] 藥效學(xué)實驗表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗肝臟損傷作用。本發(fā)明的藥學(xué)上 可接受的鹽具有同樣的藥效。
[0009] 以下通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實施方式】
[0010] 實施例1化合物SalviskinoneA的制備
[0011] 化合物SalviskinoneA(I)的制備方法參照AyumiOhsaki等人發(fā)表的文獻(xiàn) (AyumiOhsakietal. , 2011.SalviskinoneA,aditerpenewithanewskeletonfrom Salviaprzewalskii.TetrahedronLetters52 (2011) 1375 - 1377)的方法。
[0012]
[0013] 實施例2SalviskinoneA的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0014] 將化合物I(312mg，1.OOmmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0. 08g)，1，2-二溴乙烷（3. 760g，20.OOmmol)和6mL的50 %氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5 攝氏度攪拌12h。12h之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相 溶液。然后對有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌4次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減 壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動相為：石油醚/丙酮 =100:1.5,v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末（327mg， 78% ) 〇
[0015] 4匪1?(5001抱，0150-(16)5 6.63(8，1!1)，6.37(8，1!1)，5.81(8，1!1)，4.51(8,2!1)，3· 84 (s, 1H), 3. 79 (s, 2H), 2. 15 (s, 1H), 2. 04 (s, 1H) ,1-91 (s, 1H), 1. 65 (s, 1H), 1. 39 (s, 3H), 1. 08 (s, 6H), 0. 99 (s, 6H).
[0016] 13CNMR(125MHz,DMS0-d6)δ188. 07 (s)，183. 70 (s)，154. 38 (s)，147. 57 (s)，140. 2 1 (s), 136. 40 (s), 134. 71 (s), 131. 25 (s), 128. 40 (s), 118. 83 (s), 72. 12 (s), 45. 49 (s), 37. 5 4 (s), 33. 58 (s), 31. 78 (s), 26. 17 (s), 25. 12 (s), 24. 66 (s), 23. 51 (s), 23. 17 (s), 22. 65 (s).
[0017] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcdforC22H28Br03:4 1 9. 12 2 2；found419. 1220.
[0018]
[0019] 實施例3SalviskinoneA的0-(咪唑基）乙基衍生物（III)的合成
[0020] 將化合物II(209mg，0. 5mmol)溶于30mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀 (690mg，5.Ommol)，鵬化鉀（252mg，1. 5mmol)和咪挫（870mg，lOmmol)，混合物加熱回流 4h。 反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入45mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機(jī)相。依次用水 和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物 粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動相為：石油醚/丙酮=100:0.2,v/v)，收集棕色 集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物III的淡棕色固體（144.lmg，71% )。
[0021] NMR(500MHz,DMS0-d6)δ7. 91(s, 1Η), 7. 16 (s, 1H), 6. 65 (d,J= 103. 6Hz, 2H), 6 .41 (s, 1H),5. 76 (s, 1H),4. 50 (s, 2H),4. 39 (s, 2H),3. 82 (s, 1H),2. 05 (s, 1H),1. 94 (s, 1H),1 .87 (s, 1H) ,1-61 (s, 1H), 1. 30 (s, 3H), 0. 99 (s, 6H), 0. 90 (s, 6H).
[0022] 13CNMR(125MHz,DMS0-d6)δ187. 81 (s)，183. 33 (s)，153. 90 (s)，147. 28 (s)，139. 8 l(s), 139. 19 (s), 136. 14 (s), 134. 34 (s), 130. 77 (s), 128. 43 (s),128. 01 (s), 118. 85 (s),11 8. 53 (s), 69. 03 (s), 45. 02 (s), 43. 70 (s), 37. 46 (s), 33. 09 (s), 25. 87 (s), 25. 06 (s), 24. 29 ( s), 23. 03(s), 23. 05(s), 22. 41 (s).
[0023] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcdforC25H31N203:407. 2335 ；found:407. 2331 〇
[0024]
[0025] 實施例4SalviskinoneA的0-(三唑基）乙基衍生物（IV)的合成
[0026] 將化合物II(209mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀 (345mg，2. 5mmol)，鵬化鉀（84mg，0. 5mmol)和 1，2, 3-三氮挫（2760mg，40mmol)，混合物加熱 回流4h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機(jī)相。 依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑 得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動相為：石油醚/丙酮=100:0.5,v/v)， 收集黃色集中洗脫帶即得到化合物IV的黃色粉末（134. 3mg，66% )。
[0027]NMR(500MHz,Chloroform-dl)δ8. 37 (s, 1Η), 7. 95 (s, 1H), 6. 35 (s, 1H), 6. 14 (s, 1H), 5. 35 (s, 1H), 4. 13 (s, 1H), 4. 42 (d,J= 16. 4Hz, 3H), 3. 71 (s, 1H), 2. 13 (s, 1H), 2. 05 (s, 1H) ,1-81 (s, 1H), 1. 63 (s, 1H), 1. 30 (s, 3H), 1. 08 (s, 6H), 0. 97 (s, 6H).
