專利名稱：11－(3－二甲氨基亞丙基)－6,11－二氫二苯并[b,e]噁庚英－2－乙酸用于制備治療非 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及眼科用藥物制劑。更具體講，本發(fā)明涉及11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸用于治療和/或預(yù)防人體眼細(xì)胞的細(xì)胞因子釋放以及形成新血管或非過(guò)敏性炎癥疾病的治療和預(yù)防用途。
美國(guó)專利US 4,871,865和4,923,892，兩者已轉(zhuǎn)讓給BurroughsWellcome公司(“Burroughs Wellcome專利”)，談到一些多塞平(Doxepin)的羧酸衍生物，包括11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-甲酸和11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-(E)-丙烯酸具有抗組胺和止喘活性。這兩個(gè)專利基于抗組胺作用，將多塞平羧酸衍生物分類為肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑，因?yàn)樗鼈兡芤种苼?lái)自肥大細(xì)胞的自體有效物質(zhì)(組胺，5-羥色胺等)的釋放，以及直接抑制組胺對(duì)靶組織的效應(yīng)。Burroughs Wellcome專利談到了含有多塞平羧酸衍生物的不同藥物制劑。在兩個(gè)專利中的實(shí)施例8(I)中，透露了一個(gè)眼科用的溶液制劑。
轉(zhuǎn)讓給Kyowa Hakko Kogyo有限公司的美國(guó)專利US 5,116,863(“Kyowa專利”)談到多塞平的乙酸衍生物，其中包括Z-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸，具有抗過(guò)敏和抗炎活性?？寡谆钚钥蓺w因于前列腺素生物合成的抑制作用(見(jiàn)欄28，51-57行)。Kyowa專利透露的多塞平衍生物用化合物I代表
其中X表示＝N-，＝CH-或-CH2-的化合物被描述為具有強(qiáng)的抗過(guò)敏活性，而X代表＝N-的化合物被描述為具有強(qiáng)的抗炎活性(見(jiàn)欄24，20-57行)。于是，為了抗炎應(yīng)用，Kyowa專利提出了化合物(I)的多塞平衍生物，其X為＝N-。
Kyowa專利顯示出在Wistar雄性大鼠體上的抗過(guò)敏和抗炎活性。對(duì)于多塞平乙酸衍生物，從Kyowa專利中談到的藥物劑型包括廣泛的藥用載體；可是，僅僅供口服和注射給藥的劑型被敘述到。在過(guò)敏性眼疾的治療中，例如過(guò)敏性結(jié)膜炎，這樣的給藥方法要求大劑量的藥物。
美國(guó)專利US 5,641,805透露了眼科局部用藥制劑，其含有11-(3-二甲氨基亞丙基-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸，用來(lái)治療過(guò)敏性眼疾。
本發(fā)明提供了治療和預(yù)防眼部新血管生成以及非過(guò)敏性炎癥疾病，包括細(xì)胞因子從人眼細(xì)胞中釋放的方法，該方法包括通過(guò)給予眼部含治療有效劑量的11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸(下文中稱作“化合物A”)及其藥用鹽的眼用制劑來(lái)抑制人眼細(xì)胞中的細(xì)胞因子釋放。該制劑可以含有化合物A(Z-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸)的順式異構(gòu)體，化合物A(E-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸)的反式異構(gòu)體，或化合物A的順式和反式異構(gòu)體兩者的混合物。除非在其它特定情況下，“11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸”或“化合物A”意謂著順式異構(gòu)體，反式異構(gòu)體或是兩者的混合物?！绊樖疆悩?gòu)體”意謂著實(shí)質(zhì)上不含反式異構(gòu)體的順式異構(gòu)體；“反式異構(gòu)體”意謂著實(shí)質(zhì)上不含順式異構(gòu)體的反式異構(gòu)體。此處所指的一種異構(gòu)體實(shí)質(zhì)上不含有其它異構(gòu)體，假如所存在的不需要的異構(gòu)體量少于大約2％。
