專利名稱：含苯并二氫吡喃－4－酮的美容護膚組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
含苯并二氫吡喃-4-酮的美容組合物，以及通過將該組合物施用于皮膚以改進皮膚美容外觀的方法。
背景技術(shù)：
人體皮膚由兩主要層-較厚的底層真皮層和較薄的頂層表皮層構(gòu)成。真皮層是令皮膚具有強度、彈性和厚度的皮層。隨著皮膚老化，真皮層的厚度會降低，一般認為其部分原因是老化皮膚中皺紋的形成。人體皮膚的頂層或稱表皮層可令皮膚具有彈性和隔離功能，其由許多不同類型的細胞構(gòu)成。角質(zhì)細胞是表皮層中的主要細胞類型(占人體真皮層細胞總數(shù)的75-80％)。真皮層中的角質(zhì)細胞以四個不同的分化階段的形式存在。真皮分化對于令皮膚具有必要的功能非常重要，即令皮膚具有對外界環(huán)境的保護隔離功能，以及防止人體的水分損失。角質(zhì)層的形成是角質(zhì)細胞分化的最終階段。對角質(zhì)層形成起作用的酶-轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶是表皮分化的標志物。
除皮膚厚度之外的其他因素也可令皮膚具有隔離功能。皮膚中的脂類層形成一層“隔水層”，它防止水分從皮膚中散失，以及防止由此導(dǎo)致的皮膚外觀老化、干燥或起皺紋。這些脂類主要由神經(jīng)酰胺，膽甾醇，和脂肪酸構(gòu)成。在正常的皮膚中，如果隔離功能紊亂，表皮層會就不充足的脂類進行再合成。但在某些情況下，再合成能力會出現(xiàn)下降的情況。對于老化或干燥的皮膚等脂類低于正常水平的情況尤甚。
因此，能增加真皮層厚度及表皮層脂類含量的成分是調(diào)理皮膚和提供抗老化功效的理想化合物。
此外，絕經(jīng)后的婦女皮脂分泌會降低。激素替代療法可將其提高到絕經(jīng)前的水平。絕經(jīng)后婦女皮脂分泌的降低可能與該人群中常出現(xiàn)的皮膚干燥現(xiàn)象有關(guān)。能增進皮脂產(chǎn)生的任何成分均可對這些婦女具有功效。
本發(fā)明至少部分是基于以下發(fā)現(xiàn)將所培養(yǎng)的角質(zhì)細胞與苯并二氫吡喃-4-酮相接觸可增進分化和促進隔離功能所必需的脂類的出現(xiàn)。苯并二氫吡喃-4-酮還能促進人體皮脂細胞中皮脂的生成。
苯并二氫吡喃-4-酮是合成物質(zhì)，其被用于合成生物活性化合物的原料。U.S.Pat.No.3,864,484(Madaus)提出可將聚羥基苯基苯并二氫吡喃-4-酮用于防止肝損傷和肝炎的治療組合物。U.S.Pat.No.4,065,574(Moon et a1.)提出苯并二氫吡喃-4-酮可用作抗真菌化合物的原料，但未公開其可用于人體皮膚。日本專利申請55111410公開了3-羥基-苯并二氫吡喃-4-酮在皮膚增白和防曬中的用途。3-羥基-苯并二氫吡喃-4-酮是酪氨酸酶抑制劑并可用苯并二氫吡喃-4-酮作為合成原料。
發(fā)明概述本發(fā)明包括含有以下成分的美容護膚組合物(a)0.0001 to 30％(重量)的式I所示的苯并二氫吡喃-4-酮 (b)適用于化妝品的賦形劑。
本發(fā)明的組合物可促進角質(zhì)細胞分化和促進脂類產(chǎn)生，并能改善皮脂細胞的皮脂分泌，從而由此改善隔離功能和因此減少皮膚上的細紋、皺紋和皮膚老化，改進膚色，對干燥或光致老化的皮膚進行美容護理，改善皮膚的光澤、透明度和完美，令皮膚全面健康和擁有青春外觀。發(fā)明詳述除非在實施例和對照例中，或經(jīng)清楚說明，本說明書中的所有表示材料的用量或比例，或反應(yīng)條件、材料的物理特性和/或用途的數(shù)字均有“約”字加以修飾。除非特別指出，所有用量均以占最終組合物的重量計。
