miR-127抑制劑在制抗炎和肺損傷保護(hù)藥物的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬生物醫(yī)學(xué)類技術(shù)領(lǐng)域，涉及miR-127抑制劑在制備抗炎和肺損傷保護(hù)藥 物的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 急性肺損傷以肺間質(zhì)中大量炎癥因子的釋放，炎癥細(xì)胞的聚集，纖維素沉積和肺 水腫為病理生理特征。失調(diào)的炎癥反應(yīng)引起組織的嚴(yán)重?fù)p傷和肺功能的持續(xù)惡化。現(xiàn)在科 學(xué)界對于急性肺損傷及其并發(fā)癥的起因還未有深入研宄，也沒有開發(fā)出有效的治療方法。 因此，急性肺損傷的死亡率至今高達(dá)40%。
[0003] microRNAs (miRNAs,小RNA)是一類長度在18-25個(gè)核甘酸的單鏈小RNA分 子，它主要通過與相關(guān)蛋白質(zhì)形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體（RNA-induced silencing complex，RISC)，抑制其靶基因的翻譯或者促進(jìn)靶基因 mRNA的降解，以實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)基因的 轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。這類小RNA分子的表達(dá)具有空間和時(shí)間上的特異性，對于細(xì)胞的增殖，凋亡， 分化以及器官的形成具有重要的調(diào)控意義。目前，miRNA的研宄發(fā)展十分迅速，隨著研宄手 段和方法的不斷進(jìn)步，已有成百上千種miRNA被發(fā)現(xiàn)（Murray PJ, Wynn TA. Protective and pathogenic functions of macrophage subsets. Nat Rev Immunol 2011;11:723-737; Wynn TA, Chawla A，Pollard JW. Macrophage biology in development, homeostasis and disease. Nature 2013 ；496:445-455 ；Sindrilaru A，Peters T，Wieschalka S et al. An unrestrained proinflammatory Ml macrophage population induced by iron impairs wound healing in humans and mice. J Clin Invest 2011 ;121:985-997)〇 miR-127 是 一具有重疊基因結(jié)構(gòu)的非編碼小RNA。研究顯示，miR-127在肺部發(fā)育、胚胎形成等方 面具有一定的調(diào)控作用（Martinez F0, Helming L，Gordon S. Alternative activation of macrophages:an immunologic functional perspective.Annu Rev Immunol 2009 ； 27:451-483)，抑制 miR-127 的表達(dá)能促進(jìn)肝癌發(fā)生（Gautier EL，Shay T，Miller J et al.Gene-expression profiles and transcriptional regulatory pathways that underlie the identity and diversity of mouse tissue macrophages. Nat Immunol 2012 ; 13:1118-1128)，并與彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤發(fā)生密切相關(guān)（Foster SL，Hargreaves DC, Medzhitov R. Gene-specific control of inflammation by TLR-induced chromatin modifications. Nature 2007 ；447:972-978)〇
[0004] 固有免疫是物種進(jìn)化和個(gè)體發(fā)育過程中形成的一系列防御體系，它作用無針對 性，與生倶來，因此又被稱為非特異性免疫應(yīng)答。天然免疫應(yīng)答是由能夠識(shí)別病原相關(guān)分 子模式（Pathogen-associated molecular Patterns，PAMPs)的受體所介導(dǎo)的，這些受體 統(tǒng)稱為模式識(shí)別受體（Pattern recognition receptors，PRRsh主要表達(dá)于樹突狀細(xì)胞 (dendritic cells，DC)和巨細(xì)胞表面的 Toll 樣受體（toll-like receptors，TLRs)正 是這一類重要的PRRs。此類受體最早是從果蠅體內(nèi)分離得到的，主要是與果蠅胚胎背、腹側(cè) 的發(fā)育和非特異性免疫反應(yīng)有關(guān)（Ivashkiv LB. Epigenetic regulation of macrophage polarization and function. Trends Immunol 2013 ;34:216-223)。所有的 TLRs 均屬于 I型跨膜蛋白，胞外區(qū)由18-31個(gè)氨基酸組成的富含亮氨酸的重復(fù)序列LRR(leucine rich repeats)組成，胞內(nèi)區(qū)約有200個(gè)氨基酸，與白介素 -I (interleukin-1, IL-1)受體胞內(nèi)區(qū) 相似，稱為TIR(Toll/IL-l rec印tor)區(qū)。它們可直接識(shí)別某些病原體或其產(chǎn)物所共有的 PAMPs，包括細(xì)菌細(xì)胞壁脂質(zhì)組分如脂多糖、脂肽，病原微生物蛋白組分如鞭毛蛋白，核酸如 單鏈或雙鏈RNA (核糖核苷酸）以及非甲基化CpG (胞嘧啶磷酸鳥苷）DNA (脫氧核糖核苷 酸）基序等。然后，激活下游髓樣分化因子（myeloid differentiation factor88，MyD88) 和 Toll 樣受體相關(guān)的干擾素活化子（Toll/IL-IR homology domain-containing adaptor inducing interferon_|3，TRIF)依賴信號(hào)通路，進(jìn)而激活絲裂原活化蛋白激酶 (mitogen-activated protein kinase，MAPK)和核轉(zhuǎn)錄因子 κ B抑制蛋白（I κ B, inhibitor of NF-κ B)等信號(hào)，最終激活免疫細(xì)胞并產(chǎn)生炎癥因子和I型干擾素，成為機(jī)體免疫 系統(tǒng)中抵御病原體入侵的首道屏障（Bartel DP.MicroRNAs:target recognition and regulatory functions. Cell2009 ； 136:215-233) 〇
