活素介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的拮抗劑（抑制劑）作用的那些肽 基片段。
[0079] 另外，可通過例如篩選自編碼ActRIIA多肽的相應(yīng)的誘變核酸重組產(chǎn)生的修飾 多肽的文庫，來獲得ActRIIA多肽的功能活性變體。可產(chǎn)生所述變體，并測試以鑒定可起 GDFll信號轉(zhuǎn)導(dǎo)或與ActRIIA結(jié)合的拮抗劑（抑制劑）作用的變體。在某些實(shí)施方案中， ActRIIA多肽的功能變體（即具有⑶Fll結(jié)合活性）包含與選自SEQ ID N0:2或3的氨基 酸序列有至少75%同一性的氨基酸序列。在某些情況下，功能變體具有與選自SEQ ID N0:2 或3的氨基酸序列有至少80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸 序列。
[0080] 存在許多方法，籍此可從簡并寡核苷酸序列產(chǎn)生潛在同源物的文庫。簡并基因序 列的化學(xué)合成可在自動DNA合成儀中進(jìn)行，然后將合成基因連接至用于表達(dá)的合適載體 中。簡并寡核苷酸的合成是本領(lǐng)域眾所周知的（參見例如Narang，SA(1983)Tetrahedron 39:3 ;Itakura等（1981)Recombinant DNA, Proc. 3rd Cleveland Sympos. Macromolecules, 編輯 AG Walton, Amsterdam:Elsevier 第 273-289 頁；Itakura 等（1984)Annu. Rev. Biochem. 53:323 ;Itakura 等（1984)Science 198:1056 ;Ike 等（1983)Nucleic Acid Res. 11:477)。該技術(shù)已用于其它蛋白質(zhì)的定向進(jìn)化（參見例如Scott等（1990)Science 249:386-390 ;Roberts 等（1992)PNAS USA 89:2429-2433 ;Devlin 等（1990)Science 249 :404-406 ;Cwirla 等（1990) PNAS USA 87 :6378-6382 ;以及美國專利號 5, 223, 409、 5, 198, 346 和 5, 096, 815)。
[0081] 或者，可利用其它誘變形式來產(chǎn)生組合文庫。例如，可采用以下誘變產(chǎn)生ActRIIA 多肽變體，并且通過篩選從文庫中分離出ActRIIA多肽變體：例如丙氨酸掃描誘變等（Ruf 等（1994)Biochemistry 33:1565-1572 ;Wang 等（1994)J.Biol. Chem. 269:3095-3099; Balint 等（1993)Gene 137:109-118 ;Grodberg 等（1993)Eur.J.Biochem.218:597-601; Nagashima 等（1993)J. Biol. Chem. 268:2888-2892 ;Lowman 等（1991)Biochemistry 30:10832-10838 ;以及 Cunningham 等（1989) Science 244:1081-1085);通過接頭掃描誘變 (Gustin等（1993)Virology 193:653-660 ;Brown等（1992)Mol. Cell Biol. 12:2644-2652 ; McKnight 等（1982)Science 232:316);通過飽和誘變（Meyers 等（1986)Science 232:613);通過 PCR 誘變（Leung 等（1989)Method Cell Mol Biol 1:11-19)或通過隨機(jī) 誘變，包括化學(xué)誘變等（Miller 等（1992)A Short Course in Bacterial Genetics, CSHL Press, Cold Spring Harbor, N. Y.；以及 Greener 等（1994)Strategies in Mol Biol 7:32-34)。接頭掃描誘變，特別是在組合情況下，是用于鑒定截短（生物活性）形式的 ActRIIA多肽的有吸引力的方法。
[0082] 對于篩選通過點(diǎn)突變和截短制備的組合文庫的基因產(chǎn)物，以及在這方面，對于篩 選具有某種性質(zhì)的基因產(chǎn)物的cDNA文庫，各種技術(shù)是本領(lǐng)域已知的。所述技術(shù)一般可適于 通過ActRIIA多肽的組合誘變而產(chǎn)生的基因文庫的快速篩選。用于篩選大基因文庫的最廣 泛使用的技術(shù)通常包括將基因文庫克隆至可復(fù)制的表達(dá)載體中，將合適的細(xì)胞用所得載體 文庫轉(zhuǎn)化，并在所需活性的檢測有利于相對容易地分離載體（其編碼所檢測產(chǎn)物的基因） 的條件下表達(dá)所述組合基因。優(yōu)選的測定法包括GDFll結(jié)合測定法和激活素介導(dǎo)的細(xì)胞信 號轉(zhuǎn)導(dǎo)測定法。
