小RNA，其能夠調(diào)控mRNA的生產(chǎn)利用。成熟miRNA為與靶序 列互補(bǔ)的長度約21-23個核苷酸的單鏈RNA分子，且能與靶RNA序列雜交以抑制其翻譯。 miRNA本身由從DNA轉(zhuǎn)錄但不翻譯成蛋白質(zhì)的基因編碼（非編碼RNA);可替代地，它們由稱 為pri-miRNA的初級轉(zhuǎn)錄本加工成稱為pre-miRNA的短的莖-環(huán)結(jié)構(gòu)，并最終加工成功能 性miRNA。成熟miRNA分子與一種或多種信使RNA (mRNA)分子部分互補(bǔ)，且它們的主要功能 為下調(diào)基因表達(dá)。
[0047] 在一個實例中，如本文所述的方法進(jìn)一步包括在施用包含miR-198抑制劑和/或 FSTLl多肽的組合物的同時或之前或之后施用TGF-β 1。在一個實例中，miR-198抑制劑和 FSTLl多肽可彼此同時或單獨施用。
[0048] "miR-198抑制劑"是指任意分子（如非選擇或選擇的），其失活和/或下調(diào) miR-198的活性。該抑制劑可為小分子、反義核酸、小干擾RNA或微RNA類化合物。miR-198 抑制劑可為直接抑制劑使其與miR-198或與編碼miR-198的核酸相互作用?？蛇x地， miR-198抑制劑可為間接抑制劑，其在調(diào)控通路中與miR-198的上游或下游相互作用，且 不與miR-198或不與編碼miR-198的核酸相互作用。在一個實例中，miR-198抑制劑可為 抗-miR-198、miR-198抑制劑序列的肽核酸（PM)衍生物或針對抑制劑的種子序列的小鎖 核酸（LNA)抗-miR。
[0049] 如本文使用的術(shù)語"肽核酸（PNA) "是指具有偽肽骨架的DNA模擬物。在一個實例 中，如本文使用的PNA可能能夠與miR-198形成非常穩(wěn)定的雙螺旋結(jié)構(gòu)，由此競爭性抑制細(xì) 胞中miR-198的功能。
[0050] 如本文使用的術(shù)語"小LNA抗-miRs "指不易見到的RNA，是一種修飾的RNA核 苷酸。在一個實例中，小LNA轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中產(chǎn)生同時發(fā)生的在共享同一種子的家族內(nèi)的 miRNA(例如miR-198)的抑制，伴隨直接靶標(biāo)的上調(diào)。在一個實例中，小LNA的轉(zhuǎn)染系統(tǒng)地 顯示長期miRNA沉默。
[0051] 在一個實例中，miR-198抑制劑可具有下列序列：5' -GAACCUAUCUCCCCUCUGGACC-3 '（SEQ ID NO:l)，GAACCTATCTCCCCTCTGGACC(SEQ ID NO:9)或GAACCUAUCUCCCCUCUGGACC(SEQ ID NO: 10)。在一個實例中，miR-198 抑制劑可與序列 SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:9 或 SEQ ID NO: 10具有80%或以上、85%或以上、90%或以上、95%或以上或99%或以上的同一性。
[0052] 在另一實例中，miR-198抑制劑可為未修飾的或修飾的。在一個實例中，miR-198 抑制劑可用至少一個、至少兩個、至少三個、或所有下列修飾來修飾，例如1)全部或部分 2' -0-甲氧基乙基修飾，2)全部或部分硫代磷酸酯修飾，3)miR-198抑制劑的3'端的膽甾 醇修飾，4)核苷酸的全部或部分鎖核酸（LNA)修飾。
[0053] 在一個實例中，miR-198抑制劑可增加或?qū)е峦ǔＳ蒻iR-198下調(diào)的蛋白的過 表達(dá)。在一個實例中，由miR-198下調(diào)的蛋白包括，但不限于，尿激酶型纖溶酶原激活 劑（PLAU)、參與細(xì)胞外基質(zhì)組分降解的絲氨酸蛋白酶，參與肌動蛋白聚合的透明同源物 (diaphanous homolog) I (DIAPHl)，和基底膜蛋白層粘連蛋白5的必要組分---層粘連蛋白 γ2鏈（LAMC2)。在一個實例中，愈合傷口的方法可包括施用選自以下蛋白的任一種：尿激 酶型纖溶酶原激活劑（PLAU)、透明同源物I(DIAPHl)和層粘連蛋白γ2鏈（LAMC2)。
[0054] 在一個實例中，F(xiàn)STLl多肽可具有序列SEQ ID NO:2。在一個實例中，F(xiàn)STLl多肽 可與序列SEQ ID N0:2具有80%或以上、85%或以上、90%或以上、95%或以上或99%或以 上的同一性。在一個實例中，SEQ ID N0:2為如下：
[0055]
【主權(quán)項】
1. 促進(jìn)傷口愈合或傷口閉合的方法，其中所述方法包括施用miR-198抑制劑和/或卵 泡抑素樣-UFSTL1)多膚。