[0005] 目前大量的研宄已經(jīng)顯示，miRNA在免疫反應(yīng)中發(fā)揮極其重要的作用。miRNA不 僅參與了免疫細(xì)胞的發(fā)育和分化，而且還對免疫反應(yīng)的起著調(diào)控作用。例如miR-181a 在造血干細(xì)胞的異位表達(dá)可增加 B淋巴細(xì)胞的生成，減少T淋巴細(xì)胞的生成，miR-181a 調(diào)節(jié)著 T、B 淋巴細(xì)胞的分化（O'Connell RM, Rao DS, Chaudhuri AA, Baltimore D. Physiological and pathological roles for microRNAs in the immune system. Nat Rev Immunol 2010 ;10:111-122)。脂多糖（lipopolysaccharide, LPS)可誘導(dǎo)上 調(diào)人類單核細(xì)胞中miR-146的表達(dá)，而表達(dá)升高的miR-146可通過其靶基因白介素 -I 受體相關(guān)激酶 l(interleukin_l receptor-associated kinase, IRAK-1)和腫瘤壞死 因子受體相關(guān)因子 6(TNF receptor-associated factor 6, TRAF6)負(fù)調(diào)節(jié) TLR4 誘導(dǎo) 的炎癥反應(yīng)(Lodish HF, Zhou B, Liu G, Chen CZ. Micromanagement of the immune system by microRNAs. Nat Rev Immunol 2008 ;8:120-130)。miR-147 與 miR-146 相似， 可誘導(dǎo)表達(dá)于小鼠的巨噬細(xì)胞中，對TLRs誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)起著負(fù)調(diào)節(jié)作用（Chaudhuri AA, So AY, Sinha N et al. MicroRNA-125b potentiates macrophage activation. J Immunol2011 ;187:5062-5068)。miR-155作為一個(gè)重要的誘導(dǎo)性miRNA，能夠作用于其靶 基因 SHIPl (SH2-containing phosphatidylinositol 3, 4, 5-triphosphate5-phosphatase 1，SH2結(jié)構(gòu)域的I型肌醇5磷酸酶），從而抑制LPS誘導(dǎo)的MPK信號(hào)通路的活化（0' Connell RM, Taganov KD, Boldin MP, Cheng G, Baltimore D. MicroRNA-155 is induced during the macrophage inflammatory response.Proc Natl Acad Sci USA 2007;104:1604-1609)。 雖然目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)不少miRNA與免疫反應(yīng)相關(guān)，但是miRNA對免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)機(jī)制的研宄 很多并不明確，也不夠完善，有關(guān)miR-127在炎癥反應(yīng)中的調(diào)控作用更是未見報(bào)道。在本專 利中我們首次發(fā)現(xiàn)了 miR-127參與調(diào)控LPS誘導(dǎo)的炎癥應(yīng)答，揭示了 miR-127對TLR介導(dǎo) 的天然免疫應(yīng)答的調(diào)控功能及其作用機(jī)制，證明了抑制miR-127在抗炎和抑制肺損傷中的 作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供miR-127抑制劑在制備抗炎和肺損傷 保護(hù)藥物的應(yīng)用。
[0007] 所述的miR-127的核苷酸序列如下：
[0008] CCAGCCTGCTGAAGCTCAGAGGGCTCTGATTCAGAAAGATCATCGGATCCGTCTGAGCTTGGCTGGTC GG，如 SEQ ID NO. 1 所示。
[0009] 作為優(yōu)選，所述的miR-127抑制劑為anti-miR-127,可通過購買取得。
[0010] 抑制miR-127的anti-miR-127的有效用量為2 mg/kg，藥物配成溶劑，以氣道灌注 方式給藥。
[0011] miR-127在不同TLR配體的刺激下呈現(xiàn)出不同的時(shí)間依賴性，但都在16個(gè)小 時(shí)表達(dá)最高；miR-127隨LPS刺激表達(dá)上調(diào)主要是受到NF-κ B(核因子κ B，Nuclear Factor- κ B)的調(diào)控，同時(shí)，miR-127能夠增強(qiáng)由LPS誘導(dǎo)的NF- κ B和JNK (c-Jun氨基末 端激酶，c-Jun N-terminal kinase)信號(hào)通路的活化。在巨細(xì)胞中過表達(dá)miR-127后， IL_6(白介素 6, interleukin-6)、TNF-α (腫瘤壞死因子 a，tumor necrosis factora)、 IL-I β (白介素 I β，interleukin-l β )等Ml型炎癥因子表達(dá)顯著上調(diào)，IL_10(白介素 10, interleukin-10)等M2型炎癥因子表達(dá)顯著下調(diào)。通過小鼠氣道灌注LPS建立小鼠急 性肺損傷模型，通過對炎癥因子表達(dá)、組織病理學(xué)切片等多項(xiàng)指標(biāo)檢測，證明符合小鼠急 性肺損傷表現(xiàn)，造模成功。我們發(fā)現(xiàn)通過氣道灌注anti-miR-127來抑制miR-127可以顯 著減少促炎因子的產(chǎn)生，減弱氣道的炎癥反應(yīng)，減少炎癥細(xì)胞的浸潤。除此之外，我們發(fā)現(xiàn) miR-127對Bcl6(B細(xì)胞淋巴瘤6，B-cell lymphoma 6 protein)具有革巴向作用，通過調(diào)節(jié) Bcl6/Duspl (雙特異性磷酸酶 l，Dual s