硫氧還蛋白-1的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切地說是硫氧還蛋白作為潛在的新的藥物能夠起到抵抗嗎啡成癮的作用。
【背景技術(shù)】
[0002]毒品成癮一直是一個(gè)世界性的難題，至今仍未從根本上找到毒品成癮的有效治療途徑，因此，毒品使用仍然是一個(gè)世界性的問題。成癮行為是一種對能導(dǎo)致成癮藥物的依賴，其核心行為特征是強(qiáng)迫性用藥和強(qiáng)迫性覓藥行為，這與成癮藥物使用后所產(chǎn)生的欣快感有關(guān)。而嗎啡(morphine, Mor)是臨床上經(jīng)常使用的鎮(zhèn)藥物，屬于阿片類受體激動劑，長期服用無論從身體還是心理上都會產(chǎn)生嚴(yán)重的依賴性。阿片類毒品的作用是由于藥物阻斷了多巴胺被重新攝取回細(xì)胞的通路，從而產(chǎn)生相對多的多巴胺，使人產(chǎn)生興奮感。而苯丙胺類毒品例如甲基苯丙胺，它可以促進(jìn)多巴胺神經(jīng)元末端DA的釋放，引起濫用者對苯丙胺類興奮劑產(chǎn)生精神依賴目前，與嗎啡藥物成癮的分子機(jī)理截然不同。嗎啡戒毒藥物主要有包括:阿片受體激動劑，如美沙酮，訂本諾菲等；非阿片受體激動劑，如可樂定；阿片受體拮抗劑，如納洛酮等。但這些藥物作用成本高、副作用大，并且作用效果反復(fù)，不能夠從根本上解決嗎啡成癮問題。所以尋找新的嗎啡成癮的戒斷藥物具有極其重要的意義。
[0003]硫氧還蛋白-1 (th1redoxin-1, Trx-1)是一種普遍存在于原核生物和真核生物中的小分子蛋白質(zhì)，它與硫氧還蛋白還原酶、NADPH組成了細(xì)胞內(nèi)主要的氧化還原系統(tǒng)，其活性位點(diǎn)序列為-Cys-Gly-Pro-Cys-，硫氧還蛋白通過活性位點(diǎn)的兩個(gè)Cys之間的二硫鍵和巰基的相互轉(zhuǎn)變來實(shí)現(xiàn)其氧化還原功能。根據(jù)表達(dá)部位的不同，硫氧還蛋白分為3類:硫氧還蛋白-1，硫氧還蛋白-2，硫氧還蛋白-3。硫氧還蛋白-1是細(xì)胞內(nèi)一種有效的抗氧化劑，能保護(hù)細(xì)胞、減輕氧化應(yīng)激所致的損傷。維持機(jī)體內(nèi)氧化還原平衡的重要的標(biāo)志性蛋白(Matsuo Y, Yodoi J.Extracellular th1redoxin: A therapeutic tool to combatinflammat1n [J].Cytokine Growth Factor Rev, 2013, 24(4):345-353)。硫氧還蛋白-1是生物體所必須的基因，如果選擇性地敲除小鼠的硫氧還蛋白-1基因，小鼠則早期胚胎致死，不能存活(Matsui M., Oshima M., Oshima H., Takaku K., Maruyama T., YodoiJ., and Taketo Μ.M.Early embryonic lethality caused by targeted disrupt1nof the mouse th1redoxin gene.Dev.B1l.1996, 178: 179-185)。硫氧還蛋白-1 轉(zhuǎn)基因小鼠表現(xiàn)出對氧化應(yīng)激耐受增加，與野生型動物相比，壽命延長(Mitsui A, HamuroJ, Nakamura H, et al.0verexpress1n of human th1redoxin in transgenic micecontrols oxidative stress and life span[J].Ant1xidants and Redox Signalling,2002, 4(4): 693-696 ； Perez VI, Cortez LA, Lew CM, et al.Th1redoxin Ioverexpress1n extends mainly the earlier part of life span in mice [J].Journals of Gerontology Series A B1logical Sciences and Medical Sciences，2011，66(12): 1286-1299)，而硫氧還蛋白-1是否可以作為嗎啡成癮的戒斷方法尚未見報(bào)導(dǎo)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供硫氧還蛋白-1在制備抵抗嗎啡成癮中的新用途，即為嗎啡成癮的預(yù)防和治療發(fā)現(xiàn)潛在的靶點(diǎn)，并以此為基點(diǎn)應(yīng)用于嗎啡成癮治療。
[0005]本發(fā)明所使用的硫氧還蛋白-1高表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠在抵抗嗎啡成癮中也是第一次應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明所述應(yīng)用硫氧還蛋白-1高表達(dá)小鼠對嗎啡所致的條件性位置偏好有抵抗作用，因此，硫氧還蛋白-1高表達(dá)具有抵抗嗎啡成癮作用，同時(shí)也為毒品成癮的治療提供新的治療靶點(diǎn)。
[0007]本發(fā)明同時(shí)也發(fā)現(xiàn)硫氧還蛋白-1高表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠可以抵抗嗎啡所致體重的降低。