用于此的術(shù)語“皮膚”包括面部、頸部、胸部、背部、手臂、腿部、手部和頭皮的皮膚。
苯并二氫吡喃-4-酮具有如下結(jié)構(gòu)式 苯并二氫吡喃-4-酮可購自Sigma。
苯并二氫吡喃-4-酮在本發(fā)明組合物中的用量為0.0001-30％，為以最小的成本得到最大的功效，優(yōu)選用量為0.001-20％，最優(yōu)選為0.001-10％。適用于化妝品的賦形劑本發(fā)明組合物中還含有適用于化妝品的賦形劑，用作組合物中苯并二氫吡喃-4-酮的稀釋劑、分散劑或載體，以使組合物施用于皮膚上時易于分散。
不同于水或除水之外的賦形劑包括液體或固體潤膚劑、溶劑、保濕劑、增稠劑和粉末。特別優(yōu)選的無水載體是聚二甲基硅氧烷和/或聚二甲基苯基硅氧烷。本發(fā)明中聚硅氧烷的粘度可為25℃下約10-10000000mm2/s(厘沲)。特別適用的是低粘度和高粘度聚硅氧烷的混合物。這些聚硅氧烷可以是購自General Electric公司的商標名為Vicasil，SE和SF的產(chǎn)品，以及購自Dow Corning公司的商標名為200和550系列的產(chǎn)品。適用于本發(fā)明組合物中聚硅氧烷的用量占組合物重量的5％-95％，優(yōu)選25％-90％。
適用于化妝品的賦形劑的用量可占組合物重量的5％-99.9％，優(yōu)選25％-80％，并且在組合物不含其他化妝品輔劑的情況下構(gòu)成組合物的余量。在角質(zhì)層中的滲透作用是發(fā)揮活性所必需的。與粉狀成分的傳遞相反，在液體組合物中加入苯并二氫吡喃-4-酮極有利于這種滲透作用。因此優(yōu)選賦形劑中至少含80％(重量)水。優(yōu)選水含量至少占本發(fā)明組合物的50％(重量)，最優(yōu)選占組合物的60-80％(重量)。任選的皮膚有益材料和化妝品輔劑本發(fā)明組合物中優(yōu)選含有防曬劑，用于降低皮膚與有害紫外線的接觸。
防曬劑包括那些常用于阻擋紫外線的物質(zhì)。典型的化合物有PABA衍生物，肉桂酸鹽和水楊酸酯衍生物(水楊酸阿魏基酯除外)。例如甲氧基肉桂酸辛酯和2-羥基-4-甲氧基二苯酮(也稱為羥苯甲酮)也適用。甲氧基肉桂酸辛酯和2-羥基-4-甲氧基二苯酮分別可以商標名Parsol MCX和Benzophenone-3購得。乳劑中防曬劑的確切用量可視所需的防太陽的紫外線輻射的程度而定。
可采用油類或油性材料，與潤膚劑共同形成油包水型或水包油型乳劑，這主要視所用潤膚劑的親水-親油平衡(HLB)均值而定。潤膚劑的用量可以約占組合物總重量的0.5％-50％，優(yōu)選約為5％-30％?？砂凑粘Ｒ?guī)的化學品分類法把潤膚劑分為酯、脂肪酸和醇、多元醇和烴類。
酯可以是單酯或二酯。適用的脂族二酯的實例包括己二酸二丁酯，癸二酸二乙酯，二異丙基二聚酸酯(dimerate)，以及琥珀酸二辛酯。適用的支鏈脂肪酸酯包括肉豆蔻酸2-乙基己酯，硬脂酸異丙酯和棕櫚酸異硬脂酸酯。適用的三元酸酯包括三亞油酸三異丙酯，和檸檬酸三月桂基酯。適用的直鏈脂肪酸酯包括棕櫚酸月桂基酯，乳酸肉豆蔻基酯，芥酸油基酯和油酸硬脂基酯。優(yōu)選的酯包括椰油-辛/癸酸酯(椰油-辛酸酯和椰油-癸酸酯的混合物)，丙二醇肉豆蔻基醚乙酸酯，己二酸二異丙基酯和辛酸鯨蠟基酯。
適用的脂肪醇和脂肪酸包括那些含10-20個碳原子的化合物。這些化合物中特別優(yōu)選的如鯨蠟醇、肉豆蔻醇、棕櫚醇和硬脂醇及其酸。
可用作潤膚劑的多元醇有直鏈和支鏈烷基多羥基化合物。例如優(yōu)選丙二醇、山梨醇和甘油。聚多元醇如聚丙二醇和聚乙二醇也適用。丁二醇和丙二醇也特別優(yōu)選用作滲透增強劑。
適用作潤膚劑的典型的烴類是烴鏈含12-30個碳原子的烴。具體實例包括礦物油、凡士林，角鯊烯和異鏈烷烴。