[0083] 在某些方面，ActRIIA多肽的功能變體或修飾形式包括具有ActRIIA多肽的至少 一部分和一個或多個融合結(jié)構(gòu)域的融合蛋白。這類融合結(jié)構(gòu)域的眾所周知的實(shí)例包括但不 限于多聚組氨酸、Glu-Glu、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶（GST)、硫氧還蛋白、蛋白質(zhì)A、蛋白質(zhì)G、免疫 球蛋白重鏈恒定區(qū)（Fe)、麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP)或人血清白蛋白?？梢赃x擇融合結(jié)構(gòu)域以 提供所需性質(zhì)。例如，一些融合結(jié)構(gòu)域特別可用于通過親和色譜法分離融合蛋白。為了親 和純化的目的，使用用于親和色譜法的相關(guān)基質(zhì)，例如谷胱甘肽_、淀粉酶-和鎳-或鈷-綴 合的樹脂。許多的這類基質(zhì)可以"試劑盒"形式獲得，例如可與（HIS 6)融合配偶體一起使 用的Pharmacia GST純化系統(tǒng)和QIAexpress. TM?系統(tǒng)（Qiagen)。作為另一個實(shí)例，可選 擇融合結(jié)構(gòu)域以促進(jìn)ActRIIA多肽的檢測。這類檢測結(jié)構(gòu)域的實(shí)例包括各種熒光蛋白（例 如GFP)以及"表位標(biāo)簽"，所述表位標(biāo)簽通常是短肽序列，可獲得針對該短肽序列的特異性 抗體?？扇菀撰@得特異性單克隆抗體所針對的眾所周知的表位標(biāo)簽包括FLAG、流感病毒血 凝素（HA)和c-myc標(biāo)簽。在一些情況下，融合結(jié)構(gòu)域具有例如用于因子Xa或凝血酶的蛋 白酶切割位點(diǎn)，其允許相關(guān)蛋白酶部分消化融合蛋白，從而由其釋放重組蛋白?？赏ㄟ^后續(xù) 色譜分離，從融合結(jié)構(gòu)域分離釋放的蛋白質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，ActRIIA多肽與體內(nèi)穩(wěn)定 ActRIIA多肽的結(jié)構(gòu)域（"穩(wěn)定劑"結(jié)構(gòu)域）融合。所謂"穩(wěn)定"意指延長血清半壽期的任 何情況，不論是因?yàn)槠茐臏p少、腎清除降低還是其它藥代動力學(xué)作用。已知與免疫球蛋白的 Fc部分融合賦予各種蛋白質(zhì)所需要的藥代動力學(xué)性質(zhì)。同樣，與人血清白蛋白融合可提供 所需性質(zhì)?？梢赃x擇的其它類型的融合結(jié)構(gòu)域包括多聚化（例如二聚化、四聚化）結(jié)構(gòu)域 和（按需要賦予其它生物功能，例如進(jìn)一步刺激骨生長或肌肉生長）的功能結(jié)構(gòu)域。
[0084] 要了解，融合蛋白的不同元件可按與所需功能性一致的任何方式排列。例如， ActRIIA多肽可置于異源結(jié)構(gòu)域的C端，或者，異源結(jié)構(gòu)域可置于ActRIIA多肽的C端。 ActRIIA多肽結(jié)構(gòu)域和異源結(jié)構(gòu)域在融合蛋白中不一定相鄰，結(jié)構(gòu)域的C端或N端或結(jié)構(gòu)域 之間可包括其它結(jié)構(gòu)域或氨基酸序列。
[0085] 在某些實(shí)施方案中，用于本文所述方法和組合物的ActRIIA多肽含有能夠穩(wěn)定 ActRIIA多肽的一個或多個修飾。例如，這類修飾延長ActRIIA多肽的體外半壽期、延長 ActRIIA多肽的循環(huán)半壽期或降低ActRIIA多肽的蛋白水解性降解。這類穩(wěn)定性修飾包括 但不限于融合蛋白（包括例如包含ActRIIA多肽和穩(wěn)定劑結(jié)構(gòu)域的融合蛋白）、糖基化位 點(diǎn)的修飾（包括例如將糖基化位點(diǎn)加至ActRIIA多肽中）和糖部分的修飾（包括例如從 ActRIIA多肽中脫去糖部分）。在融合蛋白的情況下，ActRIIA多肽與穩(wěn)定劑結(jié)構(gòu)域例如IgG 分子（例如Fc結(jié)構(gòu)域）融合。在融合蛋白的情況下，本文所用術(shù)語"穩(wěn)定劑結(jié)構(gòu)域"不僅 僅是指融合結(jié)構(gòu)域（例如Fe)，而且還包括非蛋白質(zhì)性修飾（例如糖部分）或非蛋白質(zhì)性聚 合物（例如聚乙二醇）。
