專利名稱：?jiǎn)伪砦恢貜?fù)或多聯(lián)單表位重復(fù)－表位疫苗的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及表位疫苗的制備和生產(chǎn)。
常規(guī)疫苗制備技術(shù)通常采用以下方法(1)利用減毒或滅活的病原體(如脊髓灰質(zhì)炎病毒)；(2)利用病原體的天然的或基因重組的相關(guān)組分，如細(xì)菌類毒素、病毒包膜蛋白等制備的亞單位疫苗；(3)利用病毒的核酸制備疫苗。
現(xiàn)有的這些疫苗制備技術(shù)在預(yù)防由變異頻度很高的某些病原體(如愛滋病病毒和流感病毒)引發(fā)的傳染病時(shí)，存在著很大的困難；此外，現(xiàn)有的疫苗不能直接誘導(dǎo)預(yù)先確定的表位特異性的免疫應(yīng)答。
本發(fā)明的目的是為克服已有技術(shù)的不足之處，設(shè)計(jì)出的一種單表位重復(fù)或多聯(lián)單表位重復(fù)-表位疫苗的制備方法，使其具有不需要減毒或滅活的病原體或病原體的天然蛋白或基因重組蛋白抗原以及病原體的核酸；能夠直接誘導(dǎo)預(yù)先確定的表位特異性的免疫應(yīng)答；能夠?qū)Ω兑虿≡w變異而導(dǎo)致的疫苗失效；能夠制備出預(yù)防不同病原體的多聯(lián)疫苗等突出的優(yōu)勢(shì)。
本發(fā)明提出的單表位重復(fù)或多聯(lián)單表位重復(fù)-表位疫苗的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)人工合成帶有病原體天然蛋白或基因重組蛋白上的特定表位的表位多肽；(2)所說的表位是以重復(fù)的形式出現(xiàn)在人工合成的表位多肽上；(3)所說的表位多肽耦聯(lián)到載體蛋白或載體多肽上形成耦聯(lián)物或者直接合成為樹枝狀多肽分子(MAP，Multiple Antigen Peptide)；(4)所說的耦聯(lián)物或樹枝狀多肽分子配以適合的佐劑制備成單表位重復(fù)的表位疫苗或者是制備成多聯(lián)單表位重復(fù)-表位疫苗。
本發(fā)明根據(jù)由本發(fā)明人最先提出的表位疫苗的全新理論(Immunology Today，20588-589，1999年12月)設(shè)計(jì)出的表位疫苗的制備方法具有如下效果第一、能誘導(dǎo)很強(qiáng)的針對(duì)特定表位的免疫應(yīng)答，與相應(yīng)的亞單位疫苗相比，能顯著提高針對(duì)特定表位的抗體水平(10-20倍)；第二、某些天然蛋白上的特定表位在機(jī)體內(nèi)不能誘導(dǎo)出較強(qiáng)的具有防護(hù)作用的免疫應(yīng)答，利用本發(fā)明制備的疫苗能夠誘導(dǎo)出高滴度的表位特異性的抗體(表位特異性的抗體量為10-240微克每毫升血清)，能夠起到有效的免疫防護(hù)作用；第三、應(yīng)用本發(fā)明制備的多聯(lián)單表位-表位疫苗能夠在機(jī)體內(nèi)同時(shí)誘導(dǎo)出針對(duì)多個(gè)特定表位的抗體應(yīng)答。
實(shí)施例一制備HIV-1單表位重復(fù)的表位疫苗步驟1.人工合成以下三種重復(fù)表位的表位多肽C(ELDKWA)G(ELDKWA)G(ELDKWA)G(ELDKWA)C(GPGRAFY)(GPGRAFY)(GPGRAFY)(GPGRAFY)C(RILVERYLKD)GG(RILVERYLKD)步驟2.利用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxy suocinimide ester)分別將三種表位多肽與載體蛋白BSA耦聯(lián)；步驟3.將三種耦聯(lián)物分別和鋁佐劑混合制備成三種單表位重復(fù)的表位疫苗。