本發(fā)明美容組合物中其他類的功能成分有增稠劑。增稠劑的用量一般占組合物的0.1-20％(重量)，優(yōu)選約為0.5％ to 10％(重量)。典型的增稠劑是以商品名Carbopol購自B.F.Goodrich公司的交聯(lián)聚丙烯酸類材料。樹膠如黃原膠、角叉菜膠、明膠、梧桐膠、果膠和槐樹豆膠也適用。某些條件下，采用也起聚硅氧烷或潤膚劑作用的材料也可達到增稠效果。例如，粘度高于10厘沲的聚硅氧烷膠，以及酯類如硬脂酸甘油酯即具有雙重功能。
本發(fā)明美容組合物中可加入某些粉末。這些粉末包括白堊，滑石粉，高嶺土，淀粉，結(jié)晶粘土，經(jīng)化學改性的硅酸鎂鋁，經(jīng)有機改性的蒙脫土，水合硅酸鋁，熱解法二氧化硅，淀粉辛烯基琥珀酸鋁，以及它們的混合物。
該美容組合物中還可含有其他微量輔料組分。這些成分可包括著色劑、遮光劑和香料。這些其他微量輔料組分的用量可占組合物的0.001％(重量)直至20％(重量)。產(chǎn)品的應(yīng)用、劑型和包裝使用時，從適宜的容器或涂敷器中將少量組合物(例如1-100ml)施用于暴露的皮膚區(qū)域，如需要，然后可用手、手指或適宜裝置在皮膚上涂布和/或涂擦。
本發(fā)明的護膚美容組合物可制成洗劑、膏霜或凝膠形式。可將組合物包裝在與其粘度相宜的容器中以供消費者使用。例如洗劑或膏霜可包裝在瓶、走珠涂敷器、或者推進劑驅(qū)動的氣溶膠裝置或裝有適于手指操作的泵的容器中。當組合物為膏霜時，可將其簡單盛裝于不變形瓶或擠壓容器中，如盛裝于軟管或帶蓋小罐中。組合物還可封裝在膠囊中，如U.S.專利5,063,507中所述的那些(明膠膠囊中盛裝的聚硅氧烷基無水組合物)，收編在此作為參考。因此本發(fā)明還提供了一種盛裝本發(fā)明所規(guī)定的適于美容的組合物的密封容器。
采用以下具體實施例進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明并非僅限于此。
實施例1-4原料和方法角質(zhì)細胞培養(yǎng)在經(jīng)照射小鼠成纖細胞的存在下，經(jīng)胰蛋白酶處理，從新生兒的包皮上分離出正常的人體角質(zhì)細胞，在含有10％胎牛血清的Dulbecco’s改性Eagle’s培養(yǎng)基(DMEM，Life Technologies，GrandIsland，New York)中培養(yǎng)，以建立分化的角質(zhì)細胞集落。將細胞培養(yǎng)至第二傳代，在-70℃下保存?zhèn)溆?。培養(yǎng)過程均在37℃、5％ CO2存在下進行。將冷凍的角質(zhì)細胞第二傳代解凍，置于含DMEM的T-175燒瓶(Corning，Corning，N.Y.出品)中生長5天。達80％融合后，其經(jīng)胰蛋白酶作用，并接種于含角質(zhì)細胞生長培養(yǎng)基(KGM，Clonetics，San Diego，CA)的6孔盤中，培養(yǎng)基中含有0.15mM鈣。用苯并二氫吡喃-4-酮處理細胞將角質(zhì)細胞置于6孔板中的KGM(2ml/孔)中，其濃度為0.2百萬細胞/板，生長5天至約20％細胞融合。將苯并二氫吡喃-4-酮溶于玉米油(100％Mazola Oil)中制成2.5％，5％或10％w/vol的新品備用。通過在6孔板中2ml培養(yǎng)基上的角質(zhì)細胞上加入10μl玉米油苯并二氫吡喃-4-酮混合物而使細胞與苯并二氫吡喃-4-酮接觸。第5天開始處理過程，其中是每天用2ml新鮮KGM培養(yǎng)基替換板中的培養(yǎng)基，共經(jīng)3天，其中KGM培養(yǎng)基表面帶有10μl含0，2.5，5或10％苯并二氫吡喃-4-酮的玉米油。保留3孔的一組不經(jīng)處理用作對照組。轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(TG-1)測定經(jīng)3天培養(yǎng)后，用經(jīng)磷酸鹽緩沖的鹽水(PBS，10mM磷酸鈉，138mM氯化鈉，2.7mM氯化鉀，pH7.4)充分洗滌細胞，然后置于-70℃環(huán)境下2小時。然后將細胞解凍2小時。采用可與DNA結(jié)合的熒光團、雙-苯并咪唑(Hoechst 33258)定量測定細胞中DNA的含量，測定與DNA結(jié)合的熒光團所產(chǎn)生的比熒光(360nm激發(fā)，450nm發(fā)射)。采用轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶-1(TG-1)特定單克隆抗體(BCl，Amersham，UK)作為初級抗體、以及經(jīng)過氧化物酶標記的兔抗鼠IgG(Amersham，UK)作為二級抗體測定細胞TG-1含量。室溫下用存在于三羥甲基氨基甲烷緩沖的鹽水(TBS，10mM三羥甲基氨基甲烷，150mM NaCl，pH8.0)中的5％脫脂奶封閉板1小時，然后在室溫、1％奶/TBS存在下，用初級抗體(1∶4000稀釋液)培養(yǎng)2小時。用含0.05％ Tween 20(Bio-Rad，Hercules，CA)的1％奶/TBS漂洗培養(yǎng)板3次，然后在室溫下用1∶4000二級抗體稀釋液培養(yǎng)2小時。用1％奶/0.05％ Tween 20/TBS漂洗培養(yǎng)板3次，再用PBS沖洗3次。用鄰苯二胺(Sigma，St.Louis，Mo.)、溶于1∶10.2M磷酸氫二鈉(Sigma)、和pH5.0的0.1M檸檬酸(Sigma)混合物的過氧化氫(Sigma)培養(yǎng)使其顯色。將溶液轉(zhuǎn)入4ml塑料比色杯(Fisher Scientific，Pittsburgh PA)中，采用Ultraspec 3000分光光度計(Pharmacia，Piscataway N.J.)在492nm處讀出吸光度，用吸光度/DNA熒光表示TG-1水平。脂類分析將角質(zhì)細胞置于6孔盤中的KGM(2ml/孔)中，其濃度為0.2百萬細胞/6空板，生長5天至約20％細胞融合。如上所述用苯并二氫吡喃-4-酮培養(yǎng)和處理細胞。經(jīng)3天處理，用PBS漂洗細胞2次，然后在每孔中加入3ml of 0.1N NaOH(Fisher)獲取細胞并用橡皮頭淀帚刮擦細胞。上清液轉(zhuǎn)入16×100mm帶有聚四氟乙烯套蓋的玻璃試管中，在70℃下培養(yǎng)1小時。冷卻至室溫，然后取出50μl等分部分用于蛋白質(zhì)測定(Pierce BCA測定，Rockford IL.)。在每個試管中加入320μl 1N HCl和2.5ml氯仿，并令其在試管中充分混合。將試管置于大玻璃杯上并攪拌30分鐘。將混合物在2000×g條件下離心10分鐘。從有機相中取2ml氯仿置于自動進樣小瓶中。在氮氣條件下令試樣揮發(fā)。然后將其再懸浮于60μl 2∶1氯仿∶甲醇中，再轉(zhuǎn)入自動進樣器的進針微管里，該自動進樣器進針微管位于另一密封自動進樣器內(nèi)。將40μl試樣點滴(Camag Automatic TLC Sampler III，Wilmington，N.C.)在二氧化硅TLC板上(Whatman 4807-700)，然后在水平小室(Camag)中，采用以下溶劑體系對各板進行顯色1.95∶4.5∶0.5的氯仿，甲醇，乙酸，以及2.60∶40∶2的己烷，乙醚，乙酸。然后在存在于8％磷酸的10％硫酸銅中浸漬，培養(yǎng)板在165℃下經(jīng)炭化20分鐘，然后經(jīng)光密度計(Camag TLC Scanner II)讀數(shù)。