[0086] 在某些實(shí)施方案中，分離自或以別的方式基本不含其它蛋白質(zhì)的分離和/或純化 形式的ActRIIA多肽可用于本文所述方法和組合物。ActRIIA多肽一般可通過自重組核酸 表達(dá)來產(chǎn)生。
[0087] 在某些方面，分離核酸和/或重組核酸可用來產(chǎn)生任何ActRIIA多肽（例如可溶 性ActRIIA多肽），包括用于本文公開的方法和組合物的片段、功能變體和融合蛋白。
[0088] -些哺乳動物表達(dá)載體含有促進(jìn)載體在細(xì)菌中增殖的原核序列和在真核細(xì)胞 中表達(dá)的一個或多個真核轉(zhuǎn)錄單位兩者。pcDNAI/amp、pcDNAI/neo、pRc/CMV、pSV2gpt、 pSV2neo、pSV2_dhfr、pTk2、pRSVneo、pMSG、pSVT7、pko-neo 和 pHyg 來源的載體是適于真核 細(xì)胞轉(zhuǎn)染的哺乳動物表達(dá)載體的實(shí)例。這些載體中的一些被細(xì)菌質(zhì)粒（例如PBR322)的序 列修飾，以促進(jìn)在原核和真核細(xì)胞兩者中的復(fù)制和耐藥性選擇。或者，病毒例如牛乳頭狀瘤 病毒（BPV-I)或埃-巴病毒（pHEBo、pREP來源的和p205)的衍生物可用于真核細(xì)胞中蛋白 質(zhì)的瞬時表達(dá)。其它病毒（包括反轉(zhuǎn)錄病毒）表達(dá)系統(tǒng)的實(shí)例可參見下面的基因療法遞送 系統(tǒng)中的描述。用于質(zhì)粒制備和宿主生物轉(zhuǎn)化的各種方法是本領(lǐng)域眾所周知的。有關(guān)用于 原核和真核細(xì)胞兩者的其它穩(wěn)定的表達(dá)系統(tǒng)以及通用重組方法，參見Molecular Cloning A Laboratory Manual,第 3 版，由 Sambrook, Fritsch 和 Maniatis 編輯（Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001)。在某些情況下，可能需要通過桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)來表達(dá) 重組多肽。這類桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的實(shí)例包括PVL來源的載體（例如pVL1392、pVL1393和 pVL941)、pAcUW來源的載體（例如pAcUWl)和pBlueBac來源的載體（例如含有0 -gal的 pBlueBac III)〇
[0089] 可以設(shè)計(jì)用于在CHO細(xì)胞中產(chǎn)生主題ActRIIA多肽的載體，例如Pcmv-Script 載體（Stratagene，La Jolla，Calif.)、pcDNA4 載體（Invitrogen，Carlsbad，Calif.)和 pCI-neo載體（Promega，Madison，Wis.)。顯然，可使用主題基因構(gòu)建體以使主題ActRIIA 多肽在培養(yǎng)中增殖的細(xì)胞中表達(dá)，例如以產(chǎn)生用于純化的蛋白質(zhì)，包括融合蛋白或變異蛋 白質(zhì)。
[0090] 因此，本文提供產(chǎn)生ActRIIA多肽的方法。例如，可在合適的條件下培養(yǎng)用編碼 ActRIIA多肽的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞，以使ActRIIA多肽進(jìn)行表達(dá)。ActRIIA多肽可分 泌，并自含有ActRIIA多肽的細(xì)胞和培養(yǎng)基的混合物中分離?；蛘?，ActRIIA多肽可保持在 胞質(zhì)中或保持在膜級分；已收獲、裂解的細(xì)胞；以及分離的蛋白質(zhì)中。細(xì)胞培養(yǎng)物包括宿主 細(xì)胞、培養(yǎng)基和其它副產(chǎn)物。用于細(xì)胞培養(yǎng)的合適的培養(yǎng)基是本領(lǐng)域眾所周知的?？刹捎帽?領(lǐng)域已知的用于純化蛋白質(zhì)的技術(shù)，包括離子交換色譜法、凝膠過濾色譜法、超濾法、電泳、 用對ActRIIA多肽的特定表位有特異性的抗體的免疫親和純化和用與ActRIIA多肽融合的 結(jié)構(gòu)域結(jié)合的作用劑的親和純化（例如蛋白質(zhì)A柱可用來純化ActRIIA-Fc融合物），將主 題ActRIIA多肽從細(xì)胞培養(yǎng)基、宿主細(xì)胞或兩者中分離。在一個實(shí)施方案中，ActRIIA多肽 是含有促進(jìn)其純化的結(jié)構(gòu)域的融合蛋白。在一個實(shí)施方案中，通過一系列柱色譜法步驟，包 括例如任何順序的以下三種或更多種來實(shí)現(xiàn)純化：蛋白質(zhì)A色譜法、Q瓊脂糖色譜法、苯基 瓊脂糖凝膠（phenylsepharose)色譜法、大小排阻色譜法和陽離子交換色譜法?？捎貌《?過濾和緩沖液交換完成純化。如本文所示，ActRIIA-hFc蛋白被純化至>98% (通過大小排 阻色譜法測定）和>95% (通過SDS PAGE測定）的純度。這種純度水平足以實(shí)現(xiàn)對小鼠骨 的所需作用及在小鼠、大鼠和非人類靈長類動物中可接受的安全特征。