[0028]13CNMR(125MHz,DMS0-d6)δ188. 09 (s)，183. 61 (s)，154. 18 (s)，147. 26 (s)，139. 7 2 (s), 136. 40 (s), 136. 32 (s), 134. 52 (s), 130. 95 (s), 127. 99 (s), 120. 16 (s), 118. 62 (s), 67 .14 (s), 46. 27 (s), 45. 18 (s), 37. 69 (s), 33. 32 (s), 26. 14 (s), 25. 01 (s), 24. 41 (s), 23. 23(s ),23. 06(s), 22. 47 (s).
[0029]HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcdforC24H30N303:408. 2287 ;found:408. 2282。
[0030]
[0031] 實施例5組合物防治肝損傷的作用
[0032] (一）組合物對D-氨基半乳糖胺（D-galactosamine，D_GalN)誘導(dǎo)的小鼠急性肝 損傷的防護(hù)作用
[0033] 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的95mg化合物III的粉末和研磨之后過 200目網(wǎng)的5mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合 物，使用時用水溶解這l〇〇mg的組合物即得到組合物的溶液。
[0034] 小鼠分5組。對照組以生理鹽水灌胃（0. 3mL·(! ^，連續(xù)7d;且于第7d還要腹腔注 射生理鹽水（0. 15mL· 10g^，腹腔注射16h后取血，測AST及ALT活力。D-GalN組、組合物 3.Omg*kg1組、化合物III組和化合物IV組分別以生理鹽水、組合物、化合物III和化合物 IV灌胃（0· 3mL·(! ^，連續(xù)7d;且于第 7d還要腹腔注射D-GalN(800mg.kg\ 0· 15mL· 10g4， 腹腔注射16h后取血，測AST及ALT活力。
[0035] 表1組合物對D-GalN誘導(dǎo)的急性肝損傷的防護(hù)作用
[0036]
[0037] 注JpfO·Olvs對照組，2)p〈0.OlvsD-GalN組
[0038] 由表1可知，組合物能有效抑制D-GalN引起的小鼠AST及ALT活性的顯著上升。 化合物III和化合物IV無此作用。
[0039] (二）組合物對CC14誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷的防護(hù)作用
[0040] 小鼠分5組，對照組以生理鹽水灌胃（0. 3mL·(! ^，連續(xù)5d，第6d腹腔注射植物油 每只0.lmL· 10gSCC1 4組及組合物、化合物III和化合物IV給藥組（3.Omg*kg4分別以 生理鹽水及組合物、化合物III和化合物IV灌胃（0. 3mL·d^，連續(xù)5d，于第6d腹腔注射 0· 1%CC140.lmL· 10g^ 24h后處死動物，取血清測AST及ALT活力。
[0041] 表2組合物對0：14誘導(dǎo)的急性肝損傷的防護(hù)作用
[0042]
[0043] 注：&〈0·Olvs對照組，2)p〈0.OlvsCC14組
[0044] 由表2可知，組合物能抑制CC14引起的小鼠AST及ALT活性的顯著上升?；衔?ΠΙ和化合物IV無此作用。
[0045] 結(jié)論：組合物能有效保護(hù)D-GalN引起的小鼠肝損傷，組合物能有效保護(hù)CC14引起 的小鼠肝損傷，可以用來制備抗肝損傷藥物?；衔颕II和化合物IV不能有效保護(hù)D-GalN 引起的小鼠肝損傷，不能有效保護(hù)CC14引起的小鼠肝損傷，不可以用來制備抗肝損傷藥物。
[0046] 實施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0047] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。
[0048] 實施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0049] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100 粒。
【主權(quán)項】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為95%和5%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為：將化合物III的粉末和化合物 IV的粉末按照質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為95%和5%充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在防治肝臟損傷藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在防治肝臟損傷藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述肝臟損 傷為化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)所致的肝臟損傷。5. 如權(quán)利要求4所述的組合物在防治肝臟損傷藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述化學(xué)物 質(zhì)為D-氨基半乳糖胺。6. 如權(quán)利要求4所述的組合物在防治肝臟損傷藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述化學(xué)物 質(zhì)為四氯化碳。
【專利摘要】本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備防治肝臟損傷藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種組合物及其制備方法。藥理學(xué)實驗表明，本發(fā)明的組合物具有防治肝臟損傷的作用，具有開發(fā)防治肝臟損傷藥物的價值。
【IPC分類】A61K31/4192, A61P1/16, A61K31/4166
【公開號】CN105250275
【申請?zhí)枴緾N201510762423
【發(fā)明人】王卓婷
【申請人】南京賦海澳賽醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2016年1月20日
【申請日】2015年11月10日