2. 治療慢性皮膚傷口的方法，其中所述方法包括施用miR-198抑制劑和/或卵泡抑素 樣-l(FSTLl)多膚。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的方法，其還包括在施用miR-198抑制劑和/或FSTL1多膚 的同時或之前或之后施用TGF-0 1。
4. 如前述權(quán)利要求任一項所述的方法，其中在miR-198抑制劑和卵泡抑素 樣-1 (FSTL1)多膚一起使用的情況下，則它們彼此同時或單獨施用。
5. 如前述權(quán)利要求任一項所述的方法，其中慢性皮膚傷口為患有或疑似患有糖尿病的 患者的傷口。
6. 如前述權(quán)利要求任一項所述的方法，其中慢性皮膚傷口為糖尿病性潰瘍。
7. 如前述權(quán)利要求任一項所述的方法，其中施用經(jīng)由全身或局部施用。
8. 如權(quán)利要求7所述的方法，其中施用經(jīng)由局部施用。
9. 如前述權(quán)利要求任一項所述的方法，其中所述miR-198抑制劑和FSTL1多膚W約 10 y g至300mg/kg體重的量彼此獨立地施用。
10. 如前述權(quán)利要求任一項所述的方法，其中TGF- M W約10 y g至300mg/kg體重的 量施用。
11. 如前述權(quán)利要求任一項所述的方法，其中所述miR-198抑制劑選自抗-miR-198、 miR-198抑制劑序列的膚核酸（PNA)衍生物和針對所述抑制劑的種子序列的小LNA 抗-mlR。
12. 如前述權(quán)利要求任一項所述的方法，其中所述miR-198抑制劑具有序列；5'-GAACC UAUCUCCCCUCUGGACC-3' （SEQ ID NO:l)。
13. 如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述抑制劑是未修飾的。
14. 如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述抑制劑具有選自W下的至少一個修飾；1)全 部或部分2' -0-甲氧基己基修飾，2)全部或部分硫代磯酸醋修飾，3)所述miR-198抑制劑 的3'端的膽醬醇修飾，和4)核巧酸的全部或部分鎖核酸（LNA)修飾。
15. 鑒定樣品中慢性皮膚傷口的方法，其中所述方法包括： 分析miR-198的表達(dá)水平，其中miR-198的表達(dá)或表達(dá)增加表明所述傷口為慢性皮膚 傷口訊/或 分析FSTL1基因的表達(dá)和/或FSTL1多膚的水平，其中所述FSTL1基因的表達(dá)減少或 無表達(dá)和/或所述FSTL1多膚的水平降低或缺失表明所述傷口為慢性皮膚傷口。
16. 如權(quán)利要求15所述的方法，其中miR-198的表達(dá)增加相對于對照表達(dá)水平來測定， 所述對照表達(dá)水平來自不是慢性皮膚傷口的一個或多個傷口的樣品。
17. 如權(quán)利要求15所述的方法，其中FSTL1的表達(dá)減少或FSTL1多膚的存在減少相對 于從不是慢性皮膚傷口的一個或多個傷口獲得的對照表達(dá)或多膚水平來測定。
18. 如權(quán)利要求15至17任一項所述的方法，其中miR-198、FSTL1基因和FSTL1多膚 的表達(dá)在傷口邊緣的表皮的角化細(xì)胞中測量。 19. miR-198和/或FSTL1多膚作為用于鑒定慢性皮膚傷口的生物標(biāo)記物的用途。 20. miR-198抑制劑和/或FSTL1多膚在制備用于治療慢性皮膚傷口的藥物中的用途。 21. miR-198抑制劑和/或FSTLl多膚在制備用于促進(jìn)傷口愈合或傷口閉合的藥物中的 用途。
22. 如權(quán)利要求20所述的用途，其中所述藥物還包含TGF-0 1。
23. 藥物組合物，其包含 a) miR-198 抑制劑和 TGF-0 1 ;或 b) 所述miR-198抑制劑和FSTL1多膚；或 C)所述FSIl多膚和TGF- M ;或 d)所述miR-198抑制劑和TGF-0 1 W及所述FSTL1多膚。
【專利摘要】公開了一種促進(jìn)傷口愈合或傷口閉合的方法。所述方法包括施用miR-198抑制劑和/或卵泡抑素樣-1(FSTL1)多肽。還公開了治療慢性皮膚傷口的方法、鑒定不愈合傷口的方法、用途和包含miR-198抑制劑和/或卵泡抑素樣-1(FSTL1)多肽的藥物組合物。
【IPC分類】A61K38-17, A61P17-02, A61K31-7088
【公開號】CN104684563
【申請?zhí)枴緾N201380049696
【發(fā)明人】普拉哈·薩姆帕斯
【申請人】科技研究局(A*Star)
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2013年7月29日
【公告號】EP2877186A1, WO2014017987A1