化合物A是已知化合物，且化合物A的順式和反式兩者能通過(guò)美國(guó)專利US 5,116,863披露的方法制得，其整個(gè)內(nèi)容在此插入作為參考文獻(xiàn)。
化合物A藥用鹽的實(shí)例，包括無(wú)機(jī)酸鹽，如鹽酸鹽，溴氫酸鹽，硫酸鹽和磷酸鹽；有機(jī)酸鹽，如乙酸鹽，馬來(lái)酸鹽，富馬酸鹽，酒石酸鹽和檸檬酸鹽；堿金屬鹽，如鈉鹽和鉀鹽；堿土金屬鹽，如鎂鹽和鈣鹽；金屬鹽，如鋁鹽和鋅鹽；以及有機(jī)胺加成鹽，如三乙胺加成鹽(已知的氨基丁三醇)，嗎啉加成鹽和哌啶加成鹽。
化合物A可以多種多樣方式給藥于眼部。最可取的方式是采用常規(guī)的眼局部制劑，如溶液，懸浮液或凝膠。或者，化合物A可以經(jīng)過(guò)注射或埋入給藥。根據(jù)制劑的類型，常規(guī)的組分將與化合物A結(jié)合起來(lái)?；衔顰優(yōu)選的眼局部用制劑是滴眼劑溶液。在眼用制劑中，本發(fā)明化合物A優(yōu)選的形式是順式。本發(fā)明滴眼劑的制備通法，作為非限定的實(shí)施例被敘述于后。
化合物A和等滲劑被加到經(jīng)過(guò)滅菌的純水中，而且若有需要，防腐劑，緩沖劑，穩(wěn)定劑，粘性賦形劑等被加到溶液中，并溶于其中?；衔顰的濃度為0.0001-5w/v％，優(yōu)選為0.0001-0.001w/v％，最優(yōu)選約為0.0005w/v％，基于滅菌的純水。在溶解后，用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值到適用作眼用藥物的范圍內(nèi)，優(yōu)選pH4.5-8的范圍。
氯化鈉，甘油，甘露糖醇等可被用作為等滲劑；對(duì)羥基苯甲酸酯，氯化芐烷銨等作為防腐劑；磷酸氫鈉，磷酸二氫鈉，硼酸等作為緩沖劑；依地酸鈉鹽等作為穩(wěn)定劑；聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，聚丙烯酸等作為粘性賦形劑；還有氫氧化鈉，鹽酸等作為pH調(diào)節(jié)劑。
假如有需要，可以加入其它眼科藥物，如腎上腺素，萘甲唑林鹽酸鹽，鹽酸黃連素，奧磺酸鈉，鹽酸溶菌酶，甘草酸鹽等。
通過(guò)上述方法生產(chǎn)的滴眼劑，僅僅被典型地應(yīng)用于眼睛。每日幾次，用量為一至數(shù)滴，盡管在更嚴(yán)重的情況下，可使用滴劑，每天多次。典型的一滴為30微升。
按照本發(fā)明的方法，含有化合物A的眼科制劑，被用來(lái)抑制原炎性的細(xì)胞因子從人體眼細(xì)胞(例如人體結(jié)膜上皮細(xì)胞)分泌出來(lái)。這種類型的細(xì)胞因子分泌(例如，IL-6和IL-8)能刺激眼部新血管形成(例如，見(jiàn)于Yoshida et al.，IOVS，391097(1998))以及其它非過(guò)敏性炎癥的疾病，如干眼，角膜炎，瞼炎，眼色素層炎和與感染有關(guān)的炎癥。
本發(fā)明一些實(shí)施方案被敘述于以下實(shí)施例中。
實(shí)施例1 優(yōu)選的局部眼用的溶液制劑組分 濃度(w/v％)化合物A鹽酸鹽0.111*磷酸氫二鈉(無(wú)水)，USP0.5氯化鈉，USP 0.65氯化芐烷銨 0.01氫氧化鈉，NF q.s.pH＝7.0鹽酸，NF q.s.pH＝7.0純水 q.s.100*0.111％化合物A鹽酸鹽相當(dāng)于0.1％化合物A。
實(shí)施例2 眼科局部使用的凝膠制劑組分 濃度(w/v％)化合物A鹽酸鹽0.11*974P0.8EDTA 二鈉 0.01吐溫80 0.05氯化芐烷銨，溶液0.01+5xs氫氧化鈉q.s.pH 7.2鹽酸q.s.pH 7.2
注射用水 q.s.100*0.11％化合物A鹽酸鹽相當(dāng)于0.1％化合物A。
實(shí)施例3細(xì)胞因子釋放的抑制作用A.人結(jié)膜上皮細(xì)胞(HCE)培養(yǎng)詳述原始上皮細(xì)胞培養(yǎng)物的制備方法，以及利用這些細(xì)胞作細(xì)胞因子釋放的研究已被描述。參見(jiàn)Gamache et al.，“原炎性細(xì)胞素通過(guò)人結(jié)膜上皮細(xì)胞的分泌”O(jiān)cul.Immunol.Inflamm.，5117-128(1997)。簡(jiǎn)言之，人結(jié)膜上皮細(xì)胞的培養(yǎng)物是通過(guò)各種眼庫(kù)從在尸體解剖8小時(shí)內(nèi)得到的供體組織引入的。該組織經(jīng)酶消化過(guò)夜。上皮細(xì)胞和緩地從組織表面刮去，解離進(jìn)入單一的細(xì)胞懸浮液中，并在角質(zhì)化細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基(Clonetics注冊(cè)商標(biāo)，圣迭戈，加州)中培養(yǎng)。