魚(yú)腥草在制備預(yù)防和治療電離輻射損傷藥物方面的應(yīng)用
【專(zhuān)利說(shuō)明】魚(yú)腥草在制備預(yù)防和治療電離輻射損傷藥物方面的應(yīng)用
[0001] 涉及領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體在于從植物魚(yú)腥草中提取而來(lái)的有效成分在制備用于 預(yù)防和治療電離輻射造成的相關(guān)損傷救治和疾病治療方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0003] 隨著全球核事業(yè)的蓬勃發(fā)展，核技術(shù)已在核電站、航天事業(yè)、國(guó)防和生物醫(yī)藥等各 個(gè)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，人類(lèi)接觸電離輻射并導(dǎo)致?lián)p傷的機(jī)會(huì)增加，同時(shí)隨著世界核安全形勢(shì)緊 張帶來(lái)的核戰(zhàn)爭(zhēng)和核恐怖事件隱憂，電離輻射造成的機(jī)體損傷（簡(jiǎn)稱(chēng)為輻射損傷）的防護(hù) 與救治正在受到越來(lái)越多的重視。
[0004] 另一方面，惡性腫瘤的發(fā)病率和患者數(shù)量近年來(lái)一直呈持續(xù)上升的趨勢(shì)，放射治 療作為主要治療手段之一，起著不可或缺的作用，但是高劑量輻射照射難免會(huì)導(dǎo)致的腫瘤 周邊正常組織和器官乃至全身的急性輻射損傷，輻射損傷帶來(lái)的副反應(yīng)嚴(yán)重地限制了放射 治療在腫瘤治療中的廣泛應(yīng)用，也明顯影響了腫瘤患者放射治療療效和治療后的生活質(zhì) 量。
[0005] 目前投放市場(chǎng)的輻射損傷救治相關(guān)藥物主要有：含硫化合物、激素類(lèi)、細(xì)胞因子類(lèi) 以及中草藥等，它們分別存在各自的固有缺陷：比如含硫化合物普遍副作用較大，氨磷汀 (又名amifostine)作為此類(lèi)化合物的代表是目前公認(rèn)的防護(hù)效果最好的化合物，是國(guó)際 管理機(jī)構(gòu)通過(guò)的第一個(gè)有選擇性的廣譜細(xì)胞保護(hù)劑，但是半衰期極短（7分鐘）和價(jià)格昂貴 (國(guó)內(nèi)醫(yī)療市場(chǎng)價(jià)格在400-500元/支）限制了它的應(yīng)用；而激素類(lèi)藥物對(duì)輻射損傷的防 治主要是對(duì)骨髓有核細(xì)胞、造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞，此類(lèi)藥物對(duì)性器官和生殖系統(tǒng)的影響限 制了它的廣泛使用；細(xì)胞因子類(lèi)藥物例如白介素類(lèi)、集落刺激因子類(lèi)藥物能夠緩解和救治 輻射導(dǎo)致的骨髓造血功能系統(tǒng)損傷，但是其輻射防護(hù)作用與給藥時(shí)間密切相關(guān)（在用于預(yù) 防和救治的醫(yī)療實(shí)踐中，此類(lèi)藥物對(duì)醫(yī)護(hù)檢測(cè)水平和關(guān)注程度要求高），存在明顯的致炎作 用，且價(jià)格昂貴，難以常溫保存；中草藥類(lèi)抗輻射成分主要有酚類(lèi)、多糖類(lèi)、天然黃酮類(lèi)，具 有活性成分不明確、低毒等特點(diǎn)，經(jīng)多年研究，至今無(wú)上市或待上市的同類(lèi)藥物。
[0006] 本發(fā)明涉及植物魚(yú)腥草提取物的新用途，稱(chēng)為魚(yú)腥草提取物，具有清熱解毒，消癰 排膿作用。但迄今為止，對(duì)魚(yú)腥草在制備用于預(yù)防和治療電離輻射損傷救治和腫瘤放射治 療輔助藥物方面的應(yīng)用尚未見(jiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供魚(yú)腥草的新用途。
[0008] 本發(fā)明所提供的魚(yú)腥草的新用途在于：制備用于預(yù)防和治療電離輻射損傷救治和 腫瘤放射治療輔助藥物方面的應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明所述的電離輻射損傷包括致死劑量照射、亞致死劑量和低劑量照射損傷， 也包括腫瘤放射治療所產(chǎn)生的輻射損傷。
[0010] 本發(fā)明采用市場(chǎng)現(xiàn)有魚(yú)腥草注射液，也采用了自行提取的魚(yú)腥草水提取物。本發(fā) 明提供魚(yú)腥草的新用途，其使用形式，可根據(jù)臨床需要，加入相應(yīng)輔料，以片劑、丸劑、膠囊、 懸浮液、溶液、糖漿、注射劑、溶劑、霜?jiǎng)?、軟膏、噴霧劑等制劑形式存在。
[0011] 本發(fā)明所提供的魚(yú)腥草新用途的使用劑量在l-l〇g/Kg體重（人），但不限于此范 圍。
[0012] 本發(fā)明所采用的是魚(yú)腥草全草、魚(yú)腥草根部、炮制品或其提取物為活性成分。所述 提取物為水提取物或有機(jī)溶劑提取物。有機(jī)溶劑是指乙醇或甲醇。其中，所述乙醇的濃度 為20% -85% v/v，優(yōu)選范圍為45% -55% v/v。所述甲醇的濃度為20% -85% v/v，優(yōu)選范 圍為 45% -55% v/v。