[0008]本發(fā)明提供了硫氧還蛋白-1的一種新用途，即硫氧還蛋白-1在抵抗嗎啡成癮中的應(yīng)用。結(jié)果表明:利用黑白箱實(shí)驗(yàn)裝置對各組小鼠進(jìn)行條件性位置偏愛訓(xùn)練，發(fā)現(xiàn)野生型嗎啡組小鼠對產(chǎn)生了對位置偏愛性，也就是說對嗎啡產(chǎn)生了成癮性；而硫氧還蛋白-1高表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠能夠拮抗嗎啡所引起的位置偏愛行為。因此，硫氧還蛋白-1的高表達(dá)可用于阿片類毒品成癮的預(yù)防及治療。
[0009]由于硫氧還蛋白-1在預(yù)防及治療嗎啡成癮中的應(yīng)用是發(fā)明人的首次發(fā)現(xiàn)，因此，無論是硫氧還蛋白-1單獨(dú)使用還是活性成分制成的藥劑，均在本專利的保護(hù)范圍之內(nèi)。與目前藥物成癮研宄相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):(I)療效顯著；(2)安全性高，無成癮性；
(3)更加明確的靶向性。
[0010]本發(fā)明通過下列實(shí)施方式證明了硫氧還蛋白的高表達(dá)表能用于阿片類毒品藥物成癮的作用，但不僅限于這些實(shí)施例子。
【附圖說明】
[0011]圖1是本發(fā)明硫氧還蛋白-1高表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠抵抗嗎啡所引起的位置偏愛行為的實(shí)驗(yàn)分析結(jié)果；
圖2是本發(fā)明硫氧還蛋白-1高表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠抵抗嗎啡所引起的體重變化的實(shí)驗(yàn)分析結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0012]下面描述本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】，所用方法如無特別說明均為常規(guī)方法。
[0013]1、實(shí)驗(yàn)動物:SPF級C57BL/6小鼠，雄性，6-7周齡，體重22_25g，由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供；硫氧還蛋白高-1表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠，雄性，6-7周齡，體重22-25g，廣州賽業(yè)生物科技有限公司；小鼠單籠隔離飼養(yǎng)，飼喂專用飼料，自由飲食和飲水。
[0014]2.藥品:鹽酸嗎啡注射液(東北制藥集團(tuán)公司沈陽第一制藥廠)。
[0015]實(shí)施例1:硫氧還蛋白轉(zhuǎn)基因高表達(dá)小鼠拮抗嗎啡所引起的位置偏愛行為
位置偏愛實(shí)驗(yàn)裝置是由兩個(gè)大小完全相同的盒子組成(每個(gè)盒子大小為15 X 15 X 30cm)，中間有一個(gè)可關(guān)閉的洞口。兩個(gè)盒子分別為白色、光滑地板和黑色、顆粒粗糙地板。小鼠分成4組(每組9只):對照組(saline)、嗎啡組(Mor)、硫氧還蛋白-1高表達(dá)轉(zhuǎn)基因組(TG)和硫氧還蛋白-1高表達(dá)轉(zhuǎn)基因加嗎啡組(Mor+TG)。首先將四組小鼠放入位置偏愛實(shí)驗(yàn)裝置，在兩盒子間自由活動，適應(yīng)2天，第3天，記錄15 min小鼠在黑盒子中的時(shí)間，記錄小鼠體重。第5，7，9，11天，每組小鼠腹腔注射生理鹽水，放入黑盒子中15 min;第4，6，8，10天Mor組和Mor+TG組腹腔注射嗎啡(20 mg/kg), saline組和TG組腹腔注射生理鹽水后，放入白盒子中15 min ;第12天，打開洞口，使小鼠自由運(yùn)動，記錄15 min內(nèi)小鼠在白盒子中的時(shí)間，并記錄小鼠體重；
圖1結(jié)果顯示，Mor組小鼠經(jīng)嗎啡注射后，會對白盒子產(chǎn)生偏愛行為(知< 0.05，與saline組小鼠對比)；而Mor+TG組小鼠對白盒子產(chǎn)生偏愛行為降低(*/?< 0.05，與Mor組小鼠對比)；圖2結(jié)果顯不，Mor組小鼠經(jīng)嗎啡注射后體重顯著降低(*/?< 0.05，與saline組小鼠對比)；而Mor+TG組小鼠抵抗了嗎啡所致小鼠體重的降低。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.硫氧還蛋白-1在制備抵抗嗎啡成癮藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了硫氧還蛋白-1的新用途，即在制備抵抗嗎啡成癮藥物中的應(yīng)用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示硫氧還蛋白-1高表達(dá)具有抵抗嗎啡成癮作用，同時(shí)也為毒品成癮的治療提供新的治療靶點(diǎn)，為藥物成癮的預(yù)防和治療提供新的方法。
【IPC分類】A61P25-36, A61K38-44
【公開號】CN104873961
【申請?zhí)枴緾N201510234273
【發(fā)明人】白潔, 李翔, 周小爽
【申請人】昆明理工大學(xué)
【公開日】2015年9月2日
【申請日】2015年5月11日