實(shí)施例二制備HIV-1多聯(lián)單表位重復(fù)的表位疫苗方法1步驟1、2、3與實(shí)施例一相同；步驟4.將上述制備的三種單表位重復(fù)的表位疫苗混合免疫；方法2步驟1與實(shí)施例一相同；步驟2將上述制備的三種單表位重復(fù)的表位多肽混合，利用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxy suocinimide ester)將三種表位多肽與載體蛋白BSA同時(shí)耦聯(lián)；步驟3將耦聯(lián)物分別和鋁佐劑混合制備成三種單表位重復(fù)的表位疫苗。
權(quán)利要求
1.一種單表位重復(fù)或多聯(lián)單表位重復(fù)-表位疫苗的制備方法，其特征在于包括以下步驟1)人工合成帶有病原體天然蛋白或基因重組蛋白上的特定表位的表位多肽；2)所說的表位是以重復(fù)的形式出現(xiàn)在人工合成的表位多肽上；3)所說的表位多肽耦聯(lián)到載體蛋白或載體多肽上形成耦聯(lián)物；4)所說的耦聯(lián)物配以適合的佐劑制備成單表位重復(fù)的表位疫苗或者是制備成多聯(lián)單表位重復(fù)-表位疫苗。
3.如權(quán)利要求1或2所述的表位疫苗的制備方法，其特征在于還包括將所說的制備的幾種單表位重復(fù)的表位疫苗混合免疫制備成多聯(lián)單表位重復(fù)-表位疫苗。
2.一種單表位重復(fù)或多聯(lián)單表位重復(fù)-表位疫苗的制備方法，其特征在于包括以下步驟1)人工合成帶有病原體天然蛋白或基因重組蛋白上的特定表位的表位多肽；2)所說的表位是以重復(fù)的形式出現(xiàn)在人工合成的表位多肽上；3)所說的表位多肽直接合成為樹枝狀多肽分子；4)所說的樹枝狀多肽分子配以適合的佐劑制備成單表位重復(fù)的表位疫苗或者是制備成多聯(lián)單表位重復(fù)-表位疫苗。
3.如權(quán)利要求1或2所述的表位疫苗的制備方法，其特征在于還包括將所說的制備的幾種單表位重復(fù)的表位疫苗混合免疫制備成多聯(lián)單表位重復(fù)-表位疫苗。
4.一種單表位重復(fù)或多聯(lián)單表位重復(fù)-表位疫苗的制備方法，其特征在于包括以下步驟1)人工合成帶有病原體天然蛋白或基因重組蛋白上的幾種特定表位的表位多肽；2)將所說的幾種種單表位重復(fù)的表位多肽混合，利用MBS將幾種種表位多肽與載體蛋白BSA同時(shí)耦聯(lián)；3)將耦聯(lián)物分別和佐劑混合制備成多聯(lián)單表位重復(fù)的表位疫苗。
全文摘要
本發(fā)明屬生物工程技術(shù)領(lǐng)域,本發(fā)明首先人工合成帶有病原體天然蛋白或基因重組蛋白上的特定表位的表位多肽;其表位是以重復(fù)的形式出現(xiàn)在人工合成的表位多肽上;其表位多肽耦聯(lián)到載體蛋白或載體多肽上形成耦聯(lián)物或者直接合成為樹枝狀多肽分子;其耦聯(lián)物或樹枝狀多肽分子配以適當(dāng)佐劑制備成單表位重復(fù)或多聯(lián)單表位重復(fù)－表位疫苗。本發(fā)明可誘導(dǎo)表位特異性的免疫應(yīng)答;可對(duì)付因病原體變異而導(dǎo)致的疫苗失效;可制備出多聯(lián)疫苗。
文檔編號(hào)A61K39/44GK1256150SQ9912380
公開日2000年6月14日 申請(qǐng)日期1999年11月12日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月12日
發(fā)明者陳應(yīng)華, 肖翌, 于天維, 陸韻, 丁健 申請(qǐng)人:清華大學(xué)