[0091] 在另一個實(shí)施方案中，通過使用Ni2+金屬樹脂的親和色譜法純化，編碼純化前導(dǎo) 序列（例如重組ActRIIA多肽所需部分N端的聚（His)/腸激酶切割位點(diǎn)序列）的融合基因 可允許純化已表達(dá)的融合蛋白。然后，接著可用腸激酶處理脫去純化前導(dǎo)序列以提供純化 的 ActRIIA 多肽（例如參見Hochuli 等（1987) J. Chromatography 411:177 ;以及 Janknecht 等，PNAS USA 88:8972)。
[0092] 用于制備融合基因的技術(shù)也是眾所周知的?；旧希凑粘Ｒ?guī)技術(shù)如下進(jìn)行編碼 不同多肽序列的各個DNA片段的連接：使用連接用平端或交錯端、提供合適末端的限制性 內(nèi)切酶消化、適當(dāng)時補(bǔ)平黏端、堿性磷酸酶處理以避免不合乎需要的連接、并酶促連接。在 另一個實(shí)施方案中，可通過常規(guī)技術(shù)（包括自動化DNA合成儀），來合成融合基因?；蛘撸?基因片段的PCR擴(kuò)增可以使用錨定引物進(jìn)行，所述錨定引物在兩個相鄰的基因片段之間 產(chǎn)生互補(bǔ)突出端，其隨后可連接以形成嵌合基因序列（參見例如Current Protocols in Molecular Biology,編輯 Ausubel 等，John Wiley & Sons :1992) 〇
[0093] 可使用SEQ ID N0:9的組織纖溶酶原前導(dǎo)序列，在來自pAID4載體（SV40 ori/增 強(qiáng)子、CMV啟動子）的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的CHO-DUKX BI 1細(xì)胞中表達(dá)ActRIIA-Fc融合蛋白。Fc部 分是人IgGl Fc序列，如SEQ ID N0:7所示。在某些實(shí)施方案中，在表達(dá)時，所含蛋白質(zhì)每 分子的ActRIIA-Fc融合蛋白平均具有約1. 5和2. 5摩爾唾液酸。
[0094] 在某些實(shí)施方案中，ActRIIA-Fc融合物長的血清半壽期在人類患者中可為 25-32天。此外，與所報(bào)告的在人293細(xì)胞中表達(dá)的ActRIIA-hFc融合蛋白相比，CHO細(xì) 胞表達(dá)的產(chǎn)物可具有對激活素B配體的較高親和力（del Re等，J Biol Chem. 2004 Dec 17 ;279 (51) :53126-35)。此外，雖不受理論的束縛，但是與具有天然前導(dǎo)序列表達(dá)的 ActRIIA-Fc不一樣，使用提供比其它前導(dǎo)序列更大產(chǎn)量的TPA前導(dǎo)序列，可提供高純的N端 序列。使用天然前導(dǎo)序列可導(dǎo)致ActRIIA-Fc的兩個主要類別，各具有不同的N端序列。
[0095] (b)ACTRIIB
[0096] 本文所用術(shù)語"ActRIIB"是指來自任何物種的激活素受體IIb型（ActRIIB)蛋白 家族和通過誘變或其它修飾來源于這類ActRIIB蛋白的變體。本文提及ActRIIB要理解為 是提及任一種目前已鑒定的形式。ActRIIB家族的成員一般是跨膜蛋白質(zhì)，由具有富含半胱 氨酸的區(qū)域的配體結(jié)合胞外域、跨膜結(jié)構(gòu)域和具有預(yù)測的絲氨酸/蘇氨酸激酶活性的胞質(zhì) 結(jié)構(gòu)域組成。
[0097] 術(shù)語"ActRIIB多肽"包括包含ActRIIB家族成員的任何天然存在的多肽及其保持 有益活性的任何變體（包括突變體、片段、融合物和肽模擬物形式）的多肽。例如，ActRIIB 多肽包括來源于任何已知ActRIIB的序列的多肽，所述序列具有與ActRIIB多肽的序列有 至少約80%和任選至少85%、90%、95%、97%、98%、99%或更大同一性的序列。八(^1?118 多肽的實(shí)例包括人ActRIIB前體多肽（SEQ ID NO: 16或28)和可溶性人ActRIIB多肽。本 文所述所有ActRIIB相關(guān)多肽的氨基酸的編號基于SEQ ID NO: 16或28的氨基酸編號。有 關(guān)其氨基酸序列以SEQ ID NO: 16和28描述的ActRIIB前體多肽，人ActRIIB前體多肽的信 號肽位于氨基酸位置1-18 ;胞外域位于氨基酸位置19-134,且人ActRIIB前體多肽的N-聯(lián) 糖基化位點(diǎn)位于氨基酸位置42和65。編碼SEQ ID NO: 16的人ActRIIB前體多肽的核酸序 列以SEQ ID NO: 19公開。有關(guān)該序列的描述參見表1。
