一種急進高原實地大鼠缺氧模型的構(gòu)建方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學動物模型研宄領(lǐng)域，尤其涉及一種急進高原實地大鼠缺氧模型的 構(gòu)建方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 中國高原地域遼闊，每年因工作、旅游從內(nèi)地前往高原地區(qū)的人數(shù)超過1000萬人 /次，而高原惡劣自然環(huán)境，嚴重影響到進入高原人群的身體健康。據(jù)統(tǒng)計平原人快速進入 到海拔2500m以上地區(qū)，60~90%的人會發(fā)生急性高原病，從而制約了高原地區(qū)國民經(jīng)濟的 發(fā)展。
[0003] 急性高原病，即機體快速進入到高原地區(qū)（醫(yī)學上的高原指在海拔2500m以上的 地區(qū)，青海標準）或久居高原進入到更高海拔地區(qū)，在數(shù)小時內(nèi)發(fā)病，出現(xiàn)頭痛、頭暈、心悸、 胸悶、氣促、乏力、睡眠障礙，重者出現(xiàn)惡心、嘔吐、紫紺、少尿或血尿等癥狀。一般無特殊重 要體征，常見有呼吸加深加快，心率加快，面色蒼白，肢端發(fā)涼，少數(shù)患者血壓輕度異常、顏 面或/和四肢水腫，經(jīng)過在高原短期適應或?qū)ΠY治療，癥狀及體征顯著減輕或消失，機體可 迅速恢復正常(高鈺琪主編，高原軍事醫(yī)學，重慶出版社（2005) 250-276)。
[0004] 目前，急性高原反應的發(fā)病機理尚不清楚，這也是制約高原反應合理用藥及相關(guān) 藥物研發(fā)的重要原因。當機體快速暴露在低壓缺氧環(huán)境中時，機體會出現(xiàn)一系列生理生化 反應，如血氣、生化指標及組織器官結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生變化。因此，亟需建立一種符合高原缺 氧癥狀的模型，以便分析機體進入低壓缺氧環(huán)境后發(fā)展成為急性高原癥狀的病理生理情 況，從而有利于合理探宄急性高原疾病的發(fā)病機理，并為實地缺氧實驗的進行和抗缺氧藥 物的研發(fā)提供條件。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種簡單易行、模型制作成功率高、能真實反 應動物缺氧損傷情況的急進高原實地大鼠缺氧模型的構(gòu)建方法。
[0006] 為解決上述問題，本發(fā)明所述的一種急進高原實地大鼠缺氧模型的構(gòu)建方法，包 括以下步驟： ⑴在高原低壓低氧模擬艙中模擬海拔3500米，通過對實驗大鼠進行跑臺實驗，篩選出 缺氧敏感型大鼠； ⑵隨機選取所述缺氧敏感型大鼠，并采用急進高原方式放入高原實驗場； ⑶建立急進高原實地大鼠缺氧條件； ⑷在缺氧24~120h后鑒定所述缺氧敏感型大鼠的血氣生化指標和病理指標。
[0007] 所述步驟⑴中的實驗大鼠是指SPF級健康Wi star和/或SD雄性大鼠，體重 180~300g，6~7 周齡。
[0008] 所述步驟⑴中的篩選方法是指在高原低壓低氧模擬艙中模擬海拔3500米，將 15~100只實驗大鼠在速度10~20m/min、坡度5~20°C的條件下進行跑臺實驗，以實驗大鼠在 跑臺上的運動時間作為耐力評價標準，運動時間偏長的5~40只實驗大鼠作為耐受大鼠，運 動時間處于中間段的5~20只實驗大鼠作為不敏感型大鼠，運動時間偏短的5~40只實驗大 鼠作為敏感型大鼠。
[0009] 所述耐力評價標準的運動時間為30~540min。
[0010] 所述步驟⑵中的急進高原方式是指所述缺氧敏感型大鼠經(jīng)上海虹橋機場航空運 輸急進至蘭州中川機場后，立即改用恒溫箱式貨車轉(zhuǎn)運至青海省瑪多縣花石峽鎮(zhèn)，并于12 小時內(nèi)完成急進過程。