[0013] 所述水提取物的制備方法為以魚(yú)腥草全草、魚(yú)腥草根部至少一種為原料，粉碎，加 水浸泡，取浸泡液，干燥即得；其中，優(yōu)選加水量為原料的1-10倍量；進(jìn)一步優(yōu)選加水量為 原料的2-5倍量；
[0014] 所述有機(jī)溶劑提取物的制備方法為以魚(yú)腥草全草、魚(yú)腥草根部至少一利為原料， 粉碎，加有機(jī)溶劑浸泡，取浸泡液，干燥即得；其中，有機(jī)溶劑優(yōu)選甲醇或乙醇；優(yōu)選乙醇或 甲醇添加量為原料的1-10倍量；進(jìn)一步優(yōu)選乙醇或甲醇添加量為原料的2-5倍量。
[0015] 本發(fā)明的目的和優(yōu)點(diǎn)將通過(guò)以下優(yōu)先實(shí)施例的非限制性說(shuō)明進(jìn)行圖示和解釋?zhuān)@ 些實(shí)施例是參照附圖作為例子給出的。
【附圖說(shuō)明】
[0016] 圖1魚(yú)腥草顯著提高C57鼠致死劑量照射（x射線照射：圖la，Y射線照射：圖 lb)后存活天數(shù)。
[0017] 圖2魚(yú)腥草顯著提高C57鼠亞致死劑量照射（9Gy Y射線）照射后30天生存率。
[0018] 圖3魚(yú)腥草對(duì)低劑量（5Gy Y射線）照射造成的輻射損傷的造血保護(hù)作用。
[0019] 圖4魚(yú)腥草對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的輻射保護(hù)作用（顯微鏡下細(xì)胞圖，1.對(duì)照組； 2.照射組；3.魚(yú)腥注射液1 iU/ml培養(yǎng)液；4.照射+魚(yú)腥注射液1 iU/ml培養(yǎng)液）。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 實(shí)施例一
[0021] 單次致死劑量（13Gy x射線/ Y射線）照射造成的輻射損傷救治
[0022] 魚(yú)腥草注射液，可參考已公開(kāi)的發(fā)明專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)或相關(guān)文獻(xiàn)自行制備，也可購(gòu)買(mǎi) 于醫(yī)藥市場(chǎng)，給藥方式為腹腔注射，用藥劑量為200mg/Kg、400mg/Kg體重（鼠）。
[0023] x射線照射裝置X-Rad RS-2000輻照儀，電壓160KV，波段射線能量為50KeV，劑量 率 1. 01Gy/min。
[0024] Y射線照射裝置137Cs輻照儀，劑量率0. 5Gy/min。
[0025] C57BL/6小鼠，雌雄各半，體重18-20g，合格證號(hào)SCXK(京）2012-0001，分組情況 為：不照射組、照射并給生理鹽水組、照射并給魚(yú)腥草組，每組10只。
[0026] 采用單次致死劑量13Gy全身照射，給藥方案為照射前30分鐘腹腔給藥，照射后立 即補(bǔ)充給藥一次，之后每24小時(shí)給藥一次，連續(xù)14天。
[0027] 檢測(cè)指標(biāo)：存活天數(shù)。
[0028] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1，魚(yú)腥草可顯著延長(zhǎng)致死劑量照射C57鼠的生存時(shí)間。
[0029] 實(shí)施例二
[0030] 亞致死劑量（9Gy Y射線）照射造成的輻射損傷救治
[0031] 藥品信息、動(dòng)物信息、輻照裝置和參數(shù)、給藥方式與實(shí)施例一相同。
[0032] 照射劑量為9Gy。
[0033] 檢測(cè)指標(biāo)：30天生存率。
[0034] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2,魚(yú)腥草可顯著提高亞致死劑量照射C57鼠的生存率。
[0035] 實(shí)施例三
[0036] 低劑量（5Gy Y射線）照射造成的輻射損傷的造血保護(hù)作用
[0037] 藥品信息、動(dòng)物信息、輻照裝置和參數(shù)、給藥方式與實(shí)施例一相同。
[0038] 照射劑量為5Gy。
[0039] 檢測(cè)指標(biāo)：體重、外周血計(jì)數(shù)、單側(cè)股骨計(jì)數(shù)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落形成單位、脾臟 指數(shù)、胸腺指數(shù)。
[0040] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖3,魚(yú)腥草可顯著緩解低劑量照射引起的動(dòng)物造血系統(tǒng)損傷。
[0041] 實(shí)施例四
[0042] 魚(yú)腥草對(duì)多種腫瘤細(xì)胞/正常細(xì)胞的輻射（Y射線）保護(hù)作用
[0043] 魚(yú)腥草注射液，河南省康華藥物股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z41021744,批號(hào) 13022801。