[0098] 在具體的實(shí)施方案中，用于本文所述組合物和方法的ActRIIB多肽是可溶性 ActRIIB多肽。本文所用術(shù)語"可溶性ActRIIB多肽" 一般是指包含ActRIIB蛋白的胞外 域的多肽，包括ActRIIB蛋白的任何天然存在的胞外域及其任何變體（包括突變體、片段和 肽模擬物形式）。用于本文提供的方法的可溶性ActRIIB多肽以比激活素A高的親和力與 ⑶Fll結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，用于本文提供的方法的可溶性ActRIIB多肽以比TGF-0超家族的任何其它成員高的親和力與GDFll結(jié)合?？赏ㄟ^將天然或改變的ActRIIB蛋白與 第二GDFll選擇性結(jié)合劑偶聯(lián)賦予天然或改變的ActRIIB蛋白針對GDFll的附加的特異 性。
[0099] 在具體的實(shí)施方案中，用于本文提供的方法的ActRIIB多肽不是具有SEQID N0:17、18、23-26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的氨基酸序列但是與這些氨基酸序 列的任一個有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的多肽。用于修 飾ActRIIB多肽的方法描述于例如美國申請公布號2009/0005308和2010/0068215和國際 專利申請公布號WO2006/012627和WO2010/019261(這些參考文獻(xiàn)的公開內(nèi)容以其整體 結(jié)合到本文中）。
[0100] 在某些實(shí)施方案中，用于本文提供的方法的ActRIIB多肽在ActRIIB前體氨基酸 序列的64位處具有精氨酸。
[0101] 已表明，ActRIIB胞外域C端的脯氨酸結(jié)（proline knot)的缺失降低受體對激活 素的親和力（參見例如Attisano等，Cell, 1992,68(1) :97-108)。相對于含有SEQ ID N0:28 的氨基酸 20-134 的 ActRIIB-Fc 融合蛋白（即 SEQ ID NO: 31)/'ActRIIB (20-134)-Fc"（其 包括脯氨酸結(jié)區(qū)和完全近膜域），含有SEQ ID NO: 28的氨基酸20-119的ActRIIB-Fc融合 蛋白（即SEQ ID N0:32)，"ActRIIB(20-119)-Fc"與⑶F-Il和激活素的結(jié)合減弱。然而， 相對于ActRIIB的未截短的胞外域，含有SEQ ID NO: 28的氨基酸20-129的ActRIIB-Fc融 合蛋白，"ActRIIB(20-129)-Fc"保持相似但略降低的活性，即使脯氨酸結(jié)區(qū)被破壞。因此， 預(yù)期包含止于 SEQ ID NO: 28 (或 SEQ ID NO: 16)的氨基酸 134、133、132、131、130 和 129 的 胞外域的ActRIIB多肽全部是有活性的，但是止于氨基酸134或133的構(gòu)建體可能是有最 高活性的。類似地，預(yù)期殘基129-134任一個的突變不會大大幅改變配體結(jié)合親和力，正如 SEQ ID N0:28的P129和P130突變基本上不降低配體結(jié)合所表明的一樣。因此，用于本文所 述方法和組合物的ActRIIB多肽可早在SEQ ID NO: 28 (或SEQ ID NO: 16)的氨基酸109 (即 最后的半胱氨酸）結(jié)束，然而，預(yù)期結(jié)束于SEQ ID NO: 28 (或SEQ ID NO: 16)的氨基酸位置 109和119處或之間的形式的配體結(jié)合能力降低。