所用細(xì)胞只是經(jīng)過(guò)通道6。培養(yǎng)維持在預(yù)先的匯合狀態(tài)，以防止分化。細(xì)胞經(jīng)過(guò)陽(yáng)性角蛋白染色法被鑒定為上皮細(xì)胞。B.細(xì)胞因子分析幾種具有組胺H1-拮抗活性的化合物在對(duì)組胺刺激的反應(yīng)中，評(píng)價(jià)其抑制細(xì)胞因子(IL-6和IL-8)從培養(yǎng)的人結(jié)膜上皮細(xì)胞的分泌的能力。細(xì)胞被置于平皿(2×104個(gè)細(xì)胞/孔)，并在5％CO237℃下培養(yǎng)過(guò)夜。次日，將含有被測(cè)試化合物的新鮮培養(yǎng)基直接加到孔內(nèi)，并且在用組胺(30μM)24小時(shí)刺激之前，將細(xì)胞孵育30分鐘。三個(gè)單個(gè)的培養(yǎng)孔用于每個(gè)治療組。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，收集上清液，在200xg時(shí)離心，在-20℃下保存。樣品通過(guò)該說(shuō)明書的酶標(biāo)記免疫測(cè)定法(ELISA，研究和發(fā)展系統(tǒng)，明尼阿波利斯，明尼蘇達(dá)州)分析IL-6和IL-8，每個(gè)ELISA的靈敏度如下IL-6 0.7pg/ml；IL-8 3.0pg/ml。C.數(shù)據(jù)分析拮抗劑強(qiáng)度(IC50)定義為對(duì)激動(dòng)劑刺激功能性反應(yīng)產(chǎn)生50％抑制時(shí)所需的藥物濃度。從細(xì)胞得來(lái)的數(shù)據(jù)以平均標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)的值作計(jì)算，該值代表了經(jīng)過(guò)同樣處理的培養(yǎng)孔之間的有變性。藥劑的劑量依賴效應(yīng)和IC50值通過(guò)線性回歸測(cè)定，數(shù)據(jù)取平均值±SEM，來(lái)自3-5個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)。D.結(jié)果人結(jié)膜上皮細(xì)胞(HCE)暴露于30μM組胺，增加了IL-6和IL-8的分泌，其量分別為1.59±0.19和1.80±0.28倍于基線水平。(細(xì)胞因子的基線水平是153±42pg/ml，n＝4(IL-6)；197±48pg/ml，n＝6(IL-8)。
用具有抗組胺活性，并且可用于眼局部給藥(先于組胺暴露)的藥物治療HCE，導(dǎo)致IL-6和IL-8分泌濃度依賴的抑制作用。結(jié)果見(jiàn)如下表1所示。
依美斯汀在完整細(xì)胞中的強(qiáng)度，與應(yīng)用組織勻漿在受體結(jié)合分析中所測(cè)得的活性是一致的。左卡巴斯汀也能在與H1-受體結(jié)合親和力一致的水平上抑制IL-6和IL-8的分泌。安他心和抗感明(兩個(gè)第一代的眼科局部使用的抗組胺化合物)作為IL-6和IL-8分泌的抑制劑，比起所預(yù)測(cè)的它們的與組胺H1-受體結(jié)合的親和力來(lái)(20-140倍)講，強(qiáng)度大大地減低。然而，奧洛派他定比上預(yù)測(cè)的，已被公布的組胺H1-受體結(jié)合親和力(36nM)要強(qiáng)。奧洛派他定、安他心和抗感明顯示出相似的H1-受體結(jié)合親和力(32-39nM)。，到目前為止，奧洛派他定作為細(xì)胞因子分泌抑制劑，大體上要比由結(jié)合分析預(yù)測(cè)的數(shù)據(jù)強(qiáng)10倍，IC50分別為5.5nM(IL-6分泌)和1.7nM(IL-8分泌)。這些數(shù)據(jù)指出，并不象其它被測(cè)定的化合物那樣，奧洛派他定抑制細(xì)胞因子分泌的能力，可以歸因于比H1-受體結(jié)合親和力更多的一些方面。表1組胺H1拮抗劑人結(jié)膜上皮細(xì)胞中IL-6和IL-8分泌的抑制作用以及H1受體結(jié)合親和力H1拮抗劑 IL-6 IL-8H1結(jié)合IC 50(nM) IC 50(nM) Ki(nM)依美斷汀a2.5 4.0 1.22*奧洛派他定b 5.5 1.7 36.0**左卡巴斯汀c 25.1 11.952.6*安他心d 1014 652 38.4*抗感明e 4826 121633.9*a 1H-苯并咪唑，1-(2-乙氧基乙基)-2-(六氫-4-甲基-1H-1，4-二氮雜卓-1-基)，(E)-2-丁烯二酸酯(1∶2).