[0044] 輻照裝置和參數(shù)與實(shí)施例一相同。
[0045] 細(xì)胞系采用乳腺癌MCF-7細(xì)胞、乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞、肝癌H印G2細(xì)胞、肺癌 A549細(xì)胞、人胚腎HEK293細(xì)胞、人微血管內(nèi)皮HMEC-1細(xì)胞。
[0046] 實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
[0047] 1.細(xì)胞系及培養(yǎng)
[0048] 采用人肝癌IfepG2細(xì)胞、人肺癌A549細(xì)胞，分別用含10 % FBS (Gibico， REF10099-141)，含 100 ii g/ml 鏈霉素和 100U/ml 青霉素，高糖 DMEM(Hyclone，SH30243. 01B) 和PRMI1640(Hyclone，SH30809. 01B)培養(yǎng)，置于37°C，5% C02的恒溫培養(yǎng)箱中常規(guī)傳代培 養(yǎng)。
[0049] 2?藥物處理及照射
[0050] 細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，更換含不同濃度藥物的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，接受 不同劑量Y射線照射。
[0051] 3.克隆形成實(shí)驗(yàn)
[0052] 細(xì)胞照射后，按不同的照射劑量接種不同細(xì)胞數(shù)量接種到60mm培養(yǎng)皿。細(xì)胞連續(xù) 培養(yǎng)3周后用甲醇固定，加姬姆薩應(yīng)用液染色30分鐘，流水洗凈，計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)> 50的克隆 個(gè)數(shù)。通過(guò)克隆形成率PE=(對(duì)照組克隆數(shù)/實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)）X 100%和存活分?jǐn)?shù)=克隆 數(shù)八實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)XPE)計(jì)算克隆形成率和存活分?jǐn)?shù)。并按多靶單擊模型擬合繪制細(xì)胞 存活曲線。
[0053] 檢測(cè)指標(biāo)：IC5Q(殺死50%細(xì)胞的放射劑量）
[0054] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖4和表1，魚(yú)腥草可提高多種腫瘤細(xì)胞或正常細(xì)胞的輻射耐受劑量， 有一定的輻射保護(hù)作用。
[0055] 表1魚(yú)腥草對(duì)多種腫瘤細(xì)胞/正常細(xì)胞Y射線照射Y射線照射IC5(I的影響（Gy)
[0056]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 魚(yú)腥草在制備預(yù)防和治療電離輻射損傷救治藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述的電離輻射損傷救治包括但不限于單次致死 劑量照射造成的急性電離輻射損傷救治。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述的電離輻射損傷救治包括但不限于單次/多 次低劑量照射造成的造血系統(tǒng)損傷救治。
4. 魚(yú)腥草在制備腫瘤放射治療輔助藥物中的應(yīng)用。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述的腫瘤放射治療包括但不限于乳腺癌。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，名稱(chēng)為“魚(yú)腥草在制備預(yù)防和治療電離輻射損傷藥物方面的應(yīng)用”，公開(kāi)了魚(yú)腥草提取物在制備預(yù)防和治療電離輻射損傷藥物方面的應(yīng)用。本發(fā)明公開(kāi)了魚(yú)腥草提取物在細(xì)胞水平和動(dòng)物活體水平發(fā)揮輻射保護(hù)作用，并且在致死劑量、亞致死劑量以及低劑量輻射的廣泛劑量范圍下，均有保護(hù)作用，該提取物質(zhì)量穩(wěn)定，成本低廉，來(lái)源廣泛，可用于制備預(yù)防和治療電離輻射造成的相關(guān)損傷救治和疾病治療方面的藥物。
【IPC分類(lèi)】A61P39-00, A61K36-78, A61P35-00
【公開(kāi)號(hào)】CN104623044
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410858053
【發(fā)明人】樊賽軍, 賀欣
【申請(qǐng)人】中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所
【公開(kāi)日】2015年5月20日
【申請(qǐng)日】2014年12月30日