[0102] 在某些實(shí)施方案中，SEQ ID NO: 16和SEQ ID NO: 28的氨基酸29表示ActRIIB前 體序列中的初始半胱氨酸。預(yù)期始于SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 28的N端的氨基酸29 或在這些氨基酸位置之前的ActRIIB多肽，可保持配體結(jié)合活性。SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 28的24位丙氨酸至天冬酰胺突變引入N-聯(lián)糖基化序列而不明顯影響配體結(jié)合。這證 實(shí)了信號切割肽和半胱氨酸交聯(lián)區(qū)之間的區(qū)域（對應(yīng)于SEQ ID NO: 16或SEQ ID N0:28的 氨基酸20-29)的突變是完全容許的。具體地說，始于SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 28的氨 基酸位置20、21、22、23和24的ActRIIB多肽可保持活性，還預(yù)期始于SEQ ID NO: 16或SEQ 1〇勵:28的氨基酸位置25、26、27、28和29的八(^1?118多肽保持活性。始于5￡0 1〇勵：16 或SEQ ID NO:28的氨基酸位置22、23、24或25的ActRIIB多肽可具有最大活性。
[0103] 在某些實(shí)施方案中，待用于本文所述方法和組合物的ActRIIB前體蛋白（即SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO:28)的活性部分（即ActRIIB多肽）一般可包含SEQ ID NO: 16或 SEQ ID NO: 28的氨基酸29-109,這類ActRIIB多肽可始于例如對應(yīng)于SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 28的氨基酸19-29的任一個的殘基和終于對應(yīng)于SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 28的 氨基酸109-134的任一個的位置。本文所包括的ActRIIB多肽的具體實(shí)例包括始于SEQ ID NO: 16 或 SEQ ID NO: 28 的 19-29、20-29 或 21-29 的氨基酸位置和終于 SEQ ID NO: 16 或 SEQ ID N0:28的119-134、119-133或129-134U29-133的氨基酸位置的多肽。本文所包括的 ActRIIB多肽的其它具體實(shí)例包括始于SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 28的20-24(或21-24 或 22-25)的氨基酸位置和終于 SEQ ID NO: 16 或 SEQ ID NO:28 的 109-134(或 109-133)、 119-134(或119-133)或129-134(或129-133)的氨基酸位置的多肽。還考慮了落入這些范 圍的變異ActRIIB多肽，特別是與SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 28的相應(yīng)部分有至少80%、 85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%序列同一性或序列同源性 的多肽。
[0104] 例如，截短形式的ActRIIB包括具有氨基酸20-119、20-128、20-129、20-130、 20-131、20-132、20-133、20-134、20-131、21-131、22-131、23-131、24-131 和 25-131 的多 肽，其中氨基酸位置是指SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 28中的氨基酸位置。
[0105] 其它示例性的截短形式的ActRIIB包括（i)始于SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 28 的氨基酸21-29的任一個（任選始于SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO:28的22-25)的氨基酸 和終于SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO:28的氨基酸109-134的任一個的多肽；（ii)始于SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO:28的氨基酸20-29的任一個（任選始于SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO:28的22-25)和終于SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO:28的氨基酸109-133的任一個的多 肽；（iii)始于SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO:28的氨