對與0，2.5，5和10％存在于玉米油中的苯并二氫吡喃-4-酮接觸培養(yǎng)的角質(zhì)細胞進行試驗，其中培養(yǎng)3天，每日添料并進行處理。所有轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶表達均歸一化為細胞DNA總量，神經(jīng)酰胺值歸一化為細胞蛋白質(zhì)總量。采用t-檢驗法和JMP統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)軟件(SASInstitute)確定統(tǒng)計差異，顯著性水平p設(shè)定在小于0.05。
所得結(jié)果見表1。
表1

表1的結(jié)果表明，苯并二氫吡喃-4-酮能促進所培養(yǎng)的角質(zhì)細胞的分化和脂類的產(chǎn)生。對于活性成分的不同處理濃度，細胞的不同應(yīng)答歸因于細胞供體間的正常生物變化。
因此苯并二氫吡喃-4-酮可令生長角質(zhì)細胞具有改進的細胞功能，其與對皮膚的美容功效有關(guān)。當皮膚出現(xiàn)干燥、細紋、皺紋、老化或光致老化和其他與隔離功能破壞有關(guān)的現(xiàn)象時，細胞分化和脂類產(chǎn)生的增進有助于形成正常完整的皮膚隔離層。
經(jīng)培養(yǎng)的人體皮脂細胞與100，50和10μM的苯并二氫吡喃-4-酮接觸24小時。然后與放射性標記的乙酸鹽接觸4小時。測定乙酸鹽的加入量作為脂類生成的標志。所得結(jié)果概括于表2。
表2

與未經(jīng)處理的對照組相比，苯并二氫吡喃-4-酮對于10μM處理呈現(xiàn)逆向劑量應(yīng)答，脂類產(chǎn)生量增加30％。差異為顯著性差異(見表2)。
因此，苯并二氫吡喃-4-酮還能增進人體皮脂細胞中的皮脂產(chǎn)量；該作用可對絕經(jīng)后婦女的皮膚美容狀況產(chǎn)生有益效果。因此，促進絕經(jīng)后婦女皮膚中皮脂細胞內(nèi)皮脂生成的美容方法也屬于本發(fā)明的一部分。
水包油型乳劑


水包油型乳劑


油包水型乳劑

含水凝膠


無水漿劑

水-醇凝膠


權(quán)利要求
1.一種美容護膚組合物，其含有(a)0.0001 to 30％(重量)的式I所示的苯并二氫吡喃-4-酮 和(b)適用于化妝品的賦形劑。
2.用于護理老化、光致老化、干燥、起細紋或皺紋的皮膚的美容方法，該方法包括在皮膚上涂敷權(quán)利要求1的組合物。
3.改善皮膚隔離功能的美容方法，該方法包括在皮膚上涂敷權(quán)利要求1的組合物。
4.改善角質(zhì)細胞分化的美容方法，該方法包括在皮膚上涂敷權(quán)利要求1的組合物。
5.改善角質(zhì)細胞脂類產(chǎn)生的美容方法，該方法包括在皮膚上涂敷權(quán)利要求1的組合物。
6.改善皮脂細胞中皮脂產(chǎn)生的方法，該方法包括在皮膚上涂敷權(quán)利要求1的組合物。
7.改善絕經(jīng)后婦女皮膚中皮脂細胞中皮脂產(chǎn)生的美容方法，該方法包括在皮膚上涂敷權(quán)利要求1的組合物。
8.式I的苯并二氫吡喃-4-酮用于選自以下目的的用途 護理老化、光致老化、出現(xiàn)細紋或皺紋的皮膚；改善皮膚的隔離/功能，改善角質(zhì)細胞分化；改善角質(zhì)細胞脂類生成和/或改善皮脂細胞皮脂生成。
全文摘要
含苯并二氫吡喃－4－酮的美容護膚組合物。本發(fā)明的組合物可改進皮膚的隔離功能。
文檔編號A61K8/58GK1334720SQ99816024
公開日2002年2月6日 申請日期1999年11月29日 優(yōu)先權(quán)日1998年12月4日
發(fā)明者R·G·卡森, M·巴拉特, K·帕特爾, S·皮萊, S·P·格蘭格爾 申請人:荷蘭聯(lián)合利華有限公司