[0011] 所述步驟⑶中急進高原實地大鼠缺氧條件是指實地海拔2500~4300m，大氣壓 60. 2~75. 3KPa，溫度18~22°C，相對濕度28~55%，所述缺氧敏感型大鼠食用標準飼料，自由 飲用純凈水，實驗時間為24~120h。
[0012] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點： 1、本發(fā)明通過急進海拔4300m高原缺氧環(huán)境，建立了實驗大鼠缺氧大鼠模型，有效地 反映了實驗大鼠缺氧的真實情況，通過鑒定發(fā)現(xiàn)急進海拔4300m實地大鼠血氧飽和度降 低，動脈血氧分壓降低，動脈血乳酸升高，心、肝、腦、腎及肺出現(xiàn)不同程度的病理性損傷，形 成高原缺氧損傷的生理病理狀態(tài)。
[0013] ⑴所需材料 ①實驗動物 實驗所用大鼠為SPF級健康雄性Wistar大鼠，合格證編號為2007000525382,6~7周 齡，體重為180~220g。
[0014] ②實驗儀器 海王星500E手持式GPS儀(上海達賽導航設(shè)備有限公司），PHOX-plus-L便攜式動物 電解質(zhì)與血氣分析儀(美國Nova Biomedical有限公司），BX-3010全自動生化分析儀（日本 Sysmex醫(yī)用電子有限公司），YDS-30-80液氮罐（樂山東亞機電工貿(mào)有限公司）ASP-200S自 動脫水機、M 398419自動切片機、EG 1150H自動包埋機(德國萊卡有限公司），BX51光學顯 微鏡（日本Olympus有限公司），ZH-PT型計算機控制動物實驗跑臺（安徽正華生物儀器設(shè)備 有限公司）。
[0015] ③實驗試劑 0. 9%氯化鈉注射液(規(guī)格為500ml :4. 5g，辰欣藥業(yè)股份有限公司，批號為 1308270724)，10%水合氯醛溶液(規(guī)格為100mL/瓶，蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院，批號為130815)， 肝素鈉(規(guī)格為2ml :12500單位，南京新百藥業(yè)有限公司，批號為130618)，甲醛溶液(分析 純，規(guī)格為500ml/瓶，華北地區(qū)特種化學試劑開發(fā)中心，批號121109)。
[0016] ⑵實驗方法 ①缺氧敏感型大鼠的篩選 在高原低壓低氧模擬艙中模擬海拔3500米，將50只大鼠（Wistar及SD)進行跑臺實 驗，速度15m/min，坡度15°C，測試大鼠的耐力情況，以大鼠在跑臺上的運動時間作為耐力 評價標準，運動時間偏長的20只大鼠作為耐受大鼠，運動時間處于中間段的10只大鼠作為 不敏感型大鼠，運動時間偏短的20只大鼠作為敏感型大鼠，耐受型和敏感型大鼠進行下一 步實驗。
[0017] ②實驗動物分組 將20只耐受型大鼠，按隨機挑出10只為正常對照組(蘭州，海拔：1500m，大氣壓 85. 3KPa，北煒36° V 15"，東經(jīng)103° 47' 11"，溫度20°C，相對濕度48%，以下簡稱"正 常組")，將20只敏感型大鼠，按隨機挑出10只為缺氧模型組(海拔：4300m，大氣壓60. 2KPa， 北煒35° 6' 57.3"，東經(jīng)98° 5廣57.1"，溫度16°C，相對濕度28%。以下簡稱"模型 組")。
[0018] ③急進高原實地實驗大鼠缺氧條件的建立 實驗用大鼠飼養(yǎng)于平原(第二軍醫(yī)大學藥學院動物房)。實驗開始時，正常組大鼠放 置于動物實驗室中，模型組大鼠經(jīng)上海虹橋機場航空運輸急進至蘭州中川機場后，立即改 用恒溫箱式貨車轉(zhuǎn)運至青海省瑪多縣花石峽鎮(zhèn)(實地海