b Z-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸.
c (-)-反-1-[順-4-氰基-4-(對(duì)-氟苯基)環(huán)己基]-3-甲基-4-苯基異-3-哌啶甲酸單鹽酸鹽.
d 4，5-二氫-N-苯基-N-(苯甲基)-1H-咪唑-2-甲胺.
e N，N-二甲基-γ-苯基-2-吡啶-丙胺.
*Sharif et al.，J.Ocul.Pharmacol.，10653-664(1994).
**Yanni et al.，Ann.Allergy Asthma Immunol.，79541-545(1997).
權(quán)利要求
1.治療或預(yù)防包括細(xì)胞因子從人眼細(xì)胞釋放的眼部新血管生成和非過(guò)敏性眼部炎癥的方法，包括對(duì)眼部給予包括治療有效量的11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸或其藥用鹽的組合物。
2.權(quán)利要求1的方法，其中組合物是局部給藥的溶液，而且11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸的量大約為0.0001％(w/v)至大約5％(w/v)。
3.權(quán)利要求2的方法，其中11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸的量大約為0.0001％(w/v)至大約0.001％(w/v)。
4.權(quán)利要求3的方法，其中11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸的量是大約0.0005％(w/v)。
5.權(quán)利要求1的方法，其中11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸是(Z)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸，實(shí)質(zhì)上不含(E)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸。
6.權(quán)利要求5的方法，其中的組合物是局部服用的溶液，而且(Z)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸的量是大約0.0001％(w/v)至大約5％(w/v)。
7.權(quán)利要求6的方法，其中(Z)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸的量是大約0.0001％(w/v)至大約0.001％(w/v)。
8.權(quán)利要求7的方法，其中(Z)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸的量是0.0005％(w/v)。
9.權(quán)利要求1的方法，其中11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸是(E)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸，實(shí)質(zhì)上不含(Z)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸。
10.權(quán)利要求9的方法，其中組合物是一種局部給藥的組合物，而且(E)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸的量是大約0.0001％(w/v)至大約5％(w/v)。
11.權(quán)利要求10的方法，其中(E)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸的量是大約0.0001％(w/v)至大約0.001％(w/v)。
12.權(quán)利要求11的的方法，其中(E)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸的量是大約0.0005％(w/v)。
13.權(quán)利要求1的方法，其中非過(guò)敏性眼部炎癥選自干眼、角膜炎、瞼炎、眼色素層炎、以及和感染有關(guān)的炎癥。
14.權(quán)利要求1的方法，其中眼部新血管生成和非過(guò)敏性眼部炎癥包括人結(jié)膜上皮細(xì)胞的細(xì)胞因子釋放。
全文摘要
含11－(3－二甲氨基亞丙基)－6,11－二氫二苯并[b,e]噁庚英－2－乙酸或其藥用鹽作活性成分的眼用制劑用于抑制細(xì)胞因子(如IL－6和IL－8)從人眼細(xì)胞中釋放。該制劑用于治療或預(yù)防眼部新血管生成和非過(guò)敏性炎性癥狀如干眼,角膜炎,瞼炎,眼炎素層類和與感染有關(guān)的炎癥。
文檔編號(hào)A61P27/02GK1275078SQ99801501
公開(kāi)日2000年11月29日 申請(qǐng)日期1999年6月15日 優(yōu)先權(quán)日1998年7月14日
發(fā)明者J·M·彥尼, D·A·加馬徹, L·K·維莫 申請(qǐng)人:阿爾康實(shí)驗(yàn)室公司